导读:本文包含了密码子去优化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鼠疫耶尔森菌,YopJ蛋白,基因密码子优化,异源表达
密码子去优化论文文献综述
郭一星,杨银龙,马玥,岳盈盈,宋楠楠[1]（2019）在《鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白的基因密码子优化及异源表达纯化》一文中研究指出目的优化鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白基因密码子并在大肠埃希菌中进行异源表达纯化。方法依据大肠埃希菌密码子偏好性对鼠疫耶尔森菌YopJ基因进行全基因序列优化,并设计引物。分别以密码子优化前后的鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白的基因为模板,将包含YopJ(22aa-288aa)和YopJ(22aa-250aa)的基因片段连接到载体pGI01中。重组质粒转化到大肠埃希菌BL21菌株中,扩大培养后,IPTG诱导目的蛋白表达。提取大肠埃希菌表达蛋白并使用镍离子柱进行纯化。结果鼠疫耶尔森菌YopJ密码子优化前YopJ(22aa-288aa)及YopJ(22aa-250aa)在大肠埃希菌内表达水平较低,密码子优化后YopJ(22aa-288aa)及YopJ(22aa-250aa)在大肠埃希菌内大量表达可溶性YopJ蛋白。结论对鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白进行基因密码子优化能够提高其在大肠埃希菌内的表达量。获得的鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白具有可溶性,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年09期）
何明娟,刘宁,邹曙明,蒋霞云,潘迎捷[2]（2019）在《马槟榔甜蛋白基因(MabinlinⅡ)的密码子优化及其在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出本研究根据大肠杆菌密码子的偏好性,对马槟榔甜蛋白基因MabinlinⅡ(A链+B链)的密码子进行优化,并将优化后的马槟榔甜蛋白基因命名为MabinlinⅡ(AB) Plus。将MabinlinⅡ(AB) Plus基因与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)片段连接,构建重组表达载体pET-28a(+)-MabinlinⅡ(AB) Plus,进而转化到大肠杆菌宿主表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达。结果表明,密码子优化后的基因MabinlinⅡ(AB) Plus在大肠杆菌中最佳表达条件为:最适IPTG浓度1.4 mmol/L,最佳诱导剂温度为37℃,最适菌株起始生长量OD600为0.7,最佳诱导时间8 h。在最佳诱导表达条件下,目的蛋白表达量占菌体总蛋白约33.0%,与优化前约有提高7%。目的蛋白的上清液经过亲和纯化,在19 kDa处有单一的目的条带。经过感官评定,目的蛋白的甜度约为2%标准蔗糖溶液的400倍。这为研发以马槟榔甜蛋白为基础的新型甜味剂提供了科学的理论依据。(本文来源于《食品工业科技》期刊2019年18期）
严俊杰,杨绮玲,林艺君,石路怀,王宏[3]（2019）在《猪繁殖呼吸综合征病毒的NSP7蛋白密码子优化和表达及其免疫学活性鉴定》一文中研究指出目的:提高蓝耳病毒NSP7基因的表达水平和促进其可溶性表达,验证重组蛋白的免疫学活性,为猪繁殖呼吸综合征血清学鉴定奠定基础。方法:通过同源性分析软件分析28株NSP7基因的保守性,抗原表位预测网站预测NSP7蛋白的抗原表位,可溶性表达预测网站分析NSP7基因可溶性表达概率,随后挑选保守性高的NSP7基因进行密码子优化并合成,最后利用SDS-PAGE探究重组蛋白表达产物存在的形式和表达的最佳条件,Western blot和ELISA探究重组蛋白的免疫学活性。结果:蓝耳病毒NSP7基因较保守,抗原表位较多,经过密码子优化后以可溶性形式表达; SDS-PAGE分析表明重组蛋白的相对分子质量约为49 k D,最佳表达条件为34℃0. 8 mmol/L IPTG 7 h; Western blot和ELISA结果显示纯化的蛋白具有免疫学活性。结论:重组蛋白以可溶性形式表达且具有免疫学活性,为PRRSV血清学鉴定奠定基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年07期）
