导读:本文包含了基因替代论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:嗜热真菌,杜邦嗜热菌,原生质体转化,基因敲除
基因替代论文文献综述
何佳宁,牛雪梅[1]（2019）在《一种有效的嗜热真菌杜邦嗜热菌靶向基因替代系统》一文中研究指出以嗜热真菌杜邦嗜热菌ThermomycesdupontiiNRRL2155为研究材料,利用同源重组原理和真菌原生质体转化方法,以潮霉素抗性基因替换嗜热真菌目标基因,获得抗潮霉素的靶向基因敲除突变菌株。优化的遗传转化体系为:用15mg/mL裂解酶,在28℃下酶解2g杜邦嗜热菌菌丝5.5h以获得原生质体,经STC缓冲液洗涤重悬后,利用PEG(polyethylene glycol)介导的遗传转化方式,将10μg线性敲除全长片段转化至杜邦嗜热菌原生质体中,通过潮霉素筛选及PCR验证得到基因替换突变菌株,同源重组率达到20%。本研究首次将原生质体转化方法应用在杜邦嗜热菌,并成功建立稳定高效的基因替换体系,为快速构建杜邦嗜热菌的遗传转化体系和研究该嗜热真菌的基因功能提供有效方法。(本文来源于《菌物学报》期刊2019年02期）
梁媛[2]（2014）在《雌激素受体S309位点基因替代鼠的建立及该位点磷酸化在小鼠乳腺发育中的作用》一文中研究指出研究背景：雌激素及其受体（Estrogen Receptor，ER）信号系统在乳腺的发育和功能分化，以及疾病过程中有着非常重要的作用。乳腺的良恶性病变如乳腺囊性增生病、乳腺癌等都与ER信号系统的失调有关。自上个世纪六十年代Elwood V Jensen首次从理论上证实雌激素受体的存在以来，对于ER的研究一直没有间断过。雌激素受体有五个结构域，其激活途径主要有叁种，包括经典的配体激活途径、非经典激活途径及磷酸化激活途径。ER与雌激素结合后形成配体-受体复合物，引发雌激素受体的构象改变形成二聚体并向细胞核内转位，并与靶基因上的作用元件ERE结合激活其转录；另外ER还可与AP1、SP1等结合激活相应的靶基因转录。除了配体结合激活途径外，ER还有多个磷酸化位点。这些位点大多位于AF1区，例如305位丝氨酸的磷酸化可使ER在未与配体结合状态下激活。但目前对于雌激素受体磷酸化位点与乳腺的发育、癌变等关系研究并不透彻。基因替代鼠（Knockin mice）是研究基因/蛋白特定位点功能的非常有效的途径和工具，可以建立人类疾病相关的动物模型，在研究探讨疾病的发病机制、相关基因分析、疾病预防等方面起到重要作用；也可以作为新药研发的重要评价体系。因此，基因替代鼠不仅有利于带动生命科学的前沿发展，也在医学研究中起到先导作用。王瑞安等人前期发现ER的305位丝氨酸（ER-S305）是一磷酸化位点。Pak1激酶和PKA激酶均可磷酸化这一位点。该位点的磷酸化可使ER在不与配体结合的状态下激活，因而可能参与乳腺的癌变并与乳腺癌对抗雌激素疗法的耐药性有关。本实验拟建立与人ER-S305位点同位的ER-S309A基因突变鼠，观察该磷酸化位点的消失对乳腺发育和癌变的影响，阐明ER在体内的调节机制，并进一步探讨该位点做为乳腺癌化学预防、治疗潜在靶点的可能性提供相关依据。目的通过建立ER S309A基因替代鼠，研究将该位点的丝氨酸突变为丙氨酸失去这一磷酸化位点后小鼠的乳腺发育情况。通过观察纯合型替代鼠的乳腺发育情况、动情周期的变化，及给予雌激素后乳腺发育和动情周期的改变，分析ER-S309位点的磷酸化及能够磷酸化这一位点的激酶分子在生殖功能和乳腺发育中的作用。方法1.建立ER-S309A基因替代鼠。剪尾提取总DNA，PCR扩增相应基因改变片段经基因测序确定替代鼠的建立是否成功。2.将杂合子小鼠相互交配。用PCR结合酶切分析鉴定基因型。分析子代小鼠的比例是否符合孟德尔遗传规律。并观察纯合型雌性小鼠及雄性小鼠是否具有繁育能力，如能繁育则观测雌性小鼠的哺育能力。