导读:本文包含了棕榈酰化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:棕榈酰化修饰
棕榈酰化论文文献综述
Xiong,Zhong,Ruan[1]（2019）在《CD36棕榈酰化修饰在脂肪性肝炎发生中的作用（英文）》一文中研究指出Fatty acid translocase CD36 (CD36) is a multifunctional immuno-metabolic receptor with many ligands.CD36 expression is abnormally upregulated and it is mainly located at the plasma membrane of hepatocytes in patients with NASH. Palmitoylation has been suggested to regulate subcellular distribution of CD36, but little is known about its significance in NASH.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学会2019年全国学术会议暨学会成立四十周年论文集》期刊2019-10-24）
夏欣宇,高婷,袁春满,宋静[2]（2019）在《AMPA受体及PSD-95棕榈酰化失衡在铝致大鼠LTP损害中的作用研究》一文中研究指出目的探讨α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体及突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD-95)棕榈酰化失衡在铝致大鼠海马LTP损害中的作用及其作用机制。方法健康雄性成年SD大鼠60只,随机分为生理盐水(空白对照组)、10μmol·kg~(-1)、20μmol·kg~(-1)、40μmol·kg~(-1)麦芽酚铝染毒组,每组15只。按照大鼠体重采用腹腔注射方式进行染毒,隔天染毒,共染毒12星期。在体电生理学方法对各剂量组大鼠在体海马进行LTP检测。酰基生物素置换法(ABE法)测定AMPA受体及AMPA受体相关蛋白PSD-95棕榈酰化水平。Western-Blot、RT-PCR方法分别检测酰基转移酶(Zinc fingerspartate-histidine-histidine-cysteine cysteine rich domain3,zDHHC3)和去棕榈酰化酶(palmitoyl protein thioesterase 1,PPT1)蛋白和基因水平的表达情况。结果 LTP检测结果显示,麦芽酚铝亚慢性染毒可致大鼠海马LTP呈现剂量依赖性的降低。蛋白棕榈酰化水平检测结果显示,20μmol·kg~(-1)Al(mal)3、40μmol·kg~(-1)Al(mal)3组的离子型谷氨酸受体1(Ionotropic glutamate receptor 1,GluR1)和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。20μmol·kg~(-1)Al(mal)3组的离子型谷氨酸受体2(Ionotropic glutamate receptor 2,GluR2)棕榈酰化水平与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),40μmol·kg~(-1)Al(mal)3组的GluR2棕榈酰化水平低于对照组、10μmol·kg~(-1)Al(mal)3、20μmol·kg~(-1)Al(mal)3组(P<0.05)。20μmol·kg~(-1)Al(mal)3、40μmol·kg~(-1)Al(mal)3组的PSD-95蛋白棕榈酰化水平和空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。棕榈酰化相关酶蛋白和基因表达结果显示,随着染铝剂量的升高,zDHHC3蛋白和基因的表达量呈现下降的趋势(P<0.05),PPT1蛋白和基因的表达量呈现上升的趋势(P<0.05)。结论亚慢性染铝可导致大鼠海马AMPAR和PSD-95蛋白棕榈酰化水平降低,这可能与铝致大鼠LTP损害机制有关。大鼠海马棕榈酰化酶蛋白水平和基因水平表达降低,去棕榈酰化酶蛋白水平和基因水平表达升高,可能是铝致AMPAR和PSD-95蛋白棕榈酰化水平降低的原因。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
[3]（2019）在《PD-L1棕榈酰化是抗肿瘤免疫新靶点》一文中研究指出上海交通大学医学院许杰研究组发现了程序性死亡配体-1(programmed-death ligand 1,PD-L1)的棕榈酰化及影响其降解的作用机制,并在此基础上开发了靶向PD-L1棕榈酰化的多肽PD-PALM,为肿瘤免疫检查点抑制剂的研发提供了新思路。该研究成果以"Inhibiting PD-L1 palmitoylation enhances T-cell immune responses against tumours"为题于2019年3月在线发表于生物医学工程领域顶级期刊Nat(本文来源于《上海交通大学学报(医学版)》期刊2019年07期）
