导读:本文包含了灰藤黄链霉菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:硫藤黄链霉菌,SF2768,异腈,铜载体
灰藤黄链霉菌论文文献综述
王利娟[1]（2017）在《硫藤黄链霉菌中双异腈铜载体SF2768生物合成的研究》一文中研究指出硫藤黄链霉菌因能够产生聚酮类抗生素aureothin和二硫吡咯酮类抗生素thiolutin而成为本课题组关注研究的对象。基因组测序分析发现除了已经被克隆的aureothin和thiolutin基因簇以外,该链霉菌还含有40多个次级代谢产物的生物合成基因簇,其中绝大多数还无法通过生物信息学分析找到其对应的产物。前期研究发现含有其中一个新型NRPS类生物合成基因簇的克隆p ZMY13-2cut可在变铅青链霉菌ZX1中异源表达产生具有广谱性抑菌活性的物质。本研究从异源表达菌株S.lividans::p ZMY13-2cut大规模发酵的产物中,分离纯化到这个活性物质,并利用质谱及核磁共振分析解析出其化学结构,证明这个NRPS基因簇(sfa基因簇)所合成的活性产物为双异腈化合物SF2768。在基因簇功能的研究中,通过生物活性测定及高分辨率液相质谱联用分析技术检测了sfa基因簇中各个基因缺失突变菌株的发酵产物,发现sfa A、sfa B、sfa C、sfa D和sfa E这五个基因的敲除会完全阻断抗生素SF2768的合成。并且在基因缺失突变菌株Δsfa E的发酵产物中分离到2个新结构的异腈化合物3和4。它们与SF2768具有相似的结构,是其生物合成途径中的中间产物和副产物。体外实验证实非核糖体多肽合成酶Sfa D中A结构域的最适底物为赖氨酸。综合基因功能研究的结果,结合生物信息学的分析,利用产物SF2768及其中间产物和副产物3和4的化学结构进行反向遗传学的推理,基本阐明了抗生素SF2768的生物合成途径。SF2768的生物合成基因簇与来自粘细菌的邻苯二酚型铁载体myxochelins的生物合成基因簇同源,暗示着SF2768可能具有金属载体的功能。生物信息学比对发现sfa生物合成基因簇中存在一个疑似的与铁离子摄入相关的ATP-bing cassette(ABC)转运蛋白,这一结果暗示其产物可能是铁载体。然而随后的高分辨质谱检测(HR-ESI-MS)、RP-TLC、CAS显色和滴定实验发现化合物SF2768不能与Fe3+发生相互作用,而是特异性的结合Cu2+形成复合物。进一步的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析的结果证实SF2768可以将铜离子通过复合物的形式运入链霉菌细胞内,说明SF2768具有铜离子载体(chalkophore)的生理功能。通过比较S.lividans::p ZMY13-2cut和突变菌株Δorf12胞外与胞内SF2768含量的比值证实MFS家族蛋白Orf12负责外排SF2768。通过ICP-MS检测S.lividans::p ZMY13-2cut和突变株Δorf19-21摄入65Cu-SF2768复合物的能力,证实ABC超家族转运蛋白Orf19-21可以以复合物形式将铜离子转运到链霉菌细胞内。以上结果初步阐明了SF2768的外排及摄入机制,为合理解释SF2768的运输模式奠定了基础。除此之外,我们还发现在生物活性测定中添加铜离子可以抵消SF2768的抑制作用。分析其原因,可能有两点:1)化合物SF2768螯合了培养基中的铜离子形成复合物,而指示菌B.subtilis 168无法摄入这种复合物,造成“铜饥饿”状态的出现,抑制了菌体的正常生长。补加铜离子可以缓解“铜饥饿”状态的出现,使得指示菌的生长得到恢复。2)SF2768的异腈基团作为活性官能团可以直接作用于指示菌细胞,抑制其生长繁殖。而补加的铜离子可以与SF2768特异性的结合,封闭化合物的活性基团,使得其抑菌作用无法正常发挥。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-12-01）
