导读:本文包含了束缚浸水应激论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:束缚-浸水应激,内侧前额叶,蛋白质组学,突触可塑性
束缚浸水应激论文文献综述
马英杰[1]（2019）在《束缚-浸水应激大鼠mPFC差异蛋白分析及突触可塑性变化》一文中研究指出束缚-浸水应激(restraint water-immersion stress,RWIS)是一种生理和心理上的复合型应激,可在短时间内诱发胃肠机能紊乱(如胃运动亢进、胃酸分泌增多、胃粘液分泌减少、胃粘膜损伤和肠运动加强等)。内侧前额叶(medial prefrontal cortex,mPFC)是哺乳动物最高级别的联合皮层,具有思考记忆、整合信息以及指挥调控的功能。研究发现,应激1h大鼠mPFC内Fos蛋白阳性表达明显增多,表明mPFC核团参与RWIS了过程。那么,在RWIS过程中mPFC内有哪些蛋白发生了变化?这些差异蛋白参与RWIS调控的可能信号通路及分子机制是什么?这些问题仍没有得到解决。此外,突触可塑性对于神经元和神经环路的稳定具有重要作用。在RWIS过程中,mPFC的突触可塑性是否发生改变以及发生怎样的改变仍见未有详细报道。鉴于此,我们提出以下叁个问题:1.RWIS导致大鼠mPFC内哪些蛋白的表达量发生改变?这些差异蛋白参与调控的可能机制及信号通路如何?2.RWIS大鼠mPFC内神经元突触的超微结构是否发生改变?3.RWIS大鼠mPFC内突触相关的标志性功能蛋白是否发生改变?为探索上述叁个问题,设计以下叁部分实验:实验一:将实验动物随机分为对照组(RWIS 0h)和实验组(RWIS 4h),用同位素相对标记与绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术分析两组间大鼠mPFC内差异表达蛋白,进而对差异蛋白进行GO分析、KEGG分析和IPA分析,探索这些差异蛋白在应激过程可能参与的信号通路以及分子机制。实验二:将实验动物随机分为4组,即RWIS 0h(对照组)、RWIS 1h、RWIS 2h和RWIS 4h组。用高尔基染色法检测RWIS不同时间段mPFC内神经元树突棘密度的变化,用透射电镜超薄切片技术观察RWIS不同时间段mPFC内PSD厚度、突触间隙的宽度、突触曲率以及突触数密度等突触超微结构的变化,探究RWIS不同时间段大鼠mPFC内突触结构可塑性是否发生改变以及发生了怎样的改变。实验叁:分组情况同实验二。分别采用免疫组织化学技术、蛋白质免疫印迹技术、RTPCR技术检测应激不同时间段突触标志物——突触后致密物蛋白PSD-95与突触膨体素SYN蛋白及其mRNA相对表达量的变化,进而分析RWIS不同时间段大鼠mPFC的突触功能可塑性是否发生改变以及发生了怎样的改变。实验结果表明:1.iTRAQ技术共鉴定出对照组与RWIS 4h两组差异蛋白129种,其中有88种上调、41种下调。GO分析表明22%(29个)的差异蛋白与神经系统功能直接相关,包括突触可塑性(6个)、轴突形态和生长(12个)、神经发育与凋亡(10个)和神经信号传递(1个)等。KEGG分析发现129种差异蛋白共富集到64条代谢通路,涉及突触囊泡循环、毒理代谢等过程。IPA分析差异蛋白参与137条信号通路,其中只有Rho-GDI信号通路被抑制,整合素信号通路被激活。2.束缚-浸水应激改变了大鼠mPFC的突触结构可塑性。树突棘染色实验发现各应激组与对照组相比单位长度(10um)内树突棘的数量均有显着性减少(P<0.05)。随着RWIS时间的延长,树突棘的密度整体呈先下降再恢复的趋势。其中RWIS 1h组树突棘密度最低(P<0.01),RWIS 2h与RWIS 4h组较RWIS 1h组树突棘的密度有所升高,但无显着性差异(P>0.05)。电镜下可以观察到清晰的细胞结构,如细胞核、线粒体、高尔基体以及突触等。突触后部位电子致密物质明显增厚,在突触前终末端有或多或少的囊泡,呈圆形或椭圆形,聚集在突触前膜处,同时还可以观察到部分与突触前膜融合的囊泡。突触活性区的长度以及突触后致密带的厚度和长度也各有不同。对照组细胞成分轮廓清晰,而应激组轮廓欠清晰,穿孔型突触较多,可以观察到空泡化的线粒体,这说明氧化应激反应对线粒体造成了一定损伤。与对照组相比,RWIS 4h组单位面积突触的数量显着减少(P<0.05),RWIS 1h和RWIS 2h组与对照组相比突触数目有所减少,但差异均不显着(P>0.05)。与对照组相比,RWIS 4h组平直型突触和U型突触所占比例显着减少(P<0.05),而倒U型突触所占的比例显着上升(P<0.05),RWIS 2h和RWIS 1h组与对照组相比均差异不明显(P>0.05)。RWIS 4h组突触前囊泡的数量较对照组明显减少(P<0.05),RWIS 1h和RWIS2h组较对照组则无显着性差异(P>0.05)。突触间隙的宽度随着应激时间的延长呈现先减小后又回增的趋势,其中RWIS 1h和RWIS 2h组较RWIS 0h组突触间隙的宽度均显着降低(P<0.05),但RWIS 4h组与对照组相比则无显着差异(P>0.05)。应激不同时间段,各组PSD的厚度较对照组均有显着性降低(P<0.05),随应激时间的延长,PSD的厚度呈现先降低后恢复的趋势。