导读:本文包含了假型病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:信号肽,包装滴度,日本乙型脑炎,假病毒
假型病毒论文文献综述
刘瀚扬,曹叁杰,伍锐,袁磊,刘洪明[1]（2016）在《信号肽影响日本乙型脑炎假型病毒包装效果及感染能力的研究》一文中研究指出猪乙型脑炎病毒(JEV)是一种人畜共患的虫媒病毒,具有传染性和危险性,研究这类病毒需要一种安全的研究代替工具,假型病毒技术为解决这些问题提供了一种有效的研究手段。为了构建1种高包装滴度的JEV假型病毒,我们设计并包装出了3种乙脑假型病毒(JEVpv),分别是融合表达了水泡口炎病毒(VSV)囊膜蛋白强信号肽和JEV囊膜蛋白(ME)的VSVMEpv,带有乙脑自身弱信号肽及ME蛋白的SPMEpv,以及不带有信号肽的MEpv。蛋白免疫印迹结果显示,3种JEVpv均能成功表达JEV的E蛋白及HIV的p24蛋白;透射电镜观察显示,3种JEVpv的粒子直径在1 20~180nm;Realtime RT-PCR结果显示,VSVpv的包装滴度是MEpv的17倍,而SPMEpv的包装滴度是MEpv的6倍,说明信号肽能够显着增强病毒的包装滴度,同时强信号肽的增强效果高于弱信号肽;对绿色荧光蛋白及荧光素酶的表达检测显示,3种JEVpv均能感染293T及BHK-21细胞,且感染滴度没有显着差异(P>0.05),说明信号肽不影响JEVpv的感染能力。因此,我们的研究提供了一种经济高效的日本乙型脑炎假型病毒的包装方法,为乙脑的入侵机制研究奠定了基础。(本文来源于《第七届中国畜牧科技论坛论文集》期刊2016-05-25）
王斌[2]（2014）在《新城疫假型病毒制备应用及HN单链抗体表达活性鉴定》一文中研究指出新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的危害养禽业的一种主要传染病。NDV能够感染大多数鸟类,速发型NDV为A类病原,一旦发生需要向世界动物卫生组织(OIE)报告。ND的爆发导致了严格的封港禁运。NDV是副粘病毒亚科的一名成员,RNA基因组为单股负链。目前主要采用基于NDV的中和试验来检测鸡血清中抗NDV的中和抗体,但这种传统的中和抗体检测方法耗时较长且主观,因此本研究希望通过构建NDV的假型化病毒,建立依赖于NDV假型病毒的新型中和试验方法来检测鸡血清中抗NDV的中和抗体。本研究主要构建了 NDV囊膜蛋白血凝素-神经氨酸酶(HN)和融合蛋白(F)包裹HIV-Luciferase(HIV-Luc)骨架构建感染性假型病毒,建立了采用NDV假型化HIV-Luc假型病毒来评价NDV中和抗体效价的新型中和试验方法,并且可替代传统中和试验进行血清抗NDV中和抗体评价。此外为检测NDV的HN蛋白,本研究还制备了抗NDV HN的单链抗体(scFv)并验证了其生物学活性。1新城疫病毒假型病毒体系的构建及生物活性分析本实验通过以NDV囊膜蛋白HN和F包裹HIV-Luc骨架构建感染性假型病毒,并深入研究了 HN和F胞内区对假型病毒成功包装的重要作用,即将HN和F蛋白的胞内区氨基酸直接缺失、替换为或直接融合水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)胞内区序列。试验结果显示对膜蛋白的改造会极大增强或减弱NDV假型化HIV-Luc假型病毒的感染能力。此外本研究还采用假型病毒建立了 NDV中和抗体效价的新方法。通过将该方法与NDV传统中和试验进行比较发现,本研究所建立的中和试验结果与传统中和试验结果有很高相关性(R2=0.92),并且比传统中和试验更敏感。2抗新城疫病毒HN单链抗体制备及生物活性分析为制备抗NDVHN蛋白的scFv并鉴定其生物学功能,本研究提取了抗NDVHN蛋白单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株总RNA,通过RT-PCR扩增抗HN蛋白McAb的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)编码序列,将其插入含有linker序列的载体pET-scIG中,构建抗HN的scFv(HN-scFv)原核表达重组质粒pET-HN-scFv并在大肠杆菌中诱导表达。诱导表达结果显示HN-scFv主要以包涵体形式存在。将包涵体进行复性和Ni-NTA层析柱纯化后用于流式细胞仪检测,结果显示复性纯化后的HN-scFv能够识别表达于293T细胞表面的NDV HN蛋白。该scFv的成功制备为进一步对该抗体进行改造奠定了基础。(本文来源于《福建农林大学》期刊2014-04-01）
