导读:本文包含了血肿瘤屏障论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脑微血管内皮细胞,胶质瘤细胞,血肿瘤屏障,通透性
血肿瘤屏障论文文献综述
冷雪[1]（2019）在《piR-DQ590027/MIR17HG调控血肿瘤屏障通透性的作用机制研究》一文中研究指出目的:脑胶质瘤是颅内致死性最高的原发性恶性肿瘤。目前的治疗方案体系是手术、化疗、放疗和分子靶向治疗的综合体系。药物高效快速地进入脑肿瘤组织是提高化疗疗效的关键,血肿瘤屏障(Blood tumor barrier,BTB)是一种由肿瘤组织中的叁种微血管亚群组成的结构,BTB的存在会大大降低药物的通过率,降低化疗的疗效。因此如何选择性增加BTB通透性,使药物尽可能的通过BTB,将成为一种更有效的胶质瘤综合治疗策略之一。piRNAs是一种(Piwi-interacting RNA)是一类长度约为24~32 nt(nucleotides)的非编码RNA。在所有的非编码RNA中,piRNAs数量最多。piRNAs通过与PIWI蛋白相互作用发挥生物学功能。近期研究发现PIWI/piRNA与肿瘤等疾病的发生发展密切相关,可以在基因蛋白质调控、表观遗传调控、转座子沉默等过程中发挥重要作用,piRNAs可能成为未来肿瘤诊治的生物标志物。piRNA-DQ590027(hsa_piR_014633)的功能研究尚无报道。长链非编码RNAs(long noncoding RNA,lncRNAs)是一类参与调控细胞内多种生物过程且长度在200-100000nt之间的不编码蛋白的非编码RNA。在基因表达转录以及转录后水平都发挥重要调控作用。相关研究报道显示,部分特定的lncRNAs在肿瘤细胞内会发生表达水平的异常改变,lncRNAs可能作为未来治疗肿瘤疾病的的潜在药物靶点以及新的诊断标志物。MIR17HG是编码miR-17-92基因簇宿主基因,研究表明MIR17HG参与多种肿瘤的调控,但是对脑胶质瘤内皮细胞功能的作用尚未见报道。本研究首先探讨piRNA-DQ590027和lncRNA-MIR17HG在人脑胶质瘤微血管内皮细胞中的表达及功能,同时进一步探讨上述因子调控脑胶质瘤血管内皮细胞的可能作用机制,阐述对BTB通透性的调控作用,为未来胶质瘤的综合治疗提供新思路。研究方法:1.建立体外BTB模型;2.实时荧光定量PCR法检测piR-DQ590027、MIR17HG、miR-153、miR-377、FOXR2的表达水平;3.Western bolt检测FOXR2、ZO-1、occludin、claudin-5表达水平;4.免疫荧光染色实验检测ZO-1、occludin、claudin-5;5.在GECs中分别沉默MIR17HG、过表达FOXR2、沉默FOXR2,构建稳定的MIR17HG沉默、FOXR2过表达和沉默的转染细胞系以及在GECs中分别瞬时转染agomir-153和antagomir-153,agomir-377和antagomir-377;6.TEER实验检测BTB完整性;7.HRP渗出量实验检测BTB通透性;8.双荧光素酶报告基因实验验证piR-DQ590027与MIR17HG、MIR17HG与miR-153、MIR17HG与miR-377、miR-153与FOXR2、miR-377与FOXR2的靶向作用及靶向位点;9.RNA结合蛋白免疫共沉淀实验(RIP)检测MIR17HG、miR-153和miR-377与Ago2的靶向结合作用;10.应用ChIP实验技术验证FOXR2分别与ZO-1、occludin、claudin-5启动子区的靶向结合作用;11.流式细胞检测技术检测血肿瘤屏障的应用情况。结果:1.piR-DQ590027在GECs中低表达,过表达piR-DQ590027显着降低了TEER值、增加HRP的渗出率;同时显着抑制GECs紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的表达,并改变了紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs细胞膜上的分布,由相对连续分布变成了不连续分布;沉默piR-DQ590027显着增加了TEER值、降低HRP的渗出率;同时可以显着增强紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs中的表达,并使紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在细胞膜上的分布增加。2.MIR17HG在GECs中高表达,沉默MIR17HG显着降低了TEER值、增加了HRP的渗出率;同时显着抑制紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的表达,并使细胞膜上紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的分布由相对连续状态变成了不连续状态。3.在GECs中过表达piR-DQ590027,显着降低了MIR17HG的表达。同时,piR-DQ590027与MIR17HG靶向结合。4.在MIR17HG表达沉默的GECs中分别过表达和沉默piR-DQ590027,过表达piR-DQ590027后显着降低了TEER值,增加了HRP的渗出率,同时显着抑制脑紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的表达;沉默piR-DQ590027后显着抑制了MIR17HG对TEER值的抑制作用以及对HRP的促进作用,同时显着抑制了沉默MIR17HG后对紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5表达的抑制作用。5.miR-153在GECs中低表达,过表达miR-153可以显着降低TEER值、增加HRP的渗出率,同时能显着抑制紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs中的蛋白表达,并改变紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs上的分布,使其在细胞膜边缘由相对连续分布状态变成不连续分布状态;沉默miR-153显着增加了TEER值、降低了HRP的渗出率,同时显着增强了紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的蛋白表达。6.miR-377在GECs中低表达,过表达miR-377可以显着降低TEER值、增加HRP的渗出率,同时能显着抑制紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs中的蛋白表达,并改变紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs上的分布,使其在细胞膜边缘由相对连续分布状态变成不连续分布状态;沉默miR-377显着增加了TEER值、降低了HRP的渗出率,同时显着增强了紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5的蛋白表达。