导读:本文包含了蜘蛛拖丝蛋白基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蜘蛛拖丝蛋白基因,逆转录病毒载体,小鼠胚胎干细胞,嵌合体
蜘蛛拖丝蛋白基因论文文献综述
杜文敬,梁洋,朴善花,王春生,安铁洙[1]（2018）在《逆转录病毒载体介导的蜘蛛拖丝蛋白转基因小鼠的制备》一文中研究指出为了建立通过转基因动物获得蜘蛛拖丝蛋白的方法,试验利用前期构建的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)逆转录病毒载体侵染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),通过嵌合体法制备转基因小鼠,并用PCR技术进行鉴定。结果表明:成功获得嵌合体小鼠;目的基因2S-IRES-EGFP已整合入F0代及F1代嵌合体小鼠的鼠尾基因组中。说明利用逆转录病毒可成功获得表达蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)的转基因小鼠。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2018年17期）
安铁洙,李昊,王春生,王子竹,宋红卫[2]（2016）在《转B2C/拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选》一文中研究指出为了建立绵羊被毛特异表达蜘蛛拖丝蛋白基因的方法,研究利用前期工作获得的绵羊高硫角蛋白结合蛋白基因B2C启动子和人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体(2S),构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,进行线性化后,采用脂质体法转染进绵羊成纤维细胞并经G418筛选获得转基因阳性细胞,再进行PCR检测和冷冻复苏后进行生物学特性检测。结果表明:成功构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,将其整合入转基因阳性细胞的基因组中;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,其细胞形态仍保持成纤维细胞的梭形形态,且在续培养中呈现正常细胞相近的"S"型生长曲线。说明试验成功获得转pc DNA3.1-B2C-2S绵羊成纤维细胞株。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2016年07期）
张晓丽[3]（2015）在《家蚕转绿色荧光蛋白—蜘蛛丝蛋白融合基因的研究》一文中研究指出为了改善蚕丝的机械性,本研究以piggy Bac转座子载体为骨架,构建了含有家蚕丝素重链蛋白的N-端区域(NTD)-绿色荧光蛋白(e GFP)-蜘蛛丝蛋白[A2S8]28-重链蛋白的C-端区域(CTD)融合基因表达元件的打靶载体p XL-NTD-e GFP-Spider-CTD,同时根据丝素重链基因内含子区域((AF226688:63011-63025和63052-63066)的DNA序列,设计组装了TALENs序列,构建了靶向丝素重链基因内含子区域的TALEN 9-10载体;SURVEYOR和lac Z中断法证实TALEN 9-10载体在家蚕卵母细胞株(Bm N cells)中的效率约为13.95%。将TALEN 9-10载体与打靶载体p XL-NTD-e GFP-Spider-CTD混合,通过真空电穿孔技术,导入家蚕初产卵,筛选获得G0代转基因家蚕。PCR检测结果显示,G0代转基因家蚕蚕蛾基因组中有报告基因e GFP(enhance green fluorescence protein gene)的存在;Western Dot Blot检测转基因家蚕蚕茧蛋白样品,证实转基因家蚕表达了家蚕丝素重链蛋白的N-端区域(NTD)-绿色荧光蛋白(e GFP)-蜘蛛丝蛋白[A2S8]28Spider-重链蛋白的C-端区域(NTD)融合基因;ELISA定量检测显示,e GFP在转基因家蚕蚕茧蛋白可溶样品中的含量约为4%(摩尔比),推测表达的蜘蛛丝蛋白Spider[A2S8]28在可溶样品中的摩尔比含量也为约4%。外源DNA在家蚕基因组的定位分析显示,外源DNA定位于家蚕基因组的23号染色体,打靶载体在转基因家蚕基因组中的整合方式为随机插入,并非由TALEN技术介导的定点插入;机械性能检测结果显示,G0代转基因家蚕蚕丝的最大极限拉力(Max.Stress)提高了约40-50%,最高的最大极限拉力约为700MPa,平均值约为620MPa。挑取G0代茧丝最大极限拉力(Max.Stress)最高的转基因蚕杂交传代,得到G1代转蛛丝基因家蚕,检测结果显示,这种优良的机械性能特征能遗传至G1代转基因家蚕。研究结果为进一步通过改善蚕丝的机械性能提供了新线索。(本文来源于《苏州大学》期刊2015-03-01）