3.分别测定纯合型与野生型雌性小鼠血中雌二醇的浓度。4.分别取6、9、12周龄的纯合型和野生型雌性小鼠的第3、4对乳腺卡红整装染色观察发育情况、HE染色观察动情周期的变化。5.野生型小鼠叁周龄时行双侧卵巢去势手术后，分为给予雌激素组和对照组；纯合型突变小鼠叁周龄开始给予雌激素，分别观察补充激素组和对照组小鼠第6、9、12周第4对乳腺卡红染色观察发育情况，HE染色观察动情周期变化。6.纯合型和野生型雌性替代鼠，取其双侧卵巢、输卵管HE染色，观察是否有形态学改变。结果1.基因测序结果显示309位的丝氨酸被丙氨酸所替代，表明我们成功建立了ER-S309A基因替代鼠。2.纯合型雄性小鼠不具有生育能力。雌性纯合型小鼠具有生育能力，但每窝的鼠仔数量较野生型雌性小鼠的每窝鼠仔数量有明显减少，表明生殖力降低。3.纯合型雌性小鼠血中雌二醇浓度同野生型雌性小鼠血中雌二醇浓度相比没有明显差异。4.纯合型雌性小鼠的乳腺发育较正常野生型小鼠慢，导管生长缓慢、分支减少，乳腺腺泡数目减少，终末蕾的数量和面积减少；纯合型小鼠的动情周期紊乱，角化细胞数量减少。5.野生型雌性小鼠去势后给予雌激素组乳腺可以正常生长，动情周期中出现明显的角化细胞；未给予雌激素的对照组乳腺卡红染色没有明显的导管生成，没有动情周期出现。纯合型雌性小鼠叁周开始给予雌激素后导管生长速度加快、分支多，终末蕾的数量、面积增多；动情周期可见多量角化细胞。6.纯合型雌性小鼠卵巢和输卵管没有明显的形态学改变。结论1.ERS309A基因替代鼠的建立成功；2.失去ERS309A磷酸化位点后，雌激素受体功能降低，雄性小鼠丧失生殖功能；雌性小鼠生殖能力降低。3.纯合替代鼠血中雌二醇含量正常。4.动情周期中S309A替代鼠由于ER功能下降，阴道上皮角化细胞数量减少，给予雌激素后角化恢复；5.乳腺发育中S309A替代鼠乳腺导管由于ER功能下降，生长速度减慢、发育受阻。在高水平雌激素作用下，导管的发育缺陷可被纠正。(本文来源于《第四军医大学》期刊2014-05-01）
谢明星[3]（2011）在《物种存在:基因替代抑或机能进化》一文中研究指出进化心理学自20世纪末期成为一种新的研究取向而广为学界接受以来，进化论的思想对众多现象的解释效力使其成为解决心理学领域内的危机与困境的新期待。 达尔文基于大量的证据从生物学的角度阐述了自然选择和性选择的进化论机制。进化论由此规避了人与动(本文来源于《中国社会科学报》期刊2011-02-24）
王涛,徐军,钟南山[4]（2004）在《体内外野生型p53基因替代在继发耐药大细胞肺癌耐药逆转中的作用》一文中研究指出目的:观察野生型p53基因对耐药人大细胞肺癌细胞体外及其裸鼠体内移植瘤化疗敏感性的影响,为基因治疗在逆转继发耐药的临床试验提供科学依据。方法:以耐药人大细胞肺癌细胞H460/cDDP为研究对象(具有继发的p53突变),采用Pshuttle-CMV-wtP3质粒转染该细胞H460/cDDP,Western blot证实其转染入细胞内,绿色荧光蛋白报告基因蛋白显示转染效率,MTT法测定外源野生型p53对化疗药敏感性的影响。以裸鼠皮下移植(本文来源于《第八届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集》期刊2004-06-24）
许爱国,刘延清,祁国明,高守一[5]（1997）在《霍乱弧菌ct-B基因替代溶原性噬菌体非必需区的研究》一文中研究指出首先利用转座因子诱变的方法，分离一些不释放噬菌体的突变子，然后通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹方法证明转座因子插入的位置在Ｏ１３９群霍乱弧菌９３Ｘ１１噬菌体基因组中部的ＨｉｎｄⅢ大片段上。由此推测９３Ｘ１１噬菌体基因组非必需区位于两侧。采用低熔点胶回收与染色体相邻的ＨｉｎｄⅢＢ片段，利用体外重组方法使外源基因替代Ｂ片段上的０．