导读:本文包含了磷脂酰丝氨酸合成酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:磷脂酰丝氨酸合成酶,基因重组,同源模建,突变
磷脂酰丝氨酸合成酶论文文献综述
陈梦雪,卢欣睿,马玉,孙明波,罗维佳[1]（2014）在《基因工程手段提高磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究》一文中研究指出为了提高目的蛋白磷脂酰丝氨酸合成酶(PSS)的表达,使用rTaq酶从E coli K12总DNA中PCR扩增获得磷脂酰丝氨酸合成酶基因片段,将其重组于高效表达载体pET28b质粒,转入相应表达菌株进行表达,收集菌体超声破碎获得含PSS的粗酶液,使用两相反应体系进行生物转化,HPLC-ELSD手段进行酶活检测。结果显示,重组菌株中PSS的酶活力比对照有所提高,同时获得酶活力提高的突变基因pssE210G。将突变基因重组于更高效的表达载体pBAD-MCS,转入相应宿主菌株表达。结果显示E.coli TOP10(pBAD-MCS-pss)表达的酶活性明显优于E.coli BL21(pET28b-pss)中表达的酶活性。以上实验结果表明,将目的基因重组于高效表达质粒有助于提高酶活力;组合到不同的表达质粒,酶活提高程度不同;磷脂酰丝氨酸合成酶基因第73位氨基酸发生突变,对其酶结构和酶活力有直接的影响。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2014年05期）
欧广云,熊智强,周圣靓,王勇,李平[2]（2014）在《阿维链霉菌来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及其在毕氏酵母中的异源表达》一文中研究指出本文旨在构建阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因(pss)的重组质粒,研究其在毕氏酵母中的异源分泌型表达。利用PCR技术克隆阿维链霉菌来源的pss基因,再通过电转化方法将重组质粒pOG-01转入毕氏酵母KM71中,构建重组工程菌KP1。实验结果表明,阿维链霉菌来源的磷酯酰丝氨酸合成酶基因在毕氏酵母KM71中成功表达,2 mL菌体上清催化50 mmol/L卵磷脂,转酯反应的转化率为58%,酶活为4.83 U/mL。(本文来源于《工业微生物》期刊2014年01期）
王尧,刘逸寒,李玉,刘晓光,王建玲[3]（2012）在《磷脂酰丝氨酸合成酶发酵及反应条件的研究》一文中研究指出研究重组磷脂酰丝氨酸合成酶表达条件及其用于酶法合成磷脂酰丝氨酸的反应条件。结果表明,在50 mL培养基中,菌体浓度为OD600=0.6时,用0.5 mmol/L的IPTG,在温度为20℃,转速为120 r/min的条件下,诱导12 h后,重组磷脂酰丝氨酸合成酶活力可达1.33 U/mL,是优化前的1.66倍。酶法转化磷脂酰丝氨酸的最适温度为38℃,最适pH为8.0,最适离子是12 mmol/L Mn2+,最适表面活性剂是1.0%Trition X-100。在最适条件下,磷脂酰丝氨酸转化率可达33.15%。(本文来源于《食品研究与开发》期刊2012年03期）
王建玲,张业尼,路福平,李玉[4]（2009）在《表达磷脂酰丝氨酸合成酶基因工程菌发酵条件的研究》一文中研究指出研究表达磷脂酰丝氨酸合成酶基因工程菌的发酵条件。利用250mL叁角瓶发酵,对携带磷脂酰丝氨酸合成酶基因重组质粒的工程菌进行诱导表达,研究培养基的pH值、装液量、转速、诱导时菌体浓度、诱导剂浓度、诱导时间和温度对磷脂酰丝氨酸合成酶酶活的影响。确定工程菌的最佳发酵条件为:培养基pH值为7.5,装液量为40mL,转速为200r/min,诱导时菌体浓度为A600≈0.4,诱导剂蔗糖的终浓度为60mmol/L,诱导时间为27h,诱导温度为37℃。在最佳发酵条件下,酶活可达2.56U/mL,是优化前的1.72倍,为中试放大提供了理论依据。(本文来源于《现代食品科技》期刊2009年05期）
