导读:本文包含了反转录实时荧光定量论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:竹花叶病毒(BaMV),SYBR,GreenⅡ,反转录实时荧光定量PCR,(RT-qPCR)
反转录实时荧光定量论文文献综述
朱丰晓,陈家璐,张智俊[1]（2019）在《竹花叶病毒SYBR GreenⅡ反转录实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用》一文中研究指出竹花叶病毒(Bamboo mosaic virus, BaMV)是目前为止被发现感染竹类植物唯一的RNA病毒,严重影响竹类植物经济价值。因此,快速准确检测BaMV,对其预防和控制具有重要意义。本研究参考BaMV外壳蛋白基因(coat protein, CP)保守区设计2对特异性引物,运用反转录实时荧光定量PCR (reverse transcription real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)法对该病毒进行定性和定量分析,建立了一套基于SYBR GreenⅡ的BaMV的RT-qPCR检测体系。该检测体系的标准曲线循环阈值(Ct)与模板浓度的对数呈现良好的线性关系,扩增效率和相关系数分别为100%和0.999。重复性实验表明组内及组间变异系数均在1.5%以内。同时,利用此方法首次检测到8个不同竹种中亦存在BaMV。结果表明,SYBR GreenⅡRT-qPCR检测竹花叶病毒的方法灵敏、特异、重复性好,可用于竹花叶病毒的快速检测。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年04期）
高瑞红,曹阳,闫梅英[2]（2016）在《基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌》一文中研究指出目的建立基于单基因的猪霍乱沙门菌的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法。方法通过对猪霍乱沙门菌基因组及其他血清型沙门菌基因组、人类基因组的生物信息学比对及普通PCR检测分析,获得猪霍乱沙门菌特有而其他细菌及人类基因组中不存在的特异基因SC1242,针对该基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用123株多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株RNA评价该方法的特异性及敏感性。同时对猪霍乱沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测。结果利用该方法检测20株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株均扩增阴性。对纯菌RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限度为50 fg/反应,约为96个拷贝/反应。在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达90 cfu/ml。结论 rRT-PCR方法检测猪霍乱沙门菌特异性好、灵敏度高,对猪霍乱沙门菌的早期诊断具有潜在应用价值。(本文来源于《疾病监测》期刊2016年06期）
徐德顺,陈莉萍,朱晓娟[3]（2014）在《应用双重实时荧光定量反转录-聚合酶链反应方法同时检测A组轮状病毒和星状病毒》一文中研究指出目的建立能同时检测轮状病毒A群和星状病毒双重实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)方法。方法根据上述2种病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析多重rRT-PCR的重复性、特异性、敏感性;以所建立方法对128例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测,同时以基因测序进行验证。结果所建立的双重rRT-PCR检测方法对轮状病毒A群和星状病毒具有很好的特异性和重复性,轮状病毒A群灵敏度达到每个反应101拷贝,星状病毒灵敏度达到每个反应102拷贝。128例粪便标本中,轮状病毒A群和星状病毒的检出率分别为18.0%和3.1%。通过基因测序比对结果相符。结论构建可用于轮状病毒A群及星状病毒的双重rRT-PCR方法快速、特异且灵敏,可用于临床病原诊断和流行病学调查。(本文来源于《疾病监测》期刊2014年12期）