王海涛,孟凡华,房君,周欢敏[4]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞株的筛选》一文中研究指出试验旨在获得具有毛囊表达特性的转蜘蛛牵丝蛋白基因细胞株。根据GenBank上发表的棒络新妇属蜘蛛的cDNA片段合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体S,加倍后连入pEGFP-N1框架载体以构建真核表达载体pK-2S,转染新疆美利奴细毛羊皮肤成纤维细胞后筛选单克隆,并通过PCR在DNA、RNA水平检测阳性克隆。基因合成后测序结果显示序列正确,酶切得到正确目的条带,筛选出阳性克隆并且可以在基因组及cDNA上扩增出目的片段。本研究成功将蜘蛛牵丝蛋白基因转入新疆美利奴细毛羊细胞,并在RNA水平表达,为培育毛囊特异表达蜘蛛牵丝蛋白基因并具有更高机械性能羊毛的新型细毛羊品种奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2014年06期）
王海涛[5]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞系的建立》一文中研究指出蜘蛛丝是自然界具有最优异力学性能的生物纤维,主要成分为蛛丝蛋白,但是难以大量生产或收集。利用基因工程手段可实现蛛丝蛋白基因转入异源宿主中并表达。本实验通过脂质体转染法将蜘蛛牵丝蛋白基因真核表达载体pK-2S转入美利奴细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞中,筛选稳定转入蛛丝蛋白基因的细胞株,通过DNA,RNA水平的检测初步鉴定基因是否转入细胞并表达,为培育能生产含有蛛丝蛋白羊毛的绵羊新品种奠定基础。主要结果如下：1.以已发表的棒络新妇蛛cDNA片段为模板,人工合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S),并获得二聚体(2S)。2.建立了新疆美利奴细毛羊胎儿成纤维细胞系,细胞形态观察显示细胞形态良好,生长曲线表明细胞增殖状态较好,核型分析正常。3.克隆了绵羊毛囊特异性表达启动子Kap6.1,构建表达载体pKap-EGFP并转入细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞中并表达绿色荧光蛋白,表明启动子具有表达活性。4.以pEGFP-N1为框架,将2S与绵羊毛囊特异性启动子Kap6.1相连,构建毛囊特异表达载体pK-2S。5.质粒pK-2S线性化后,转染新疆美利奴细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞,并通过600μg/mL G418筛选单克隆。提取单克隆基因组进行PCR验证,表明了部分克隆转入蛛丝蛋白基因,对部分阳性克隆提取细胞总RNA进行RT-PCR,并以cDNA为模板进行PCR验证,表明蛛丝蛋白在RNA水平表达。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
房君[6]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出蜘蛛牵丝因其优异的机械性能越来越多地作为材料应用于医疗、建筑等领域。但天然蛛丝产量低,利用原核生物反应器生产重组蛛丝是目前人工获得大量蛛丝的有效手段。本研究用拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)和二聚体(2S)分别构建了原核表达载体pGEX-S和pGEX-2S,转化大肠杆菌并诱导其表达,用产量多的重组蛋白为抗原,免疫小白鼠以制备抗血清。通过此方法可以探索建立适宜的重组蛛丝原核表达体系,也为检测其在真核表达提供材料。主要研究结果如下：1.拟蜘蛛牵丝蛋白基因序列的合成：根据棒络新妇蛛的cDNA片段人工合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S),并构建了二聚体(2S)。2.原核表达载体的构建：基因单体(S)合成后与克隆载体pUC57相连,得到重组质粒pUC57-S再通过酶切、连接、转化等合成二聚体(2S)；分别将S和2S片段与表达载体pGEX-2T相连,获得可用于原核表达的重组质粒pGEX-S和pGEX-2S。3.重组蛋白的表达和纯化：将重组质粒pGEX-S和pGEX-2S转化入表达型感受态细胞BL21中,并对菌株的表达条件进行了摸索,发现0.8mmol/l的IPTG诱导4小时为最好。提取总蛋白进行Western Blot,发现S-GST的表达量明显高于2S-GST。利用亲和层析法纯化重组蛋白S-GST,用于多克隆抗体的制备。4.拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)多克隆抗体的制备：取适量纯化后S-GST重组蛋白与佐剂混合乳化,利用皮下多点注射的方法免疫8只CD I小白鼠,免疫结束后经ELISA检测,发现其中的两只小鼠的抗血清浓度较高,可用于后续实验。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