张业尼,路福平,李玉,王建玲[5]（2009）在《重组磷脂酰丝氨酸合成酶的分离纯化及酶学性质研究》一文中研究指出利对重组枯草芽孢杆菌(pBES-pss)表达的磷脂酰丝氨酸合成酶进行分离纯化及酶学性质研究。pBES-pss发酵后的粗酶液经硫酸铵盐析、中空纤维膜除盐浓缩、SP-Sepharose HP离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析,基本获得电泳纯的重组磷脂酰丝氨酸合成酶,比活力可达13.62 U/mg,分子量约为53 kD。酶学性质研究表明,该酶催化卵磷脂水解反应的最适pH8.0,最适温度为35℃。稳定性研究表明:该酶在pH 6.5~9.5区间和低于45℃温度下稳定。表面活性剂及金属离子对该酶水解活性的影响结果表明,SDS、Tween20、Tween80对该酶有抑制作用,Triton X-100对该酶有增强作用;Mg2+、Zn2+、K+对该酶有抑制作用,Ca2+、Mn2+和EDTA对该酶有增强作用。(本文来源于《生物技术通报》期刊2009年03期）
张业尼[6]（2009）在《磷脂酰丝氨酸合成酶基因异源表达及酶学性质研究》一文中研究指出磷脂酰丝氨酸合成酶属于磷脂酰二酯合成酶类,具有该家族的明显特征,即含有两个间隔出现的H(x)K(x)4D保守序列。它可以催化底物相中的磷脂类物质和水相中亲核供体发生类似于酯缩合的转酯反应,是合成磷脂酰丝氨酸等稀有磷脂的良好工具酶。而利用该酶的高度专一性,对现有来源广泛的粗品磷脂进行转化和改性,可以制备一些稀有磷脂,在医药及食品保健品领域具有很大的应用价值。应用PCR技术从Escherichia coli K12中扩增到大小为1350bp编码磷脂酰丝氨酸合成酶(ExPASy P23830)的DNA片段,将其插入枯草芽孢杆菌诱导型表达载体pBES,获得重组质粒pBES-pss后转化Bacillus subtilis DB104o经蔗糖诱导后,该磷脂酰丝氨酸合成酶在Bacillus subtilis DB104 (pBES-pss)中获得胞外分泌表达,SDS-PAGE分析发现目的蛋白分子量约为53kDa,酶联比色法检测酶活力为1.50U／mL。利用250 mL叁角瓶发酵,对携带磷脂酰丝氨酸合成酶基因重组质粒的工程菌进行诱导表达,研究培养基的pH值、装液量、转速、诱导时菌体浓度、诱导剂浓度、诱导时间和温度对磷脂酰丝氨酸合成酶酶活的影响。确定工程菌优化的发酵条件为：培养基pH值为7.5,装液量为40 mL,转速为200 r／min,诱导时菌体浓度为OD600≈0.4,诱导剂蔗糖的终浓度为60 mmol／L,诱导时间为27 h,诱导温度为37℃。在最佳发酵条件下,酶活可达2.56 U／mL,是优化前的1.72倍。pBES-pss发酵后粗酶液,经硫酸铵盐析、中空纤维膜除盐浓缩、SP-Sepharose HP离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析,基本获得电泳纯的重组磷脂酰丝氨酸合成酶,比活力可达13.62U／mg,是纯化前的39.59倍。酶学性质研究表明：该酶催化卵磷脂水解反应的最适pH为8.0,最适温度为35℃。稳定性研究表明：该酶在pH6.5～9.5区间和在温度低于45℃下稳定。各种表面活性剂及金属离子对该酶水解活性的影响结果表明：SDS、Tween20、Tween80对该酶有抑制作用,Triton X-100对该酶有增强作用；Mg2+、Zn2+、K+对该酶有抑制作用,Ca2+、Mn2+和EDTA对该酶有增强作用。(本文来源于《天津科技大学》期刊2009-03-01）
