导读:本文包含了酚氧化酶原基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:褐飞虱,酚氧化酶原,特性,表达模式
酚氧化酶原基因论文文献综述
陈静,张道伟,钱正敏[1]（2018）在《褐飞虱两个酚氧化酶原基因的特性及细菌诱导后的表达分析》一文中研究指出为探讨褐飞虱Nilaparvata lugens(St表)酚氧化酶原基因的发育表达模式及生物学功能,利用转录组数据和RACE方法获得两条褐飞虱酚氧化酶原基因NlPPO1(GenBank No.:ALE32751)和NlPPO2(GenBank No.:ALE32752)全长序列,褐飞虱NlPPO1全长为2316 bp,CDS编码区为2073 bp,编码690氨基酸;NlPPO2全长为2738 bp,CDS编码区为2100 bp,编码699氨基酸。通过实时荧光定量PCR方法检测NlPPO的发育表达模式及注射细菌诱导后NlPPO的表达量变化。发育表达模式结果显示,NlPPO1和NlPPO2在肠中都有较高的表达水平,而NlPPO1在表皮细胞表达量最低,NlPPO2在脂肪体表达量最低;在5龄幼虫阶段NlPPO1随时间增加表达量增加,NlPPO2表达量则维持相对较高水平;在成虫阶段NlPPO1表达量维持在较低水平,NlPPO2随时间增加表达量降低。注射大肠杆菌诱导NlPPO结果表明,诱导24 h后,NlPPO1表达量显着升高,NlPPO2表达量变化差异不显着;注射枯草芽胞杆菌诱导NlPPO结果表明,诱导24 h后,NlPPO1和NlPPO2表达量都显着升高。研究结果显示褐飞虱NlPPO1和NlPPO2的发育表达模式存在差异,对不同菌诱导免疫应答也存在差异,暗示二者具有不同的生物学功能。该结果为进一步探索酚氧化酶原在褐飞虱对病原菌的免疫响应机制奠定基础。(本文来源于《中国生物防治学报》期刊2018年01期）
于杰伦[2]（2016）在《日本沼虾酚氧化酶原激活因子基因克隆及其表达分析》一文中研究指出日本沼虾(Macrobrachium nipponense),俗称青虾,属于甲壳纲(Crustarcea)、十足目(Decaplda)、长臂虾科(Palaemonidae)、沼虾属(Palaemonidae),广泛分布于我国多种淡水水域,是我国淡水虾类养殖中一个重要的养殖品种。近年来,青虾养殖中的病害问题日益凸显,成为制约青虾养殖业健康发展的重要因素,亟待研究和解决。酚氧化酶原激活系统(Prophenoloxidaseactivating system,pro-PO)是无脊椎动物先天免疫机制中最重要的组成部分。酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidase-activating Factor,PPAF)是酚氧化物酶原激活及其辅因子丝氨酸同系物活化的重要因子,可以直接影响酚氧化酶的活力和机体的免疫防御机制。这些免疫相关因子在抵御病原微生物入侵,以及参与机体免疫活动,一直倍受关注。本研究通过RACE方法首次克隆了日本沼虾PPAF的cDNA全长序列;通过半定量PCR技术分别对目的基因进行了不同组织的表达谱分析,主要研究内容和结果如下。通过RACE技术首次得到PPAF基因的cDNA全序列,全长1261bp,包括364bp的5'UTR,822bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),75bp的3'UTR。编码区271个氨基酸,预测蛋白质分子量是30.389.86kDa,等电点为9.727,其中包含34个碱性氨基酸(K,R),18个酸性氨基酸(D,E),94个疏水性氨基酸(A,I,L,F,W,V),75个极性氨基酸(N,C,Q,S,T,Y)。开放阅读框的组成分析结果发现其G、C碱基的含量(51.09%)高于A、T碱基的含量(48.91%)。