张振杰,崔丽娜,张元鹏,赵协,王亮[3]（2010）在《假型病毒制备与应用进展》一文中研究指出假型病毒(Pseudotyped virus)是利用现代生物技术人工合成的一种病毒,它与真病毒相比不仅囊膜上具有其他病毒的糖蛋白,而且核酸分子上编码囊膜蛋白的基因被删除,所以这种病毒只能进行"一个细胞周期"的侵染,在慢病毒表达高度发展基础上[1],确保了假型病毒的(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2010年06期）
陈景艳,尹晓磊,王宜,袁丽,王超[4]（2010）在《应用假病毒和假型病毒制备抗猪瘟病毒E2蛋白中和性单克隆抗体的初步研究》一文中研究指出为制备抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体(MAb),本实验以表达CSFV E2囊膜糖蛋白的水泡口炎假病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;利用间接ELISA方法和携带荧光素酶(Luciferase)报告基因的HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒系统筛选分泌中和性E2MAb的杂交瘤细胞;测定MAb亚型并纯化后,间接ELISA方法测定MAb的效价;采用western blot鉴定MAb的特异性亲和力;利用HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒进行体外中和试验,分析MAb抑制病毒感染的能力。结果表明本实验获得了1株分泌中和性MAb的杂交瘤细胞9C8,该MAb能与E2蛋白特异性结合,而且体外抑制试验中和效价大于1∶25600。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2010年04期）
王旋[5]（2009）在《不同禽源新城疫强毒株部分基因的克隆与序列分析及新城疫假型病毒的构建》一文中研究指出新城疫又称亚洲鸡瘟,是由新城疫病毒(NDV)所引起的严重危害养禽业的主要疫病之一。在OIE被列为A类疫病,在我国被列为一类疫病。NDV属于副粘病毒科、禽腮腺炎病毒属,是一种具有囊膜、单链负股RNA病毒。NDV属二类病原微生物,易发生变异,其宿主范围广泛,新致病型不断出现。本研究拟通过克隆叁种不同禽源NDV部分基因(F、HN、NP、M)进行序列分析,在分子水平上探讨WF00C、 WF00D、WF00G株的分类地位、毒力、特点及进化关系,近而为解释NDV的演化提供依据。采用假病毒系统构建具有新城疫病毒囊膜糖蛋白一次性感染能力的假病毒,为NDV囊膜蛋白基因的功能及细胞融合活性的研究奠定基础。1.不同禽源新城疫强毒株F、HN基因的克隆与序列分析分别对鸡源、鸭源、鹅源NDV强毒分离株(WF00C、WF00D、WF00G)的F基因进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定,并对其核苷酸和推导氨基酸序列进行分析。结果表明,各分离株F基因均含1个完整的开放阅读框(ORF),全长为1662bp,编码553个氨基酸,有6个潜在的糖基化位点,裂解位点区的氨基酸序列均为112R-R-Q-K-R-F117,与强毒株特征相符,具有第101位的K(赖氨酸)和121位的V(缬氨酸),符合基因Ⅶ型NDV特征；WFooC株有13个半胱氨酸(Cys)残基,WF00D株和WF00G株各有12个Cys残基；在限制性内切酶(RE)位点(nt334-1682)的分布上,叁个毒株均存在多数鹅源分离株特有的973nt和1249nt Rsa Ⅰ位点；WFooD株与WFooC株、WFooG株以及Genebank下载的15株各基因型代表株的F基因编码区同源性进行比较,其核苷酸序列同源率为84.7～99.3%,推导的氨基酸序列同源率为88.4～98.9%；各分离株HN基因均含1个完整的(?)ORF, ORF全长为1716bp,编码571个氨基酸。