7.在GECs中沉默MIR17HG的表达,显着增加miR-153、miR-377的表达。同时,MIR17HG与miR-153、miR-377靶向结合,并分别与miR-153、miR-377共同富集于Ago2复合物中。8.在表达沉默的MIR17HG GECs中分别过表达miR-153、miR-377,能显着增加沉默MIR17HG之后对TEER值的抑制、以及对HRP的促进作用;同时显着增加了沉默MIR17HG之后对GECs紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达的抑制作用。与此相反,在表达沉默的MIR17HG GECs中分别沉默miR-153、miR-377,能对之前发挥逆转作用。9.FOXR2在GECs中高表达,过表达FOXR2可以显着增加TEER值和降低HRP的渗出率,沉默FOXR2的表达显着降低TEER值同时增加HRP渗出量;同时沉默FOXR2后可以显着抑制紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达,并改变紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin、claudin-5在GECs上的分布,使其在细胞膜边缘由相对连续分布状态变成不连续分布状态;过表达FOXR2后可以增强紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达。10.FOXR2靶向结合ZO-1、occludin和caludin-5的启动子区。11.miR-153、miR-377分别靶向结合FOXR2。并且,在GECs中分别过表达miR-153、miR-377可以显着抑制FOXR2的蛋白表达。12.同时双过表达FOXR2和miR-153,能够显着改变在GECs中单独过表达miR-153对降低TEER值、增加HRP渗出率的作用,同时可以显着逆转过表达miR-153抑制脑内紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5表达的作用。13.同时双过表达FOXR2和miR-377,能够显着改变在GECs中单独过表达miR-377对降低TEER值、增加HRP渗出率的作用,同时可以显着逆转过表达miR-377抑制脑内紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5表达的作用。14.在沉默MIR17HG GECs中分别过表达piR-DQ590027、miR-153、miR-377的体外BTB模型以及同时双过表达miR-153、miR-377的体外BTB模型中均能够增加阿霉素促进胶质瘤细胞的凋亡作用。结论:1.piR-DQ590027通过结合MIR17HG,MIR17HG通过结合miR-153、miR-377调节BTB通透性。2.miR-153和miR-377分别通过靶向结合FOXR2的3'-UTR,共同调节BTB通透性。3.FOXR2促进紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的转录,上调其表达,调节BTB通透性。4.piR-DQ590027/MIR17HG/miR-137、miR-377/FOXR2信号轴在调节BTB通透性中发挥重要作用。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-02-01）
郭吉喆,赫倩茹,刘丽波,阮雪蕾,马珺[2]（2018）在《HCG11靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性》一文中研究指出目的研究HCG11和miR-543对血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制。方法应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells, ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells, GECs)中HCG11和miR-543的表达以及二者的结合作用。应用Lipo3000将HCG11表达沉默和/或miR-543过表达质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance, TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性。应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达。荧光素梅报告基因系统分析miR-543与HCG11的结合作用。结果 HCG11在GECs中表达显着增加,miR-543在GECs中表达显着降低;HCG11表达沉默、miR-543过表达均显着降低TEER值,增加HRP渗透量,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平。MiR-543与HCG11存在靶向结合作用。HCG11表达沉默显着增加miR-543的表达,增加血肿瘤屏障通透性。结论 HCG11通过靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2018年06期）
刘静,陆威成,解辉,丁晓慧,周慧[3]（2018）在《TRPV4通道激活增加大鼠血肿瘤屏障通透性》一文中研究指出目的研究TRPV4通道激活对脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障(blood tumor barrier, BTB)通透性的作用效果及机制。方法制备脑胶质瘤模型,应用伊文氏蓝(EB)渗透评估TRPV4激动剂GSK1016790A作用后血肿瘤屏障通透性的变化;RT-PCR和Westen blot法检测脑胶质瘤组织中质膜微囊结构蛋白caveolin-1mRNA和蛋白表达的变化。结果 GSK1016790A可引起脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通透性的改变,灌注15min后BTB通透性开始增加,灌注45min时达高峰,而后有所下降,3h基本恢复灌注前水平。在灌注GSK1016790A 15min后,caveolin-1mRNA和蛋白表达水平开始增加,在45min时表达最多,而后有所下降,在3h基本恢复到灌注前水平。结论 TRPV4通道激活选择性开放血肿瘤屏障可能与跨细胞途径标志蛋白caveolin-1表达水平上调相关,本研究可为人脑胶质瘤的化疗提供新思路。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2018年05期）
