导读:本文包含了铁蛋白表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:海洋食品,铁蛋白,原核表达,纯化
铁蛋白表达论文文献综述
李晗,臧佳辰,谭晓怡,夏小雨,王震宇[1]（2019）在《牡蛎重组铁蛋白GF1的原核表达、分离纯化及表征》一文中研究指出铁蛋白可形成纳米笼结构,并可作为功能性纳米材料。在本研究中,从牡蛎的内脏中提取铁蛋白基因GF1,成功克隆后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,纯化和表征。使用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱法分离纯化牡蛎铁蛋白。铁蛋白亚基的分子量为19972 Da(聚丙烯酰胺凝胶电泳),铁蛋白分子量为480 kDa(非变性凝胶电泳)。利用胰蛋白酶进行胶内酶解,使用NanoLC-Q-TOF-MS鉴定铁蛋白,并通过圆二色谱法分析其二级结构,通过动态光散射和透射电子显微镜表征铁蛋白的纳米笼结构。基于人铁蛋白重链氨基酸序列对牡蛎铁蛋白进行同源建模,构建其叁维结构。本研究为铁蛋白自组装和生物功能活性的研究提供了理论基础。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯[2]（2019）在《鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建》一文中研究指出为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年10期）
刘佩佩,杨冬梅,夏琼,欧阳俊,黄利红[3]（2019）在《转铁蛋白受体1与早期生长反应因子4在宫颈癌组织中的表达及其临床意义》一文中研究指出为研究转铁蛋白受体1(transferrin receptor type 1,TfR1)与早期生长反应因子4(early growth response protein 4, EGR4)在宫颈癌(uterine cervical carcinoma, UCC)组织中的表达水平,并分析其与UCC临床病理分期的相关性,选取2012年3月至2018年5月于武汉市第四医院就诊的慢性宫颈炎患者33例、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)患者78例、宫颈鳞癌患者63例。采集宫颈炎症和癌变组织,采用免疫组织化学法检测组织中TfR1与EGR4的表达水平,并分析两者之间的相关性及其与宫颈鳞癌临床病理分期的关系。结果显示,TfR1与EGR4在慢性宫颈炎、CIN及宫颈鳞癌组织中均有表达,其中在慢性宫颈炎组织中的表达水平最低(分别为6.1%、9.1%),而在CIN组织中的表达水平随分期的增加而上升,在宫颈鳞癌组织中的表达水平最高(分别为74.6%、57.1%)。相关性分析显示,TfR1与EGR4的表达呈正相关(r_s=0.695,P<0.001),而两者表达水平均与患者年龄、肿瘤大小无关;TfR1的表达水平在不同国际肿瘤学会和国际妇产科协会(the International Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO)分期和分化程度患者中存在差异(χ~2=16.937,P<0.001;χ~2=8.051,P=0.018),EGR4的表达水平则仅在不同FIGO分期患者中不同(χ~2=8.974,P=0.003)。提示在宫颈鳞癌的发生、发展过程中TfR1与EGR4起着重要作用,其中TfR1的表达随着肿瘤细胞分化程度的降低、FIGO分期的增加而上升,EGR4的表达水平则仅随FIGO分期的增加而上升。(本文来源于《现代免疫学》期刊2019年04期）