夏欣宇[4]（2019）在《AMPA受体及PSD-95棕榈酰化失衡在铝致大鼠LTP损害中的作用研究》一文中研究指出目的:探讨a-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体及突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD-95)棕榈酰化失衡在铝致大鼠海马LTP损害中的作用及其作用机制。方法:1.建立动物染铝模型:健康雄性成年SD大鼠60只,随机分为生理盐水(空白对照组)、10mmol/kg、20mmol/kg、40mmol/kg麦芽酚铝染毒组,每组15只。按照大鼠体重采用腹腔注射方式进行染毒,隔天染毒,共染毒12星期。2.在体电生理学方法对各剂量组大鼠在体海马进行LTP检测。3.免疫组化方法测定各剂量组大鼠海马AMPA受体表达水平。4.酰基生物素置换法(ABE法)测定AMPA受体及AMPA受体相关蛋白PSD-95棕榈酰化水平。5.Western-Blot、RT-PCR方法分别检测酰基转移酶(Zinc finger spartate-histidine-histidine-cysteine cysteine rich domain3,z DHHC3)和去棕榈酰化酶(palmitoyl protein thioesterase 1,PPT1)蛋白和基因水平的表达情况。结果:1.LTP检测结果显示,10mmol/kg Al(mal)3组在60min的幅值同空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。20mmol/kg Al(mal)3组在1min的幅值同空白组、10mmol/kg Al(mal)3组相比,在60min的幅值同空白组相比分别有统计学意义(P<0.05)。40mmol/kg Al(mal)3组在1min的幅值和空白组、10mmol/kg Al(mal)3组相比,在60min的幅值,和空白组、10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3组相比差异分别有统计学意义(P<0.05)。2.免疫组化结果显示,10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组的Glu R1蛋白表达水平和空白组相比差异具有统计学意义(P<0.05),20mmol/kg Al(mal)3组的Glu R1蛋白表达水平和10mmol/kg Al(mal)3组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),40mmol/kg Al(mal)3组的Glu R1蛋白表达水平和10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组的Glu R2表达量均低于空白组(P<0.05),40mmol/kg Al(mal)3组的Glu R2表达量低于10mmol/kg Al(mal)3组和20mmol/kg Al(mal)3组(P<0.05)。3.酰基生物素置换法结果显示,20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组的离子型谷氨酸受体1(Ionotropic glutamate receptor 1,i Glu R1)和空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。20mmol/kg Al(mal)3组的离子型谷氨酸受体2(Ionotropic glutamate receptor 2,i Glu R2)棕榈酰化水平与空白组相比差异有统计学意义(P<0.05),40mmol/kg Al(mal)3组的Glu R2棕榈酰化水平低于空白组、10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3组(P<0.05)。20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组的PSD-95蛋白棕榈酰化水平和空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。4.Western-Blot结果显示,空白组、10mmol/kg Al(mal)3组、20mmol/kg Al(mal)3组、40mmol/kg Al(mal)3组的z DHHC3蛋白表达水平分别为1±0.00、0.76±0.15、0.60±0.06、0.53±0.08,与空白组相比,10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组的z DHHC3蛋白表达水平降低(P<0.05),40mmol/kg Al(mal)3组的z DHHC3蛋白表达水平低于10mmol/kg Al(mal)3组(P<0.05)。