导读:本文包含了穿膜能力论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:TAT,iPS,包涵体,纯化
穿膜能力论文文献综述
王军[1]（2013）在《细胞穿膜肽TAT与诱导多功能干细胞相关转录因子的融合表达及其穿膜能力研究》一文中研究指出将外源基因Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc导入成体细胞使其重编程，产生具有类似于干细胞性质的诱导多功能干细胞（iPS）是近期干细胞研究的热点。然而基于病毒技术将外源基因插入细胞基因组存在致瘤的风险，因此制约iPS的临床应用。本文利用细胞穿膜肽TAT可高效介导蛋白进入细胞的特点，设计并制备了TAT-Oct4、TAT-Sox2、TAT-Klf4、TAT-c-Myc和TAT-Nanog融合蛋白，并评价了其穿透细胞能力，为获得更为安全的iPS奠定了基础。首先扩增获得TAT-Oct4、TAT-Sox2、TAT-Klf4目的基因，利用重迭PCR技术将细胞穿膜肽TAT与c-Myc、Nanog基因片段融合，获得TAT-c-Myc、TAT-Nanog目的基因。所有PCR产物经Nco I和Xho I双酶切，插入pET28a表达载体，构建相关的重组质粒经测序验证与理论序列一致。将重组质粒转入BL21(DE3)原核表达菌株，经SDS-PAGE鉴定后，分别获得表达TAT-Oct4、TAT-Sox2、TAT-Klf4、TAT-c-Myc和TAT-Nanog的重组工程菌。SDS-PAGE结果显示，TAT-Oct4、TAT-Sox2、TAT-Klf4、TAT-c-Myc和TAT-Nanog在大肠杆菌中主要以不溶性包涵体形式表达。包涵体在变性条件下利用镍柱纯化，最终产物纯度可达90%以上。采用添加精氨酸、甘油、GSH/GSSG等的尿素梯度透析复性方法获得具有活性的TAT-Oct4、TAT-Sox2、TAT-Klf4、TAT-c-Myc和TAT-Nanog目的蛋白，其平均复性收率分别为8.8%、51.0%、47.9%、67.2%、8.5%。免疫荧光分析结果显示，5种带有细胞穿膜肽TAT的融合蛋白可穿透近100%受试细胞的细胞膜。同时确定TAT-Oct4、TAT-Sox2、TAT-Klf4、TAT-c-Myc和TAT-Nanog作用细胞的最佳浓度分别为6μg/mL、8μg/mL、8μg/mL、8μg/mL、4μg/mL。为了进一步分析各个蛋白在细胞内相对量，流式细胞仪分析结果显示，各个蛋白的荧光强度值分别为37.5、44.5、38.7、44.7、64.7，其相对荧光强度为16.6%、20.6%、17.3%、20.7%、33.2%。(本文来源于《江南大学》期刊2013-06-01）
殷慧群,张运海,王恒,孙雪萍,刘亚[2]（2012）在《Myc-R_9-EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定》一文中研究指出构建、表达、纯化和鉴定Myc-R9-EGFP融合蛋白,验证其在体外培养成纤维细胞中的转导活性。从胎猪原始生殖嵴中提取总RNA,反转录cDNA第一链。设计带九聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪c-Myc基因,克隆到pET-28a-EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21。经IPTG诱导表达,Ni 2+柱亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达产物后,将Myc-R9-EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞以观察其转导活性。结果显示:Myc-R9-EGFP融合蛋白原核表达载体构建正确,目的蛋白在诱导后获得了高效表达,经SDS-PAGE和Western blot检测证实融合蛋白片段大小正确,并在体外培养的成纤维细胞中证实了其高转导活性。本实验为进一步研究Myc蛋白的生物学特性和利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)的研究奠定了基础。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊2012年03期）
殷慧群,张运海,刘亚,曹鸿国,孙雪萍[3]（2011）在《Sox2-R_9-EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定》一文中研究指出构建、表达、纯化、鉴定Sox2-R9-EGFP融合蛋白,验证其在体外培养的成纤维细胞中的转导活性。以胎猪原始生殖嵴为材料提取总RNA,反转录成cDNA第一链,设计带9聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪Sox2基因,克隆到pET-28a-EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,Ni2+柱亲和层析纯化和SDS-PAGE检测表达产物后,将Sox2-R9-EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞中以观察其转导活性。成功构建Sox2-R9-EGFP融合蛋白原核表达载体,纯化后蛋白经SDS-PAGE检测证实融合蛋白片段大小正确,加到培养的猪胎儿成纤维细胞中可观察到Sox2-R9-EGFP融合蛋白能进入细胞,且部分可定位于细胞核。获得了Sox2-R9-EGFP原核蛋白表达载体,R9能介导Sox2蛋白进入细胞,为进一步利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS细胞)的研究奠定了基础。(本文来源于《生物医学工程研究》期刊2011年03期）
