本文主要研究内容
作者朱伦井,贝朝涌,段江涛,彭称飞,马跃刚,王宁,陈俊毅（2019）在《脂质体和慢病毒介导P75神经生长因子受体及神经生长因子转染骨髓间充质干细胞的效果比较》一文中研究指出：背景:P75神经生长因子受体(P75 neurotrophin receptor,P75NTR)在不同细胞中可以介导截然不同的信号通路,但是在骨髓间充质干细胞中所传导的调节作用还尚未研究;脂质体和慢病毒介导单基因转染细胞技术已趋向成熟,但是其介导双基因转染的差异比较还未见报道。目的:构建大鼠P75NTR、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）的过表达质粒及慢病毒载体,比较脂质体和慢病毒介导2种基因转染骨髓间充质干细胞的效果和实用性,以便于今后根据不同实验要求选择实验最优方案。方法:设计大鼠P75NTR及NGF的基因引物,提取基因组DNA进行PCR扩增、与质粒载体重组构建表达增强绿色荧光的GV358-P75NTR、表达增强红色荧光的GV492-NGF过表达质粒,转染293T细胞,加入慢病毒载体超速离心,收集目的基因过表达慢病毒,测定病毒样品滴度;选取体外培养的大鼠原代骨髓间充质干细胞,一组用脂质体Lipo3000共转染质粒GV358-P75NTR、GV492-NGF,另一组用慢病毒共感染,同时设置阴性对照组和空白对照组,对转染后的骨髓间充质干细胞常规培养,第3,5,7,9,12天用荧光显微镜观察红绿荧光的表达,Westernblot检测P75NTR及NGF蛋白表达,对转染后培养至7d的骨髓间充质干细胞进行消化传代培养,培养第3,5,7,9,12天用荧光显微镜观察红绿荧光的表达以及Western blot检测P75NTR、NGF蛋白的表达。结果与结论:①构建的GV358-P75NTR、GV492-NGF过表达质粒及慢病毒符合实验设计;②显微镜视野中红绿色荧光的丰度:脂质体共转染组先增加后降低,慢病毒共感染组持续增多;各时间点慢病毒组均多于脂质体组;脂质体转染组传代培养细胞的荧光表达相比于未传代前降低,而慢病毒转染组未见明显变化;③各时间点慢病毒感染组的P75NTR及NGF蛋白表达量明显高于脂质体组,目的基因转染组的P75NTR及NGF蛋白表达量均高于阴性对照组及空白对照组,差异有显著性意义（P<0.05）;④P75NTR、NGF双基因均能通过脂质体和慢病毒共转染方法在大鼠骨髓间充质干细胞中过表达;脂质体双基因转染操作相对简便,实验设备依赖性低,费用相对低廉,但感染效率明显低于慢病毒,而慢病毒双基因共感染后目的基因存在着持续表达,传代后基因丢失现象不明显。
Abstract
bei jing :P75shen jing sheng chang yin zi shou ti (P75 neurotrophin receptor,P75NTR)zai bu tong xi bao zhong ke yi jie dao jie ran bu tong de xin hao tong lu ,dan shi zai gu sui jian chong zhi gan xi bao zhong suo chuan dao de diao jie zuo yong hai shang wei yan jiu ;zhi zhi ti he man bing du jie dao chan ji yin zhuai ran xi bao ji shu yi qu xiang cheng shou ,dan shi ji jie dao shuang ji yin zhuai ran de cha yi bi jiao hai wei jian bao dao 。mu de :gou jian da shu P75NTR、shen jing sheng chang yin zi （nerve growth factor,NGF）de guo biao da zhi li ji man bing du zai ti ,bi jiao zhi zhi ti he man bing du jie dao 2chong ji yin zhuai ran gu sui jian chong zhi gan xi bao de xiao guo he shi yong xing ,yi bian yu jin hou gen ju bu tong shi yan yao qiu shua ze shi yan zui you fang an 。fang fa :she ji da shu P75NTRji NGFde ji yin yin wu ,di qu ji yin zu DNAjin hang PCRkuo zeng 、yu zhi li zai ti chong zu gou jian biao da zeng jiang lu se ying guang de GV358-P75NTR、biao da zeng jiang gong se ying guang de GV492-NGFguo biao da zhi li ,zhuai ran 293Txi bao ,jia ru man bing du zai ti chao su li xin ,shou ji mu de ji yin guo biao da man bing du ,ce ding bing du yang pin di du ;shua qu ti wai pei yang de da shu yuan dai gu sui jian chong zhi gan xi bao ,yi zu yong zhi zhi ti Lipo3000gong zhuai ran zhi li GV358-P75NTR、GV492-NGF,ling yi zu yong man bing du gong gan ran ,tong shi she zhi yin xing dui zhao zu he kong bai dui zhao zu ,dui zhuai ran hou de gu sui jian chong zhi gan xi bao chang gui pei yang ,di 3,5,7,9,12tian yong ying guang xian wei jing guan cha gong lu ying guang de biao da ,Westernblotjian ce P75NTRji NGFdan bai biao da ,dui zhuai ran hou pei yang zhi 7dde gu sui jian chong zhi gan xi bao jin hang xiao hua chuan dai pei yang ,pei yang di 3,5,7,9,12tian yong ying guang xian wei jing guan cha gong lu ying guang de biao da yi ji Western blotjian ce P75NTR、NGFdan bai de biao da 。jie guo yu jie lun :①gou jian de GV358-P75NTR、GV492-NGFguo biao da zhi li ji man bing du fu ge shi yan she ji ;②xian wei jing shi ye zhong gong lu se ying guang de feng du :zhi zhi ti gong zhuai ran zu xian zeng jia hou jiang di ,man bing du gong gan ran zu chi xu zeng duo ;ge shi jian dian man bing du zu jun duo yu zhi zhi ti zu ;zhi zhi ti zhuai ran zu chuan dai pei yang xi bao de ying guang biao da xiang bi yu wei chuan dai qian jiang di ,er man bing du zhuai ran zu wei jian ming xian bian hua ;③ge shi jian dian man bing du gan ran zu de P75NTRji NGFdan bai biao da liang ming xian gao yu zhi zhi ti zu ,mu de ji yin zhuai ran zu de P75NTRji NGFdan bai biao da liang jun gao yu yin xing dui zhao zu ji kong bai dui zhao zu ,cha yi you xian zhe xing yi yi （P<0.05）;④P75NTR、NGFshuang ji yin jun neng tong guo zhi zhi ti he man bing du gong zhuai ran fang fa zai da shu gu sui jian chong zhi gan xi bao zhong guo biao da ;zhi zhi ti shuang ji yin zhuai ran cao zuo xiang dui jian bian ,shi yan she bei yi lai xing di ,fei yong xiang dui di lian ,dan gan ran xiao lv ming xian di yu man bing du ,er man bing du shuang ji yin gong gan ran hou mu de ji yin cun zai zhao chi xu biao da ,chuan dai hou ji yin diu shi xian xiang bu ming xian 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国组织工程研究的朱伦井,贝朝涌,段江涛,彭称飞,马跃刚,王宁,陈俊毅，发表于刊物中国组织工程研究2019年21期论文，是一篇关于神经生长因子受体论文,神经生长因子论文,过表达质粒论文,慢病毒论文,脂质体论文,双基因转染论文,骨髓间充质干细胞论文,国家自然科学基金论文,中国组织工程研究2019年21期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国组织工程研究2019年21期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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