空白组、10mmol/kg Al(mal)3组、20mmol/kg Al(mal)3组、40mmol/kg Al(mal)3组的PPT1蛋白表达水平分别为1±0.00、1.28±0.32、1.56±0.36、1.61±0.28,其中,与空白组相比,20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组PPT1蛋白表达水平升高(P<0.05)。5.RT-PCR结果显示随着染铝剂量的升高,z DHHC3基因的表达量呈现下降的趋势,z DHHC3基因的10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组与空白组相比分别下降了16%、15%、32%,其中10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3组的z DHHC3基因表达量与空白组相比差异有统计学意义(P<0.05),40mmol/kg Al(mal)3组的z DHHC3基因表达量与空白组、10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3组相比差异有统计学意义(P<0.05)。随着染铝剂量的升高,PPT1基因的表达量呈现上升的趋势。PPT1基因的10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组与空白组相比分别升高了58%、72%、81%,其中与空白组相比,10mmol/kg Al(mal)3、20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组的PPT1基因表达量升高(P<0.05),20mmol/kg Al(mal)3、40mmol/kg Al(mal)3组的PPT1基因表达量高于10mmol/kg Al(mal)3组(P<0.05)。结论:1.不同剂量的麦芽酚铝亚慢性染毒可致大鼠海马LTP呈现剂量依赖性的降低,AMPA受体蛋白表达量下降。2.染铝可导致大鼠海马AMPAR和PSD-95蛋白棕榈酰化水平降低,这可能与铝致大鼠LTP损害机制有关。3.大鼠海马棕榈酰化酶蛋白水平和基因水平表达均降低,去棕榈酰化酶蛋白水平和基因水平表达升高,可能是AMPAR和PSD-95蛋白棕榈酰化水平降低的原因。(本文来源于《山西医科大学》期刊2019-06-10）
陈扬[5]（2019）在《Porcupine依赖的Ku70蛋白棕榈酰化在DNA损伤应答中的作用及机制研究》一文中研究指出目的:基因组不稳定是肿瘤的特征之一。DNA损伤应答(DDR)是预防基因组不稳定性的主要机制,也是影响细胞对电离辐射(IR)和许多化疗药物敏感性的重要因素。阐明DDR通路所涉及的分子调控机制对于理解肿瘤发生和干预肿瘤治疗具有重要意义。蛋白质棕榈酰化作为一种重要的蛋白翻译后修饰形式,可调控蛋白质的稳定性、转运及蛋白之间的相互作用等过程。近年研究发现棕榈酰化在恶性肿瘤的发生发展中起重要作用,但是其在基因组稳定性及DNA损伤修复机制中的功能尚不明确。Porcupine(PORCN)蛋白是膜结合的O-酰基转移酶,通常存在于内质网膜。本论文研究重点是阐明细胞核内的PORCN蛋白对DDR及肿瘤放射敏感性的调控机制。方法:为了探究细胞核内PORCN在DDR中的作用,首先采用慢病毒载体的PORCN sh RNA建立PORCN敲低的稳定细胞系。然后采用可以抵抗sh RNA敲低的PORCN-WT及PORCN-ΔNLS质粒转染细胞并建立PORCN突变的HT1080稳定细胞系。通过克隆形成实验检测细胞的放射敏感性,MTS实验检测细胞的增殖能力,免疫荧光实验检测细胞核内DNA损伤修复蛋白γ-H2AX的表达变化。通过DNA损伤修复检测系统,对细胞非同源重组修复(Non-homologous End Joining,NHEJ)及同源重组修复(Homologous Recombination,HR)的能力进行评估。通过对PORCN免疫沉淀物进行质谱分析筛选出PORCN相互作用蛋白。采用酰基-生物素置换法检测蛋白质的棕榈酰化水平。为了研究棕榈酰化的功能,将Ku70蛋白棕榈酰化位点由半胱氨酸突变成丝氨酸,并检测了这些突变体在HT1080细胞中的棕榈酰化能力。我们采用免疫共沉淀实验探究Ku70蛋白的棕榈酰化是否影响DNA-PKcs/Ku70/Ku80复合物的形成。为了研究电离辐射诱导的棕榈酰化在体内的活性,我们采用突变Ku70蛋白棕榈酰化位点的细胞建立小鼠移植瘤模型,并观察小鼠移植瘤经过电离辐射后的生长情况。结果:我们发现PORCN缺失的细胞表现为DDR异常,如γ-H2AX灶点持续时间延长,有丝分裂期尚未完成DNA损伤修复,同时NHEJ修复功能缺失,并且这些细胞的放射敏感性增加,说明PORCN参与了DDR及放射敏感性的调控。进一步研究结果发现有一小部分PORCN存在于细胞核中,第230-235位的KKRKAR氨基酸序列是核定位序列(Nuclear localization sequence,NLS)。