分析日本沼虾PPAF基因的氨基酸序列的结构域,结果发现在84-277区域左右有一个胰蛋白酶功能域,在77-278区域中有一胰蛋白酶家族中的类丝氨酸蛋白功能域。构建了进化树,分析表明日本沼虾PPAF基因与中国对虾的同源性最高,与家蚕、棉铃虫的同源性最低。采用荧光定量PCR技术检测了PPAF基因在沼虾体内不同组织的差异表达情况。检测结果显示,PPAF基因在健康的日本沼虾的不同组织内表达水平差异显着(P<0.05),在肝胰腺、鳃和血细胞等免疫相关的组织中的表达水平较高;而在肌肉、精巢、卵巢和甲壳等组织中的表达水平低。选取肝胰腺组织来检测PPAF基因在沼虾感染嗜水气单胞菌后不同时期的表达量变化情况,以空白组的β-actin基因作标准,检测不同时期表达量变化规律。半定量PCR分析结果发现,在感染了嗜水气单孢菌后的72h内,日本沼虾的PPAF基因在肝胰腺、鳃、血细胞组织中的mRNA表达差异显着(P<0.05)。PO活性在攻毒组中变化明显,在嗜水气单胞菌刺激后,PO活性在注射3小时后增加到4.23倍,与生理盐水注射组相比有显着的提高。嗜水气单胞菌注射后的PO活性的显着变化现象表明,细菌可以触发酚氧化酶原激活系统转换成PO,说明青虾的酚氧化酶原系统可以抵御外界细菌的侵袭,表明酚氧化酶原系统在青虾的免疫系统中起到着重要的作用。PPAF是日本沼虾最重要的体液免疫系统proPO的关键性因子,在机体的免疫系统中占有重要地位。本研究对PPAF基因在感染嗜水气单胞菌后免疫组织中的表达规律的研究,揭示了日本沼虾在对抗细菌性疾病的免疫防御中的遗传机制奠定了基础;进一步揭示了酚氧化酶原激活系统参与免疫防御的遗传机制奠定了基础。(本文来源于《山东农业大学》期刊2016-04-28）
王景[3]（2015）在《拟穴青蟹酚氧化酶原激活系统关键基因及血蓝蛋白基因的研究与分析》一文中研究指出拟穴青蟹(Scylla paramamosain)是我国重要的海水养殖经济蟹类之一。近年来,青蟹的人工养殖规模不断扩大,但在青蟹的人工育苗和养殖过程中因容易受水质、微生物感染等导致存活率仍较低,同时养殖业抗生素药品的大量使用使病原微生物的耐药性不断增加,这些都极大地限制了产业的发展。因此对青蟹免疫机制的研究具有十分重要的意义。酚氧化酶系统是无脊椎动物特有的一套非自身识别免疫系统,尤其是在节肢动物的免疫机制中具有非常重要的作用。血蓝蛋白是一类在节肢动物和软体动物中负责运输氧气的含铜呼吸蛋白。近年来很多研究表明节肢动物的血蓝蛋白和酚氧化酶具有同源关系,结构上非常相似,且在一定条件下血蓝蛋白又具有酚氧化酶活性。本研究主要通过构建拟穴青蟹的c DNA文库,借助c DNA末端快速扩增(RACE)技术和实时荧光定量PCR技术对拟穴青蟹酚氧化酶原激活系统中的两个相关基因以及血蓝蛋白基因进行了克隆和不同模式下的表达分析,并利用生物信息学的方法对获得的序列进行了分析研究,试图从分子生物学的角度来探讨这些基因之间的关系以及它们在拟穴青蟹免疫过程中的作用,以期为缓解拟穴青蟹养殖业的病害问题提供重要的理论基础。本文主要研究结果总结如下:1、酚氧化酶原激活酶(PPAF)是一类含有clip结构域的丝氨酸蛋白酶,可以激活无活性的酚氧化酶原(pro PO),从而引起病原菌的黑化反应,是酚氧化酶系统的关键组成部分。本文克隆到了拟穴青蟹PPAF1和PPAF2两个基因的c DNA全长,比对结果显示它们与其他物种的PPAF具有较高的同源性,综合分析后分别命名为Sp PPAF1和Sp PPAF2。Sp PPAF1序列c DNA全长为1677bp,其中包括52bp的5’-末端非转录区(5’-UTR),1131bp的ORF和494bp的3’-末端非转录区(3’-UTR),共编码376个氨基酸,预测蛋白分子量38.43 k Da。