杨丽鸳,朱梦奕,何璟[2]（2016）在《硫藤黄链霉菌基因组表达文库的构建及筛选》一文中研究指出为了探讨硫藤黄链霉菌中可能存在的次级代谢产物合成及调控机制,以链霉菌整合型质粒pJTU2554为载体,构建了硫藤黄链霉菌的基因组表达文库。以模式菌株变铅青链霉菌为异源表达宿主,通过生物活性筛选获得9株具有抑菌活性的异源表达突变菌株,同时通过PCR筛选获得多个含有聚酮合酶和非核糖体多肽合成酶基因的克隆子。TLC及HPLC-MS分析发现6个携带有aureothin生物合成基因簇的cosmid,通过异源表达在变铅青链霉菌中成功合成聚酮类抗生素aureothin,证实文库异源表达及筛选的有效性。(本文来源于《华中农业大学学报》期刊2016年05期）
成雪晴,朱涛,邓子新,由德林[3]（2016）在《藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和基因文库的构建》一文中研究指出【目的】建立藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的遗传操作系统和基因文库,以便筛选次级代谢产物生物合成基因。【方法】利用大肠杆菌和链霉菌的属间接合转移的方法,以整合型载体pPM927、pSET152和复制型载体pJTU1278构建链霉菌遗传操作系统。以pCClFOS~(TM)载体,大肠杆菌EP1300~(TM)-T1~R为宿主菌构建Fosmid文库。随后,设计引物,利用"板池-行池-单克隆"的叁级PCR方法对文库进行快速筛选。【结果】pPM927、pSET152和pJTU1278均成功转入藤黄生孢链霉菌NRRL 2401,其中pSET152载体的转化效率最高。构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的基因文库,含2880个克隆,平均插入片段大小约为35 kb,空载率小于1%,文库覆盖率为99.99%,覆盖基因组16.5倍。同时,初步筛选出可能含有吲哚霉素生物合成基因簇的9个阳性克隆。【结论】成功构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和高质量的基因文库,为克隆该菌中次级代谢产物生物合成基因簇以及进一步遗传改造奠定了基础。(本文来源于《微生物学报》期刊2016年02期）
成雪晴[4]（2015）在《藤黄生孢链霉菌次级代谢产物生物合成初探》一文中研究指出藤黄生孢链霉菌(Streptomyces luteosporeus NRRL 2401)是一种可以产生硫藤黄素(thiolutin)和吲哚霉素(indolmycin)的链霉菌,这两种产物均有着良好的生物活性。为了探索该菌种中的蕴藏的次级代谢产物生物合成信息,本研究针对藤黄生孢链霉菌NRRL2401进行了初步研究。首先,我们对藤黄生孢链霉菌NRRL2401进行了发酵、分离和产物鉴定,确定了该菌株中可以产生硫藤黄素和吲哚霉素,同时对吲哚霉素的发酵条件进行了优化,为后续检测突变株中相应较低产量化合物打下了基础。同时,我们优化了该菌株的产孢条件,利用pSET152、pJTU1278和pPM927为载体,构建了一套稳定高效的遗传操作系统。随后,我们利用了pCC1FOS作为载体,构建了藤黄生孢链霉菌NRRL2401的基因文库,其中包含2880个克隆,插入片段平均大小为35kb,覆盖率大于99.9%,可以覆盖基因组16.5倍。这一高质量的文库是后续筛选相应次级代谢产物生物合成基因簇的基础。此外,我们还提取了藤黄生孢链霉菌NRRL2401的全基因组DNA,分别用solexa和SMRT两种方法进行全基因组测序,将两者的数据进行拼接,最终得到6.75 Mb的全基因组序列包含2个重迭群(contig),通过生物信息学软件进行比对,共预测到6222个基因,并对它们进行了功能注释。在得到全基因组序列后,以吲哚霉素为例,我们运用了生物合成途径预测和基因组序列信息分析两种方法对其生物合成基因簇进行了探索,构建的突变株CXQ-1产生了与野生型藤黄生孢链霉菌NRRL2401的差异峰,暗示其可能是目前未知的次级代谢产物生物合成基因。对全基因组序列进行了深入的分析,发现其中蕴藏着大量的次级产代谢物生物合成基因,如PKS、NRPS、NRPS-PKS杂合、氨基糖苷类、萜类、铁载体类、羊毛硫抗生素等,为以后深入挖掘该菌的遗传信息提供了基础。其中,我们找到了一个与黄色霉素生物合成基因簇十分相似的区域,可以在以后的研究中尝试“唤醒”该基因簇。此外,我们还针对这其中的一个NRPS基因和一个NRPS-PKS杂合基因进行了基因置换,在得到的突变株CXQ-2,CXQ-3中均有差异峰的出现,为后续进一步验证藤黄生孢链霉菌NRRL2401基因组中的生物合成信息提供了材料。(本文来源于《上海交通大学》期刊2015-05-01）