这段NLS序列可影响PORCN蛋白的入核。通过激光共聚焦观察发现当去除这段核定序列后,细胞在有丝分裂期有γ-H2AX灶点的积累,表明存在有丝分裂期DDR功能障碍。通过DNA损伤修复检测系统发现与野生型细胞相比,PORCN-ΔNLS细胞的NHEJ修复缺失,但HR功能不受影响。克隆形成实验结果显示与野生型细胞相比,PORCN-ΔNLS细胞的放射敏感性增加。γ-H2AX免疫荧光结果示与野生型细胞相比,PORCN-ΔNLS细胞经过电离辐射后细胞核内γ-H2AX灶点持续时间延长,表明存在DNA损伤修复的延迟。荷瘤鼠实验发现PORCN-ΔNLS组相比PORCN-WT组放射敏感性增加。质谱分析发现PORCN可以与许多DNA损伤修复相关蛋白相结合,包括DNA-PKcs/Ku70/Ku80复合物。进一步实验发现PORCN可以介导Ku70蛋白棕榈酰化,这个过程依赖于PORCN的核定位序列。所有Ku70突变体的棕榈酰化水平均有不同程度的降低,只有将所有的半胱氨酸突变成丝氨酸(Ku70-MU)才失去棕榈酰化。克隆形成实验结果显示与野生型细胞相比,Ku70-MU细胞的放射敏感性增加。免疫荧光结果显示与野生型细胞相比,Ku70-MU细胞经过电离辐射后存在DNA损伤修复的延迟。DNA损伤修复检测系统发现与野生型细胞相比,Ku70-MU细胞的的NHEJ修复缺失,但HR功能不受影响。激光共聚焦观察发现Ku70-MU细胞经过电离辐射后在有丝分裂期有γ-H2AX灶点的积累,表明存在有丝分裂期DDR功能障碍。免疫共沉淀实验发现与野生型的Ku70蛋白相比,突变棕榈酰化位点后的Ku70蛋白与Ku80蛋白的结合减弱,且不能与DNA-PKcs蛋白结合。进一步荷瘤鼠实验发现Ku70-MU组相比Ku70-WT组放射敏感性增加。结论:有部分PORCN蛋白在细胞核内表达,且细胞核内的PORCN可介导Ku70蛋白的棕榈酰化。Ku70蛋白的棕榈酰化在DDR中起重要作用,其机制为Ku70蛋白的棕榈酰化可影响DNA-PKcs/Ku70/Ku80复合物的形成进而影响NHEJ。综上所述,我们的研究阐明了PORCN依赖的Ku70蛋白棕榈酰化在DDR中的关键作用。(本文来源于《天津医科大学》期刊2019-05-01）
程炜[6]（2019）在《基于酰基-生物素交换的棕榈酰化修饰蛋白质组分析方法学研究》一文中研究指出蛋白质棕榈酰化修饰是一种可逆的翻译后修饰,在调节蛋白质间相互作用、蛋白质的膜定位及细胞内信号传导等过程中起着关键作用,同时心脏组织中的G蛋白偶联受体(GPCR)、跨膜钠/钾泵和电压门控钠通道等蛋白质均受到棕榈酰化修饰的调节。利用酰基-生物素置换法(Acyl-biotinyl exchange,ABE)对棕榈酰化蛋白质的检测已经日益成熟,但是已有研究主要集中于神经系统,对心脏组织中的相关修饰研究较少。因此本研究利用ABE方法对心脏组织中的棕榈酰化修饰蛋白质进行检测及质谱鉴定,并对ABE方法进行优化,进一步提高检测效率。在本研究中,采用生物素化试剂Biotin-HPDP对小鼠心脏组织中的棕榈酰化蛋白质进行标记,成功鉴定出50个棕榈酰化修饰的蛋白质。此外,建立了基于多肽水平的ABE方法,对棕榈酰化蛋白质进行快速标记。在这一方法中,通过将多肽样品吸附至固相萃取柱,使反应缓冲液流过柱子并与吸附在柱上的多肽样品反应,在每一步反应后仅通过洗涤柱子便可以达到去除残余试剂的目的,这一方法简化了操作步骤,大大的缩短了实验时间。本研究中确定最优实验条件是酶解为多肽后使用10 mmol/L N-乙基马来酰亚胺(NEM)封闭自由巯基,羟胺(HA)切割硫酯键的反应时间为90 min,再加入浓度为10μmol/L的Biotin-maleimide对新产生的自由巯基进行标记,并在ABE反应后立即冻干富集。富集目标蛋白的最佳条件为1 mg经ABE反应后的样品加入20μL抗生物素抗体琼脂糖珠,重复富集两次。本研究进一步丰富了蛋白质棕榈酰化修饰的相关研究,并为ABE方法的优化提供了可参考的方向,对棕榈酰化修饰检测方法的发展具有一定意义。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-05-01）
黄超[7]（2019）在《阿霉素与棕榈酰化抑制剂溴代十六烷酸联合应用抑制骨肉瘤细胞的作用及机制研究》一文中研究指出研究背景:骨肉瘤(Osteosarcoma)是原发性恶性肿瘤中最常见的一种骨肿瘤,常发于儿童与青少年。自上世纪70年代起,临床上骨肉瘤的治疗方案主要是截肢手术配合新辅助化疗,其中化疗的一线用药为阿霉素、甲氨蝶呤、顺铂、异环磷酰胺等,患者五年生存率约65%-70%。然而近几十年来,骨肉瘤的治疗一直停滞不前,患者的五年生存率未见提高,亟待寻找新的化疗方案。阿霉素(Adriamycin,ADR)对骨肉瘤有良好的疗效,主要通过破坏DNA叁级结构并促进细胞产生氧化应激从而达到治疗目的。但是阿霉素极易在心肌细胞蓄积,导致严重的心脏毒性。此外,一定数量的患者在接受阿霉素辅助治疗后存在复发、转移以及原发或继发性耐药现象,限制了阿霉素在临床上更广泛的应用。因此,如何基于阿霉素对骨肉瘤的治疗方案进行新的探索,是目前亟需解决的问题。