孙天浩,王震,陈创夫[4]（2019）在《布鲁氏菌感染对小鼠巨噬细胞铁蛋白和转铁蛋白表达的影响》一文中研究指出铁不仅是宿主生长繁殖不可或缺的基本元素,也是绝大多数微生物必备的营养元素[1]。因此,铁已成宿主-病原体相互作用的关键决定因素,影响并调控多种胞内菌的生存和复制。已有研究表明,胞内游离铁的隔离或限制是许多许多生物的主要防御策略;另一方面,宿主细胞的铁代谢也是其自我防御的一部分[2]。细菌是如何诱导宿主细胞提供铁离子,同时宿主如何保持自身有足够的铁进行氧化还原反应与其阻止胞内菌对铁利用之间的微妙平衡关系尚不清楚。研究目的:为了探讨布鲁氏菌与宿主铁代谢的关系,明确布鲁氏菌感染对小鼠巨噬细胞铁蛋白(Fn)和转铁蛋白(FPN)表达的影响。材料方法:使用布鲁氏菌疫苗A19株按照感染复数(MOI=100:1)侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,于感染0、4、12、24、48h后收集细胞,通过CFU计数观察布鲁氏菌的胞内生存能力;利用ELISA和Western Blot方法检测布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞前后,细胞铁蛋白和转铁蛋白的表达变化。研究结果:布鲁氏菌感染巨噬细胞后,随着侵染时间的延长,胞内细菌数量逐渐降低;ELISA结果显示:与未感染细胞相比,布鲁氏菌感染巨噬细胞0h、4h、12h、24h时,其胞内铁蛋白的含量显着降低(P<0.05);而巨噬细胞转铁蛋白的含量在感染0h、12h时含量显着低于未感染细胞(P<0.05),且随着感染时间的延长,胞内转铁蛋白的含量呈现先升高后降低的趋势,在感染24h时胞内转铁蛋白含量显着高于对照组(P<0.05)。Western Blot结果显示:与未感染细胞相比,布鲁氏菌感染的细胞其铁蛋白和转铁蛋白的表达量呈降低趋势。结论与讨论:布鲁氏菌感染巨噬细胞后,细胞铁蛋白的表达被显着抑制;在感染早期,细胞内转铁蛋白的表达也被不同程度的抑制。在本实验研究发现,布鲁氏菌感染前期(0h-12h),细胞内转铁蛋白的表达被抑制,这可能是由于布鲁氏菌感染诱发的急性炎症反应造成的,同时还发现随着侵染时间的延长,转铁蛋白呈现先升高后降低的变化趋势,这可能由于布鲁氏菌侵染造成小鼠巨噬细胞中铁离子的含量降低,从而导致FPN表达量降低,从而维持了巨噬细胞对铁离子含量的需求,当胞内细菌含量降低到一定水平后,胞内铁含量需求减少,铁离子逐渐积累,从而诱导转铁蛋白的表达,但该推论仍需进一步证实。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
崔中锋[5]（2019）在《铁蛋白、甲胎蛋白表达情况对肝癌的诊断价值分析》一文中研究指出目的探讨铁蛋白(FER)、甲胎蛋白(AFP)对原发性肝癌中的诊断价值。方法选取2015年2月至2017年3月在我院治疗的原发性肝癌患者89例(肝癌组),同时选取肝硬化患者90例(肝硬化组),健康志愿者90例(健康组)作为对照,检测各组Fer和AFP水平。结果肝癌组AFP和FER分别为(330. 28±93. 20) ng/mL和(312. 19±84. 28)%g/L,明显高于肝硬化组和健康组(P<0. 05);肝硬化组AFP和FER分别为(138. 28±67. 30) ng/mL和(201. 38±78. 16),明显高于健康组(P<0. 05); AFP和FER判断原发性肝癌的ROC曲线下面积分别为0.和0. 713,(P<0. 05),AFP截断值为195. 19ng/mL时,诊断灵敏度和特异度分别为84. 02%和90. 28%,FER为258. 43g/L时,诊断灵敏度和特异度分别为72. 11%和84. 29%联合诊断肝癌的ROC曲线下面积为0. 834,(p <0. 05),灵敏度和特异度分别为90. 32%和84. 55%;肿瘤肝内多发、有门脉癌栓患者AFP分别为(347. 22±80. 03) ng/mL和(383. 10±78. 47) ng/mL,明显高于肿瘤单发、无门脉癌栓患者(P <0. 05); FER水平与患者的性别、年龄、HBsAg、Child-Pugh、肿瘤大小、肿瘤数目和门脉癌栓无明显关系(P<0. 05)。结论 FER和AF联合检查在原发性肝癌中有较好的诊断价值,其中AFP与患者肿瘤数目、门脉癌栓有关。(本文来源于《西南军医》期刊2019年04期）