罗勤,胡洪波,彭华松,张雪洪,王威[5]（2015）在《灰藤黄链霉菌P510中两个活性吩嗪类物质的分离及结构鉴定（英文）》一文中研究指出Phenazine antibiotics phenazine-1-carboxylic acid(PCA)and 1-hydroxyphenazine(1-OH-PHZ)were purified from culture broth and mycelia of Streptomyces griseoluteus P510.Both PCA and 1-OH-PHZ exhibit strong antifungal activity against six plant pathogens,especially Fusarium oxysporium,with minimal inhibition concentrations less than 1 and 2μg·ml-1for PCA and 1-OH-PHZ,respectively.The presence of PCA and 1-OH-PHZ indicates that S.griseoluteus P510 can be used as a potential source of pesticides.(本文来源于《Chinese Journal of Chemical Engineering》期刊2015年04期）
肖顺,张婷婷,卢云彬,刘国坤,张绍升[6]（2014）在《藤黄轮丝链霉菌T0907-107抑菌活性研究》一文中研究指出从海产虾壳上分离筛选拮抗放线菌、研究其抑菌活性具有重要的实践意义。藤黄轮丝链霉菌(Streptomyces luteoverticillatus)T0907-107是分离自海产虾壳上并经初筛和鉴定的一株链霉菌,为了进一步开发和利用该菌,本研究采用极性不同的5种溶剂(丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和甲醇),对该菌株的发酵液菌体活性物质进行了提取,对粗提物的理化性质和抑菌活性进行了初步研究。结果表明,其发酵液活性物质大部分存在于菌体中,采用甲醇和丙酮浸提的效果好,其抑菌圈直径分别为26.20和22.50 mm;对粗提物进行耐热性实验,结果表明,粗提物是一种能够耐60℃高温和一定酸碱的物质;粗提物对蛋白酶K稳定;菌体及粗提物对多种植物病原菌物如烟草炭疽病菌(Colletotrichum nicotianae Sacc.)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata(Fries)Keissler)、烟草立枯丝核病菌(Rhizoctonia solani Kühn)、枇杷炭疽菌(C.gloeosporioides(Penz.)Sacc.)和白菜炭疽病菌(C.higginsianum Sacc.)有较强抑制作用。研究结果表明,甲醇和丙酮是较合适的萃取溶剂,该菌发酵液菌体粗提物极性强、稳定性好、有较广的抑菌谱,显示出好的开发前景。本研究为进一步鉴定该活性物质及开发和利用该菌提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2014年11期）
罗勤[7]（2012）在《灰藤黄链霉菌P510中吩嗪类抗生物质的纯化鉴定及发酵优化》一文中研究指出灰藤黄链霉菌P510（Streptomyces griseoluteus P510）是本实验室从土壤中分离得到的，前期研究发现其胞外产物中含有吩嗪类活性物质灰藤黄菌酸（griseolutein acid，GA）。但是，在GA的纯化过程中，发现S. gri-seoluteus P510的胞外产物中还有其它活性组分，同时发现P510的胞内产物也具有一定的生物活性。因此，本论文对S. griseoluteus P510发酵产物中的其它活性组分了进行了分离纯化和结构鉴定，同时初步研究了发酵培养基对这些组分合成的影响。首先，以抑菌活性、产物颜色及光吸收波长等吩嗪类物质的特性作参考，对S. griseoluteus P510的代谢产物进行了分离纯化和结构鉴定。