蛋白质棕榈酰化修饰是一种最普遍的翻译后脂质修饰形式,包括不可逆型N-棕榈酰化和可逆型S-棕榈酰化。S-棕榈酰化指饱和的含16个碳的棕榈酸通过硫脂键与蛋白质半胱氨酸残基共价结合的过程,可由DHHC蛋白介导。近年来,大量研究发现,棕榈酰化与癌症的发生发展密切相关。抑制与癌症相关的蛋白棕榈酰化能够有效治疗肿瘤。因此,本课题拟通过实验研究蛋白棕榈酰化抑制剂溴代十六烷酸(2-Bromopalmitate,2-BP)与阿霉素(Adriamycin,ADR)联合应用,诱导骨肉瘤细胞凋亡的效应,并进一步探讨其内在的分子机制。研究目的:本研究的目的是探讨棕榈酰化抑制剂2-Bromopalmitate(2-BP)对阿霉素(ADR)抗骨肉瘤作用的影响,并进一步阐明其内在的分子机制。具体分为两部分:1)验证棕榈酰化抑制剂2-BP协同阿霉素治疗骨肉瘤的效果。2)阐明活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)诱导的内质网应激在2-BP协同阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡中的作用,探究两药联合应用后内质网应激下游信号的变化。研究方法:选用人骨肉瘤细胞株(U20S和MG63)与骨肉瘤病人的原代细胞样本(OS14、OS15、OS20和OS21)为主要研究对象,考察2-BP与ADR联合应用对骨肉瘤细胞的增殖及凋亡的影响。采用磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)法检测骨肉瘤细胞增殖情况;采用碘化丙唆(Propidium Iodide,PI)单染法结合流式细胞术检测细胞死亡比例;采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(Diamidino-2-Phenylindole,DAPI)染色法观察细胞凋亡情况;采用膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡比例;采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(Poly-ADP-Ribose Polymerase,PARP)、Caspase 8、Caspase 3的裂解情况;加入不同的细胞程序性死亡抑制剂后,采用PI单染法结合流式细胞术检测骨肉瘤细胞死亡比例,并结合Western Blot观察细胞凋亡相关蛋白的裂解变化,进一步探究加入细胞程序性死亡抑制剂后各组细胞凋亡变化情况。选用人骨肉瘤细胞株U20S和骨肉瘤病人的原代细胞样本OS21为主要研究对象,考察2-BP协同ADR诱导骨肉瘤细胞凋亡的分子机制。采用PI单染法结合流式细胞术检测细胞周期分布;采用Western Blot检测细胞DNA损伤应答相关蛋白ATM、ATR、CHK1和CHK2的磷酸化水平;加入活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)清除剂 N-乙酰-L-半胱氨酸(N-Acetyl-L-Cysteine,NAC)和 L-谷胱甘肽(L-Glutathione,GSH)后采用PI单染法结合流式细胞术检测骨肉瘤细胞周期分布变化;采用荧光探针二氯二氢荧光素乙酰乙酸(Carboxy-Dichlorofluorescein Acetic Acid,Carboxy-DCFDA)结合流式细胞术检测细胞活性氧水平;加入内质网应激诱导剂衣霉素(Tunicamycin,Tu)后采用PI单染法结合流式细胞术检测细胞死亡比例变化;采用Western Blot和半定量PCR分别检测细胞内质网应激下游信号激活转录因子4(Activation Transcription Factor 4,ATF4)、激活转录因子 6(Activation Transcription Factor 6,ATF6)和 X 盒结合蛋白 1(X-box Binding Protein 1,XBP1)的表达水平;采用实时定量PCR法检测CCAAT增强子结合蛋白的同源蛋白(CCAAT-enhancer-binding Protein Homologous Protein,CHOP)mRNA的表达水平;采用Western Blot检测CHOP蛋白表达水平;加入ROS清除剂后采用Western Blot检测CHOP蛋白表达水平变化;用siCHOPs转染后,采用实时定量PCR法检测CHOP mRNA的表达水平验证沉默效率,再采用PI单染法结合流式细胞术检测细胞周期分布变化,并采用AV/PI双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡比例;采用Western Blot检测沉默CHOP后细胞凋亡相关蛋白蛋白PARP、Caspase 8、Caspase 3的裂解变化情况。研究结果:1)2-BP协同ADR引起骨肉瘤细胞增殖抑制,诱导细胞凋亡2-BP可以增强ADR抑制骨肉瘤细胞和人源骨肉瘤原代细胞增殖的能力,且呈良好的浓度关系;各浓度合用指数(Combination Index,CI)均小于1;同时,2-BP能够有效降低骨肉瘤细胞和人源骨肉瘤原代细胞上阿霉素的IC50。