Sp PPAF2序列c DNA全长为1808bp,其中包括88bp的5’-UTR,1125bp的ORF和595bp的3’-UTR,共编码374个氨基酸,预测蛋白分子量38.56 k Da。Sp PPAF1和Sp PPAF2都含有如下结构:信号肽区域、一个典型的N端clip结构域和具有催化活性的C端丝氨酸蛋白结构域。两者氨基酸序列相似性为81.0%。荧光定量PCR实验结果显示Sp PPAF1和Sp PPAF2在7个组织(血液、肝胰腺、鳃、精巢、心脏、肌肉和卵巢)中均有表达,其中Sp PPAF1在鳃、精巢和血液中表达量较高,Sp PPAF2主要在血液中表达。用副溶血弧菌感染处理大眼幼体,结果显示Sp PPAF1和Sp PPAF2的表达量除了感染的前6 h变化趋势有略微不同外,在接下来的6 h都显着升高,至12h时达到最大值,随后下降,至72 h时基本恢复正常水平。结果表明拟穴青蟹中PPAF可能与机体对外来病原的免疫防御作用密切相关,作用周期大约为72 h。2、酚氧化酶原(pro PO)是一种含铜的保守酶,也是酚氧化酶原激活系统的关键组成部分和黑色素生成的关键酶。本文获得了拟穴青蟹pro PO基因的c DNA全长,比对结果显示它与其他物种的pro PO具有较高的同源性,经综合分析后确定命名为Sppro PO。该序列全长为2688bp,其中包括40bp的5’-UTR,2133bp的ORF和515bp的3’-UTR,共编码710个氨基酸,预测蛋白分子量约为81.5 k Da,等电点约为6.01。序列分析结果显示Sppro PO含有叁个串联的血蓝蛋白保守结构域和两个保守的铜离子结合位点。运用荧光定量PCR技术检测了Sppro PO在拟穴青蟹不同组织中的表达差异情况,结果显示Sppro PO在拟穴青蟹的7个不同组织中均有表达,其中在血液和精巢中表达量较高,在心脏中的表达量最低。本实验为深入研究拟穴青蟹酚氧化酶原基因的结构和功能奠定了基础。3、血蓝蛋白(Hc)是许多节肢动物和软体动物中重要的呼吸蛋白,为动物的生存提供了重要的支撑。本文克隆到了拟穴青蟹中Hc1、Hc2、Hc3和Hc4四个基因的c DNA全长,比对结果显示它与其他物种的Hc具有较高的同源性,综合分析后分别命名为Sp Hc1、Sp Hc2、Sp Hc3和Sp Hc4,全长分别为2281 bp,2002 bp,2184 bp和2069 bp,分别编码676,570,672和671个氨基酸,预测蛋白分子量分别为76.8,65.0,76.3和76.4 k Da。序列分析结果显示Sp Hc含有叁个串联的血蓝蛋白保守结构域和两个保守的铜离子结合位点。运用荧光定量PCR技术研究了血蓝蛋白基因在拟穴青蟹各个不同组织,溞状幼体Z1-Z5期、大眼幼体M期以及仔蟹C1期等7个不同发育阶段的时空表达差异。分析结果表明Sp Hc在各个组织中均有表达,其中主要在肝胰腺、精巢和血液中表达;另外,在不同的发育时期也均有表达,其中在前6个发育时期时,Sp Hc3和Sp Hc4的表达量要显着高于Sp Hc1和Sp Hc2,但到仔蟹期时Sp Hc3和Sp Hc4的表达量突然下降,低于Sp Hc1和Sp Hc2。副溶血弧菌感染试验结果表明:在感染后的前3 h内,Sp Hc的表达量明显下降,在随后的9 h逐渐上升,至12 h时达到最大值。研究结果说明血蓝蛋白基因可能参与了拟穴青蟹的免疫抗菌过程,且四个血蓝蛋白基因在拟穴青蟹不同发育时期可能发挥着不同的作用,Sp Hc3和Sp Hc4可能在青蟹浮游生活时期发挥主要作用,而Sp Hc1和Sp Hc2可能在其底栖及以后的生活中发挥主要作用。综上所述,本研究共克隆得到了7个与拟穴青蟹酚氧化酶系统相关的基因的c DNA全长序列,并研究了他们在拟穴青蟹中不同模式下的表达差异情况。研究结果初步揭示了拟穴青蟹酚氧化酶系统及血蓝蛋白的分子基础以及应对微生物感染的调控趋势,为今后这些基因的功能研究奠定了基础。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2015-06-10）