通过将S. griseoluteus P510发酵液经过等体积的酸性乙酸乙酯萃取，流动相为甲醇-氯仿（1:9）的常压硅胶柱层析及制备型薄层层析，流动相为甲醇-0.1%乙酸水（55:45）的C18反相高效液相层析，最终从10L发酵液中纯化得到3.2mg的纯物质A及9.1mg的GA。同时，S. griseoluteus P510菌丝体经过丙酮萃取，流动相为甲醇-0.1%乙酸水（55:45）的C18反相高效液相层析，最终从20.1g菌丝体中纯化得到6.5mg的纯物质IX。通过全波长扫描、ESI-MS及UPLC-MS-MS、~1H-NMR波谱技术，并结合相关文献，鉴定物质A的结构为吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid, PCA)，物质IX的结构为1-羟基吩嗪(1-hydroxyphenazine,1-OH-PHZ)其次，考察了GA、PCA和1-OH-PHZ对西瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、水稻稻瘟菌、甜叶菊斑枯病菌、番茄早疫病菌和油菜菌核病原菌这六种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明叁种产物都具有明显的抑菌活性，并且对西瓜枯萎病具有最高抑菌活性，PCA、GA和1-OH-PHZ对其最小抑菌浓度分别为<1μg/mL、2μg/mL和2μg/mL。最后，考察了培养基中碳源种类（8g/L的葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉和甘油）、氮源种类（2g/L的硫酸铵、黄豆饼粉、蛋白胨和酵母提取物）、碳/氮比（葡萄糖-酵母提取物4:1、1:1和1:4）以及无机盐种类（0.5g/L的MgCl_2·6H_2O、FeSO_4·7H_2O、ZnSO_4·7H_2O和MnSO_4·H_2O）对S. gri-seoluteus P510发酵时叁种吩嗪类代谢产物合成的影响。结果表明葡萄糖、酵母提取物和MgCl_2有利于GA和PCA的合成，而甘油、黄豆饼粉和MgCl_2有利于1-OH-PHZ的合成；碳/氮比为1:1有利于GA和1-OH-PHZ的合成，碳/氮比为4:1有利于PCA的合成。以产量最高的GA为例，采用5g/L的葡萄糖、5g/L的酵母提取物和0.5g/L的MgCl_2·6H_2O为培养基，培养96小时后，GA的最高产量达到了146.4±3.6mg/L，比优化前的酵母-淀粉II培养基（可溶性淀粉8g/L，酵母提取物2g/L）中的产量提高了约5.6倍吩嗪类化合物由于其结构和活性的多样性，成为一类极有价值的生防抗生素，而链霉菌则是天然吩嗪类化合物的重要来源。本论文从S. gri-seoluteus P510胞内和胞外代谢产物中纯化鉴定了1-OH-PHZ和PCA，并初步研究了培养基对S. griseoluteus P510发酵吩嗪类产物合成的影响，为后续定向提高目标产物的产量以及深入研究不同吩嗪类物质的合成和转化机制打下了基础。(本文来源于《上海交通大学》期刊2012-07-01）
张安娜[8]（2010）在《灰藤黄链霉菌中吩嗪类物质生物合成基因簇的研究》一文中研究指出本实验室从土壤中分离出了一株能产灰藤黄菌素(griseolutein)的链霉菌——灰藤黄链霉菌(Streptomyces griseoluteus)。灰藤黄菌素是具有吩嗪核心结构的一种抗生素,具有很强的抗菌活性,对革兰氏阳性菌和阴性菌的抑制效果比吩嗪其它衍生物如绿脓菌素( pyocyanine )、绿针菌素( chlororaphin )和吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid)都要好。有研究证实,其较强的抗菌活性主要归因于吩嗪核心结构上C-6的取代基羟基乙酰甲基或1,2-二羟基乙氧基甲基。但是到目前为止还没有关于灰藤黄菌素生物合成基因的报道。为证实灰藤黄链霉菌中存在吩嗪核心结构的合成基因及后续转化基因,本研究构建了灰藤黄链霉菌的Fosmid基因组文库,为后续的实验奠定了基础。通过比对吩嗪核心结构的保守序列,设计了特异性引物,采用多轮PCR的方法筛选文库,最终筛选到7个阳性克隆。通过酶谱分析的方法,确定了最有可能包含完整吩嗪合成基因簇的克隆10D11,采用鸟枪法进行测序,并用PCR的方法补全缺口。最终,测得32973bp的碱基序列。采用ORF和同源性分析的方法,共得到27个ORF,其中6个为吩嗪生物合成的基因sghBCDEFG。ORF21-25为后续转化基因,最终的产物为灰藤黄菌素。(本文来源于《上海交通大学》期刊2010-03-01）