PI单染法结合流式细胞术和AV-PI双染法结合流式细胞术实验结果提示2-BP与ADR联合应用可上调细胞凋亡比例;DAPI染色后可观察到合用组引起的细胞核的破碎以及凋亡小体的数量均多于单用组;Western Blot结果显示,合用组能够明显增加细胞凋亡相关蛋白PARP、Caspase 8、Caspase 3的裂解,且呈浓度相关;此外,细胞凋亡抑制剂能够逆转2-BP协同ADR诱导骨肉瘤细胞发生凋亡。2)2-BP协同阿霉素诱导的细胞凋亡与活性氧产生相关首先,2-BP未能显着增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞周期阻滞效果;与单用组相比,ADR和2-BP合用组DNA损伤应答相关蛋白ATM、CHK1、ATR和CHK2的磷酸化水平没有明显提高。上述结果提示2-BP协同ADR诱导骨肉瘤细胞发生凋亡与DNA损伤的机制没有明显相关。另一方面,在骨肉瘤细胞株和人源骨肉瘤原代细胞上,ROS清除剂NAC和GSH均能有效缓解两药合用诱导的细胞凋亡;检测细胞活性氧水平发现ADR单用组ROS水平有一定提高,但是ADR与2-BP合用组的ROS水平与其相比未有明显上调。3)2-BP协同阿霉素激活内质网应激下游CHOP信号内质网应激诱导剂衣霉素(Tunicamycin,Tu)能够加重ADR、2-BP以及两者合用诱导的细胞凋亡;另一方面,2-BP对ADR诱导细胞凋亡的协同效果比其协同Tu的效果更明显。检测未折迭蛋白反应(Unfolded Protein Response,UPR)下游信号ATF4,ATF6和XBP1表达水平发现,2-BP能够增强ADR上调ATF4蛋白表达水平的能力,而ATF6和XBP1的表达水平在给药前后无明显差别。2-BP与ADR联合应用能够显着上调CHOP的转录表达水平,且呈作用时间依赖性和浓度依赖性;同时,两药合用也能显着上调CHOP蛋白表达水平;加入ROS清除剂NAC后,ADR与2-BP合用导致的CHOP蛋白表达水平的上调被明显抑制;此外,沉默CHOP蛋白表达能够逆转2-BP协同阿霉素诱导的细胞凋亡:PI单染法结合流式细胞术和AV-PI双染法结合流式细胞术军检测到合用组细胞凋亡比例降低,而且细胞凋亡相关蛋白PARP、Caspase 8、Caspase 3的裂解被明显削弱。研究结论:本研究发现了蛋白质棕榈酖化抑制剂2-溴代十六烷酸(2-Bromopalmitate,2-BP)能够增强阿霉素对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用,并阐明了活性氧诱导的CHOP信号活化在2-BP协同阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡中起关键作用。本研究首次提出了 2-BP与阿霉素联合应用具有良好的抗骨肉瘤疗效,为临床治疗骨肉瘤提供了一种新思路。(本文来源于《浙江大学》期刊2019-04-01）
程炜,占方玲,李水明,杨静波,王勇[8]（2019）在《基于不同沉淀方法检测小鼠心脏组织中S-棕榈酰化蛋白》一文中研究指出酰基-生物素置换法(Acyl-biotinyl exchange,ABE)是利用生物素取代棕榈酸,进而对棕榈酸修饰的蛋白进行标记检测的方法,是检测S-棕榈酰化蛋白质的常用方法。本研究比较了ABE法中丙酮沉淀与甲醇-氯仿沉淀两种方法对S-棕榈酰化蛋白检测的影响,并对小鼠心脏组织中S-棕榈酰化修饰蛋白进行整体分析,进一步丰富S-棕榈酰化蛋白质的相关研究。首先用N-乙基马来酰亚胺(NEM)对小鼠心脏组织中蛋白质分子上的游离巯基进行封闭,再利用巯基反应性生物素化试剂(HPDP-Biotin)对羟胺(HA)切割后新产生的半胱氨酸巯基进行生物素标记,可检测出小鼠心脏组织中S-棕榈酰化修饰的蛋白。在此反应过程中,均通过蛋白沉淀法除去未反应的NEM、HA及HPDP-Biotin。基于不同沉淀方法对小鼠心脏组织总蛋白中的S-棕榈酰化蛋白进行标记后,利用链霉亲和素修饰琼脂糖珠对已标记上生物素的S-棕榈酰化蛋白进行富集,利用质谱检测分析。本研究共鉴定出50种S-棕榈酰化蛋白,其中丙酮沉淀实验组鉴定出23种S-棕榈酰化蛋白,甲醇-氯仿沉淀实验组鉴定出37种S-棕榈酰化蛋白,两组均鉴定出的蛋白有10种,不同的沉淀方法交叉互补使用可使鉴定结果更加丰富、可靠。(本文来源于《分析化学》期刊2019年01期）
