导读:本文包含了氨甲蝶呤多聚谷氨酸链论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:高效毛细管电泳,DNA甲基化,5-甲基-2脱氧胞嘧啶,氨甲蝶呤
氨甲蝶呤多聚谷氨酸链论文文献综述
李明[1]（2009）在《高效毛细管电泳法在细胞内整体DNA甲基化水平和氨甲蝶呤多聚谷氨酸链检测中的应用》一文中研究指出高效毛细管电泳(High Performance Capillary Electrophoresis,HPCE),是20世纪80年代在全世界范围内迅速发展起来的一种新型分离分析技术,被认为是上世纪末分离分析领域最有影响力的分支之一,也是该领域的公认前沿。高效毛细管电泳具有分离效率高、分析速度快、费用低、所需样品少、易于操作、自动化程度高、应用范围广等优点,在生命科学、生物技术、临床医学、药学分析和环境科学等领域显示了极其重要的应用前景。本文报道了高效毛细管电泳在细胞内整体DNA甲基化水平和药物(氨甲蝶呤)及其代谢产物含量测定方面的应用。建立了分析整体DNA甲基化水平新的检测方法,为大规模临床样本检测和肿瘤患者的筛查提供了技术平台。同时,采用柱上样本堆积技术,克服了毛细管电泳灵敏度较低的缺点,成功的进行了细胞内氨甲蝶呤及其代谢产物含量测定,为氨甲蝶呤临床用药和治疗效果判断提供指导,也为临床微量或超微量样本的检测提供新的思路。第一部分高效毛细管电泳法检测整体DNA甲基化水平方法的建立及其在氨甲蝶呤耐药细胞内的应用目的建立一种简便快速检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法,以用于临床甲基化诊断。探讨氨甲蝶呤获得性耐药与整体DNA甲基化的相关性。方法采用高效毛细管电泳技术,以pH 9.6的48 mmol/L的碳酸氢钠溶液[含60 mmol/L十二烷基磺酸钠(SDS)]为分离缓冲液,检测波长为256 nm,在20 kV电压下,0.7 psi压力进样时间5 s,对2′-脱氧胞苷(dC)、5-甲基-2′-脱氧胞苷(mdC)、2′-脱氧腺苷(dA)、2′-脱氧胸苷(dT)、2′-脱氧鸟苷(dG)5种物质进行分离。在此基础上检测氨甲蝶呤(MTX)诱导的肺癌A549耐药细胞株内整体DNA甲基化水平。结果通过不断优化分离缓冲液中SDS浓度(40、60、80 mmol/L)、pH值(9.4、9.6、9.8)、分离电压(15、17、19、20、22 kV)、进样时间(5、10、15、20、30 s)和毛细管温度(15、20、25、30℃),建立高效毛细管电泳检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法,可在10 min内实现dC、mdC、dA、dT、dG的完全分离,其日内变异系数(CV)＜0.2%,日间CV＜2%,最低检出线为2μmol/L。肺癌A549亲本细胞甲基化水平为(4.80±0.52)%;不同浓度(15μmol/L、30μmol/L、40μmol/L)MTX诱导耐药A549细胞株的甲基化水平分别为:(4.20±0.44)%、(3.70±0.36)%、(3.10±0.35)%。结论建立高效毛细管电泳检测整体DNA甲基化水平的方法具有高效、快速、简单、灵敏的特点;MTX耐药细胞株内整体DNA甲基化水平随着耐药浓度的增加明显降低。第二部分柱上样本堆积毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤及其代谢产物目的建立柱上堆积高效毛细管电泳法同时检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG的方法。方法以PH 7.4 75 mmol/L的磷酸盐缓冲液作为分离介质,用水和乙腈(1:1)作溶剂重组残留样品的的方法进行柱上样本堆积,0.5 psi压力进样时间50 s,在分离电压28 KV,检测波长300 nm条件下对MTX和MTXPG进行分离。在此基础上,以非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,将处于对数生长期的细胞在终浓度为50μmol/L MTX孵育24小时,检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG的含量。结果通过不断改变分离缓冲液中异丙醇(5%、8%、10%,V/V)和hp-β-CD浓度(20、25、30 mmol/L),发现在含8%的异丙醇、25 mmol/L hp-β-CD的缓冲液条件下,30min内实现7种组分的完全分离。用水和乙腈(1:1)作溶剂重组残留样品的的方法进行柱上样本堆积的方法可实现检测灵敏度提高10倍。结论建立柱上样本堆积高效毛细管电泳法可同时检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG。该方法具有高效、快速、简单、超高灵敏度的特点。总结总之,高效毛细管电泳技术可以用于细胞内整体DNA甲基化和微量药物及其代谢产物含量测定,毛细管电泳具有分离能力高、分离时间短、运行成本低且样品消耗少等许多优势。它在化学和生物化学分析领域具有很大的潜力,尤其在生物化学分析中,作为一种新兴、快速有效的分析方法将会得到快速发展。但是毛细管电泳也有其不足。我们在实验中发现石英管内表面和带高电荷的物质间的吸附是电泳过程中的主要问题,其直接影响到实验分离的效率和实验的重复性。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2009-04-01）
李明,沈佐君[2]（2008）在《氨甲蝶呤多聚谷氨酸的检测及其临床应用价值》一文中研究指出氨甲蝶呤多聚谷氨酸(methotrexate polyglutamate,MTXPG)为氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)在细胞内的代谢产物,其蓄积程度决定着MTX的细胞毒性和治疗效果。MTXPG的检测有利于监测其在细胞内的浓度,指导临床用药和预后判断。本文就MTXPG在细胞内的代谢过程、检测方法及其在临床疾病治疗中的应用价值做一综述。(本文来源于《生命的化学》期刊2008年05期）
氨甲蝶呤多聚谷氨酸链论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
氨甲蝶呤多聚谷氨酸(methotrexate polyglutamate,MTXPG)为氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)在细胞内的代谢产物,其蓄积程度决定着MTX的细胞毒性和治疗效果。MTXPG的检测有利于监测其在细胞内的浓度,指导临床用药和预后判断。本文就MTXPG在细胞内的代谢过程、检测方法及其在临床疾病治疗中的应用价值做一综述。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
氨甲蝶呤多聚谷氨酸链论文参考文献
[1].李明.高效毛细管电泳法在细胞内整体DNA甲基化水平和氨甲蝶呤多聚谷氨酸链检测中的应用[D].安徽医科大学.2009
[2].李明,沈佐君.氨甲蝶呤多聚谷氨酸的检测及其临床应用价值[J].生命的化学.2008
标签：高效毛细管电泳; DNA甲基化; 5-甲基-2脱氧胞嘧啶; 氨甲蝶呤;