WF00D洙与WF00C株、WF00G株以及Genebank下载的15株各基因型代表株的HN基因编码区同源性进行比较,其核苷酸序列同源率为84.0～100.0%,推导的氨基酸序列同源率为88.1～100.0%；叁个分离株间的同源性高,均有5个潜在的糖基化位点,13个半胱氨酸残基,且位置均相同。其中鸭、鹅源HN基因序列完全相同,其与ZJ1、SF02和NA_1等鹅源毒株之间差异较小而与Lasota、F48E9等毒株之间差异明显。根据NDV系统发育进化树、酶切位点分析以及基因分型结果,证明它们的基因型均为Ⅶd亚型。2.不同禽源新城疫强毒株NP、 P、(?)(?)基因的克隆与生物学特性分析根据GeneBank登录的新城疫病毒P基因序列,设计一对引物,运用RT-PCR技术分别对鸡源、鸭源、鹅源NDV强毒分离株(WF00C、WF00D、WF00G)的P基因进行扩增,将扩增产物提纯后克隆入pMD18-T载体后,进行酶切、PCR和测序验证,并对其核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析、系统进化树分析及叁个不同禽源分离毒株氨基酸序的比较。结果表明,各分离株NP、P、M基因均含1个完整的开放阅读框(ORF), ORF总长分别为1470bp、1188bp、1095bp,分别编码489、395、364个氨基酸。鸭源毒株与GenBank下载的各参考毒株的NP、P、M基因编码区同源性进行比较,其核苷酸序列同源率为85.2～99.4%、81.5～99.7%、84.1～99.7%,推导的氨基酸序列同源率为90.6～99.4%、80.1-99.7%、86.1～99.7%；叁个不同禽源分离株间的同源性较高,其与近年分离的ZJ1、SF02和NA_1等鹅源毒株和PX2/03、Duck/1/05、FP1/02等鸭源毒株之间差异较小,系统进化树分析表明,同属于基因Ⅶ型新城疫病毒；与Lasota、F48E9等经典毒株之间差异明显,说明该毒株相对于经典的禽源NDV在NP、P、M基因上均亦有较大的变异。各氨基酸序列的比对情况与核苷酸序列比对差异较小。通过比较不同禽源毒株在NP、P、M基因的变异情况,显示出高度的一致性,同时揭示了不同禽源间NDV病毒互感变异的存在,且各个基因的变异是同步的。其中P基因在NDV Ⅶd亚型中存在特征性氨基酸序列。3.新城疫病毒假型病毒体系的构建及生物活性分析根据已获得的鸡源F、HN的基因核苷酸序列设计一对含Flag标签蛋白编码序列PCR引物,其5’端分别引入EcoRI/SalI酶切位点,以T克隆重组质粒pMDC-F、 pMDC-HN为模板,PCR扩增NDV F、HN基因,经双酶切后定向克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA-JF-Flag、pcDNA-JHN-Flag。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后与含包装和复制功能缺陷的HIV-1基因组重组质粒pNL4-3.Luc.R-E-共转染HEK293T细胞,收获NDV假病毒上清,感染293T细胞,进行虫荧光素酶(Luciferase)报告基因活性检测。结果表明,分离、克隆的NDVF、H基因序列全长分别为1662bp和1716bp,与模板pMD-F、pMD-HN基因序列100%同源；NDV假型病毒感染HEK293T细胞与相应的对照相比Luciferase活性值显着增高。成功构建了含Flag标签序列的NDV囊膜糖蛋白基因的真核表达质粒,制备出了NDV-F/HN假型病毒。(本文来源于《南京农业大学》期刊2009-11-01）
党占国[6]（2008）在《猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白假型病毒体系的建立》一文中研究指出本试验利用RT-PCR方法分别克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)河南分离株Hn-1/06 GP5和GP6基因,并进行了遗传变异分析,结果表明该分离株的核苷酸序列和氨基酸序列与美洲型标准株VR2332的同源性分别为89.6%和89.5%;与国内江西分离株JX0612的同源性分别为97.4%和96.0%。