７８６ｋｂＥｃｏＲⅠ小片段，通过同源重组将这种改变的Ｂ片段重组到正常的９３Ｘ１１噬菌体基因组Ｂ片段位置上。结果表明，这种外源基因并不影响该噬菌体的溶原性和免疫性。由此认为，这一替代区域属９３Ｘ１１噬菌体基因组上非必需区。然后对它进行核酸序列测定。通过基因重组的方法霍乱弧菌保护性抗原基因ｃｔ－Ｂ取代了溶原性噬菌体基因组上的非必需区。利用ＧＭ１－ＥＬＩＳＡ方法检测ｃｔ－Ｂ的表达，结果表明，ｃｔ－Ｂ表达良好，并且分泌至胞外。重组菌苗免疫家兔后的血清稀释度在１∶４０时，能抵抗１０６ＣＦＵ／ｍｌ毒株的攻击。因此，该重组菌苗可能成为霍乱弧菌很好的菌苗候选株。(本文来源于《中华微生物学和免疫学杂志》期刊1997年06期）
雅德[6]（1994）在《肺癌基因替代治疗试验》一文中研究指出以Jack Roth为首的美国休斯顿Anderson癌中心研究小组应用新技术——反义基因替代疗法进行了首次肺癌治疗临床试验。反义疗法(Antisense)是应用负像低聚核苷酸干扰DNA及其信使RNA的指令来抑制肿瘤的。但是除给病人注射大量人造反义核苷酸之外,休斯顿研究人员将使肿瘤细胞在自身毁(本文来源于《国外医学情报》期刊1994年19期）
[7]（1992）在《基因替代疗法进入第二年》一文中研究指出【《美国医学协会杂志》1991年10月】一位患有能使免疫系统功能瘫痪的罕见遗传病腺苷脱氨酶(ADA)缺乏症的5岁女孩,于1990年9月14日在美国贝塞斯达的国立卫生研究所接受了基因替代疗法。具体方法是把病孩的淋巴细胞,与携带有病孩所缺乏的 ADA 基因的逆病毒载体混合培养,使淋巴细胞获取这种基因,然后再把这种经过基因矫治的淋巴细胞输回给病孩。目前病孩开始进入第二个年头,参加该项研究的 Blaese 称,“病孩的情况很好”。病孩在接受基因疗法两年前,曾接受过酶替代疗法。当时,病孩的淋巴细胞明显减少,经酶替代疗法后,淋巴细胞数急剧增加。到第二年,病孩的淋巴细胞数又下降,虽然增加酶剂(本文来源于《国外医学(内科学分册)》期刊1992年04期）
基因替代论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景：雌激素及其受体（Estrogen Receptor，ER）信号系统在乳腺的发育和功能分化，以及疾病过程中有着非常重要的作用。乳腺的良恶性病变如乳腺囊性增生病、乳腺癌等都与ER信号系统的失调有关。自上个世纪六十年代Elwood V Jensen首次从理论上证实雌激素受体的存在以来，对于ER的研究一直没有间断过。雌激素受体有五个结构域，其激活途径主要有叁种，包括经典的配体激活途径、非经典激活途径及磷酸化激活途径。ER与雌激素结合后形成配体-受体复合物，引发雌激素受体的构象改变形成二聚体并向细胞核内转位，并与靶基因上的作用元件ERE结合激活其转录；另外ER还可与AP1、SP1等结合激活相应的靶基因转录。除了配体结合激活途径外，ER还有多个磷酸化位点。这些位点大多位于AF1区，例如305位丝氨酸的磷酸化可使ER在未与配体结合状态下激活。但目前对于雌激素受体磷酸化位点与乳腺的发育、癌变等关系研究并不透彻。基因替代鼠（Knockin mice）是研究基因/蛋白特定位点功能的非常有效的途径和工具，可以建立人类疾病相关的动物模型，在研究探讨疾病的发病机制、相关基因分析、疾病预防等方面起到重要作用；也可以作为新药研发的重要评价体系。因此，基因替代鼠不仅有利于带动生命科学的前沿发展，也在医学研究中起到先导作用。王瑞安等人前期发现ER的305位丝氨酸（ER-S305）是一磷酸化位点。Pak1激酶和PKA激酶均可磷酸化这一位点。该位点的磷酸化可使ER在不与配体结合的状态下激活，因而可能参与乳腺的癌变并与乳腺癌对抗雌激素疗法的耐药性有关。