靳梦曈,孙文烁,李沁,孙晓红,潘迎捷[4]（2014）在《基于反转录实时荧光定量PCR的3种标准曲线定量活副溶血性弧菌的差值分析》一文中研究指出【目的】比较分析基于反转录实时荧光定量PCR(Real-time Reverse-Transcriptase PCR,Real-time RTPCR)技术建立的3种标准曲线定量样品中活副溶血性弧菌数量的差异性。【方法】体外转录合成带有目的片段(tlh基因)的RNA标准品,提取纯培养副溶血性弧菌(108CFU/mL)RNA样品,提取接种于虾上副溶血性弧菌(106CFU/g)RNA样品,将3种RNA样品分别反转录得到cDNA,10倍梯度稀释,进行Real-time PCR扩增,建立标准曲线A、B、C(其中标准曲线A和C为本研究首次建立)。用标准曲线A、B、C分别定量6个样品(2个纯培养副溶血性弧菌样品、2个人工污染煮熟南美白对虾样品和2个人工污染生南美白对虾样品)中活副溶血性弧菌数量,并与传统涂布计数法进行比较,分析定量结果的差异性。【结果】3种标准曲线均具有较好的线性关系(R2>0.99);3种标准曲线定量6个样品中活副溶血性弧菌结果均显着(p<0.05)低于涂布定量结果,与涂布定量结果的相对误差大小顺序为:标准曲线A(30.0%)>标准曲线C(18.8%)>标准曲线B(6.9%);标准曲线A对6个样品定量结果与标准曲线B、C定量结果的差值平均值分别为-2.25Lg CFU/mL和-0.75 Lg CFU/mL,相对误差平均值为48.2%和15.9%,标准曲线B与C对6个样品定量结果的差值在(1.47-1.53)Lg CFU/mL之间,相对误差在19.0%-23.8%之间。【结论】标准曲线B可以广泛应用于Real-time RT-PCR准确定量样品中微生物数量。(本文来源于《微生物学报》期刊2014年04期）
王和平,郑跃杰,陈小文,邓继岿,张民[5]（2013）在《直接免疫荧光与实时荧光定量反转录PCR检测常见呼吸道病毒抗原比较》一文中研究指出目的观察病毒抗原直接免疫荧光检测(direct fluorescence assay,DFA)和实时荧光定量反转录PCR(real-time reverse-transcription PCR,rt-RT-PCR)检测住院儿童鼻咽分泌物呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)和流感病毒(influenza virus,FLU)的一致性。方法应用DFA、rt-RT-PCR方法检测92例呼吸科住院患儿鼻咽分泌物RSV,应用DFA、rt-RT-PCR方法检测162例呼吸科住院患儿鼻咽分泌物FLU-A和FLU-B,比较2种方法检测的阳性率,Kappa检验分析2种检测方法的一致性。结果 DFA检测RSV的阳性率56.5%低于rt-RT-PCR检测RSV的阳性率70.7%(P<0.05),一致性良好(Kappa=0.517);DFA检测FLU-A、FLU-B的阳性率分别为3.7%和7.4%,rtRT-PCR检测FLU-A、FLU-B的阳性率分别为8.0%和15.4%,2种方法检测FLU-A阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),一致性较差(Kappa=0.168),检测FLU-B阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),一致性良好(Kappa=0.489)。结论 rt-RT-PCR检测呼吸道病毒的阳性率明显高于DFA,但2种方法的一致性良好,DFA因设备简单适合用于呼吸道病毒的早期诊断。(本文来源于《中华实用诊断与治疗杂志》期刊2013年10期）
宋嘉哲,孙福伯,庄开歌,薛恺[6]（2013）在《基于实时荧光定量反转录PCR技术的动物miRNA表达分析策略》一文中研究指出在人体内有约60%的蛋白质编码基因受到到miRNA调控。近年来,miRNA参与调控的与动物生长相关的细胞周期、发育、分化和新陈代谢等多种生物学过程也越来越受到关注。目前针对miRNA表达检测的常用方法有很多,其中基于反转录PCR(RT-PCR)的放大检测技术是应用范围最广,实施手段最灵活的一种研究策略。主要包括miRNA的全定量PCR法(miR-Q)、基于茎环引物的实时荧光定量PCR法、Poly(A)加尾性通用反转录法、miRNA表达谱的高通量RT-PCR分析和miRNA扩增谱系(mRAP)法。作者对这几种基于实时荧光定量RT-PCR技术的动物miRNA表达分析策略分别进行了介绍,对其原理、方法和应用范畴进行了概括性总结。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2013年09期）