李一青,刘树芳,李铭刚,赵江源,李家瑞[9]（2008）在《藤黄灰链霉菌ECO 00001菌株中寡霉素A和C的分离鉴定及其活性》一文中研究指出运用生物活性追踪和色谱分离方法,从藤黄灰链霉菌ECO 00001菌丝体丙酮粗提物中分离得到两个活性化合物。经波谱分析,鉴定为大环内酯类抗生素寡霉素C和A。采用孢子萌发抑制法和菌丝生长抑制法测定寡霉素C和A对5种植物病原真菌的离体抗菌活性。当寡霉素C和A的浓度分别为15μg/mL和5μg/mL时,对百合灰霉病菌、百合炭疽病菌、烟草赤星病菌、稻瘟病菌及水稻恶苗病菌的孢子萌发抑制率均为100%;当浓度分别为100μg/mL和50μg/mL时,对上述5种病原真菌的抑菌圈直径均在10mm以上,化合物II对5个供试植物病原真菌的抑制活性强于化合物I。(本文来源于《植物保护学报》期刊2008年01期）
司端运,钟大放[10]（2006）在《藤黄灰链霉菌发酵液中寡糖类成分的微生物转化研究》一文中研究指出藤黄灰链霉菌(Streptomyces luteogriseus)是从土壤中分离出来的放线菌,其WC670号菌株的发酵液具有糖苷酶抑制活性。将发酵液经过提取和初步分离,得到次生代谢产物的有效部位称为WC670。通过化学组成研究,发现WC670为一非常复杂的寡糖类混合物,采用液相色谱-质谱联用技术(LC／MS)检测到其中至少含有100多种组成成分。由于WC670中的化学组成过于复杂,这给制订质量标准、药效学研究、体内过程研究等进一步的新药开发工作带来障碍。本文采用微生物转化手段,研究WC670中已知寡糖类成分的生物转化方式。通过筛选实验,发现从土壤中分离出的菌株2829等对寡糖类化合物结构中非还原(本文来源于《第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要》期刊2006-10-01）
灰藤黄链霉菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了探讨硫藤黄链霉菌中可能存在的次级代谢产物合成及调控机制,以链霉菌整合型质粒pJTU2554为载体,构建了硫藤黄链霉菌的基因组表达文库。以模式菌株变铅青链霉菌为异源表达宿主,通过生物活性筛选获得9株具有抑菌活性的异源表达突变菌株,同时通过PCR筛选获得多个含有聚酮合酶和非核糖体多肽合成酶基因的克隆子。TLC及HPLC-MS分析发现6个携带有aureothin生物合成基因簇的cosmid,通过异源表达在变铅青链霉菌中成功合成聚酮类抗生素aureothin,证实文库异源表达及筛选的有效性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
灰藤黄链霉菌论文参考文献
[1].王利娟.硫藤黄链霉菌中双异腈铜载体SF2768生物合成的研究[D].华中农业大学.2017
[2].杨丽鸳,朱梦奕,何璟.硫藤黄链霉菌基因组表达文库的构建及筛选[J].华中农业大学学报.2016
[3].成雪晴,朱涛,邓子新,由德林.藤黄生孢链霉菌NRRL2401遗传操作系统和基因文库的构建[J].微生物学报.2016
[4].成雪晴.藤黄生孢链霉菌次级代谢产物生物合成初探[D].上海交通大学.2015
[5].罗勤,胡洪波,彭华松,张雪洪,王威.灰藤黄链霉菌P510中两个活性吩嗪类物质的分离及结构鉴定（英文）[J].ChineseJournalofChemicalEngineering.2015
[6].肖顺,张婷婷,卢云彬,刘国坤,张绍升.藤黄轮丝链霉菌T0907-107抑菌活性研究[J].农业生物技术学报.2014
[7].罗勤.灰藤黄链霉菌P510中吩嗪类抗生物质的纯化鉴定及发酵优化[D].上海交通大学.2012
[8].张安娜.灰藤黄链霉菌中吩嗪类物质生物合成基因簇的研究[D].上海交通大学.2010
[9].李一青,刘树芳,李铭刚,赵江源,李家瑞.藤黄灰链霉菌ECO00001菌株中寡霉素A和C的分离鉴定及其活性[J].植物保护学报.2008
[10].司端运,钟大放.藤黄灰链霉菌发酵液中寡糖类成分的微生物转化研究[C].第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要.2006