白平平[4]（2015）在《桔小实蝇酚氧化酶酶学特性及其酶原基因的研究》一文中研究指出酚氧化酶在昆虫的生长发育和变态过程中具有重要作用,该酶主要参与昆虫伤口愈合、黑化作用和硬化作用。其中,黑化与硬化在昆虫表皮的形成、抵御外源病原菌以及免疫反应中起到重要的作用。因此,酚氧化酶及其酶原蛋白成为昆虫生长发育与免疫反应研究的热点。桔小实蝇是一种极具破坏力的多食性害虫,可危害250多种果蔬。化蛹和羽化是昆虫在生长发育过程中,面临复杂环境而成功生存繁衍的重要变态过程。桔小实蝇成虫产卵于果实中,幼虫期主要在果实内部为害,造成果实腐烂落地,进而在土壤中化蛹羽化为成虫后继续为害。当前,对桔小实蝇的防治主要依靠化学药剂,导致桔小实蝇对多种化学药剂产生了抗性,所以寻找新方法新途径进行治理已刻不容缓。本学位论文研究以桔小实蝇为对象,以酚氧化酶及其酶原为靶标,针对桔小实蝇幼虫-蛹变态阶段该酶的作用开展了系统而深入地研究,主要结果如下：1.桔小实蝇不同发育阶段及组织中酚氧化酶酶学特性及其酶原基因表达模式以邻苯二酚为底物,分别测定桔小实蝇不同发育阶段酚氧化酶活力。结果表明：桔小实蝇在不同发育阶段酚氧化酶活力的高低存在显着性差异,其中3龄幼虫的酶活力最高,1龄幼虫的酶活力最低。测定桔小实蝇3龄幼虫表皮、脂肪体和中肠等组织的酚氧化酶活力,结果表明：桔小实蝇表皮、脂肪体和中肠等组织均可检测到酚氧化酶的活性。其中表皮中酚氧化酶活力最高,而脂肪体中酚氧化酶活力最低。分析桔小实蝇酚氧化酶的动力学常数发现,以邻苯二酚为底物时,桔小实蝇不同发育阶段间酚氧化酶的米氏常数(Km)值差异显着,1龄、2龄幼虫中酚氧化酶的最大反应速度(Vmax)值显着大于3龄幼虫、蛹和成虫的Vmax。以L-多巴为底物结果大致相同。桔小实蝇不同组织间酚氧化酶的Km值无显着性差异,表皮酚氧化酶的Vmax值显着高于脂肪体和中肠酚氧化酶的Vmax值；但以L-多巴为底物时,各组织酚氧化酶的Km和Vmax均无显着性差异。桔小实蝇不同发育阶段及组织中酚氧化酶酶促反应的最适pH为7.5,温度为37。C。采用qPCR技术,以α-Tubulin为内参基因,解析桔小实蝇酚氧化酶酶原基因(BdPPO1)在不同发育阶段及组织的表达模式。结果表明,BdPPO1主要在桔小实蝇幼虫-蛹转化期以及表皮中表达量较高,说明酚氧化酶活力及BdPPO1表达量与桔小实蝇生长发育紧密相关,尤其是在其变态发育阶段。2.曲酸对桔小实蝇酚氧化酶及生长发育的影响曲酸是酚氧化酶的典型抑制剂,能够有效的抑制昆虫酚氧化酶的活性。将曲酸加入到桔小实蝇人工饲料并喂食新孵化的幼虫,结果发现,桔小实蝇幼虫期和蛹期显着延长,化蛹率和羽化率显着降低,幼虫体态明显小于对照组。以邻苯二酚为底物,喂食曲酸饲料的桔小实蝇幼虫体内及表皮中酚氧化酶酶活力显着降低,而BdPPO1基因表达量显着上调,推测桔小实蝇体内可能存在一种自我补偿机制。进一步分析酚氧化酶动力学发现,饲喂曲酸后酚氧化酶的Km值未发生显着变化,但Vmax值显着降低,酶促反应的最适pH和温度未发生变化。上述结果说明曲酸能够有效抑制桔小实蝇酚氧化酶的活性,并且导致桔小实蝇生长发育延迟。3.20-羟基蜕皮酮(20E)及金属离子对桔小实蝇BdPPO1表达量的影响对桔小实蝇3龄幼虫注射20E后,发现桔小实蝇幼虫提前化蛹。检测注射不同浓度的20E后BdPPO1的表达量发现,与对照相比,注射浓度为0.5μg/mL时该基因表达量显着上调,而注射浓度降低或提高至0.15μg/mL和15μg/mL时该基因的表达量显着下调。离体酶活性测定发现,Zn2+、Mg2+、Ca2+和Cu2+等4种二价金属离子均能有效地激活并提高桔小实蝇酚氧化酶的活力。