高潇,王冰,姚佳,朱玉贞,王静[9]（2018）在《CBP棕榈酰化位点的突变对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生物学行为的影响》一文中研究指出背景与目的:Src羧基末端激酶结合蛋白(Csk-binding protein,CBP)是新近发现的通过棕榈酰化位点锚定脂筏,参与多种肿瘤的发生、发展过程的抑制性跨膜接头蛋白。本研究旨在观察棕榈酰化位点异常的CBP对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其相关的分子机制。方法:构建CBP-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合蛋白的慢病毒表达载体,采用反转录病毒转染的方法建立CBP棕榈酰化位点突变的A431细胞系以及CBP过表达的A431细胞系,实验分为4组:空白对照组(Parental组,未进行基因转染的A431细胞)、阴性对照组(Control,A431细胞转染仅含EGFP阴性对照病毒载体)、阳性(过表达)对照组(WT-CBP,A431细胞转染WT PAG1-EGFP病毒载体)、实验组(Mutant-CBP,A431细胞转染棕榈酰化位点突变的CBP-EGFP病毒载体)。采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测转染率,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Westernblot)检测转染后细胞中CBP mRNA表达和蛋白水平,验证转染是否成功。采用流式细胞术检测CBP棕榈酰化位点突变对细胞凋亡的影响;细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)细胞增殖实验、划痕、transwell迁移及侵袭实验检测CBP棕榈酰化位点突变对A431细胞生长、迁移和侵袭能力的影响;用Western blot检测Csk和Fyn两种下游信号转导分子蛋白水平的变化。结果:建立了稳定的CBP棕榈酰化位点突变A431细胞系和CBP过表达A431细胞系。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,结果显示,与Control组和Parental组比较WT-CBP组A431细胞的凋亡明显增多,差异有统计学意义(P<0.001);但Mutant-CBP组A431细胞的凋亡与WT-CBP组相比明显减少,与Control组和Parental组比较差异无统计学意义(P>0.05)。划痕实验结果表明,与Control组和Parental组比较野生型CBP过表达组A431细胞愈合率明显降低(P<0.001),而CBP棕榈酰化位点突变A431细胞愈合率没有明显变化(P>0.05)。Transwell迁移和侵袭实验结果表明,与Control组和Parental组比较野生型CBP过表达组A431细胞的迁移、侵袭能力明显降低(P<0.001),过表达CBP棕榈酰化位点突变A431细胞的迁移和侵袭能力与WT-CBP组相比明显增高,而与Control组和Parental组相比差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果表明:WT-CBP组Csk和Fyn蛋白与Parental组和Control组相比表达明显增加(P<0.001),而Mutant-CBP组Csk和Fyn蛋白的相对表达水平与Parental组和Control组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CBP上调可以抑制A431细胞的增殖,但棕榈酰化位点突变的CBP丧失了发挥抑制细胞增殖的功能。由此可见,棕榈酰化位点突变可影响CBP发挥其抑制细胞增殖的作用。(本文来源于《中国癌症杂志》期刊2018年12期）
夏欣宇,王翡,高婷,宋静[10]（2018）在《AMPA受体棕榈酰化在亚慢性铝染毒大鼠海马长时程增强中的作用》一文中研究指出[目的]研究α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体棕榈酰化修饰在亚慢性铝染毒在大鼠海马长时程增强(LTP)中的作用。[方法]健康成年雄性SD大鼠24只,按体重相近者随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组6只,采用腹腔注射麦芽酚铝的方式对大鼠进行染毒,对照组给予生理盐水,低、中、高剂量组的铝染毒剂量分别为10、20、40μmol/kg,隔天染毒,共染毒12周。染毒结束后采用在体海马CA1区LTP记录技术,记录兴奋性突触后电位,然后断头取海马,采用酰基生物素置换法测定AMPA受体棕榈酰化水平。[结果] LTP检测结果显示,高频刺激后1 min和60 min时,各剂量组的标准化幅值(后简称"幅值")差异有统计学意义(P<0.05);30 min时差异无统计学意义。1 min时,中、高剂量组的幅值低于对照组和低剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。60 min时,低、中、高剂量组的幅值均低于对照组,且高剂量组的幅值低于低、中剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。酰基生物素置换法结果显示,中、高剂量组的离子型谷氨酸受体1(GluR1)低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中剂量组的离子型谷氨酸受体2(GluR2)棕榈酰化水平低于对照组,高剂量组的GluR2棕榈酰化水平低于对照组及低、中剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]亚慢性铝染毒后,大鼠海马LTP受到抑制,AMPA受体棕榈酰化水平降低,这提示AMPA受体棕榈酰化降低可能是LTP损害的机制之一。(本文来源于《环境与职业医学》期刊2018年12期）