田雨香,许逊,蔺昕,陈勋,宗扬勇[4]（2009）在《原核表达的含PTD-eGFP不同分子质量融合蛋白穿膜能力的比较》一文中研究指出目的:评价HIV-1 TAT蛋白转导结构域(PTD)携带的不同分子质量融合蛋白的穿细胞膜能力。方法:诱导表达、纯化含PTD-eGFP的不同分子质量的融合蛋白,与细胞共育后,通过流式细胞术、激光共聚焦评价融合蛋白穿膜能力。结果:诱导表达、纯化获得3种含PTD-eGFP的不同分子质量的融合蛋白。流式细胞术和激光共聚焦方法分析发现3种融合蛋白均具有高效穿膜能力。结论:PTD介导融合蛋白的穿膜能力与分子质量无直接关系。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2009年04期）
蔺昕,宗扬勇,许逊,田雨香,陈勋[5]（2009）在《PTD-eGFP-△E250 mFoxp3融合蛋白的表达与穿膜能力鉴定》一文中研究指出目的:构建、表达并纯化含有蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)、eGFP的小鼠Foxp3突变体(PTD-eGFP-△E250 mFoxp3)融合蛋白,为研究小鼠Foxp3的功能奠定基础。方法:利用重迭延伸PCR方法构建pET28a-PTD-eGFP-△E250 mFoxp3原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达此融合蛋白,经Ni2+柱纯化,通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察其穿膜效率。结果:成功构建了pET28a-PTD-eGFP-△E250 mFoxp3原核表达载体,并表达和纯化了PTD-eGFP-△E250 mFoxp3融合蛋白,流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果显示融合蛋白能很好地穿过细胞膜进入细胞内,并定位于细胞质和细胞核。结论:成功制备了具有穿膜活性的PTD-eGFP-△E250 mFoxp3融合蛋白,为更好地研究小鼠Foxp3的功能与特性奠定了实验基础。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2009年01期）
许逊,蔺昕,田雨香,招倩倩,季宝菊[6]（2008）在《两种方式制备的原核表达含TAT蛋白转导域融合蛋白穿膜能力比较》一文中研究指出目的:联合应用多种技术评价不同方式制备的TAT转导结构域-eGFP-目的蛋白的穿膜效率及亚细胞定位情况,以期建立有效、稳定的高效穿膜蛋白制备方法。方法:诱导表达、纯化包涵体形式融合蛋白,分别进行直接脱盐和透析复性,并与细胞共育,然后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹法评价融合蛋白穿膜能力。结果:通过透析复性制备的融合蛋白穿膜效率极低;而纯化后直接脱盐的融合蛋白经流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹等方法分析,表明均具有高效穿膜能力。结论:两种方式制备的融合蛋白均能穿膜,但透析复性制备的蛋白穿膜效率低,且不易定位于细胞核中,影响进一步对该目的蛋白在胞核中生物学行为的研究;而脱盐的变性蛋白具有高效的穿膜效率。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2008年06期）
穿膜能力论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
构建、表达、纯化和鉴定Myc-R9-EGFP融合蛋白,验证其在体外培养成纤维细胞中的转导活性。从胎猪原始生殖嵴中提取总RNA,反转录cDNA第一链。设计带九聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪c-Myc基因,克隆到pET-28a-EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21。经IPTG诱导表达,Ni 2+柱亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达产物后,将Myc-R9-EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞以观察其转导活性。结果显示:Myc-R9-EGFP融合蛋白原核表达载体构建正确,目的蛋白在诱导后获得了高效表达,经SDS-PAGE和Western blot检测证实融合蛋白片段大小正确,并在体外培养的成纤维细胞中证实了其高转导活性。本实验为进一步研究Myc蛋白的生物学特性和利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)的研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
穿膜能力论文参考文献
[1].王军.细胞穿膜肽TAT与诱导多功能干细胞相关转录因子的融合表达及其穿膜能力研究[D].江南大学.2013
[2].殷慧群,张运海,王恒,孙雪萍,刘亚.Myc-R_9-EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定[J].生物医学工程学杂志.2012
[3].殷慧群,张运海,刘亚,曹鸿国,孙雪萍.Sox2-R_9-EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定[J].生物医学工程研究.2011
[4].田雨香,许逊,蔺昕,陈勋,宗扬勇.原核表达的含PTD-eGFP不同分子质量融合蛋白穿膜能力的比较[J].江苏大学学报(医学版).2009
[5].蔺昕,宗扬勇,许逊,田雨香,陈勋.PTD-eGFP-△E250mFoxp3融合蛋白的表达与穿膜能力鉴定[J].江苏大学学报(医学版).2009
[6].许逊,蔺昕,田雨香,招倩倩,季宝菊.两种方式制备的原核表达含TAT蛋白转导域融合蛋白穿膜能力比较[J].江苏大学学报(医学版).2008