徐畅,刘坤[4]（2018）在《联合应用缓激肽与罂粟碱开放血肿瘤屏障作用》一文中研究指出目的探讨缓激肽与罂粟碱(papaverine,PA)联合应用对血肿瘤屏障通透性和紧密连接(tight junctions,TJ)相关蛋白之闭锁小带蛋白1(ZO-1)表达的影响。方法应用大鼠胶质瘤模型,伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透性实验检测血肿瘤屏障通透性,免疫组织化学法测定ZO-1蛋白表达,RT-PCR法测定ZO-1 m RNA表达。结果与对照组大鼠脑肿瘤组织中EB含量[(0.182±0.026)μg/g]比较,缓激肽、罂粟碱、缓激肽+罂粟碱组(联合组)大鼠脑肿瘤组织中EB含量[分别为(0.487±0.031)、(0.503±0.029)和(0.875±0.040)μg/g]均明显升高(P<0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中EB含量进一步增加(P<0.01)。与对照组(0.379±0.011)比较,缓激肽、罂粟碱、联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1蛋白表达[分别为(0.259±0.008)、(0.252±0.010)和(0.135±0.015)]均明显下降(P<0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1蛋白表达进一步降低(P<0.01)。与对照组(0.876±0.062)比较,缓激肽、罂粟碱、联合组大鼠肿瘤组织中ZO-1 m RNA表达[分别为(0.735±0.036)、(0.695±0.050)和(0.420±0.047)]均明显降低(P<0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1 m RNA表达进一步降低(P<0.01)。结论缓激肽与罂粟碱联合应用对血肿瘤屏障的开放作用具有协同效应,此作用与紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平下调有关。(本文来源于《中国公共卫生》期刊2018年08期）
陈亮宇[5]（2018）在《EMAP-Ⅱ通过miR-429调控紧密连接增加血肿瘤屏障通透性的机制研究》一文中研究指出目的:脑胶质瘤是临床最常见的神经系统恶性肿瘤之一,占整个神经系统肿瘤的40%-45%,严重影响人类健康。脑胶质瘤起源尚无定论,很多学者认为起源于神经外胚层的神经胶质细胞或者其始祖细胞,生物学上胶质瘤以星形细胞瘤和胶质母细胞瘤最为多见。由于脑胶质瘤恶性程度较高,容易复发,所以预后相对较差。其中高级别胶质瘤患者虽经手术、放疗及化疗等多种治疗手段的干预,但死亡率仍高达98%以上,2年生存率仅为20%,因此提高疗效,延长患者的生存期成为亟待解决的一大难题。化疗是脑胶质瘤术后治疗的主要手段,但是由于血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)极大的限制了抗肿瘤药物进入中枢神经系统,从而严重影响了化疗效果。因此,选择性地增加BTB的通透性是一个理想的策略。药物通过BTB进入脑组织的主要方式包括开放紧密连接的细胞旁途径和增加吞饮小泡数量的跨细胞途径。内皮-单核细胞激活多肽酶Ⅱ(endothelialmonocyte activating polypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)是在甲基胆蒽诱导形成的纤维肉瘤上清中发现提取,具有许多生物活性。具有促进肿瘤凋亡,抑制肿瘤新生血管,使TNF-α和NO表达上调,介导炎症反应,以及提高血肿瘤屏障通透性等作用,这能够为提高脑胶质瘤化疗疗效提供帮助。研究结果证实,EMAP-II能够通过细胞旁途径和跨细胞途径选择性增加BTB通透性,但具体分子机制需进一步深入研究。蛋白、多肽等亲水性化疗药物主要通过开放紧密连接的细胞旁途径进入肿瘤组织,本研究主要探讨EMAP-II开放紧密连接的可能分子机制。MicroRNA(miRNA)是一类长度约22~24个核苷酸的内源性单链非编码小分子RNA。Mi RNA与靶基因mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)完全或不完全互补配对发挥负性调节作用,参与转录后基因表达调控。近些年来,miRNA因在动植物及人类各种疾病中发挥重要的生物学功能而备受关注。MiRNA是具有调控功能的一类非编码小RNA,参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生理及病理过程。大多数miRNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇(cluster)的形式存在于基因组中。MiR-429是miR-200家族(miR-200b/c/429,miR-200a/141)的成员,通过对细胞周期、细胞分化、衰老和凋亡等的调控,参与多种肿瘤的发生发展。在大多数肿瘤中,miR-429作为肿瘤抑制性miRNA发挥作用,能够抑制肿瘤的发生,在神经胶质瘤中也是潜在的抑癌基因。探讨mi R-429对肿瘤的影响及机制,可能为神经胶质瘤的治疗及相关研究提供新的策略。但miR-429是否能够调控BTB通透性未见报道。Pecot CV等报道miR-429通过调控interleukin-8和CXCL1,能够抑制卵巢癌、肾癌、肺癌和基底细胞样乳腺癌的肿瘤血管新生,根据miR-429对血管的影响,推测miR-429能够调控BTB通透性。p70S6K是核糖体40S小亚基S6的蛋白激酶,为mTOR下游调节因子,是调控蛋白质合成的关键信号分子,可以提高含有5’-TOP结构mRNA的蛋白翻译效率。据报道,和多种肿瘤的增殖、分化和凋亡等过程中起到作用。Zhang C等报道降低p70S6K磷酸化水平能够抑制脑胶质瘤U87细胞系的增值能力,但是,p70S6K是否参与miR-429对胶质瘤BTB通透性的调节还未见报道。本研究的首先研究EMAP-Ⅱ是否通过miR-429直接调控BTB的通透性及可能机制,进一步探讨miR-429通过p70S6K间接调控BTB通透性的可能机制,为神经胶质瘤等中枢神经系统疾病的治疗提供新途径。方法:1.培养人脑微血管内皮细胞系(hCMEC/D3)细胞、人脑胶质瘤细胞系U87细胞和人胚肾细胞系HEK293T细胞。2.体外血肿瘤屏障(BTB)模型和体外血脑屏障(BBB)模型的建立。3.不同剂量的EMAPⅡ作用于BTB模型不同时间,应用跨内皮电阻实验(transendothelial electric resistance,TEER)和辣根过氧化物酶渗出量实验(horseradish peroxidase,HRP),评估BTB模型通透性的变化。应用Western blot方法检测紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平变化。4.应用实时荧光定量PCR方法检测mi R-429在不同病理级别胶质瘤组织中的内源性表达水平。5.应用RT-PCR方法检测BTB模型和BBB模型的内皮细胞中miR-429表达含量的差异。6.应用RT-PCR方法检测不同剂量EMAPⅡ作用后BTB的内皮细胞细胞中miR-429表达含量的差异。