将GP5、GP6基因克隆入真核表达载体pcDNA3.0,分别构建pcDNA-GP5单表达载体、pcDNA-GP5-GP6串联表达载体和pcDNA-GP5/6共表达载体,运用磷酸钙方法分别瞬时转染人胚肾细胞293T,48h后收集细胞,与抗PRRSV特异性血清及荧光素标记羊抗猪二抗反应,用流式细胞仪检测,GP5蛋白在293T细胞表面获得表达,共表达重组质粒的GP5蛋白荧光标记细胞数达到48.5%;单一GP5重组质粒的GP5蛋白荧光标记细胞数达到33%;串联表达重组质粒的GP5蛋白表达标记细胞数很少,仅为7.3%。该试验结果说明PRRSV GP5蛋白和M蛋白异源二聚体的形成是对GP5蛋白的转运、定位是有影响的。将构建好的pcDNA-GP5、pcDNA-GP5/6重组质粒分别与鼠白血病病毒(MuLV)病毒假型构建体系的两种质粒pHIT60(包括MuLV的结构蛋白基因,即gag和pol)和pHIT111(为MuLV的基因组及报告基因LacZ)瞬时共转染人胚肾细胞293T,48h后收获PRRS病毒假型粒子,超速离心浓缩病毒粒子,SDS-PAGE电泳,与抗GP5特异性血清及辣根过氧化物酶标记二抗反应,Western blot证实GP5蛋白在病毒假型颗粒表面表达,GP5蛋白整合到病毒假型粒子表面。将病毒假型粒子感染Marc-145和猪肺巨噬细胞(PAM)等不同的靶细胞,48h后检测报告基因,证实所构建的病毒假型粒子有感染性,确定GP5基因编码蛋白与病毒感染有关的糖蛋白抗原;同时发现由M蛋白介导GP5蛋白假型病毒颗粒的感染低度比单一GP5蛋白假型病毒颗粒感染低度高。本研究通过Western blot试验发现GP5蛋白在形成的病毒假型颗粒表面获得表达。通过感染性试验发现,其形成的假型病毒具有感染性,能够感染其宿主细胞,说明在细胞表面有PRRSV GP5蛋白的受体。经过Western blot和感染性试验证明我们已经成功构建了PRRSV的MuLV假型病毒体系,为研究PRRSV侵入细胞的机理提供了一个手段,为研究其在受体特性和组织嗜性上的变异提供了一个技术平台,也为研究PRRSV疫苗及治疗性药物具有重要的指导意义,为控制PRRS打下理论基础。(本文来源于《河南农业大学》期刊2008-06-01）
赵朴,徐耀辉,郑玉姝,贾贝贝,刘兴友[7]（2008）在《假型病毒载体研究进展》一文中研究指出假型病毒(Pseudotyped virus)是指包被其它囊膜病毒糖蛋白的病毒颗粒,但其细胞和组织嗜性由其包被的糖蛋白决定.研究表明假型病毒是一种新型的基因转移载体,具有非细胞周期依赖的整合特性、比原病毒更容易浓缩成高滴度、宿主范围广、可安全及高效地转染静止细胞等优点,这为解决目前基因治疗中的关键问题——载体系统,提供了新的途径,因此本文就将假型病毒裁体的最新研究进展做一综述,以供参考。(本文来源于《第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）》期刊2008-04-01）
赵朴,徐耀辉,郑玉姝,刘兴友[8]（2008）在《假型病毒载体研究进展》一文中研究指出假型病毒是包被其它囊膜病毒糖蛋白的病毒颗粒。由于假型病毒具有宿主嗜性广、生物安全性高和稳定性强的优点,所以成为基因治疗中向靶细胞呈递治疗基因的有效工具,引起了广泛关注。假型病毒载体将会给基因治疗研究带来新的机遇。因此,将就假型病毒载体的最新研究进展作以综述。(本文来源于《生物技术通报》期刊2008年01期）
李深伟,孟庆来,张晓燕[9]（2006）在《假型病毒的应用研究进展》一文中研究指出一种病毒的核酸被另一种病毒编码的包膜蛋白所包被,称为假型病毒。假型病毒在细胞内只能进行单一周期复制,安全性好,并具有广泛的宿主范围,更高的转染效率,更容易浓缩成高滴度,能抵抗血清补体的攻击,非细胞周期依赖性地高效转染静止细胞等优点,因而假型病毒在研究病毒进入过程、受体鉴定、中和抗体检测、疫苗评价等方面具有重要作用。(本文来源于《动物医学进展》期刊2006年11期）
康洁,李淑萍[10]（2005）在《假型病毒》一文中研究指出假型病毒是研究病毒与宿主细胞之间相互关系的一种新型实验工具,它是由一种病毒的囊膜蛋白和另一种病毒的核衣壳包装而成。由于假型病毒核酸缺失了囊膜蛋白基因,只能进行一个细胞周期的侵染,因而安全性较好。假型病毒与真病毒相比宿主范围广、滴度高、不易被血清补体灭活,可以代替真病毒进行中和抗体检测、药物筛选和特异受体鉴定等实验,也能用于基因治疗。(本文来源于《生物学教学》期刊2005年06期）