向新孵化幼虫饲喂含金属离子的人工饲料6d后,酚氧化酶活力显着升高,其中饲喂锌离子后酚氧化酶活力最高,而饲喂镁离子后酚氧化酶活力最低。进一步采用qPCR技术检测桔小实蝇BdPPO1表达量发现,饲喂4种金属离子后该基因的表达量均显着上调。上述结果说明,桔小实蝇BdPPO1表达量受20E调控,酚氧化酶作为一种金属酶,能够有效的被金属离子激活。4.桔小实蝇BdPPO1基因的功能验证利用RNAi技术进一步验证了桔小实蝇BdPPO1基因的功能。结果表明,对桔小实蝇3龄幼虫注射BdPPO1基因dsRNA 24 h和48 h后,BdPPO1基因达量显着降低,幼虫出现不能正常化蛹、表皮黑化等现象,同时化蛹率显着降低。上述结果说明BdPPO1基因可作为一个潜在的靶标来开发新的防治药剂,特别是具有作为基于RNAi技术防控桔小实蝇及其它害虫的潜力。(本文来源于《西南大学》期刊2015-04-15）
冼健安,王安利,苗玉涛,钱坤,王冬梅[5]（2015）在《饲料铜水平对斑节对虾血细胞中酚氧化酶原系统相关基因表达的影响》一文中研究指出以不同铜离子添加水平(0 mg·kg-1、10 mg·kg-1、25 mg·kg-1、40 mg·kg-1、55 mg·kg-1和110 mg·kg-1)的饲料喂养斑节对虾Penaeus monodon 8周,测定对虾血细胞中酚氧化酶原系统相关基因(pro PO1、pro PO2、PE、PPAF和BGBP)表达水平的变化。结果显示,与对照组相比,当铜添加水平为40~55 mg·kg-1时,proPO1的表达量显着上升;当铜添加水平为25~55 mg·kg-1时,pro PO2、PE和PPAF的表达量显着上升;铜添加水平对BGBP的表达量没有显着影响。血清PO活力也在铜添加水平为25~55 mg·kg-1时显着提高。这些结果表明,饲料中添加一定量的铜离子可诱导pro PO1、pro PO2、PE和PPAF表达量的上调,从而提高血清PO活力。根据上述结果,针对提高酚氧化酶原系统免疫功能,在本基础饲料配方中适宜的铜添加水平为25~55 mg·kg-1。(本文来源于《四川动物》期刊2015年02期）
赵永贞,陈秀荔,曾地刚,杨春玲,彭敏[6]（2014）在《凡纳滨对虾酚氧化酶原激活因子基因的克隆及表达分析》一文中研究指出为研究酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidase-activating factor,PPAF)在凡纳滨对虾感染传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)过程中所起的免疫作用,实验采用逆转录聚合酶链式反应和cDNA末端快速扩增技术克隆了凡纳滨对虾PPAF基因的全长cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析了该基因在正常凡纳滨对虾和感染IHHNV凡纳滨对虾不同组织的表达情况。结果显示,克隆获得了1 986 bp凡纳滨对虾PPAF基因cDNA全长序列(GenBank登录号JQ684529),其中含有一个1 629 bp开放阅读框(ORF),两翼分别存在21 bp(5'端)和336 bp(3'端)的非翻译区。该基因的开放阅读框共编码542个氨基酸,氨基酸序列269~517处存在功能结构域——丝氨酸蛋白酶结构域,氨基酸序列494~502区域存在一个ALPHA-2巨球型免疫蛋白功能位点,316~321区域有一个组氨酸酶活性位点;定量PCR分析发现,该基因无论在正常对虾还是感染IHHNV对虾的心脏、肝胰腺、肠、胃和肌肉中的表达量均较低,在血液和鳃腺中的表达量明显高于其他组织,但感染IHHNV对虾不同组织中PPAF基因的表达量均低于正常对虾相应组织中的表达量。定量检测PPAF基因在对虾鳃腺组织中的表达情况显示,对虾感染IHHNV后,PPAF基因的表达量急剧降低,3 h时至最低,之后表达量逐渐上升,48h时达最高值。研究表明,IHHNV可抑制PPAF基因的表达,因而抑制酚氧化酶原免疫系统的有效激活,或是其感染对虾并在对虾组织内增殖的原因之一。(本文来源于《水产学报》期刊2014年08期）