7.MiR-429过表达或表达沉默的稳定转染内皮细胞系的建立。8.应用TEER和HRP实验检测miR-429过表达或表达沉默稳定转染细胞系所建立BTB模型中通透性的变化。9.应用Western blot和免疫荧光法检测miR-429过表达或表达沉默稳定转染后,BTB模型中的内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平变化。10.应用双荧光素酶报告基因分析miR-429和紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin的直接靶向作用和结合位点。11.p70S6K过表达或表达沉默稳定转染的内皮细胞系的建立。12.应用TEER和HRP实验检测p70S6K过表达或表达沉默稳定转染细胞系所建立BTB模型中通透性的变化。13.应用Western blot方法检测p70S6K过表达或表达沉默稳定转染后,BTB模型的内皮细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平变化。14.应用双荧光素酶报告基因分析miR-429和p70S6K的直接靶向作用和结合位点。15.分别建立miR-429和p70S6K双过表达和表达沉默的体外BTB模型。应用TEER和HRP实验检测BTB通透性的变化。应用Western blot方法检测上述内皮细胞所建立BTB模型中内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平变化。应用Western blot方法检测上述内皮细胞所建立BTB模型中p70S6K、P-p70S6K、S6、P-S6的蛋白表达水平的变化。16.分别应用p70S6K激酶抑制剂AT7868和S6激酶抑制剂BI-D1870应用于miR-429表达沉默稳定转染内皮细胞系,应用Western blot方法检测上述内皮细胞所建立BTB模型的内皮细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平变化。结果:1.MiR-429在人胶质瘤血管内皮细胞中表达显着低于在人脑微血管内皮细胞中的表达。2.MiR-429在不同级别胶质瘤组织中均低表达,且与胶质瘤病理级别显着负相关。3.成功建立了体外BTB模型;分别成功构建了miR-429和p70S6K的稳定过表达和表达沉默的体外BTB模型;成功建立miR-429和p70S6K双过表达和表达沉默的体外BTB模型。4.EMAPⅡ显着增加BTB的通透性,降低肿瘤血管内皮细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达,呈时间和剂量依赖。5.EMAPⅡ显着增加体外BTB模型的肿瘤血管内皮细胞中miR-429的表达。6.肿瘤血管内皮细胞过表达miR-429使BTB模型TEER值显着降低,HRP透过率显着增高;肿瘤血管内皮细胞miR-429表达沉默使BTB模型的TEER值显着增高,HRP透过率显着降低。7.肿瘤血管内皮细胞过表达miR-429使紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-5的表达显着降低,由连续分布变为不连续分布;miR-429表达沉默使紧密连接相关蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-5的表达显着增高,连续性增强。8.紧密连接相关蛋白Occludin和ZO-1是miR-429的靶基因。9.MiR-429过表达显着下调p70S6K的蛋白表达,同时下调其磷酸化水平;miR-429表达沉默显着上调p70S6K的表达,同时上调其磷酸化水平。10.p70S6K是miR-429的靶基因。11.MiR-429能够通过靶向结合p70S6K,下调p70S6K的表达和磷酸化水平,进一步影响S6的磷酸化水平增加BTB通透性。12.p70S6K和S6的激酶抑制剂AT7868以及BI-D1870能够部分阻断miR-429表达沉默导致的BTB通透性降低和紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5表达增高的作用。讨论:本研究发现,EMAP-Ⅱ作用于BTB模型,能够呈时间和剂量依赖增加BTB通透性和降低肿瘤血管内皮细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达。0.05nM的EMAP-Ⅱ作用于BTB模型0.5、1、2、3和6h后,发现在EMAP-Ⅱ作用0.5h、1h、2h后,BTB通透性明显增高,并且紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5均被明显抑制,在1h效果最为显着。低剂量的EMAP-Ⅱ对BTB通透性的增高和ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达的抑制作用随时间逐渐减弱,在3h以及6h时,没有统计学差异。EMAPⅡ显着增加体外BTB模型的肿瘤血管内皮细胞中miR-429的表达,0.05nM的EMAP-Ⅱ作用于BTB模型0.5、1、2、3和6h后,发现mi R-429的表达在0.5、1、2h明显增高,1h增高最明显,在3和6h未见统计学差异。人miR-429位于1p36.33,参与肿瘤的发生发展。有报道认为miR-429能够发挥癌基因的作用,促进肿瘤的发生(如肝癌)。但多数研究认为,在大多数肿瘤中miR-429作为肿瘤抑制性miRNA发挥作用,能够抑制肿瘤的发生。如miR-429在非小细胞肺癌、结肠直肠癌、肾细胞癌和食管癌等多种肿瘤组织中表达下调,miR-429表达上调后,可通过靶向调控Onecut2、bcl-2和SP-1等基因,抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。此外,报道发现miR-429在肿瘤血管内皮细胞中呈低表达,miR-429表达增加可通过抑制肿瘤血管生成,抑制肿瘤生长。上述研究表明,miR-429能够调控肿瘤细胞和肿瘤血管的生物学行为,发挥抑制肿瘤作用。目前关于miR-429对脑胶质瘤微血管内皮细胞的作用未见报道,仅有2篇报道显示miR-200家族成员miR-200b/c在人胶质瘤样本中获得的胶质瘤细胞中呈现低表达,能够直接或者通过抑制转录因子锌脂E-box结合同源盒1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。而miR-429与miR-200b/c位于同一位点,并且能够直接靶向调控ZEB1。本课题组前期研究表明:miR-429能够显着降低人U87神经胶质瘤细胞的增殖能力,并且诱导U87细胞凋亡。本研究结果显示miR-429在不同胶质瘤病理级别中和肿瘤内皮中的表达,mi R-429对BTB通透性的调控以及在EMAP-II调控BTB通透性中的作用未见报道。为探讨mi R-429在EMAP-Ⅱ增加BTB通透性中的作用,我们选取小剂量EMAP-Ⅱ0.05nM浓度进行后续试验,验证其对BTB模型中血管内皮细胞中miR-429表达量的影响。