本实验拟建立与人ER-S305位点同位的ER-S309A基因突变鼠，观察该磷酸化位点的消失对乳腺发育和癌变的影响，阐明ER在体内的调节机制，并进一步探讨该位点做为乳腺癌化学预防、治疗潜在靶点的可能性提供相关依据。目的通过建立ER S309A基因替代鼠，研究将该位点的丝氨酸突变为丙氨酸失去这一磷酸化位点后小鼠的乳腺发育情况。通过观察纯合型替代鼠的乳腺发育情况、动情周期的变化，及给予雌激素后乳腺发育和动情周期的改变，分析ER-S309位点的磷酸化及能够磷酸化这一位点的激酶分子在生殖功能和乳腺发育中的作用。方法1.建立ER-S309A基因替代鼠。剪尾提取总DNA，PCR扩增相应基因改变片段经基因测序确定替代鼠的建立是否成功。2.将杂合子小鼠相互交配。用PCR结合酶切分析鉴定基因型。分析子代小鼠的比例是否符合孟德尔遗传规律。并观察纯合型雌性小鼠及雄性小鼠是否具有繁育能力，如能繁育则观测雌性小鼠的哺育能力。3.分别测定纯合型与野生型雌性小鼠血中雌二醇的浓度。4.分别取6、9、12周龄的纯合型和野生型雌性小鼠的第3、4对乳腺卡红整装染色观察发育情况、HE染色观察动情周期的变化。5.野生型小鼠叁周龄时行双侧卵巢去势手术后，分为给予雌激素组和对照组；纯合型突变小鼠叁周龄开始给予雌激素，分别观察补充激素组和对照组小鼠第6、9、12周第4对乳腺卡红染色观察发育情况，HE染色观察动情周期变化。6.纯合型和野生型雌性替代鼠，取其双侧卵巢、输卵管HE染色，观察是否有形态学改变。结果1.基因测序结果显示309位的丝氨酸被丙氨酸所替代，表明我们成功建立了ER-S309A基因替代鼠。2.纯合型雄性小鼠不具有生育能力。雌性纯合型小鼠具有生育能力，但每窝的鼠仔数量较野生型雌性小鼠的每窝鼠仔数量有明显减少，表明生殖力降低。3.纯合型雌性小鼠血中雌二醇浓度同野生型雌性小鼠血中雌二醇浓度相比没有明显差异。4.纯合型雌性小鼠的乳腺发育较正常野生型小鼠慢，导管生长缓慢、分支减少，乳腺腺泡数目减少，终末蕾的数量和面积减少；纯合型小鼠的动情周期紊乱，角化细胞数量减少。5.野生型雌性小鼠去势后给予雌激素组乳腺可以正常生长，动情周期中出现明显的角化细胞；未给予雌激素的对照组乳腺卡红染色没有明显的导管生成，没有动情周期出现。纯合型雌性小鼠叁周开始给予雌激素后导管生长速度加快、分支多，终末蕾的数量、面积增多；动情周期可见多量角化细胞。6.纯合型雌性小鼠卵巢和输卵管没有明显的形态学改变。结论1.ERS309A基因替代鼠的建立成功；2.失去ERS309A磷酸化位点后，雌激素受体功能降低，雄性小鼠丧失生殖功能；雌性小鼠生殖能力降低。3.纯合替代鼠血中雌二醇含量正常。4.动情周期中S309A替代鼠由于ER功能下降，阴道上皮角化细胞数量减少，给予雌激素后角化恢复；5.乳腺发育中S309A替代鼠乳腺导管由于ER功能下降，生长速度减慢、发育受阻。在高水平雌激素作用下，导管的发育缺陷可被纠正。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因替代论文参考文献
[1].何佳宁,牛雪梅.一种有效的嗜热真菌杜邦嗜热菌靶向基因替代系统[J].菌物学报.2019
[2].梁媛.雌激素受体S309位点基因替代鼠的建立及该位点磷酸化在小鼠乳腺发育中的作用[D].第四军医大学.2014
[3].谢明星.物种存在:基因替代抑或机能进化[N].中国社会科学报.2011
[4].王涛,徐军,钟南山.体内外野生型p53基因替代在继发耐药大细胞肺癌耐药逆转中的作用[C].第八届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集.2004
[5].许爱国,刘延清,祁国明,高守一.霍乱弧菌ct-B基因替代溶原性噬菌体非必需区的研究[J].中华微生物学和免疫学杂志.1997
[6].雅德.肺癌基因替代治疗试验[J].国外医学情报.1994
[7]..基因替代疗法进入第二年[J].国外医学(内科学分册).1992