高晋芳[7]（2014）在《转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊重组胚的构建、移植及转基因羊的鉴定》一文中研究指出蜘蛛牵丝是由蜘蛛体内一对主壶腹腺合成的天然蛋白质纤维,被誉为“生物钢”,具有广泛的应用前景。本研究主要目的是通过体细胞核移植手段制备被毛表达蛛丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊,有效改善羊毛品质,对提高细毛羊毛纤维的商业价值具有非常重要的意义。本文采用体细胞核移植技术,以转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞为核供体,去核卵母细胞为受体,制备转基因克隆重组胚716枚,取发育到桑葚期的胚胎进行RT-PCR检测显示外源基因已表达；胚胎移植受体羊44只,受孕12只,出生7只。对出生的转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊在DNA、RNA水平进行检测,结果表明目的基因成功整合到细毛羊宿主基因组中并得以表达；检测转基因和非转基因细毛羊羊毛纤维韧性,结果表明,转基因细毛羊羊毛的拉力及拉伸度均高于非转基因细毛羊。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
房君,孟凡华,王海涛,周欢敏[8]（2013）在《转拟蜘蛛牵丝蛋白基因新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系的建立及初步鉴定》一文中研究指出[目的]建立含有拟蜘蛛牵丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系。[方法]采用脂质体转染,将表达拟蜘蛛牵丝基因的质粒pKap-EGFP4S转入新疆美利奴细毛羊成纤维细胞,通过G418毒性筛选获得阳性细胞系,并采用PCR、RT-PCR检测重组细胞中的目的基因表达。[结果]对体外分离培养的成纤维细胞观察表明细胞形态均为长梭形、活性良好(细胞生长曲线呈S型)、染色体数目为2n=54;通过G418筛选出共43株单克隆细胞系,经PCR鉴定拟蜘蛛牵丝蛋白基因随机整合的细胞系15株,其中挑选4个阳性细胞系经过RT-PCR检测目的基因已转录为mRNA。[结论]成功建立了拟蜘蛛牵丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系,为进一步通过体细胞核移植技术制备被毛含转拟蜘蛛牵丝蛋白基因克隆羊奠定基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2013年22期）
王子竹[9]（2013）在《转蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体绵羊成纤维细胞株的筛选》一文中研究指出蜘蛛丝是目前已知的一种集多种优良性能于一身的纤维,无论与其它天然材料还是人工合成的材料相比,蜘蛛丝都显示出了绝对的优势。但是由于蜘蛛的生活习性以及织网特点,无法通过人工进行大规模饲养繁殖,这些都给蜘蛛丝的大量获取造成了巨大困难。本研究通过绵羊可以产生由角蛋白构成的羊毛为启迪,利用本实验室前期合成的蜘蛛丝蛋白基因二聚体和绵羊毛发角蛋白启动子B2C,将B2C与报告基因相连,验证其是否具有表达活性,并将绵羊毛发角蛋白启动子与pcDNA3.1相连构建真核表达载体,再与蜘蛛丝蛋白基因二聚体相连后转染绵羊皮肤成纤维细胞,经抗性筛选后扩大培养,建立转拟蜘蛛丝蛋白基因二聚体绵羊皮肤成纤维细胞系。为后续产生被毛中表达蜘蛛拖丝蛋白的转基因绵羊奠定了基础。实验的结果与结论如下：(1)绵羊毛发角蛋白启动子B2C的活性检测：将绵羊毛发角蛋白启动子pEasy-T3-B2C与报告基因GFP相连,构建重组质粒B2C-GFP,将其转染绵羊皮肤成纤维细胞。结果在蓝光激发下观察到了绿色荧光,证明了该启动子在绵羊皮肤成纤维细胞中具有表达活性；(2)真核表达载体的构建：将去除自身CMV巨噬细胞病毒启动子的pcDNA3.1与经过相同酶切的启动子B2C相连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体2S相连接,成功构建了真和表达载体pcDNA3.1-B2C-2S;(3)转基因阳性细胞的筛选：通过脂质体转染法将线性化的pcDNA3.1-B2C-2S转染绵羊皮肤成纤维细胞,用最适终浓度的G418对转染后的细胞进行筛选,得到了生长状态良好的转基因细胞；(4)转基因细胞的检测：提取转基因细胞的基因组DNA,通过PCR检测显示pcDNA3.1-B2C-2S整合到了绵羊皮肤成纤维细胞的基因组中,将转基因细胞进行冻存与复苏,复苏后的细胞生长状态依然良好。通过以上叙述可知,本研究获得了转蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体绵羊皮肤成纤维细胞系。(本文来源于《东北林业大学》期刊2013-04-01）