董聪,高庆华,王玥,罗同阳[4]（2019）在《基于密码子优化的FAD依赖葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质》一文中研究指出旨在获得表达量高的FAD依赖的葡萄糖脱氢酶。通过FAD依赖的葡萄糖脱氢酶密码子优化,人工合成基因片段,构建重组表达载体pMD-GDH,转化毕赤酵母X33菌株后利用甲醇诱导培养实现分泌表达。结果显示,经试管水平筛选阳性转化子获得一株酶活高且稳定的重组菌株,在10 L发酵罐培养时经过136 h诱导培养,酶活达到257 600 U/L。酶学性质分析表明,以葡萄糖为底物时最适温度和pH分别为55℃和7.0,在50℃下处理150 min仍有70%的活性,在pH 4-7范围内,37℃保温4 h,FAD-GDH仍能保持50%以上的活性。金属离子Cu~(2+)对酶活抑制作用比较大。FAD-GDH的底物专一性较好,以葡萄糖为最适底物。经毕赤酵母密码子偏好性优化实现了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的高效表达,为应用于血糖检测提供理论依据。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年07期）
郭亚茜,王灏琦,费东亮,马跃宇,樊琼[5]（2019）在《蜜蜂残翼病毒VP2基因密码子优化、原核表达及免疫原性分析》一文中研究指出蜜蜂残翼病毒(Deformed wing virus,DWV)是引发世界各地大范围蜂群损失的主要嫌疑对象,间接给农业生产带来了巨大的经济损失。为了探究DWV结构蛋白VP2的免疫原性,深入研究该蛋白的功能和为制备DWV单克隆抗体提供可靠的免疫原,本研究从DWV分离株(GenBank登录号:MF770715)扩增得到VP2基因,同时根据大肠杆菌密码子的偏嗜性对VP2基因进行优化并合成,分别将优化前和优化后的VP2基因克隆到pET-28a载体上,获得重组质粒pET-28a-VP2和pET-28a-opti-VP2,分别转化至宿主菌BL21(DE3)中诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot检测,显示仅优化后的opti-VP2基因高效表达,然后对最佳表达条件进行摸索。在此基础上,对重组蛋白纯化后分3次免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,同时设置纯化病毒组和空白对照组,对免疫小鼠的抗体水平和淋巴细胞增殖指数(SI)以及干扰素(IFN-γ)、白介素IL-2和IL-4水平进行检测。结果表明,重组VP2蛋白能够诱导产生特异性抗体,促进淋巴细胞增殖,提高IFN-γ、IL-2和IL-4水平,具有良好的免疫原性,为深入研究DWV VP2蛋白功能和开发防治DWV的生物制剂提供了帮助。(本文来源于《病毒学报》期刊2019年02期）
郭冰峰,张少宁,安文琪,梁雪爽,张静静[6]（2019）在《狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白密码子优化、原核表达及多克隆抗体的制备》一文中研究指出目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经亲和层析和复性后,免疫豚鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接ELISA检测多抗的免疫反应性以及效价。结果成功构建了pET-28b-M重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,经亲和层析及透析获得纯化的重组M蛋白,制备的多克隆抗体可与M蛋白发生特异性结合,效价达1∶21 870。结论成功优化表达了狂犬病病毒CTN-1株M蛋白,制备了高效价的多克隆抗体,为后续M蛋白生物学分析以及新型狂犬病疫苗的研究奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年02期）
