宁夏回族自治区第四人民医院宁夏，银川750021
【摘要】目的：评价实时荧光定量检验在结核病患者临床诊断中的应用价值。方法：采集我院收治的怀疑为结核病的76例患者痰液标本开展研究，每例患者采集两份痰液标本，1份进行痰涂片抗酸染色检测，1份进行实时荧光定量检验，将病理结果作为金标准，比较两种方法诊断结核病的准确性、特异性、敏感性。结果：实时荧光定量检验诊断结核病的准确性、特异性、敏感性均高于痰涂片抗酸染色检测，P<0.05，有统计学意义。结论：实时荧光定量检验用于结核病诊断，结果可靠，可有效减少疾病漏诊、误诊。
【关键词】实时荧光定量检验；结核病；痰涂片抗酸染色；准确性
长期观察发现，绝大多数结核病患者发病早期并无明显临床症状，确诊时病情已较严重，治疗难度明显增大[1-2]。因此，实现该类疾病的早期诊断十分必要。本研究应用实时荧光定量检验诊断结核病，旨在明确该种检验方法在提高结核病早期确诊率中的应用价值。
1.资料与方法
1.1一般资料
纳入我院2018年4月至2019年3月收治的高度怀疑为结核病的76例患者作为研究对象。纳入标准：（1）年龄≥18周岁；（2）入院时有明显的结核病临床表现。排除标准：（1）合并其他感染性疾病；（2）合并呼吸系统疾病。本组患者中，男性患者42例，女性患者34例，年龄26~73岁，平均（48.13±4.42）岁。本研究在获取患者本人及其家属知情、同意后实施。
1.2方法
痰涂片抗酸染色检测：涂片，干燥固定，进行荧光染色，严格按照《中国结核病防治规划-痰涂片镜检标准化操作质量保证手册》中的相关流程、要求进行检测和阳性判定。
实时荧光定量检验：第一步进行DNA提取，现痰液标本试管中加入4%氢氧化钠摇匀，在常规室温中静置20min，液化后，取1ml离心（12000r/min；5min），取沉淀物，加入1ml生理盐水，再次离心，速度、时间同前次，取沉淀去，加入DNA提取液50μl，混匀，－20℃环境中保存备用。第二步进行PCR扩增，解冻后，取上清液2μl加入至PCR反应管中，离心后（8000r/min；1min）置入仪器样品槽中，按照温度93℃、时间2min、温度55℃、时间45s、温度65℃、时间1min进行10个循环，然后在按温度93℃、时间30s、温度55℃、时间45s进行30个循环。Ct值为37~40为阴性，>40为阳性。
1.3观察指标
将病理结果作为金标准，比较痰涂片抗酸染色检测和实时荧光定量检验诊断结核病的准确性、敏感性和特异性，
1.4数据处理
统计学软件版本：SPSS19.0，采用%描述计数资料，资料差异行x2检验，P<0.05为差异显著性判定标准。
2.结果
2.176例患者的病理结果
76例患者中，共58例患者经病理检查确诊为结核病，其中肺结核49例，肺外结核9例，结核病检出率为76.32%。
2.2痰涂片抗酸染色检测、实时荧光定量检验诊断结核病的准确性、敏感性、特异性比较
实时荧光定量检验诊断结核病的准确性为92.11%（70/76）、敏感性为98.28%（57/58）、特异性为72.22%（13/18），痰涂片抗酸染色检测诊断结核病的准确性为55.26%（42/76）、敏感性为62.07%（36/58）、特异性为33.33%（6/18）。两种诊断方法诊断结核病的准确性、敏感性、特异性比较x2分别为5.562、4.116、5.931、P值分别为0.021、0.036、0.019。
3.讨论
长期以来，细菌学检验一直为我国临床诊断结核病的常用方法，传统的检验方法为痰涂片抗酸染色法[3]。实时荧光定量检验为进入新世纪以来我国医疗领域应用较多的一种基因诊断技术，近年来也在结核病的临床诊断中得到应用。为进一步明确该诊断方法的诊断价值，本研究经传统细菌学检验方法作为对照，进行分析和讨论。结果显示实时荧光定量检验诊断结核病的准确性、敏感性、特异性均明显高于痰涂片抗酸染色法。根据上述研究结果得出，实时荧光定量检验是一种适用于结核病诊断的细菌学检验方法。分析得到上述研究结果的原因为：早期开展的大量研究已经证实，痰涂片抗酸染色法虽然能够直接观察到分枝杆菌，但直接镜检的阳性率并不高，且分枝杆菌的生长周期较长，难以满足疾病尽早确诊的诊断需求[4-5]。而实时荧光定量检验为应用荧光标记释放荧光信号，通过荧光信号的强弱即可准确的进行模板定量，整个实验过程短于3h，可为疾病早期诊断提供较客观的参考依据，且能够有效缩短疾病诊断时间。
综上所述，实时荧光定量检验诊断结核病，特异性高、敏感性高、准确性高，有利于实现结核病的早期诊断和治疗，可作为现阶段临床诊断结核病的常用方法。
参考文献：
[1]秦维香,张晓艳,张白洁.实时荧光定量检验对于结核病患者的诊断价值[J].中国民康医学,2016,28(14):43+79.
[2]谭健.探究实时荧光定量检验对于结核病患者的诊断价值[J].名医,2018(10):119-120.
[3]朱小红,胡颖君.实时荧光定量检验对结核病患者的诊断价值评价[J].中国现代药物应用,2018,12(24):45-46.
[4]姚梅宏,郑宇辉,杨映红.不同荧光定量PCR试剂盒在结核分枝杆菌检测中的应用[J].临床与实验病理学杂志,2018,34(12):1392-1394.
[5]娄丽萍,张文迪.石蜡包埋组织实时荧光定量PCR技术在结核病诊断中的应用[J].锦州医科大学学报,2019,40(03):74-76+119.