吕卉王燕唐士平
（山东省莱芜市中医医院山东莱芜271100）
【摘要】目的：探讨分析活血调脂胶囊的制备方法及降血脂作用药理学原理。方法：按新药研究思路，我们采用正交试验法以浸膏得率和大黄酚、大黄素、总大黄蒽醌含量为考察指标，对大黄等热回流条件、浓缩干燥方法等进行了全面考察。结果：大黄干燥方法对大黄酚、大黄素含量影响非常大，采用常压浓缩干燥大黄酚的损失率可达成70％，喷雾干燥为瞬间干燥，明显优于真空干燥，大黄酚基本无损失，大黄酚的转移率可达60％以上。结论：中药所含成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成分和有毒成分，所以选用合理的提取工艺是非常重要的。
【关键词】活血调脂胶囊；制备方法；药理学研究
【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）23-0006-02
活血调脂胶囊为我院临床应用多年的医院制剂，由大黄、泽泻、山楂、大蒜粉、绞股蓝、刺五加叶、月见草等组成，大黄为其主要药效成分之一，其化学成分主要有大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸等蒽醌类化合物，大黄酚为调脂有效成分，具有改善血管脆性，缩短凝血时间，促进血小板生成的作用[1]，药理研究证实本制剂预防和治疗给药对金黄地鼠具有显著降血脂和调节脂代谢的作用[2]，为充分发挥其药理作用，按新药研究思路，我们采用正交试验法以浸膏得率和大黄酚、大黄素、总大黄蒽醌含量为考察指标，对大黄等热回流条件、浓缩干燥方法等进行了全面考察。
1.仪器与试药
1.1仪器
Waters2690型高效液相色谱仪(美国)，996型光电二极管阵列检测器，MILLENNIUM32色谱工作站，自动进样器，TH66025型超声清洗器。WPG5喷雾干燥机组(陕西)，ZK—82B电热真空干燥箱(上海)。
1.2试药
大黄酚对照品、大黄素对照品，均由中国药品生物制品鉴定所提供，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。活血调脂胶囊由我院制剂中心提供。
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱KromasiIC18(200mm×4．6mmI．D，5um)；流动相：0.04％mol／L磷酸—甲醇(30︰70)，用10％氨水调节PH至6.0；流速1m1／min，检测波长：254nm。
2.2大黄药材中大黄酚及大黄素的测定
取大黄细粉约0.1g，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置50m1圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol／L的硫酸溶液10m1，超声处理5min，再加氯仿10ml，加热回流1h，冷却，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次10ml，合并氯仿液。以无水硫酸钠脱水，氮仿液移至100m1锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，作为供试品溶液，作HPLC测定，结果大黄中含大黄素(C15H10O5)0.261％、大黄酚(C15H10O5)0.615％，其总量为0.876％。以下试验中的大黄均用本批样品。
2.3因素水平确定
对乙醇热回流产生影响的因素有：乙醇浓度、乙醇用量、回流时问、提取次数，实验以提膏得率、大黄酚含量、大黄素含量为考察指标，因素水平的选择见表。
表因素水平表
2.4方法与结果
分别称取处方量中药9份，每份50g。分别置100mI圆底烧瓶中，按正交表L9(34)的安排进行试验，以不同浓度乙酵、不同用量乙醇、不同回流时间和提取次数进行乙醇热回流提取。收集1～9份回流提取液，合并，滤过，分别定容至1000ml，备用。
2.4.1醇浸膏得率测定
精密吸取上述提取液50ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105±1℃干燥3h，置干燥器中冷却0.5h，迅速称重，并计算浸膏得率。
2.4.2大黄酚和大黄素含量测定