结果发现,EMAP-Ⅱ对miR-429表达量的影响趋势与对BTB通透性影响趋势契合。为进一步研究miR-429对BTB通透性的影响,我们分别成功建立了miR-429过表达或表达沉默的稳定转染细胞,进而成功建立了miR-429过表达或表达沉默的体外BTB模型。首先应用TEER试验和HRP试验检测BTB模型通透性结果显示miR-429过表达显着增加了BTB的通透性;而miR-429表达沉默则显着降低了BTB的通透性。紧密连接蛋白ZO-1、occludin和claudin-5是紧密连接的重要组成部分,其表达降低能够显着开放紧密连接,增加BTB通透性。在本研究中,Western blot检测结果显示miR-429过表达显着下调了ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表达;相反,mi R-429表达沉默诱导ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表达显着上调。免疫荧光和Western blot检测结果相一致。上述研究结果证实EMAP-II能够通过上调miR-429的表达,显着抑制ZO-1、occludin和claudin-5的表达,进而开放紧密连接增加BTB通透性。关于miR-429如何下调紧密连接相关蛋白的表达尚不清楚。本研究应用生物信息学软件TargetScan Human Release 6.2预测了miR-429的潜在靶点,结果发现,在ZO-1 mRNA 3′UTR的71-77位置有一个潜在的结合位点,在occludin mRNA 3′UTR的139-145位置和2151-2157位置有两个潜在的结合位点,上述位点的序列与mi R-429“种子区”完全互补配对,未见claudin-5mRNA3′UTR与miR-429有预测结合位点。miR-429过表达后ZO-1、occludin和claudin-5的表达下调,而miR-429表达沉默后ZO-1、occludin和claudin-5的表达显着上调。同时,双荧光素酶报告基因试验证实了miR-429分别和ZO-1、occludin紧密连接蛋白的靶向结合,并分别验证了其结合位点。本研究结果充分证实了ZO-1和occludin是miR-429的靶基因,miR-429可与靶基因ZO-1和occludin的3'UTR直接结合。我们推测,miR-429可通过负性调控ZO-1、occludin和claudin-5的表达,增加BTB通透性。作为一种转录因子,p70S6K被认为是一些mi RNA的可能的下游靶点。p70S6K通过磷酸化S6蛋白激酶促进含5’TOP的mRNA翻译,进而发挥生物学作用。在多种肿瘤的增殖、凋亡等生物学行为中起作用。miR-429过表达显着下调p70S6K的蛋白表达,同时下调其磷酸化水平;mi R-429表达沉默显着上调p70S6K的表达,同时上调其磷酸化水平。我们应用TargetScan Human Release 6.2生物信息学软件预测到在p70S6K mRNA3′UTR的291-298位置有一个潜在的miR-429结合位点。双荧光素酶报告基因系统分析证实miR-429能够靶向结合p70S6K,并明确了结合位点。上述结果证明p70S6K是miR-429的靶基因。但p70S6K是否参与miR-429调控紧密连接蛋白的表达尚不清楚,为此,我们成功建立了p70S6K过表达或表达沉默稳定转染的内皮细胞,应用TEER试验和HRP试验检测发现,p70S6K过表达后BTB模型通透性显着降低;p70S6K表达沉默后BTB模型通透性显着增高,证实了p70S6K能够影响BTB通透性。Western blot检测发现p70S6K过表达,BTB模型的内皮细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达水平增高;p70S6K表达沉默则上述蛋白表达显着降低。提示p70S6K能够通过影响紧密连接蛋白进一步改变通透性。分别建立miR-429和p70S6K双过表达和表达沉默的体外BTB模型。通过TEER试验和HRP试验检测BTB通透性变化,通过Western blot检测上述内皮细胞所建立BTB模型中内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5叁种蛋白表达水平的变化,(前述结果具体描述)证实了miR-429可以通过靶向结合p70S6K,影响ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达,从而影响BTB通透性。miR-429过表达显着下调p70S6K的和表达,同时下调其磷酸化水平;miR-429表达沉默显着上调p70S6K的表达,同时上调其磷酸化水平。p70S6K和S6的激酶抑制剂AT7868以及BI-D1870能够部分阻断miR-429的表达沉默对BTB通透性降低作用和紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5表达的增高作用。miR-429增加BTB通透性是通过结合p70S6K,下调p70S6K的表达和磷酸化水平,进一步影响S6的磷酸化水平来实现的。由于未预测到miR-429和claudin-5mRNA3'UTR有潜在结合位点,考虑miR-429对claudin-5表达含量的影响可能是通过p70S6K实现的。本研究证明了miR-429可能是EMAP-II影响BTB通透性和胶质瘤微血管内皮细胞生物学行为的重要调节子。其机制分为两方面:一、EMAPⅡ作用于BTB,肿瘤血管内皮细胞中miR-429的表达量显着增高,进而直接靶向作用于紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin,增高BTB的通透性;二、EMAPⅡ作用于BTB,肿瘤血管内皮细胞中miR-429的表达量显着增高,miR-429靶向调控p70S6K,下调p70S6K的表达和磷酸化水平,进一步影响S6的磷酸化水平,下调紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5,增加BTB通透性。以上研究结果提示,EMAPⅡ可能成为开通BTB的新方法。结论:1.EMAPⅡ能够增加BTB的通透性,降低紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达水平。2.mi R-429在胶质瘤微血管内皮细胞中的低表达;miR-429在不同级别胶质瘤组织中均低表达,且与胶质瘤病理级别显着负相关。3.EMAPⅡ能够显着增加miR-429的表达;miR-429过表达后BTB通透性显着增加,紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5表达水平显着降低。4.ZO-1和Occludin是miR-429的靶基因。5.mi R-429通过靶定p70S6K,二者反向共同调节BTB通透性及紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表达水平。6.p70S6K通过磷酸化S6,调控ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表达水平,影响BTB通透性。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-03-01）