陆艳莉[7]（2014）在《酚氧化酶原（proPO）编码基因的原核表达及其体内表达水平研究》一文中研究指出酚氧化酶(phenoloxidase,简称PO, EC.1.14.18.1)在昆虫的生理发育和内源性免疫过程中具有重要功能,如黑化或包被入侵的病原物、昆虫伤口的愈合等。目前对酚氧化酶酶原(proPO)的激活途径进行了很多研究,但对激活的整个过程和机制仍不太清楚；有研究表明鳞翅目昆虫的proPO主要产生于血淋巴的类绛色细胞,但其进化和形成过程尚不十分明确。为了进一步研究昆虫proPO的性质与功能,探讨其在昆虫生长发育过程中的作用,本文采用鳞翅目害虫小菜蛾(Plutella xylostella)和菜青虫(Pieris rapae)为研究对象,采用RT-PCR技术克隆得到了编码小菜蛾PxPPO1和PxPPO2基因的全长编码区序列,并将该片段与表达载体pET-30a连接构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞后由IPTG诱导表达,获得融合蛋白。另外,本文采用球孢白僵菌(Beauveria bassiana)的成熟孢子侵染菜青虫4龄幼虫,并通过实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)分析了侵染不同时间后PPO1在菜青虫体内的表达情况；收集不同发育时期菜青虫血淋巴,统计其类绛色细胞的数量,研究不同发育时期类绛色细胞密度与PrPPO1表达量之间的关系。主要内容如下：1.将克隆到的PxPPO1的ORF片段插入到pET-30a原核表达载体中,构建了长度为7451bp的重组质粒PET-30a-PxPPO1,在大肠杆菌系统中诱导表达,得到83kDa(PxPPO178.56kDa, His-tag4.66kDa)的目标蛋白,该目标蛋白的表达量占总细胞的50%以上,超声破碎后分析,常规条件下诱导表达的蛋白以包涵体的形式存在。2.将克隆得到的PxPPO2的ORF片段插入到pET-30a原核表达载体中,构建了长度为7480bp的重组质粒pET-30a-PxPPO2,在大肠杆菌系统中诱导表达,得到84.5kDa (PxPPO279.86kDa, His-tag4.66kDa)的目标蛋白,该目标蛋白的表达量占总细胞的50%以上,超声破碎后分析,常规条件下诱导表达的蛋白以包涵体的形式存在。3.优化诱导表达条件的结果表明,PxPPO1经不同浓度的IPTG诱导产生融合蛋白的表达量均占细菌总蛋白表达量的60%以上,不同浓度对蛋白表达量的影响不明显；PxPPO1在同样条件下诱导不同时间,3h后,融合蛋白的表达量占细菌总蛋白表达量的32%,8h后,达到总蛋白的62%；不同温度下诱导PxPPO1,30℃融合蛋白有较高的表达,约占细菌总蛋白表达量的84%；在15℃诱导该比例达到73%。4. PxPPO2经不同浓度的IPTG诱导产生融合蛋白的表达量均占细菌总蛋白表达量的62%以上,不同浓度对蛋白表达量的影响不明显；PxPPO2在同样条件下诱导不同时间,3h后,融合蛋白的表达量仅占细菌总蛋白表达量的27%；6h后,所占比例明显上升,达到40%,诱导8h后,达到58%；不同温度下诱导PxPP02,在15℃、20℃、25℃和30℃培养条件下诱导的蛋白占菌体总蛋白的比例分别为60%、83.8%、86.6%和88.1%。5.经western印迹鉴定,诱导表达的融合蛋白为试验所需要的目标蛋白。这为下一步制备PxPPO1和PxPPO2多克隆抗体,对PxPPO基因进行蛋白水平的分析和研究该酶的功能奠定了基础,为酚氧化酶调控昆虫生长发育及免疫反应的研究提供了新思路。