许炎,张晨,徐庆文,黄江平,刘亚楠[7]（2013）在《应用反转录PCR和实时荧光定量PCR技术判定现场物证生物属性》一文中研究指出目的探寻分子生物学方法判定刑事案件现场物证的生物属性的可行性。方法取30份现场生物检材,其中血液(斑)、唾液(斑)、精液(斑)各10份,分别进行常规检验法和分子生物学方法,通过DNA-RNA共提取技术,将其中的mRNA运用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术反转录成cDNA,根据3种生物检材不同的目标基因设计3对特异性引物,进行实时荧光定量PCR扩增,通过熔解曲线测定不同的熔解温度(Tm)和不同长度的扩增片段来区分生物检材。结果血液(斑)的Tm值为(84.5±0.2)℃,片段长度177 bp;唾液(斑)的Tm值为(76.9±0.3)℃,片段长度134 bp;精液(斑)的Tm值为(88.5±0.2)℃,片段长度294 bp。结论与常规检验法比较,联合应用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术判定检材的生物属性特异性强、灵敏度高、结果稳定可靠,可应用于日常法医物证检验。(本文来源于《法医学杂志》期刊2013年04期）
蓝雨,赵翔,李晓丹,隗合江,王大燕[8]（2013）在《丙型流感病毒RNA标准品的制备和实时荧光定量-反转录聚合酶链反应检测方法的建立》一文中研究指出目的通过分析GenBank中丙型流行性感冒(流感)病毒的序列,建立丙型流感病毒实时荧光定量-反转录聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法,并制备丙型流感病毒的RNA标准品。方法下载GenBank中丙型流感病毒的序列,使用Beacon Designer 8软件在保守区域设计特异性引物和TaqMan荧光探针。人工合成病毒HE、NP、MP和NS基因序列,克隆到pBluescriptⅡSK(+)质粒载体,进一步通过体外转录获得RNA模板,并验证检测方法的检测极限值和特异性。结果建立了针对丙型流感病毒HE、NP、MP和NS基因的快速、可靠的实时荧光定量RT-PCR检测方法,同时制备了RNA标准品。结论本文建立的丙型流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法,可以在日常监测和临床鉴定中快速、准确地检测丙型流感病毒。(本文来源于《疾病监测》期刊2013年07期）
虞吉寅,王忠发,任宜,毛彬[9]（2013）在《TaqMan探针实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测新布尼亚病毒L基因方法的建立与应用》一文中研究指出目的建立敏感、特异、实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reversetranscription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)方法,用于新布尼亚病毒的核酸检测。方法以新布尼亚病毒L基因为靶基因设计引物以及TaqMan探针,建立real-time RT-PCR方法,并对舟山市岱山县50份临床疑似患者血清、血浆、25份正常人群血清和从患者血清中分离到的2株病毒样本进行了检测鉴定,并验证了方法的特异性、敏感性和重复性。结果建立的real-time RT-PCR具有良好的特异性,标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.999),最低检出浓度为1拷贝/μl,重复性评估批内变异系数均<1.0%。在103份检测标本中,50份临床病例血清血浆标本,30份为阳性,健康人群血清25份和28份鼠肺、鼠肾均为阴性,8份病毒分离培养血样中2份为阳性。结论本研究建立的real-time RT-PCR方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,可用于人与动物新布尼亚病毒核酸的快速检测、病毒分离培养的初步鉴定等。(本文来源于《疾病监测》期刊2013年02期）
张熔,廖静,李戈,孙怀强,石毓君[10]（2012）在《实时荧光定量反转录多聚酶链反应技术检测TEL-AML1融合基因阳性急性淋巴细胞白血病》一文中研究指出目的建立实时荧光定量反转录(qRT)-PCR方法检测小儿急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因的表达水平,探讨其临床意义。方法采用TaqMan探针qRT-PCR技术,2-△△ct相对定量法动态检测20例TEL-AML1融合基因阳性急性淋巴细胞白血病患儿初诊期(20例)、缓解期(20例)、复发期(2例),及15例骨髓形态学正常的非肿瘤非血液病儿童作为对照组的TEL-AML1融合基因表达水平。