本文主要研究内容
作者李晓（2019）在《马铃薯原生质体培养再生及利用CRISPR/Cas9瞬时转化的研究》一文中研究指出：马铃薯是我国重要的粮食作物。由于马铃薯遗传背景复杂、自交不亲和等特性,新品种培育进程缓慢,鲜食、加工专用的高品质马铃薯品种匮乏。利用生物技术手段对作物进行改造,能够有效缩短育种进程。原生质体瞬时表达系统能够避免外源基因在植物基因组上的整合,可以通过后期筛选获得具有目的性状且无外源基因整合的新种质材料。本研究旨在建立一套用于CRISPR/Cas9转化的高效马铃薯原生质体制备、转化再生体系,为马铃薯遗传改良和新种质资源创造提供技术支撑。以马铃薯栽培种大西洋为材料,针对原生质体制备、转化及再生两个关键环节,研究酶解液浓度、时间、渗透压、外源激素和起始密度等关键因素,建立并优化体系。选取文献报道的StGBSS基因外显子9上20 bp序列(GBSS9)为靶位点,构建pCAMBIA2300-GBSS载体。利用CRISPR/Cas9编辑技术在叶肉原生质体进行瞬时转化。主要研究结果如下:1.对分离条件进行了优化,初步确定纤维素酶浓度为0.7%,渗透压为0.4 M甘露醇浓度,酶解时间8-9 h,为原生质体分离的最佳条件。2.对培养条件进行优化,发现外源激素2,4-D的浓度为2 mg/L、起始密度为0.5×10~4个/mL-1×10~4个/mL的条件最利于培养。研究原生质体培养从细胞分裂阶段到分化成愈伤组织最终脱分化诱导成苗的各个时期的变化,建立了快速、稳定的原生质体再生体系。本研究从愈伤组织阶段到诱导出芽仅为40 d左右,缩短了原生质体成苗时间。3.PEG介导进行瞬时转化,共获得45株再生植株。通过PCR、测序鉴定其中10株。后期为了获得足够的转化苗,已进行二次转化,敲除检测也同时进行中。
Abstract
ma ling shu shi wo guo chong yao de liang shi zuo wu 。you yu ma ling shu wei chuan bei jing fu za 、zi jiao bu qin he deng te xing ,xin pin chong pei yo jin cheng huan man ,xian shi 、jia gong zhuan yong de gao pin zhi ma ling shu pin chong kui fa 。li yong sheng wu ji shu shou duan dui zuo wu jin hang gai zao ,neng gou you xiao su duan yo chong jin cheng 。yuan sheng zhi ti shun shi biao da ji tong neng gou bi mian wai yuan ji yin zai zhi wu ji yin zu shang de zheng ge ,ke yi tong guo hou ji shai shua huo de ju you mu de xing zhuang ju mo wai yuan ji yin zheng ge de xin chong zhi cai liao 。ben yan jiu zhi zai jian li yi tao yong yu CRISPR/Cas9zhuai hua de gao xiao ma ling shu yuan sheng zhi ti zhi bei 、zhuai hua zai sheng ti ji ,wei ma ling shu wei chuan gai liang he xin chong zhi zi yuan chuang zao di gong ji shu zhi cheng 。yi ma ling shu zai pei chong da xi xiang wei cai liao ,zhen dui yuan sheng zhi ti zhi bei 、zhuai hua ji zai sheng liang ge guan jian huan jie ,yan jiu mei jie ye nong du 、shi jian 、shen tou ya 、wai yuan ji su he qi shi mi du deng guan jian yin su ,jian li bing you hua ti ji 。shua qu wen suo bao dao de StGBSSji yin wai xian zi 9shang 20 bpxu lie (GBSS9)wei ba wei dian ,gou jian pCAMBIA2300-GBSSzai ti 。li yong CRISPR/Cas9bian ji ji shu zai xie rou yuan sheng zhi ti jin hang shun shi zhuai hua 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :1.dui fen li tiao jian jin hang le you hua ,chu bu que ding qian wei su mei nong du wei 0.7%,shen tou ya wei 0.4 Mgan lou chun nong du ,mei jie shi jian 8-9 h,wei yuan sheng zhi ti fen li de zui jia tiao jian 。2.dui pei yang tiao jian jin hang you hua ,fa xian wai yuan ji su 2,4-Dde nong du wei 2 mg/L、qi shi mi du wei 0.5×10~4ge /mL-1×10~4ge /mLde tiao jian zui li yu pei yang 。yan jiu yuan sheng zhi ti pei yang cong xi bao fen lie jie duan dao fen hua cheng yu shang zu zhi zui zhong tuo fen hua you dao cheng miao de ge ge shi ji de bian hua ,jian li le kuai su 、wen ding de yuan sheng zhi ti zai sheng ti ji 。ben yan jiu cong yu shang zu zhi jie duan dao you dao chu ya jin wei 40 dzuo you ,su duan le yuan sheng zhi ti cheng miao shi jian 。3.PEGjie dao jin hang shun shi zhuai hua ,gong huo de 45zhu zai sheng zhi zhu 。tong guo PCR、ce xu jian ding ji zhong 10zhu 。hou ji wei le huo de zu gou de zhuai hua miao ,yi jin hang er ci zhuai hua ,qiao chu jian ce ye tong shi jin hang zhong 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自内蒙古大学的李晓，发表于刊物内蒙古大学2019-08-13论文，是一篇关于马铃薯论文,原生质体论文,瞬时转化论文,植株再生论文,内蒙古大学2019-08-13论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自内蒙古大学2019-08-13论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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