李垚[6]（2018）在《Caveolin-1对紧密连接相关蛋白及血肿瘤屏障通透性的调节作用》一文中研究指出目的:血脑屏障(Blood-brain Barrier,BBB)主要由脑微血管内皮细胞和邻近细胞间的紧密连结构成,具有选择性通透作用,其主要功能是保护脑组织,但同时也阻碍了治疗性药物进入脑内。血肿瘤屏障(Blood-tumor Barrier,BTB)具有与血脑屏障几乎相同的屏障功能,可限制抗肿瘤药物进入脑内而影响化疗效果。因此,选择性开放BTB成为治疗脑胶质瘤的理想策略。血肿瘤屏障的开放有两种途径:跨细胞途径和细胞旁途径,caveolae诱导的内化是跨细胞途径之一,而caveolin-1是形成caveolae所必需的;细胞旁途径主要是指相邻细胞间紧密连接的开放,而紧密连接相关蛋白的表达下调将引起紧密连接开放。最近有研究报道,caveolin-1对紧密连接相关蛋白有一定的调节作用,但结果不一致。在caveolin-1基因敲除小鼠,血管内皮细胞eNOS活性增加,并伴随血管功能缺陷,通透性增加;然而有研究表明caveolin-1对紧密连接相关蛋白呈负性调节,如Zhong等人在人脑微血管内皮细胞上证明,人免疫缺陷病毒-1 Tat可引起caveolin-1表达的升高,而升高的caveolin-1能够诱导紧密连接相关蛋白occludin、ZO-1和ZO-2的表达下调,从而增加血脑屏障的通透性。本研究通过构建caveolin-1重组腺病毒表达载体和沉默载体,感染脑胶质瘤模型大鼠的脑微血管内皮细胞,使caveolin-1的表达增多或减少,观察紧密连接相关蛋白及BBB通透性的改变,以明确caveolin-1对紧密连接相关蛋白的调节效果,以及对血肿瘤屏障通透性的影响,为临床开放血肿瘤屏障治疗脑肿瘤提供新的思路及理论支持。研究方法:1.构建重组腺病毒:以大鼠脑组织总RNA为模板,扩增caveolin-1全长cDNA片段,构建caveolin-1重组腺病毒表达载体。设计靶向沉默caveolin-1的小干扰RNA片断,退火合成双链DNA,构建caveolin-1重组腺病毒沉默载体。2.培养大鼠C6胶质瘤细胞,建立大鼠脑胶质瘤模型。3.将Wistar大鼠随机分成5组:对照组(C6胶质瘤+生理盐水);caveolin-1沉默组(C6胶质瘤+Ad-siRNA-Cav1);沉默阴性对照组(C6胶质瘤+Ad-siRNA-NC);caveolin-1过表达组(C6胶质瘤+Ad-Cav1);过表达阴性对照组(C6胶质瘤+Ad-EGFP),每组24只。4.接种caveolin-1重组腺病毒表达载体和沉默载体,感染脑微血管内皮细胞,使caveolin-1表达增多或减少。5.应用伊文思兰(evans blue,EB)渗透性实验检测caveolin-1重组腺病毒感染脑微血管内皮细胞后,脑胶质瘤大鼠BTB通透性的变化。6.应用Western blot法检测caveolin-1重组腺病毒感染脑微血管内皮细胞后,caveolin-1及紧密连接相关蛋白claudin-5、occludin、ZO-1的蛋白表达水平。7.caveolin-1重组腺病毒感染脑微血管内皮细胞后,透射电镜观察紧密连接超微结构的变化。8.采用SPSS13.0进行统计分析,所有数据以均数±标准差((3(3?±SD)表示,采用单因素方差分析和Bonferroni检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.成功建立了大鼠C6脑胶质瘤模型。2.成功构建caveolin-1重组腺病毒表达载体,酶切及测序鉴定结果完全相符,命名为Ad-cav1,同时构建过表达阴性对照腺病毒,命名为Ad-EGFP。3.成功构建caveolin-1重组腺病毒沉默载体,酶切及测序鉴定结果完全相符,命名为Ad-siRNA-Cav1,同时构建沉默阴性对照腺病毒,命名为Ad-siRNA-NC。4.Ad-siRNA-Cav1感染脑微血管内皮细胞48h后,脑胶质瘤模型大鼠的BTB通透性显着升高;而Ad-cav1感染大鼠的BTB通透性显着下降,对照组、沉默阴性对照组及过表达阴性对照组间无明显差异。5.Ad-siRNA-Cav1感染脑微血管内皮细胞48h后,caveolin-1及紧密连接相关蛋白claudin-5、occludin、ZO-1的表达显着减少;而Ad-cav1感染大鼠的caveolin-1及TJ相关蛋白claudin-5、occludin、ZO-1的表达显着增加。6.透射电镜显示,Ad-siRNA-Cav1感染脑微血管内皮细胞48h后,紧密连接开放,间隙增宽;而Ad-cav1感染大鼠紧密连接非常致密,呈窄黑带状。结论:1.caveolin-1表达增多或减少能够上调或下调紧密连接相关蛋白的表达,呈正性调节作用。2.caveolin-1通过调节紧密连接相关蛋白的表达而影响紧密连接的完整性,继而影响血肿瘤屏障的通透性。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-03-01）
许鑫,刘啸白,薛一雪,马珺,刘丽波[7]（2018）在《内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ上调LINC00263增强血肿瘤屏障通透性》一文中研究指出目的研究LINC00263在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(endothelial monocyte activating polypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)增加血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制。方法应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells,GECs)中LINC00263的表达以及EMAPII处理后LINC00263的表达。应用Lipo3000将LINC00263过表达和沉默质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance,TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性。应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1(zonula occludens-1)、Occludin和Claudin-5的表达。结果与ECs组相比,LINC00263在GECs中表达显着降低;EMAPII作用后GECs中LINC00263的表达显着上调;与对照组相比,LINC00263(+)组TEER值显着降低,HRP渗透量显着升高,ZO-1、Occludin和Claudin-5的m RNA和蛋白表达水平显着降低;LINC00263(-)组的结果与之相反。结论EMAPII增强血肿瘤屏障的通透性可能与上调LINC00263的表达,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达相关。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2018年01期）