棕榈酰化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体及突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD-95)棕榈酰化失衡在铝致大鼠海马LTP损害中的作用及其作用机制。方法健康雄性成年SD大鼠60只,随机分为生理盐水(空白对照组)、10μmol·kg~(-1)、20μmol·kg~(-1)、40μmol·kg~(-1)麦芽酚铝染毒组,每组15只。按照大鼠体重采用腹腔注射方式进行染毒,隔天染毒,共染毒12星期。在体电生理学方法对各剂量组大鼠在体海马进行LTP检测。酰基生物素置换法(ABE法)测定AMPA受体及AMPA受体相关蛋白PSD-95棕榈酰化水平。Western-Blot、RT-PCR方法分别检测酰基转移酶(Zinc fingerspartate-histidine-histidine-cysteine cysteine rich domain3,zDHHC3)和去棕榈酰化酶(palmitoyl protein thioesterase 1,PPT1)蛋白和基因水平的表达情况。结果 LTP检测结果显示,麦芽酚铝亚慢性染毒可致大鼠海马LTP呈现剂量依赖性的降低。蛋白棕榈酰化水平检测结果显示,20μmol·kg~(-1)Al(mal)3、40μmol·kg~(-1)Al(mal)3组的离子型谷氨酸受体1(Ionotropic glutamate receptor 1,GluR1)和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。20μmol·kg~(-1)Al(mal)3组的离子型谷氨酸受体2(Ionotropic glutamate receptor 2,GluR2)棕榈酰化水平与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),40μmol·kg~(-1)Al(mal)3组的GluR2棕榈酰化水平低于对照组、10μmol·kg~(-1)Al(mal)3、20μmol·kg~(-1)Al(mal)3组(P<0.05)。20μmol·kg~(-1)Al(mal)3、40μmol·kg~(-1)Al(mal)3组的PSD-95蛋白棕榈酰化水平和空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。棕榈酰化相关酶蛋白和基因表达结果显示,随着染铝剂量的升高,zDHHC3蛋白和基因的表达量呈现下降的趋势(P<0.05),PPT1蛋白和基因的表达量呈现上升的趋势(P<0.05)。结论亚慢性染铝可导致大鼠海马AMPAR和PSD-95蛋白棕榈酰化水平降低,这可能与铝致大鼠LTP损害机制有关。大鼠海马棕榈酰化酶蛋白水平和基因水平表达降低,去棕榈酰化酶蛋白水平和基因水平表达升高,可能是铝致AMPAR和PSD-95蛋白棕榈酰化水平降低的原因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
棕榈酰化论文参考文献
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[2].夏欣宇,高婷,袁春满,宋静.AMPA受体及PSD-95棕榈酰化失衡在铝致大鼠LTP损害中的作用研究[C].中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集.2019
[3]..PD-L1棕榈酰化是抗肿瘤免疫新靶点[J].上海交通大学学报(医学版).2019
[4].夏欣宇.AMPA受体及PSD-95棕榈酰化失衡在铝致大鼠LTP损害中的作用研究[D].山西医科大学.2019
[5].陈扬.Porcupine依赖的Ku70蛋白棕榈酰化在DNA损伤应答中的作用及机制研究[D].天津医科大学.2019
[6].程炜.基于酰基-生物素交换的棕榈酰化修饰蛋白质组分析方法学研究[D].吉林大学.2019
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[8].程炜,占方玲,李水明,杨静波,王勇.基于不同沉淀方法检测小鼠心脏组织中S-棕榈酰化蛋白[J].分析化学.2019
[9].高潇,王冰,姚佳,朱玉贞,王静.CBP棕榈酰化位点的突变对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生物学行为的影响[J].中国癌症杂志.2018
[10].夏欣宇,王翡,高婷,宋静.AMPA受体棕榈酰化在亚慢性铝染毒大鼠海马长时程增强中的作用[J].环境与职业医学.2018
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