匡哲,张永潮,郭慧丽,苏东星[6]（2019）在《血清铁蛋白表达与非酒精性脂肪性肝病肝脏脂肪含量的关系及临床意义》一文中研究指出目的探讨非酒精性脂肪性肝病患者的肝脏脂肪含量与血清铁蛋白表达水平的关系。方法选取2017年3月-2018年3月于我院治疗的35例非酒精性脂肪性肝病患者为观察组研究对象,另选取35例健康体检者作为对照组。测定两组对象的血清铁蛋白水平并测定肝脏的脂肪含量。结果观察组的血清铁蛋白水平为(18.05±5.04)μmol/L,明显高于对照组的(14.53±5.01)μmol/L(P<0.05)。Logistic回归分析显示血清铁蛋白为非酒精性脂肪肝的影响因素。Q1组的血清铁蛋白水平为(14.08±4.88)μmol/L,与Q2组的(14.16±4.71)μmol/L比较无明显差异(P>0.05),但与Q3组的(18.96±5.37)μmol/L、Q4组(20.22±5.41)μmol/L比较差异明显(P<0.05)。结论血清铁蛋白与非酒精性脂肪性肝病患者的肝脏脂肪含量具有相关性,且血清铁蛋白表达水平是非酒精性脂肪肝患者的危险因素,非酒精性脂肪性肝病患者的肝脏脂肪含量与血清铁蛋白水平呈正相关。(本文来源于《解放军预防医学杂志》期刊2019年06期）
张恩鹏[7]（2019）在《牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达研究》一文中研究指出牛乳铁蛋白肽(LFcinB,Bovine Lactoferricin)是酸性环境下,经胃蛋白酶水解,从天然牛乳铁蛋白(BLf,Bovine Lactoferrin)N末端释放的一段含25个氨基酸残基的阳离子肽,其氨基酸序列为:Phe-Lys-Cys-Arg-Arg-Trp-Gln-Trp-Arg-Met-Lys-Lys-Leu-Gly-Ala-Pro-Ser-Ile-Thr-Cys-Val-Arg-Arg-Ala-Phe。目前已经证实LFcinB具有广谱抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗寄生虫和抗氧化等生物活性。此外,其良好的耐热性和无抗原性有利于在食品工业的应用,尤其是婴幼儿奶粉的生产。研究发现不同来源的乳铁蛋白肽中,LFcinB的抗菌活性最高,因此,LFcinB及其衍生肽的研究成为近年来的研究热点之一。巴斯德毕赤酵母表达系统是一种高效的异源蛋白表达系统,迄今为止,已有数百种异源蛋白在巴斯德毕赤酵母中成功表达。相对于其他表达系统,巴斯德毕赤酵母可以对表达的异源蛋白进行翻译后糖基化修饰和加工。其外泌型表达载体线性化后,整合入毕赤酵母基因组DNA中,可将目的蛋白分泌至发酵液中,简化了下游纯化工艺,降低生产成本。本文利用生物信息学工具,以LFcinB为模板,设计得到具有高抗菌活性的衍生肽序列。将衍生肽基因构建至表达载体,线性化后将衍生肽基因整合到巴斯德毕赤酵母基因组DNA中,通过基因工程菌外泌表达衍生肽。1、本文对LFcinB不同位点的氨基酸进行替换,设计得到5条衍生肽,利用生物信息学工具对衍生肽的理化参数、疏水残基比例、电荷数、两亲性分布、二级结构及空间结构进行预测和对比分析,然后利用抗菌肽数据库预测工具对衍生肽抗菌活性进行评价。得到一条最优化衍生肽序列L3,其疏水性为52%,电荷数为+7,两亲性分布及空间结构模拟与LFcinB相似,综合分析结果表明,衍生肽L3理论上具有比LFcinB更高的抗菌活性。