对照品溶液的制备：精密称取大黄酚1.58rng，加甲醇制成每1ml，精密称取大黄素对照品，加甲醇定容于5．0ml容量瓶中，备用。
供试品溶液的制备：精密吸取上述1～9号提取液10ml于蒸发皿中，挥干溶剂，残渣分别加甲醇溶解并定容至100ml量瓶中，过0.25um的滤膜，取续滤液即为1～9号供试品溶液。按上述条件进行液相色谱分析，进样量20ul。
2.4.3实验结果
由浸膏得率极差及方差分析结果表明：各因素作用主次为A>B>C>D，其中A，B因素有显著性差异(P<0.05)，C、D因素无显著性差异(P>0.05)，最佳工艺为A1B1C1D1；大黄酚方差分析结果表明：各因素作用主次为A>C>D>B，其中A因素有极其显著性差异(P<0.01)，C因素有显著性差异(P<0.05)，B、D因素无显著性差异，最佳工艺为A2B2C3D1；以大黄素方差显示：各因素作用主次为A>C>B>D，方差分析表明：中A、B、C因素有显著性差异(P<0.05)，D因素无显著性差异(P>0.05)，最佳工艺为A2B2C3D1；以大黄总蒽醌方差显示：各因素作用主次为A>C>B>D，其中A因素有显著性整异((P<0.01)，A、B、C、D因素无显著性差异(P>0.05)，最佳工艺为A2B2C3D1。结合生产实际，考虑到大黄酚转移率，综合比较，大黄的最佳提取工艺为：A2B2C3D1，即大黄分别以8、6倍量70％乙醇回流提取2次，每次1.0、1.0h。
验证实验：按优选工艺，重复3次，大黄酚转移率70％以上。验证结果与正交结果基本一致，故提取工艺条件基本稳定。
2.5浓缩、干燥方法的考察
2.5.1常压水浴浓缩、真空干燥
以上正交样品常压水浴浓缩6～12h，至稠膏基本无流动性(60℃相对密度在1.35以上)，真空干燥24h，干膏粉碎，过80目筛，称取0.1g，精密称定，用甲醇溶解并定容至100m1量瓶中，按含量测定方法测定大黄酚含量，计算转移率，结果表明，以上述条件浓缩干燥，大黄中45～70％受热破坏。
2.5.2浓缩对大黄酚的影响
正交A2B3C2D2提取的溶液，分别于75℃以下减压(0.085Mpa)浓缩4h，水浴(100℃)浓缩2h，4h、8h，测定大黄酚含量，计算转移率，结果减压浓缩明显优于常压浓缩，随时间延长，大黄酚转移率下降。
2.5.3干燥方法对大黄酚的影响
正交A2B3C2D2提取的溶液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.20的清膏(60℃)，分别喷雾干燥(进口温度：150～170℃，出口温度：75～85℃)和60℃真空干燥8h，结果表明，喷雾干燥对大黄酚无破坏，60℃真空干燥8h对大黄酚有明显破坏。
3.讨论
3.1由于大黄总蒽醌以结合态和游离态存在，用水只能提取其游离态类成分，但两类成分均易溶于乙醇，故本试验采用乙醇提取的方法。同时我们考察了渗漉提取对大黄酚、大黄素的影响，结果热回流提取的效率高于渗漉提取法。
3.2大黄干燥方法对大黄酚、大黄素含量影响非常大，采用常压浓缩干燥大黄酚的损失率可达成70％，喷雾干燥为瞬间干燥，明显优于真空干燥，大黄酚基本无损失，大黄酚的转移率可达60％以上。
3.3中药所含成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成分和有毒成分，所以选用合理的提取工艺是非常重要的。除上述大黄的提取工艺外,绞股蓝皂苷的提取工艺为：绞股蓝全草→切碎为粗粉→离子水浸泡→水浴80℃→减压提取3次→超滤器过滤→滤液加NaOH调pH至9～10→D101-A型树脂柱吸附→0.5mol/LNaOH洗涤→水洗至中性→95%乙醇洗脱→洗脱液加入活性炭回流→趁热抽滤→滤液减压回收乙醇→干燥→粉末状绞股蓝总皂甙→薄层层析与Rb1的图谱比较。山楂总黄酮的提取工艺如下：山楂切片，干燥→粉碎→用乙醇作溶剂，微波提取→减压蒸馏→大孔树脂吸附→蒸馏水清洗→95%的乙醇洗脱→回收乙醇→水浴加热脱水→总黄酮含量测定。
【参考文献】
[1]金幼兰，刘春海，李士勇.用正交试验探讨大黄煎煮条件对大黄酚含量的影响[J].中国药房,1997．8(6)254.
[2]张小丽，惠爱武，范引科等．调脂胶囊对高血脂金黄地鼠的作用[J]．陕西中医，2005，26(7)：721.
[3]刘惠茹，高景莘.均匀法优选大黄渗漉提取最佳工艺条件[J]．基层中药杂志，1998，31(3)：542.
[4]杨去，冯卫生.中药化学成分提取分离手册北京；中国中医药出版社，2001，3.