陈芳,王兰,张左兵[7]（2019）在《基于密码子优化策略的斑马鱼FOXP3A分子的原核表达及多克隆抗血清制备》一文中研究指出目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白的原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清。方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA的894 bp特异区段(s-foxp3a),对该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后的蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白的多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果:在16℃经0.5 mmol/LIPTG诱导10 h的条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清的效价在1.6×10~5以上。结论:制备了高效价的斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进一步解析斑马鱼FOXP3A蛋白的功能提供了基础工具。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年01期）
张晓元,郝荣华,刘飞,袁丹丹,陈勉[8]（2019）在《密码子优化提高海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达水平》一文中研究指出目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres1基因的表达载体pET-26b(+)-tres和pET-26b(+)-tres1,CaCl2法转入大肠杆菌BL21(DE3)获得表达海藻糖合成酶的大肠杆菌基因工程菌株,采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对摇瓶发酵粗酶液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及酶活性测定以确定表达水平。结果 1707 bp海藻糖合成酶tres基因共优化碱基序列268 bp,优化后序列的GC含量由65.8%降低至54.4%,密码子适应指数(CAI)由0.37提升至0.97,SDS-PAGE及酶活性分析表明,含pet-26b(+)-tres1表达载体的大肠杆菌基因工程菌株海藻糖合成酶蛋白表达量高,酶活性比含pet-26b(+)-tres工程菌提高60.3%以上。结论密码子优化可有效提高海藻糖合成酶TreS蛋白在大肠杆菌中的表达,为海藻糖合成酶的异源高效表达提供了重要参考。(本文来源于《食品与药品》期刊2019年01期）
杨银萍[9]（2018）在《人乙醛脱氢酶2的密码子优化及分子克隆》一文中研究指出乙醛脱氢酶(ALDH)是参与人体酒精代谢的关键酶之一,ALDH是一个庞大的蛋白质家族,其中能够参与酒精代谢的主要是位于肝脏线粒体的ALDH2。ALDH2可将酒精代谢过程中产生的乙醛转化为乙酸,从而减轻乙醛的毒害作用。但是很多人缺乏正常的ALDH2,易引起酒精中毒。近年来,随着人们健康意识的提高,对解酒护肝药物和制剂的需求越来越明显,因而对ALDH2的研究更显得意义深远。目前商业化的ALDH2主要从动物肝脏或肝细胞线粒体中提取,价格昂贵,难以大规模生产。本课题旨在采用基因工程的方法构建原核表达载体,导入到大肠杆菌中,利用微生物发酵大量制备ALDH2,并通过密码子优化,提高重组ALDH2的表达量。具体研究如下:1、从肝癌细胞中提取总RNA,反转录得到cDNA,然后PCR扩增获得Aldh2片段,并将回收产物连接至pMD19-T-simple载体,转化五.cCliDH5α,抽提重组质粒进行双酶切鉴定并测序,以确保目的基因连接至克隆载体,同源比对分析显示序列同源性为100%。用限制性核酸内切酶EcoR I和Mde I将质粒pMD19-T-ALDH2中的目的基因切下,亚克隆至同样双酶切的线性化质粒pET44b(+)中,双酶切分析结果显示,在DNA Marker 1515bp、5600bp均有特异性条带,酶切结果正确。测序结果表明目的基因成功连接至表达载体。2、对NCBI中提供的编号为CR45699的人乙醛脱氢酶2原始序列进行了密码子优化,根据大肠杆菌的密码子偏爱性,在不改变氨基酸序列的前提下,将稀有密码子替换成大肠杆菌偏爱密码子,并优化了密码子适应指数(CAI)、GC含量,以期提高蛋白表达量。