导读:本文包含了高拷贝整合载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:合成生物学,生物砖,解脂耶氏酵母,多拷贝
高拷贝整合载体论文文献综述
张玲[1]（2012）在《利用Biobrick法构建解脂耶氏酵母多拷贝整合载体及基因剂量效应的研究》一文中研究指出在21世纪生物科学领域,合成生物学是一门正在迅速发展的新兴交叉学科,它从最基本的要素开始,先一步步建立零部件,再将这些零部件组织起来,建立出能体现不同功能的天然生物系统。由于传统的分子克隆技术获得重组DNA需要依赖PCR,酶切和连接等分子生物学手段,满足不了合成生物学研究的需要。每需要一个零部件,就必须设计一个独特的克隆方法,而且克隆一个组件过程中的中间产物一般不能应用到别的组件上,毫无疑问这是一种资源上的浪费。随着基因工程技术的迅速发展,如何提高目标蛋白在宿主菌的表达量和稳定性受到了国内外的高度重视,特别是一些具有生物活性的小分子多肽受到了高度关注。通过构建目的基因多拷贝的串联表达方式为小分子多肽的高效表达显现出了广阔的前景,而且多拷贝表达策略在一定程度上可以提高目的蛋白的表达量,为目的基因异源表达的工业化生产打下一定的技术基础。本文研究是在生物砖方法的基础上,通过PCR的方法在解脂耶氏酵母表达载体pINA1296启动子上游和终止子下游分别引入HindⅢ、NheⅠ、XbaⅠ、BamHⅠ各两组酶切位点,最终成功地实现了载体的改造,命名为pINA1296I。为了便于重组子的筛选,本研究分别选取了来源于黑曲霉(Aspergillus niger)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的甘露聚糖酶基因克隆到已改造好的pINA12961载体上,利用生物砖方法来实现体外串联多拷贝目的基因。将构建好的一系列不同拷贝数载体转化解脂耶氏酵母polg菌株中,通过测定蛋白浓度和酶活来研究基因的剂量效应关系。通过测定摇瓶表达上清中的蛋白浓度及酶活,结果表明man-A随着拷贝数的增加蛋白量及酶活性也逐渐增加。5拷贝时蛋白量及酶活达到最大,6拷贝开始下降。该酶最适pH值为3.5,最适温度为65℃。70℃处理10分钟,活性仅剩余24%。pH2.0-8.0范围内室温处理1h,在pH3.0-6.5范围内最稳定,可保持95%以上的活性。Man-B蛋白浓度及酶活与拷贝数呈正相关性,6拷贝蛋白量及酶活达到最大,所以利用生物砖的方法体外串联多拷贝基因在一定程度上可以提高目的蛋白的表达量。(本文来源于《湖北大学》期刊2012-05-24）
姜勇,张学成,孙平楠,陈云松[2]（2009）在《以rDNA为同源重组位点酵母表达鲑鱼降钙素基因多拷贝整合载体的构建》一文中研究指出根据酵母整合质粒的设计要求,PCR扩增2.2 kb rDNA片段,导入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)整合载体pYD1中,设计并合成适合在酵母中表达的鲑鱼降钙素(Salmon Calcitonin),以此为目标基因,构建适合酿酒酵母多拷贝整合的表达载体p-r-sCT。通过载体p-r-sCT引入到酿酒酵母菌株EBY100中,得到酵母重组菌株yAGA2-r-sCT。流式细胞检测结果表明,目标基因鲑鱼降钙素在重组菌株的yAGA2-r-sCT中得到了表达,实现了外源基因在酿酒酵母菌株中的稳定表达。(本文来源于《中国海洋大学学报(自然科学版)》期刊2009年03期）
唐南筠,霍克克,李育阳[3]（1996）在《乳酸克鲁维酵母高拷贝整合载体的构建及应用》一文中研究指出用酿酒酵母２６ｓｒＤＮＡ作探针克隆了乳酸克鲁维酵母Ｋ．ｌａｃｔｉｓ２．２ｋｂｒＤＮＡ片段，对其作限制性内切酶图谱分析。以该基因片段为同源整合的靶顺序，酿酒酵母ＵＲＡ３基因为选择标记构建整合载体质粒ｐＩＲＫ，并对其在宿主Ｋ．ｌａｃｔｉｓＭＷ９８－８ｃ细胞中的整合位点，拷贝数及稳定性进行测定和分析。结果表明：质粒整合在转化子ＩＶ号染色体的ｒＤＮＡ位点；载体转化后的平均整合拷贝数约为１２０；在完全培养基上连续培养５０代，质粒稳定性这９５％－１００％。用载体ｐＩＲＫ表达外源基因ＬＡＣ４，实验表明，表达载体的稳定性好，拷贝数和表达量在一定程度上成正相关，转化子产生的半乳糖苷酶最高活性是Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ野生菌株所产生的８．６倍。(本文来源于《生物化学与生物物理学报》期刊1996年05期）
高拷贝整合载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
根据酵母整合质粒的设计要求,PCR扩增2.2 kb rDNA片段,导入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)整合载体pYD1中,设计并合成适合在酵母中表达的鲑鱼降钙素(Salmon Calcitonin),以此为目标基因,构建适合酿酒酵母多拷贝整合的表达载体p-r-sCT。通过载体p-r-sCT引入到酿酒酵母菌株EBY100中,得到酵母重组菌株yAGA2-r-sCT。流式细胞检测结果表明,目标基因鲑鱼降钙素在重组菌株的yAGA2-r-sCT中得到了表达,实现了外源基因在酿酒酵母菌株中的稳定表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
高拷贝整合载体论文参考文献
[1].张玲.利用Biobrick法构建解脂耶氏酵母多拷贝整合载体及基因剂量效应的研究[D].湖北大学.2012
[2].姜勇,张学成,孙平楠,陈云松.以rDNA为同源重组位点酵母表达鲑鱼降钙素基因多拷贝整合载体的构建[J].中国海洋大学学报(自然科学版).2009
[3].唐南筠,霍克克,李育阳.乳酸克鲁维酵母高拷贝整合载体的构建及应用[J].生物化学与生物物理学报.1996