2、将优化设计的衍生肽基因克隆至扩增质粒pUC-SP上,将pUC-SP-L3转化至感受态大肠杆菌DH5α中,经扩增后提取质粒,用EcoR I和Not I进行双酶切获取L3目的基因;使用T4 DNA连接酶将目的基因连接至同样经EcoR I和Not I双酶切的外泌型穿梭表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-L3;将重组表达载体pPIC9K-L3转化至感受态大肠杆菌DH5α进行扩增,提取扩增后的重组表达载体,经双酶切、PCR扩增及基因测序验证,证明衍生肽基因插入到经酶切后的pPIC9K多克隆位点,且构建的重组表达载体pPIC9K-L3基因序列准确。3、使用限制性内切酶Sac I将重组表达载体pPIC9K-L3线性化,电转化至感受态毕赤酵母GS115细胞中,涂布至最小葡萄糖培养基(MD,Minimal Dextrose Medium)平板,于30℃恒温静置培养72 h;利用选择性培养基最小甲醇培养基(MM,Minimal Methanol Medium)和MD平板筛选得到41个表型为His~+Mut~+,4个表型为His~+Mut~s的阳性转化子;PCR扩增鉴定表明,目的基因已正确整合入GS115基因组DNA中。4、使用BMGY/BMMY培养基对得到的45个阳性转化子进行筛选,设置甲醇浓度梯度为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%和3.0%,筛选得到5个具有抑菌活性的阳性转化子,其中一个抑菌活性最强,甲醇诱导浓度为2.5%。5、使用500 mL锥形瓶对筛选得到最优阳性转化子进行摇瓶发酵,验证并优化其表达条件,抑菌实验结果进一步确定,最佳甲醇诱导浓度为2.5%,最佳发酵时间为96 h;经平行试验对比分析,与天然LFcinB抑菌活性相比,衍生肽抗菌活性优于LFcinB,证明了衍生肽分子设计的合理性;Tricine-SDS-PAGE检测表明,衍生肽基因已得到了有效表达;将发酵上清液进行冷冻干燥,制备含有衍生肽成分的发酵上清液冻干粉。复水后抑菌实验表明,10×浓缩液的抑菌圈直径为同体积氨苄青霉素溶液(50 mg/mL)的2.5倍,证明浓缩液抑菌活性为氨苄青霉素的2.5倍。本研究基于抗菌肽结构-功能的关系,利用生物信息学工具设计LFcinB衍生肽,并对其抗菌活性进行了分析预测,实验结果证明了衍生肽设计的合理性,衍生肽基因得到了有效的表达,研究结果为进一步扩大生产衍生肽奠定了理论基础。(本文来源于《江苏大学》期刊2019-06-01）
冯国飞,梁瑜珊,钟素华,张哲[8]（2019）在《转铁蛋白受体1在头颈肿瘤中的表达及其意义》一文中研究指出目的:观察转铁蛋白受体1(TFR1)在头颈肿瘤中的表达,并分析其表达水平与患者临床病理特征的关系。方法:通过挖掘cDNA表达谱芯片(GSE33205、GSE29330)和人类肿瘤基因组(TCGA)中头颈肿瘤的数据,比较TFR1在肿瘤组织和正常组织中的转录水平,用KM-plotter在线软件研究TFR1表达与患者总生存率关系,进一步用头颈肿瘤组织芯片免疫组化技术检测TFR1的蛋白表达情况。结果:生物信息分析结果提示,头颈肿瘤中TFR1的表达较正常对照组织明显上调(P<0.05),TFR1高表达患者的总生存率较低(HR=1.43;P=0.0084)。免疫组化结果提示TFR1在肿瘤组织中表达较正常上调(P<0.05),高表达TFR1的头颈肿瘤患者有不良的预后(更易发生转移、更高的T分期,P<0.05)。结论:TFR1在头颈肿瘤中表达上调,可能参与肿瘤的发生和发展。(本文来源于《广西医科大学学报》期刊2019年05期）
吕自力,张恩鹏,郭爱珍,罗斌,梁鑫[9]（2019）在《重组牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出利用抗菌肽数据库和生物信息学分析工具,基于抗菌肽结构和功能的关系,设计了LFcin B衍生肽LFcin B-W4,10。为了验证衍生肽设计的合理性及表达产物功能正确性,将优化设计的基因序列经限制性内切酶酶切后,用T4 DNA连接酶连接到分泌型表达载体p PIC9K中,获得的重组表达载体p PIC9K-LFcinB-W 4,10经线性化后电转入毕赤酵母GS115中,经过G418浓度梯度筛选得到高拷贝转化子。