本文主要研究内容
作者王宇（2019）在《多功能载体固定蛋白A免疫吸附材料的制备及吸附性能研究》一文中研究指出：自身免疫疾病和器官移植排斥反应的治疗是医学领域面临的难题之一,利用蛋白A免疫吸附剂直接清除血液中的致病因子是目前的最佳治疗方案。为此,提高吸附剂与免疫球蛋白(IgG)结合能力极其重要。在载体上固定亲和配体是制备亲和色谱材料的关键步骤,有效的固定方法和合适的载体可以显著提高免疫吸附剂的有效性和降低成本。在制备蛋白A免疫吸附剂时,以重组蛋白A(rSpA)作为配体,通过多点共价连接增加rSpA稳定性,同时定向固定使rSpA活性得以保持。多功能载体表面上的功能基能在不同情况下与蛋白A相互作用,因此具有广泛的适用范围,制备的蛋白A免疫吸附剂具备较高的吸附性能。本论文对多功能载体固定蛋白A及其吸附性能进行了研究,具体内容如下:使用定向固定策略将重组蛋白A(rSpA)共价结合在戊二醛多功能载体上。通过控制戊二醛浓度、pH和反应时间,得到两种结构不同的戊二醛载体。对两种载体的结构差异进行评估后,发现琼脂糖上的每个伯氨基有一个或两个戊二醛分子。此外,用SWISS-MODEL对rSpA的B结构域进行3D表面结构建模,用MemBrain计算氨基酸的表面可及性(ASA)值以探索反应性和吸附性基团的分布。与单体戊二醛琼脂糖(Aga@MG)相比,二聚戊二醛琼脂糖(Aga@DG)似乎能和rSpA的更多氨基酸反应。因此,Aga@DG@rSpA吸附IgG时泄漏的rSpA为0.24 ng/mg略低于Aga@MG@rSpA的0.36 ng/mg。然而,Aga@MG更适合于rSpA的定向固定,这使得制备的吸附剂具有更高的IgG结合能力。当rSpA在低和高离子强度下固定在Aga@MG上时,用Langmuir模型拟合的最大IgG结合能力分别为56.2和59.2 mg/g,比在中等离子强度下制备的吸附剂吸附量高约34%。Aga@MG由于间隔臂较短且与Aga@DG反应性相当,这有助于通过控制离子强度来控制rSpA在载体上的取向,从而实现定向固定。用环氧氯丙烷和1,4-丁二醇二缩水甘油醚进行活化制备得不同空间微环境的多功能氨基环氧基载体:氨基和环氧基载体(AAE)、氨基-环氧基载体(AEA)和氨基环醚载体(ABA)。将三种载体在相同条件(5 mM硼酸缓冲液,pH 8)下固定rSpA,制得AAE@rSpA、AEA@rSpA和ABA@rSpA三种免疫吸附剂。通过分析三种载体的结构差异、rSpA的B结构域反应性和吸附性基团分布情况可知,空间微环境影响定向共价固定时载体与rSpA的离子吸附效率和空间位阻。对比三种免疫吸附剂,AEA@rSpA和AAE@rSpA最大hIgG结合能力相差不大,其最大结合能力分别为45.8 mg/g和42.1 mg/g,远高于ABA@rSpA的18.2 mg/g。AEA@rSpA高的hIgG结合能力是由于载体上合适的微环境,一方面可以进行快速的离子吸附,另一方面减少了载体与rSpA之间的空间位阻,这有助于载体上rSpA固定率的提高,使得AEA成为固定rSpA的优良载体。总之,本论文应用SWISS-MODEL建模和MemBrain计算ASA值探索了rSpA反应性和吸附性基团的分布。多功能戊二醛载体和氨基环氧基载体可定向固定rSpA,制得高吸附性能的免疫吸附材料,该吸附材料有望用于抗体纯化和自身抗体相关疾病的治疗。
Abstract
zi shen mian yi ji bing he qi guan yi zhi pai chi fan ying de zhi liao shi yi xue ling yu mian lin de nan ti zhi yi ,li yong dan bai Amian yi xi fu ji zhi jie qing chu xie ye zhong de zhi bing yin zi shi mu qian de zui jia zhi liao fang an 。wei ci ,di gao xi fu ji yu mian yi qiu dan bai (IgG)jie ge neng li ji ji chong yao 。zai zai ti shang gu ding qin he pei ti shi zhi bei qin he se pu cai liao de guan jian bu zhou ,you xiao de gu ding fang fa he ge kuo de zai ti ke yi xian zhe di gao mian yi xi fu ji de you xiao xing he jiang di cheng ben 。zai zhi bei dan bai Amian yi xi fu ji shi ,yi chong zu dan bai A(rSpA)zuo wei pei ti ,tong guo duo dian gong jia lian jie zeng jia rSpAwen ding xing ,tong shi ding xiang gu ding shi rSpAhuo xing de yi bao chi 。duo gong neng zai ti biao mian shang de gong neng ji neng zai bu tong qing kuang xia yu dan bai Axiang hu zuo yong ,yin ci ju you an fan de kuo yong fan wei ,zhi bei de dan bai Amian yi xi fu ji ju bei jiao gao de xi fu xing neng 。ben lun wen dui duo gong neng zai ti gu ding dan bai Aji ji xi fu xing neng jin hang le yan jiu ,ju ti nei rong ru xia :shi yong ding xiang gu ding ce lve jiang chong zu dan bai A(rSpA)gong jia jie ge zai wu er quan duo gong neng zai ti shang 。tong guo kong zhi wu er quan nong du 、pHhe fan ying shi jian ,de dao liang chong jie gou bu tong de wu er quan zai ti 。dui liang chong zai ti de jie gou cha yi jin hang ping gu hou ,fa xian qiong zhi tang shang de mei ge bai an ji you yi ge huo liang ge wu er quan fen zi 。