优化后的序列进行全基因合成,命名为Aldh2-OP,重组蛋白为ALDH2-OP。结果:序列优化后CAI由0.73提高到0.96,GC含量从57%降至49%,更有利于目的蛋白在大肠杆菌中的表达。对优化前后的基因序列进行比对分析发现,与原始序列相比有311个碱基改变,经DNAMAN软件翻译后,氨基酸序列同源性为100%。3、合成的Aldh2-OP片段已构建至pMD19-T-simple,用限制性核酸内切酶EcoR I和Nde I双酶切,同样克隆至线性化质粒pET44b(+)中,转化到E.coliBL21(DE3),抽提质粒双酶切分析,结果显示,在DNAMarker1515bp、5600bp均有特异性条带,酶切结果正确。同时,测序结果也正确,说明成功构建了原核表达载体pET44b-ALDH2-OP。4、采用IPTG诱导重组菌BL21(DE3)表达蛋白,通过改变IPTG浓度、诱导时间、温度来摸索大肠杆菌表达外源基因的最佳诱导条件,并用Western-blot方法鉴定重组蛋白。本研究表明ALDH2的最优表达条件为IPTG浓度0.75mM、37℃诱导3h。ALDH2-OP的最优表达条件为IPTG浓度0.25 mM、37 ℃诱导4 h。Westem-blot结果显示两个重组蛋白均为带有His-tag标签的目标蛋白,且均以包涵体形式存在。ALDH2和ALDH2-OP蛋白表达的电泳图片利用Image-Pro Plus软件分析,结果表明ALDH2在总蛋白和沉淀中的IOD值分别为1386.5 和 1593.0,ALDH2-OP 对应的 IOD 值分别为 2030.7 和 2434.5,并且ALDH2-OP占菌体总蛋白中的比例(47.6%)明显大于ALDH2(32.9%),说明密码子优化可以显着提高目的蛋白的表达量。5、利用Ni~(2+)-NTA亲和层析方法纯化重组蛋白,通过改变平衡缓冲液中咪唑的浓度来优化纯化条件。研究发现,当使用含有35 mM咪唑浓度的平衡缓冲液时,得到的目的蛋白条带总IOD值约为3695.7,目的蛋白的纯度可达96.8%。纯化后的蛋白置于层析柜中,4 ℃进行缓慢透析复性。得到的ALDH2浓度为194.80 μg/mL,ALDH2-OP 浓度为 300.39 μg/mL。6、根据脱氢酶酶活测定方法,通过测定340 nm吸光度变化,得出 ALDH2 和 ALDH2-OP 酶活分别为 1.43 U/mL 和 1.612 U/mL,计算得到相应的比活力为10.83 U/mg和13.43 U/mg。此外,优化了酶的最值反应温度及pH值,结果表明,该酶的最适pH值为8.5,30 ℃时酶活性达到最高。酸碱稳定性研究表明 相对于酸性环境,酶在碱性环境下活性更高。热稳定性研究表明,40 ℃时酶仍有较好的稳定性,ALDH2和ALDH2-OP对比分析发现稳定性无明显差异。金属离子对酶活性的影响显示,Ca~(2+)、K+、Na+、Mg~(2+)和Mn~(2+)对酶活均有促进作用。动力学研究表明,以乙醛为底物测得ALDH2的Km为31.23μM,Vmax 为 0.081 μM/s,Kcat为 0.037 s-1,Kcat/Km为 1.186s-1mM-1;ALDH2-OP 的为 19.58 μM,Vmax 为 0.090μM/s,Kcat为 0.041 s-1,Kcat/Km为2.145 s-1mM-1。本研究通过密码子优化,得到了高表达的优化序列和更高活性的人乙醛脱氢酶2,为后期通过计算机辅助设计实现ALDH2可溶性表达奠定了基础,为解酒护肝药物及保健品的研发提供重要的理论依据。(本文来源于《浙江工商大学》期刊2018-12-01）
李文锋,梅敏敏,黄兴国,黄雯晶,李晓文[10]（2018）在《新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白基因密码子的优化及原核表达》一文中研究指出试验旨在优化新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的原核表达系统,并评价sσB蛋白的免疫原性。根据已测得的NDRV-XX的σB蛋白基因序列,在不改变氨基酸序列的前提下,按照大肠杆菌密码子偏好性对σB蛋白全基因进行优化、合成并连接至pET-32a(+)质粒中,构建原核表达重组质粒pET-32a(+)-sσB,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达并优化表达条件。