张业尼,路福平,李玉,王建玲,李静文[7]（2008）在《磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及在枯草芽孢杆菌中的表达》一文中研究指出应用PCR技术从Escherichia coli K12 Sgal-(ExPASy P23830)中扩增到大小为1350bp编码磷脂酰丝氨酸合成酶的DNA片段,将其插入枯草芽孢杆菌诱导型表达载体pBES,获得重组质粒pBES-pss后转化Bacillus subtilis DB104。经蔗糖诱导后,该磷脂酰丝氨酸合成酶在Bacillus subtilis DB104(pBES-pss)中获得胞外分泌表达,SDS-PAGE分析发现目的蛋白分子量约为52kDa,酶联比色法检测酶活力为1.50U/ml,提高了磷脂酰丝氨酸合成酶的表达产量,为工业化发酵生产磷脂酰丝氨酸合成酶奠定了良好的基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2008年09期）
李斌,路福平,刘逸寒,钱磊,戴永鑫[8]（2007）在《磷脂酰丝氨酸合成酶基因pss的克隆与表达》一文中研究指出磷脂酰丝氨酸合成酶能催化转酯反应,是定向合成特定磷脂类物质特别是磷脂酰丝氨酸的工具酶,但出发菌株产量低,很大程度上限制了酶法合成磷脂酰丝氨酸的工业化应用。利用表达载体pET-22b,实现了大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的同源高效表达。利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,并用HPLC法对纯化后的重组酶的活力进行检测。结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达,蛋白含量是出发菌株的100倍,同时经6h的转酯反应转化率达到33%,重组磷脂酰丝氨酸合成酶活力达到69U/mg蛋白。(本文来源于《生物技术通报》期刊2007年04期）
磷脂酰丝氨酸合成酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文旨在构建阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因(pss)的重组质粒,研究其在毕氏酵母中的异源分泌型表达。利用PCR技术克隆阿维链霉菌来源的pss基因,再通过电转化方法将重组质粒pOG-01转入毕氏酵母KM71中,构建重组工程菌KP1。实验结果表明,阿维链霉菌来源的磷酯酰丝氨酸合成酶基因在毕氏酵母KM71中成功表达,2 mL菌体上清催化50 mmol/L卵磷脂,转酯反应的转化率为58%,酶活为4.83 U/mL。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
磷脂酰丝氨酸合成酶论文参考文献
[1].陈梦雪,卢欣睿,马玉,孙明波,罗维佳.基因工程手段提高磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究[J].微生物学杂志.2014
[2].欧广云,熊智强,周圣靓,王勇,李平.阿维链霉菌来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及其在毕氏酵母中的异源表达[J].工业微生物.2014
[3].王尧,刘逸寒,李玉,刘晓光,王建玲.磷脂酰丝氨酸合成酶发酵及反应条件的研究[J].食品研究与开发.2012
[4].王建玲,张业尼,路福平,李玉.表达磷脂酰丝氨酸合成酶基因工程菌发酵条件的研究[J].现代食品科技.2009
[5].张业尼,路福平,李玉,王建玲.重组磷脂酰丝氨酸合成酶的分离纯化及酶学性质研究[J].生物技术通报.2009
[6].张业尼.磷脂酰丝氨酸合成酶基因异源表达及酶学性质研究[D].天津科技大学.2009
[7].张业尼,路福平,李玉,王建玲,李静文.磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及在枯草芽孢杆菌中的表达[J].中国生物工程杂志.2008
[8].李斌,路福平,刘逸寒,钱磊,戴永鑫.磷脂酰丝氨酸合成酶基因pss的克隆与表达[J].生物技术通报.2007