结果初诊期、缓解期、复发期及对照组的TEL-AML1中位数表达水平分别为0.62、0.31、0.76、0.23,初诊期和复发期基因表达水平均显着高于缓解期及对照组(Pa<0.05),初诊期和复发期的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。诱导缓解第33天TEL-AML1水平高表达(>对照组的P75)患儿的复发率、无病生存率期间显着高于和低于低表达患儿(Pa<0.05)。20例患儿首次诱导治疗第33天骨髓均达完全缓解,高表达8例均在强化治疗、维持治疗后TEL-AML1水平下降,但其中1例患儿在维持治疗期间TEL-AML1水平又异常升高后复发,另1例患儿在停药后2个月TEL-AML1水平再上升后复发。诱导缓解第33天qRT-PCR检测8例微小残留病阳性,骨髓形态学、染色体核型分析均阴性,实时反转录-PCR检测5例阳性。结论 qRT-PCR是一种快速、灵敏度高、特异性好的方法,诱导缓解第33天TEL-AML1融合基因水平可用于早期判断预后,TEL-AML1水平的变化可用于监测微小残留病、预测复发,指导个体化治疗。(本文来源于《实用儿科临床杂志》期刊2012年23期）
反转录实时荧光定量论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立基于单基因的猪霍乱沙门菌的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法。方法通过对猪霍乱沙门菌基因组及其他血清型沙门菌基因组、人类基因组的生物信息学比对及普通PCR检测分析,获得猪霍乱沙门菌特有而其他细菌及人类基因组中不存在的特异基因SC1242,针对该基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用123株多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株RNA评价该方法的特异性及敏感性。同时对猪霍乱沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测。结果利用该方法检测20株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株均扩增阴性。对纯菌RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限度为50 fg/反应,约为96个拷贝/反应。在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达90 cfu/ml。结论 rRT-PCR方法检测猪霍乱沙门菌特异性好、灵敏度高,对猪霍乱沙门菌的早期诊断具有潜在应用价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反转录实时荧光定量论文参考文献
[1].朱丰晓,陈家璐,张智俊.竹花叶病毒SYBRGreenⅡ反转录实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].农业生物技术学报.2019
[2].高瑞红,曹阳,闫梅英.基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌[J].疾病监测.2016
[3].徐德顺,陈莉萍,朱晓娟.应用双重实时荧光定量反转录-聚合酶链反应方法同时检测A组轮状病毒和星状病毒[J].疾病监测.2014
[4].靳梦曈,孙文烁,李沁,孙晓红,潘迎捷.基于反转录实时荧光定量PCR的3种标准曲线定量活副溶血性弧菌的差值分析[J].微生物学报.2014
[5].王和平,郑跃杰,陈小文,邓继岿,张民.直接免疫荧光与实时荧光定量反转录PCR检测常见呼吸道病毒抗原比较[J].中华实用诊断与治疗杂志.2013
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[7].许炎,张晨,徐庆文,黄江平,刘亚楠.应用反转录PCR和实时荧光定量PCR技术判定现场物证生物属性[J].法医学杂志.2013
[8].蓝雨,赵翔,李晓丹,隗合江,王大燕.丙型流感病毒RNA标准品的制备和实时荧光定量-反转录聚合酶链反应检测方法的建立[J].疾病监测.2013
[9].虞吉寅,王忠发,任宜,毛彬.TaqMan探针实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测新布尼亚病毒L基因方法的建立与应用[J].疾病监测.2013
[10].张熔,廖静,李戈,孙怀强,石毓君.实时荧光定量反转录多聚酶链反应技术检测TEL-AML1融合基因阳性急性淋巴细胞白血病[J].实用儿科临床杂志.2012
标签：竹花叶病毒(BaMV); SYBR; GreenⅡ; 反转录实时荧光定量PCR; (RT-qPCR);