朱迎君,赵培源,翟鹏云,刘喜红,赵晖[8]（2018）在《扶正抑瘤方联合替莫唑胺抑制大鼠脑胶质瘤生长及调控血肿瘤屏障相关蛋白的作用研究》一文中研究指出目的探讨扶正抑瘤方联合替莫唑胺对C6脑胶质瘤大鼠肿瘤生长及血肿瘤屏障相关蛋白(zonula odluden,ZO-1)、P-糖蛋白(glycoprotein,gp)及细胞质膜微囊蛋白Caveolin-1的影响。方法雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组:假手术组、模型组、替莫唑胺组、扶正抑瘤方组和扶正抑瘤方联合替莫唑胺组。采用立体定位法建立C6大鼠脑胶质瘤模型,造模当天开始,各组大鼠每天给予相应药物灌胃处理,观察其体重、生存状态,第21天时,计算大鼠生存率,采用HE染色法观察胶质瘤脑组织的病理变化,免疫组织化学法检测大鼠脑肿瘤浸润区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和半胱天冬酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3的表达,Western blot法检测脑肿瘤浸润区血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、ZO-1、P-gp及Caveolin-1蛋白表达的变化。结果与模型组相比,替莫唑胺、扶正抑瘤方及联合用药组肿瘤浸润区GFAP和Caspase-3的表达显着上升(P<0.01),ZO-1和P-gp的表达显着下降(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,扶正抑瘤方和联合用药组VEGF的表达显着下降(P<0.05,P<0.01),与模型组相比,联合用药组Caveolin-1的表达明显下降(P<0.05)。结论扶正抑瘤方联合替莫唑胺对脑胶质瘤具有明显的防治作用,可促进胶质瘤细胞的分化和凋亡,抑制血管新生,开放血肿瘤屏障,限制肿瘤生长。(本文来源于《环球中医药》期刊2018年01期）
刘嘉晖[9]（2017）在《小剂量EMAP-Ⅱ通过miR-330-3p/PKC-α途径增加血肿瘤屏障通透性的机制》一文中研究指出目的:在脑胶质瘤中,血肿瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)的存在是限制大分子抗肿瘤药物进入肿瘤组织,从而影响化疗疗效的关键因素。与血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的组成不同,胶质瘤细胞的生长破坏了正常的BBB结构,组成了BTB。BTB的通透性虽略高于BBB,但仍然能够阻止大分子抗肿瘤药物通过。因此,选择性增加BTB的通透性,有效地将药物转运到脑胶质瘤组织,切实提高脑胶质瘤的治疗效果,是脑胶质瘤综合治疗一个亟待解决的问题。内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(endothelial monocyte-activating polypeptide-II,EMAP-Ⅱ)由其前体物质proEMAP-Ⅱ分解而成,能够调节内皮和单核细胞的功能。目前研究发现,EMAP-Ⅱ具有多种调控细胞功能的作用。有研究报道小剂量EMAP-Ⅱ(0.05nM)具有选择性开放BTB的作用。EMAP-Ⅱ通过cAMP/PKA通路以及PKC-ζ/PP2A通路选择性增加BTB的通透性。在体外BTB模型中,小剂量EMAP-Ⅱ能够与肿瘤微血管内皮细胞膜上的α-ATP合酶结合,通过下调紧密连接相关蛋白(ZO-1、occludin和claudin-5)的表达,开放紧密连接,选择性地增加BTB的通透性。另有研究显示在调节紧密连接的信号分子中,蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)是调节紧密连接动态变化,影响内皮细胞间通透性的重要分子。PKC激活能通过磷酸化紧密连接相关蛋白并诱导其重分布,发挥直接调节紧密连接的作用。研究发现EMAP-Ⅱ能够通过激活PKC增加BTB模型的通透性,预先给予PKC抑制剂H7能够阻断EMAP-Ⅱ增加BTB通透性的作用,提示PKC的表达及活性变化在EMAP-Ⅱ调节BTB通透性中起重要的调节作用。MicroRNAs是一类长度为18-25个核苷酸的非编码小分子RNA,多在转录后水平上调节靶基因的表达,进而在生理和病理过程中调控多种细胞的生物学功能。MircoRNA-330(miR-330)基因是Weber在2005年发现的,定位于19q13.32,在多种组织中表达,但功能不同。miR-330-3p作为miR-330的重要亚型之一,在不同组织中发挥不同作用。目前miR-330-3p对脑胶质瘤微血管内皮细胞的作用尚未见报道。通过应用生物信息学软件预测到,在PKC-α的mRNA第2038-2044和3115-3121位点3’UTR存在miR-330-3p结合位点,因此推测EMAP-Ⅱ可能是通过miR-330-3p实现对PKC-α的调节,进而影响BTB的通透性。本实验首先研究miR-330-3p在脑胶质瘤微血管内皮细胞中的内源性表达,研究EMAP-Ⅱ作用下miR-330-3p的表达是否发生变化,进一步研究EMAP-Ⅱ是否通过调控miR-330-3p的表达影响BTB的通透性,以及miR-330-3p调控BTB通透性的效果及机制。本研究旨在揭示小剂量EMAP-Ⅱ选择性增加BTB通透性的机制,以及为胶质瘤的综合治疗提供新思路。研究方法:1、分别培养人脑星形胶质母细胞瘤细胞系U87细胞、人胚肾细胞系HEK293T和人脑微血管内皮细胞系hCMEC/D3。2、通过hCMEC/D3与U87细胞共培养,建立体外BTB模型,hCMEC/D3成为脑胶质瘤微血管内皮细胞(glioma microvascular endothelial cells,GECs)。3、细胞转染和稳定表达细胞的建立:miR-330-3p过表达、miR-330-3p表达沉默的稳定表达hCMEC/D3细胞和U87细胞。4、应用real-time PCR检测GECs中miR-330-3p的表达水平。5、应用跨内皮电阻(transendothelial electric resistance,TEER)评估体外BTB模型的完整性。6、应用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)流量测定评估体外BTB模型的通透性。7、应用real-time PCR、Western blot检测GECs中紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表达变化。