假型病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的危害养禽业的一种主要传染病。NDV能够感染大多数鸟类,速发型NDV为A类病原,一旦发生需要向世界动物卫生组织(OIE)报告。ND的爆发导致了严格的封港禁运。NDV是副粘病毒亚科的一名成员,RNA基因组为单股负链。目前主要采用基于NDV的中和试验来检测鸡血清中抗NDV的中和抗体,但这种传统的中和抗体检测方法耗时较长且主观,因此本研究希望通过构建NDV的假型化病毒,建立依赖于NDV假型病毒的新型中和试验方法来检测鸡血清中抗NDV的中和抗体。本研究主要构建了 NDV囊膜蛋白血凝素-神经氨酸酶(HN)和融合蛋白(F)包裹HIV-Luciferase(HIV-Luc)骨架构建感染性假型病毒,建立了采用NDV假型化HIV-Luc假型病毒来评价NDV中和抗体效价的新型中和试验方法,并且可替代传统中和试验进行血清抗NDV中和抗体评价。此外为检测NDV的HN蛋白,本研究还制备了抗NDV HN的单链抗体(scFv)并验证了其生物学活性。1新城疫病毒假型病毒体系的构建及生物活性分析本实验通过以NDV囊膜蛋白HN和F包裹HIV-Luc骨架构建感染性假型病毒,并深入研究了 HN和F胞内区对假型病毒成功包装的重要作用,即将HN和F蛋白的胞内区氨基酸直接缺失、替换为或直接融合水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)胞内区序列。试验结果显示对膜蛋白的改造会极大增强或减弱NDV假型化HIV-Luc假型病毒的感染能力。此外本研究还采用假型病毒建立了 NDV中和抗体效价的新方法。通过将该方法与NDV传统中和试验进行比较发现,本研究所建立的中和试验结果与传统中和试验结果有很高相关性(R2=0.92),并且比传统中和试验更敏感。2抗新城疫病毒HN单链抗体制备及生物活性分析为制备抗NDVHN蛋白的scFv并鉴定其生物学功能,本研究提取了抗NDVHN蛋白单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株总RNA,通过RT-PCR扩增抗HN蛋白McAb的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)编码序列,将其插入含有linker序列的载体pET-scIG中,构建抗HN的scFv(HN-scFv)原核表达重组质粒pET-HN-scFv并在大肠杆菌中诱导表达。诱导表达结果显示HN-scFv主要以包涵体形式存在。将包涵体进行复性和Ni-NTA层析柱纯化后用于流式细胞仪检测,结果显示复性纯化后的HN-scFv能够识别表达于293T细胞表面的NDV HN蛋白。该scFv的成功制备为进一步对该抗体进行改造奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
假型病毒论文参考文献
[1].刘瀚扬,曹叁杰,伍锐,袁磊,刘洪明.信号肽影响日本乙型脑炎假型病毒包装效果及感染能力的研究[C].第七届中国畜牧科技论坛论文集.2016
[2].王斌.新城疫假型病毒制备应用及HN单链抗体表达活性鉴定[D].福建农林大学.2014
[3].张振杰,崔丽娜,张元鹏,赵协,王亮.假型病毒制备与应用进展[J].中国预防兽医学报.2010
[4].陈景艳,尹晓磊,王宜,袁丽,王超.应用假病毒和假型病毒制备抗猪瘟病毒E2蛋白中和性单克隆抗体的初步研究[J].中国预防兽医学报.2010
[5].王旋.不同禽源新城疫强毒株部分基因的克隆与序列分析及新城疫假型病毒的构建[D].南京农业大学.2009
[6].党占国.猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白假型病毒体系的建立[D].河南农业大学.2008
[7].赵朴,徐耀辉,郑玉姝,贾贝贝,刘兴友.假型病毒载体研究进展[C].第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）.2008
[8].赵朴,徐耀辉,郑玉姝,刘兴友.假型病毒载体研究进展[J].生物技术通报.2008
[9].李深伟,孟庆来,张晓燕.假型病毒的应用研究进展[J].动物医学进展.2006
[10].康洁,李淑萍.假型病毒[J].生物学教学.2005