经PCR鉴定,目的基因与酵母基因组稳定整合。阳性转化子经体积分数为2. 5%的甲醇诱导表达,表达产物用Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量约为3. 2 k Da的衍生肽LFcin B-W4,10。每24 h取样检测发酵上清液抑菌活性,结果表明,抗菌肽LFcin BW4,10对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性,诱导表达96 h时其抑菌圈直径最大。实验为探究牛乳铁蛋白肽功能-结构关系奠定了基础。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2019年15期）
王总飞,刘先本,张瑞祥,刘士磊[10]（2019）在《非小细胞肺癌患者血清铁蛋白、胸苷激酶1、基质金属蛋白酶9表达及临床价值探讨》一文中研究指出目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清铁蛋白(SF)、胸苷激酶1(STK1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达及临床意义。方法我院收治的NSCLC患者80例(观察组)、肺部良性疾病患者65例(对照1组)及健康体检者50例(对照2组),测定各组血清SF、MMP-9、STK1水平,并分析与NSCLS患者病理特征的关系。结果观察组血清SF、MMP-9、STK1水平高于对照1、2组(P <0. 05);鳞癌、III期、淋巴结转移患者血清SF、MMP-9、SKT1水平分别高于腺癌、I～II期、非淋巴结转移患者(P <0. 05); NSCLC患者血清SF与MMP-9、STK1呈正相关(P <0. 05)。结论 NSCLC患者血清SF、MMP-9、STK1水平明显上升,且叁者之间呈正相关关系,协同参与NSCLC的发生、进展。(本文来源于《实用医院临床杂志》期刊2019年03期）
铁蛋白表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
铁蛋白表达论文参考文献
[1].李晗,臧佳辰,谭晓怡,夏小雨,王震宇.牡蛎重组铁蛋白GF1的原核表达、分离纯化及表征[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
[2].朱艳平,何勇,刘佳,邢瑞林,常乐凯.鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建[J].中国畜牧兽医.2019
[3].刘佩佩,杨冬梅,夏琼,欧阳俊,黄利红.转铁蛋白受体1与早期生长反应因子4在宫颈癌组织中的表达及其临床意义[J].现代免疫学.2019
[4].孙天浩,王震,陈创夫.布鲁氏菌感染对小鼠巨噬细胞铁蛋白和转铁蛋白表达的影响[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[5].崔中锋.铁蛋白、甲胎蛋白表达情况对肝癌的诊断价值分析[J].西南军医.2019
[6].匡哲,张永潮,郭慧丽,苏东星.血清铁蛋白表达与非酒精性脂肪性肝病肝脏脂肪含量的关系及临床意义[J].解放军预防医学杂志.2019
[7].张恩鹏.牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达研究[D].江苏大学.2019
[8].冯国飞,梁瑜珊,钟素华,张哲.转铁蛋白受体1在头颈肿瘤中的表达及其意义[J].广西医科大学学报.2019
[9].吕自力,张恩鹏,郭爱珍,罗斌,梁鑫.重组牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达[J].食品与发酵工业.2019
[10].王总飞,刘先本,张瑞祥,刘士磊.非小细胞肺癌患者血清铁蛋白、胸苷激酶1、基质金属蛋白酶9表达及临床价值探讨[J].实用医院临床杂志.2019