ci wai ,yong SWISS-MODELdui rSpAde Bjie gou yu jin hang 3Dbiao mian jie gou jian mo ,yong MemBrainji suan an ji suan de biao mian ke ji xing (ASA)zhi yi tan suo fan ying xing he xi fu xing ji tuan de fen bu 。yu chan ti wu er quan qiong zhi tang (Aga@MG)xiang bi ,er ju wu er quan qiong zhi tang (Aga@DG)shi hu neng he rSpAde geng duo an ji suan fan ying 。yin ci ,Aga@DG@rSpAxi fu IgGshi xie lou de rSpAwei 0.24 ng/mglve di yu Aga@MG@rSpAde 0.36 ng/mg。ran er ,Aga@MGgeng kuo ge yu rSpAde ding xiang gu ding ,zhe shi de zhi bei de xi fu ji ju you geng gao de IgGjie ge neng li 。dang rSpAzai di he gao li zi jiang du xia gu ding zai Aga@MGshang shi ,yong Langmuirmo xing ni ge de zui da IgGjie ge neng li fen bie wei 56.2he 59.2 mg/g,bi zai zhong deng li zi jiang du xia zhi bei de xi fu ji xi fu liang gao yao 34%。Aga@MGyou yu jian ge bei jiao duan ju yu Aga@DGfan ying xing xiang dang ,zhe you zhu yu tong guo kong zhi li zi jiang du lai kong zhi rSpAzai zai ti shang de qu xiang ,cong er shi xian ding xiang gu ding 。yong huan yang lv bing wan he 1,4-ding er chun er su shui gan you mi jin hang huo hua zhi bei de bu tong kong jian wei huan jing de duo gong neng an ji huan yang ji zai ti :an ji he huan yang ji zai ti (AAE)、an ji -huan yang ji zai ti (AEA)he an ji huan mi zai ti (ABA)。jiang san chong zai ti zai xiang tong tiao jian (5 mMpeng suan huan chong ye ,pH 8)xia gu ding rSpA,zhi de AAE@rSpA、AEA@rSpAhe ABA@rSpAsan chong mian yi xi fu ji 。tong guo fen xi san chong zai ti de jie gou cha yi 、rSpAde Bjie gou yu fan ying xing he xi fu xing ji tuan fen bu qing kuang ke zhi ,kong jian wei huan jing ying xiang ding xiang gong jia gu ding shi zai ti yu rSpAde li zi xi fu xiao lv he kong jian wei zu 。dui bi san chong mian yi xi fu ji ,AEA@rSpAhe AAE@rSpAzui da hIgGjie ge neng li xiang cha bu da ,ji zui da jie ge neng li fen bie wei 45.8 mg/ghe 42.1 mg/g,yuan gao yu ABA@rSpAde 18.2 mg/g。AEA@rSpAgao de hIgGjie ge neng li shi you yu zai ti shang ge kuo de wei huan jing ,yi fang mian ke yi jin hang kuai su de li zi xi fu ,ling yi fang mian jian shao le zai ti yu rSpAzhi jian de kong jian wei zu ,zhe you zhu yu zai ti shang rSpAgu ding lv de di gao ,shi de AEAcheng wei gu ding rSpAde you liang zai ti 。zong zhi ,ben lun wen ying yong SWISS-MODELjian mo he MemBrainji suan ASAzhi tan suo le rSpAfan ying xing he xi fu xing ji tuan de fen bu 。duo gong neng wu er quan zai ti he an ji huan yang ji zai ti ke ding xiang gu ding rSpA,zhi de gao xi fu xing neng de mian yi xi fu cai liao ,gai xi fu cai liao you wang yong yu kang ti chun hua he zi shen kang ti xiang guan ji bing de zhi liao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自云南师范大学的王宇，发表于刊物云南师范大学2019-10-16论文，是一篇关于重组蛋白论文,多功能载体论文,免疫吸附剂论文,定向固定论文,云南师范大学2019-10-16论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自云南师范大学2019-10-16论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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