6.球孢白僵菌(Beauveria bassiana)的成熟孢子侵染菜青虫4龄幼虫试验表明,侵染6h-12h, PrPPO1的表达量显着降低,在6h和12h的表达量分别为对照的0.59倍和0.18倍。然而在侵染后72h PrPPO1的表达量大幅提高,约为对照表达量的9.00倍。在侵染后2h(1.12倍)、24h(0.33倍)、48h(1.06倍)PrPPO1的表达水平与对照相比没有显着性差异。7.统计了不同发育时期菜青虫血淋巴中类绛色细胞的数量,菜青虫4龄幼虫类绛色细胞密度为20.44×104个/mL。相对其他龄期密度最大,与菜青虫4龄幼虫较高的PrPPO1的表达量相一致。2龄和5龄幼虫类绛色细胞密度分别为13.78×104个/mL和13.33×104个/mL。相对而言,菜青虫1龄和3龄幼虫类绛色细胞密度较低,分别为10.22×104个/mL和8.89x104个/mL,与1龄和3龄PrPPO1的较低的表达量较一致。结果表明在菜青虫的不同发育时期PrPPO1的表达水平与类绛色细胞密度之间存在相应的关系。(本文来源于《山东农业大学》期刊2014-05-01）
李洋,刘萍,李健,李吉涛,马朋[8]（2014）在《脊尾白虾酚氧化酶原基因克隆及表达分析》一文中研究指出利用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)酚氧化酶原(Prophenoloxidase,proPO)基因。该基因cDNA全长3092bp,开放阅读框2013bp,编码671个氨基酸,其预测分子量为74.82kDa。脊尾白虾酚氧化酶原基因推导的氨基酸序列与其他虾类酚氧化酶原氨基酸序列同源性较高(65%—78%),该氨基酸序列具有铜离子结合位点等酚氧化酶原基因所具有的典型特征位点。组织表达分析结果表明,proPO基因在脊尾白虾血细胞中表达量最高,其次是鳃和肝胰腺组织,在肌肉中几乎不表达。利用荧光定量PCR分析了不同盐度胁迫下脊尾白虾血细胞和鳃组织中的表达变化规律,结果发现在不同盐度胁迫后血淋巴proPO表达量显着高于对照组,盐度胁迫初期鳃组织proPO表达量显着高于对照组。本研究结果表明脊尾白虾酚氧化酶原基因参与了盐度胁迫引起的机体应激反应。(本文来源于《海洋与湖沼》期刊2014年02期）
杜志强,林涛,李新苍[9]（2013）在《拟穴青蟹酚氧化酶原基因的抗菌免疫反应研究》一文中研究指出以拟穴青蟹酚氧化酶原(SP-proPO)基因作为研究对象,通过金黄色葡萄球菌和哈维氏弧菌免疫刺激后表达模式的分析,来探索SP-proPO基因在防御细菌入侵过程中的先天免疫作用。结果表明,SP-proPO基因在正常拟穴青蟹的血细胞中存在较高的表达量;而且在细菌刺激的情况下,SP-proPO基因的表达量存在较为明显的上升,哈维氏弧菌刺激12 h后,血细胞中SPproPO基因的表达量提高了近4倍;金黄色葡萄球菌刺激2 h后,血细胞中SP-proPO基因的表达量提高了近2.5倍。(本文来源于《广东农业科学》期刊2013年19期）
李殿香,甄天民,辛正,王丽娟,马淑芳[10]（2013）在《家蝇酚氧化酶原系统关键基因的研究进展》一文中研究指出家蝇酚氧化酶原系统是家蝇免疫体系重要的组成部分,在对病原识别和免疫防御中发挥着强有力的作用。目前,对该系统的关键基因和作用机制还不清楚。为此,进行了家蝇转录组分析,得到参与酚氧化酶原系统的酚氧化酶原、酚氧化酶原激活酶、Serpin型丝氨酸蛋白酶抑制因子及上游的模式识别受体等关键基因的EST(基因表达序列标签),现就它们的研究进展予以综述。(本文来源于《中国媒介生物学及控制杂志》期刊2013年04期）
酚氧化酶原基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