孟凡华,房君,王海涛,邢燕平,齐昱[10]（2013）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出利用原核表达获得的拟蜘蛛牵丝蛋白制备多克隆抗体,将为我们在真核水平检测其表达情况奠定基础。以质粒pGEX-2T为骨架载体,在其多克隆位点处连接人工合成的拟蛛丝蛋白基因单体(S),构建含有GST标签的融合蛋白原核表达载体pGEX-S;利用IPTG诱导重组质粒pGEX-S在大肠杆菌感受态细胞BL21中表达,并利用GST标签亲和纯化重组蛋白,获得的S-GST蛋白与佐剂混合后,采用多点皮下免疫注射8只健康的CDⅠ小白鼠,免疫期结束后收集抗血清进行ELISA检测。序列分析后,确定原核表达载体pGEX-S编码正确;诱导表达后,Western blot检测显示在41 kD处有重组蛋白条带出现,与我们预期的结果相符;抗血清Elisa检测显示有2只小鼠A和F抗血清效价较高。采用原核表达生产的拟蜘蛛牵丝蛋白成功制备了多克隆抗体。(本文来源于《生物技术通报》期刊2013年03期）
蜘蛛拖丝蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了建立绵羊被毛特异表达蜘蛛拖丝蛋白基因的方法,研究利用前期工作获得的绵羊高硫角蛋白结合蛋白基因B2C启动子和人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体(2S),构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,进行线性化后,采用脂质体法转染进绵羊成纤维细胞并经G418筛选获得转基因阳性细胞,再进行PCR检测和冷冻复苏后进行生物学特性检测。结果表明:成功构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,将其整合入转基因阳性细胞的基因组中;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,其细胞形态仍保持成纤维细胞的梭形形态,且在续培养中呈现正常细胞相近的"S"型生长曲线。说明试验成功获得转pc DNA3.1-B2C-2S绵羊成纤维细胞株。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蜘蛛拖丝蛋白基因论文参考文献
[1].杜文敬,梁洋,朴善花,王春生,安铁洙.逆转录病毒载体介导的蜘蛛拖丝蛋白转基因小鼠的制备[J].黑龙江畜牧兽医.2018
[2].安铁洙,李昊,王春生,王子竹,宋红卫.转B2C/拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选[J].黑龙江畜牧兽医.2016
[3].张晓丽.家蚕转绿色荧光蛋白—蜘蛛丝蛋白融合基因的研究[D].苏州大学.2015
[4].王海涛,孟凡华,房君,周欢敏.拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞株的筛选[J].中国畜牧兽医.2014
[5].王海涛.拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞系的建立[D].内蒙古农业大学.2014
[6].房君.拟蜘蛛牵丝蛋白基因的原核表达及多克隆抗体制备[D].内蒙古农业大学.2014
[7].高晋芳.转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊重组胚的构建、移植及转基因羊的鉴定[D].内蒙古农业大学.2014
[8].房君,孟凡华,王海涛,周欢敏.转拟蜘蛛牵丝蛋白基因新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系的建立及初步鉴定[J].安徽农业科学.2013
[9].王子竹.转蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体绵羊成纤维细胞株的筛选[D].东北林业大学.2013
[10].孟凡华,房君,王海涛,邢燕平,齐昱.拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)原核表达及多克隆抗体制备[J].生物技术通报.2013