SDS-PAGE结果显示,最佳诱导表达时间、温度及IPTG浓度分别为3h、32℃和0.25mmol/L;可溶性分析结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。表达菌经超声破碎、变性、复性和Ni 2+柱亲和层析后,得到纯度高于90%的sσB可溶性蛋白,sσB重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株上的表达量较σB蛋白提升了14.6%,前者占细菌总蛋白量的32.3%。Western blotting结果显示,sσB重组蛋白具备NDRV抗原免疫反应原性。本试验成功构建并优化了NDRV-XX株σB蛋白的原核表达系统,提高了σB蛋白的表达量,并获得具有良好NDRV抗原免疫反应原性的σB重组蛋白,为后续NDRVσB蛋白功能及其应用的深入研究、基因工程疫苗的研发奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年10期）
密码子去优化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究根据大肠杆菌密码子的偏好性,对马槟榔甜蛋白基因MabinlinⅡ(A链+B链)的密码子进行优化,并将优化后的马槟榔甜蛋白基因命名为MabinlinⅡ(AB) Plus。将MabinlinⅡ(AB) Plus基因与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)片段连接,构建重组表达载体pET-28a(+)-MabinlinⅡ(AB) Plus,进而转化到大肠杆菌宿主表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达。结果表明,密码子优化后的基因MabinlinⅡ(AB) Plus在大肠杆菌中最佳表达条件为:最适IPTG浓度1.4 mmol/L,最佳诱导剂温度为37℃,最适菌株起始生长量OD600为0.7,最佳诱导时间8 h。在最佳诱导表达条件下,目的蛋白表达量占菌体总蛋白约33.0%,与优化前约有提高7%。目的蛋白的上清液经过亲和纯化,在19 kDa处有单一的目的条带。经过感官评定,目的蛋白的甜度约为2%标准蔗糖溶液的400倍。这为研发以马槟榔甜蛋白为基础的新型甜味剂提供了科学的理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
密码子去优化论文参考文献
[1].郭一星,杨银龙,马玥,岳盈盈,宋楠楠.鼠疫耶尔森菌YopJ蛋白的基因密码子优化及异源表达纯化[J].中国病原生物学杂志.2019
[2].何明娟,刘宁,邹曙明,蒋霞云,潘迎捷.马槟榔甜蛋白基因(MabinlinⅡ)的密码子优化及其在大肠杆菌中的表达[J].食品工业科技.2019
[3].严俊杰,杨绮玲,林艺君,石路怀,王宏.猪繁殖呼吸综合征病毒的NSP7蛋白密码子优化和表达及其免疫学活性鉴定[J].中国免疫学杂志.2019
[4].董聪,高庆华,王玥,罗同阳.基于密码子优化的FAD依赖葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质[J].生物技术通报.2019
[5].郭亚茜,王灏琦,费东亮,马跃宇,樊琼.蜜蜂残翼病毒VP2基因密码子优化、原核表达及免疫原性分析[J].病毒学报.2019
[6].郭冰峰,张少宁,安文琪,梁雪爽,张静静.狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白密码子优化、原核表达及多克隆抗体的制备[J].中国生物制品学杂志.2019
[7].陈芳,王兰,张左兵.基于密码子优化策略的斑马鱼FOXP3A分子的原核表达及多克隆抗血清制备[J].生物技术通讯.2019
[8].张晓元,郝荣华,刘飞,袁丹丹,陈勉.密码子优化提高海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达水平[J].食品与药品.2019
[9].杨银萍.人乙醛脱氢酶2的密码子优化及分子克隆[D].浙江工商大学.2018
[10].李文锋,梅敏敏,黄兴国,黄雯晶,李晓文.新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白基因密码子的优化及原核表达[J].中国畜牧兽医.2018