日本沼虾(Macrobrachium nipponense),俗称青虾,属于甲壳纲(Crustarcea)、十足目(Decaplda)、长臂虾科(Palaemonidae)、沼虾属(Palaemonidae),广泛分布于我国多种淡水水域,是我国淡水虾类养殖中一个重要的养殖品种。近年来,青虾养殖中的病害问题日益凸显,成为制约青虾养殖业健康发展的重要因素,亟待研究和解决。酚氧化酶原激活系统(Prophenoloxidaseactivating system,pro-PO)是无脊椎动物先天免疫机制中最重要的组成部分。酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidase-activating Factor,PPAF)是酚氧化物酶原激活及其辅因子丝氨酸同系物活化的重要因子,可以直接影响酚氧化酶的活力和机体的免疫防御机制。这些免疫相关因子在抵御病原微生物入侵,以及参与机体免疫活动,一直倍受关注。本研究通过RACE方法首次克隆了日本沼虾PPAF的cDNA全长序列;通过半定量PCR技术分别对目的基因进行了不同组织的表达谱分析,主要研究内容和结果如下。通过RACE技术首次得到PPAF基因的cDNA全序列,全长1261bp,包括364bp的5'UTR,822bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),75bp的3'UTR。编码区271个氨基酸,预测蛋白质分子量是30.389.86kDa,等电点为9.727,其中包含34个碱性氨基酸(K,R),18个酸性氨基酸(D,E),94个疏水性氨基酸(A,I,L,F,W,V),75个极性氨基酸(N,C,Q,S,T,Y)。开放阅读框的组成分析结果发现其G、C碱基的含量(51.09%)高于A、T碱基的含量(48.91%)。分析日本沼虾PPAF基因的氨基酸序列的结构域,结果发现在84-277区域左右有一个胰蛋白酶功能域,在77-278区域中有一胰蛋白酶家族中的类丝氨酸蛋白功能域。构建了进化树,分析表明日本沼虾PPAF基因与中国对虾的同源性最高,与家蚕、棉铃虫的同源性最低。采用荧光定量PCR技术检测了PPAF基因在沼虾体内不同组织的差异表达情况。检测结果显示,PPAF基因在健康的日本沼虾的不同组织内表达水平差异显着(P<0.05),在肝胰腺、鳃和血细胞等免疫相关的组织中的表达水平较高;而在肌肉、精巢、卵巢和甲壳等组织中的表达水平低。选取肝胰腺组织来检测PPAF基因在沼虾感染嗜水气单胞菌后不同时期的表达量变化情况,以空白组的β-actin基因作标准,检测不同时期表达量变化规律。半定量PCR分析结果发现,在感染了嗜水气单孢菌后的72h内,日本沼虾的PPAF基因在肝胰腺、鳃、血细胞组织中的mRNA表达差异显着(P<0.05)。PO活性在攻毒组中变化明显,在嗜水气单胞菌刺激后,PO活性在注射3小时后增加到4.23倍,与生理盐水注射组相比有显着的提高。嗜水气单胞菌注射后的PO活性的显着变化现象表明,细菌可以触发酚氧化酶原激活系统转换成PO,说明青虾的酚氧化酶原系统可以抵御外界细菌的侵袭,表明酚氧化酶原系统在青虾的免疫系统中起到着重要的作用。PPAF是日本沼虾最重要的体液免疫系统proPO的关键性因子,在机体的免疫系统中占有重要地位。本研究对PPAF基因在感染嗜水气单胞菌后免疫组织中的表达规律的研究,揭示了日本沼虾在对抗细菌性疾病的免疫防御中的遗传机制奠定了基础;进一步揭示了酚氧化酶原激活系统参与免疫防御的遗传机制奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酚氧化酶原基因论文参考文献
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