8、应用real-time PCR、Western blot和免疫荧光法检测GECs中PKC-α的蛋白表达变化和在细胞中分布变化。9、应用双荧光素酶报告基因实验分析miR-330-3p对PKC-α3'UTR区的靶向调节。10、应用免疫荧光法检测GECs中紧密连接蛋白的分布与表达。11、应用流式细胞检测EMAP-Ⅱ、阿霉素(Dox)、EMAP-Ⅱ+anti-i R-330-3p+PKC-αactivator、以及EMAP-Ⅱ+anti-miR-330-3p+PKC-αactivator+Dox组对U87胶质瘤细胞的增殖和凋亡的影响。结果:1、在GECs中,miR-330-3p高表达。2、小剂量(0.05nM)EMAP-Ⅱ降低GECs中miR-330-3p表达。在不同时间点,miR-330-3p表达量不同,在1h时最低。3、过表达miR-330-3p显着降低BTB的通透性,miR-330-3p表达沉默显着增加BTB的通透性。EMAP-II作用于BTB,能显着降低BTB的通透性。与EMAP-Ⅱ组相比,miR-330-3p表达沉默+EMAP组显着降低BTB通透性。4、过表达miR-330-3p增加GECs中紧密连接相关蛋白ZO-1,occludin和claudin-5的表达。miR-330-3p表达沉默减低GECs中紧密连接相关蛋白的表达。EMAP-Ⅱ作用后,GECs中紧密连接相关蛋白的表达水平明显降低;与EMAP-Ⅱ组相比,miR-330-3p表达沉默+EMAP-Ⅱ组显着降低紧密连接相关蛋白在GECs中的表达。5、过表达miR-330-3p下调GECs中PKC-α的mRNA和蛋白表达以及磷酸化水平。EMAP-Ⅱ作用后,GECs中PKC-α的mRNA和蛋白表达水平明显升高。与EMAP-Ⅱ组相比,miR-330-3p表达沉默+EMAP-Ⅱ组GECs中PKC-α的mRNA和蛋白表达以及磷酸化水平明显升高。6、激光共聚焦显微镜显示miR-330-3p过表达组PKC-α呈现低染,EMAP-Ⅱ作用后,GECs中PKC-α的表达明显增加,miR-330-3p表达沉默+EMAP-Ⅱ组与EMAP-Ⅱ组相比,PKC-α的表达明显增加。7、MiR-330-3p通过靶向结合PKC-α的3′-UTR区抑制PKC-α的表达。8、PKC-α激活剂显著增加BTB通透性,显着降低紧密连接相关蛋白ZO-1,occludin和claudin-5的表达,过表达miR-330-3p能够逆转PKC-α调节BTB通透性以及紧密连接相关蛋白表达。9、与EMAP-Ⅱ、Dox、EMAP-Ⅱ+anti-iR-330-3p+PKC-αactivator组相比较,EMAP-Ⅱ+anti-miR-330-3p+PKC-αactivator+Dox组显着抑制胶质瘤细胞的增殖并促进了细胞凋亡。结论:1、miR-330-3p在脑胶质瘤微血管内皮细胞中高表达。miR-330-3p上调胶质瘤微血管内皮细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1,occludin和claudin-5的表达,降低BTB的通透性。2、mi R-330-3p通过靶向结合PKC-α的3′-UTR区,调控PKC-α的表达;以及调节PKC-α的活性影响BTB的通透性。3、小剂量EMAP-Ⅱ通过下调miR-330-3p,增加PKC-α表达和活性,降低胶质瘤微血管内皮细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1,occludin和claudin-5的表达,增加BTB的通透性。4、EMAP-Ⅱ、anti-miR-330-3p、PKC-αactivator叁者联合应用能够促进阿霉素的抑制胶质瘤细胞增殖的效应。(本文来源于《中国医科大学》期刊2017-12-01）
宋阳,郑晓娇,薛一雪[10]（2017）在《caveolin-1对低频超声辐照选择性开放血肿瘤屏障中occludin表达及分布的影响》一文中研究指出目的探讨低频超声辐照选择性开放血肿瘤屏障过程中,caveolin-1对occludin表达及分布的影响。方法 Western blot检测occludin的表达,测量跨内皮细胞电阻值检测血肿瘤屏障通透性,双重免疫荧光染色法检测caveolin-1及occludin在脑微血管及体外血肿瘤屏障内皮细胞内的定位表达。结果低频超声辐照后occludin表达及跨内皮细胞电阻随时间变化呈先下降后回升趋势,于低频超声辐照后1.5h,二者下降最为显着(P<0.01)。以低频超声辐照后1.5h为时间点,抑制caveolin-1的表达,occludin的表达增加(P<0.01),跨内皮电阻增高(P<0.05)。双重免疫荧光染色显示caveolin-1和occludin在正常和脑胶质瘤大鼠脑微血管共定位,在体外血肿瘤屏障内皮细胞膜上共定位;低频超声辐照后1.5h,caveolin-1在胞质中表达显着增多,并诱导occludin从胞膜转移至胞质。结论低频超声辐照选择性开放血肿瘤屏障的过程中,caveolin-1增加血肿瘤屏障通透性与下调occludin的蛋白表达并诱导其内化相关。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2017年02期）
血肿瘤屏障论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究HCG11和miR-543对血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制。方法应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells, ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells, GECs)中HCG11和miR-543的表达以及二者的结合作用。应用Lipo3000将HCG11表达沉默和/或miR-543过表达质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance, TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性。应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达。荧光素梅报告基因系统分析miR-543与HCG11的结合作用。结果 HCG11在GECs中表达显着增加,miR-543在GECs中表达显着降低;HCG11表达沉默、miR-543过表达均显着降低TEER值,增加HRP渗透量,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平。MiR-543与HCG11存在靶向结合作用。HCG11表达沉默显着增加miR-543的表达,增加血肿瘤屏障通透性。结论 HCG11通过靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
血肿瘤屏障论文参考文献
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