其中,在RWIS 2h组PSD厚度最低(P<0.01),RWIS 4h组PSD厚度与RWIS 1h和RWIS 2h组相比有升高的趋势,但无显着性差异(P>0.05)。3.束缚-浸水应激改变了大鼠mPFC的突触功能可塑性。免疫组化结果显示PSD-95蛋白主要在胞浆及膜表面表达,呈棕色或者棕黄色。随着应激时间的延长,PSD-95阳性胞体数量呈现先降低后又恢复的趋势,且各应激组PSD-95阳性胞体数量均较对照组均有显着性减少(P<0.05)。其中RWIS 1h组PSD-5阳性表达量数量最低(P<0.01),RWIS 2h和RWIS 4h组与RWIS 1h组相比,PSD-95表达量有所上升,但与RWIS 1h组无显着性差异(P>0.05)。SYN在整个胞质中均有表达,呈棕黄色。RWIS 4h组与对照组相比,SYN的表达量显着下降(P<0.05),而RWIS 1h和RWIS 2h组与对照组相比略有上升,但无显着性差异(P>0.05)。免疫印迹结果与免疫组化结果一致,PSD-95表达整体呈先降低再升高的趋势。应激组与对照组相比,PSD-95相对表达量均有所降低,并具有显着性差异(P<0.05)。其中,RWIS 1h组PSD-95条带相对表达量最低(P<0.01),RWIS 2h和RWIS 4h组较RWIS1h组PSD-95的表达量增多,但无显着性差异。SYN的表达整体呈现先升高再降低的趋势。RWIS 4h组SYN的相对表达量最低,与应激组相比有显着性差异(P<0.05),RWIS 1h组与RWIS 4h组较对照组SYN的表达略有上升,但无显着性差异。PCR实验结果发现SYN蛋白mRNA相对表达量与免疫组化和免疫印迹结果一致,RWIS 4h组与RWIS 0h组相比,mRNA表达显着下调(P<0.05),RWIS 1h和RWIS 2h组与对照组相比有减少趋势,但无显着性差异(P>0.05)。与对照组相比,RWIS 1h和RWIS 2h组PSD-95蛋白mRNA表达量显着上调(P<0.05),RWIS 4h组mRNA却表达无显着差异(P>0.05)。RWIS 4h组与RWIS 2h组相比,PSD-95蛋白mRNA表达下降(P<0.05),但与RWIS 1h组相比无显着性差异(P>0.05)。综合以上实验,RWIS不同时间段对大鼠mPFC内神经元形成一定程度损伤,mPFC内突触可塑性下调。差异蛋白参与了氧化应激、毒理代谢、转录翻译以及细胞凋亡等生物过程,尤其是NDRG1和NYAP2蛋白在应激中可能参与了机体的保护机制。随RWIS时间的延长,机体启动应激损伤调控机制,mPFC内Rho-GDI信号通路的抑制和整合素信号通路的上调激活可能在神经元的损伤修复以及突触重塑过程中发挥重要功能。(本文来源于《山东师范大学》期刊2019-06-09）
张顺[2]（2019）在《“下丘脑—脑干—肠脑轴”中CRF在大鼠束缚—浸水应激中的作用》一文中研究指出束缚-浸水应激模型(Restraint Water-Immersion Stress,RWIS)是一种快速对大鼠心理和生理造成伤害的刺激模型。在这种应激模型中,大鼠在短时间内因受到刺激,体温下降,胃肠功能紊乱,导致胃酸分泌增加和急性胃黏膜损伤。肠神经系统是位于胃肠道壁中的神经元、神经递质和肠细胞组成的网络,控制和调节胃肠道中的平滑肌,黏膜上皮和血管效应系统,它的调节具有高度的自主性,因此也被称为“肠脑”。经本实验室的早期研究发现,大鼠在一定的应激时间段内,随着束缚-浸水的时间增长,下丘脑的室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)、视上核(supraoptic nucleus,SON)、孤束核(Solitary Nucleus,NTS)、迷走神经背核(dorsal motor nucleus of the vagus,DMV)和肠道肌间神经丛中Fos和GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)的表达水平显着升高,我们推测束缚-浸水应激造成胃黏膜损伤不只是涉及到脑干内神经元的过度活动这种初级中枢机制~([75]),所以我们提出了“下丘脑-脑干-肠脑轴”环路参与了对应激的调控。而促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-Releasing Factor,CRF)作为下丘脑的室旁核、视上核释放的非常重要的激素之一,已研究表明其参与了多种应激(热刺激、冷刺激、感染和毒物刺激)反应,但促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)及其受体是否参与了束缚-浸水应激尚未见报道。因此,我们提出以下几个问题:1.CRF及其受体是否介导和参与了RWIS过程,并在RWIS中各时间段有何变化?2.侧脑室注射CRF受体阻断剂Astressin和CRF后,对孤束核及肠道内的神经元和胶质细胞有何影响?3.CRF若参与束缚-浸水的过程,是通过哪条信号路径起作用?为了解决上述问题,我们实验设计如下:实验研究一:大鼠随机分为对照组(RWIS 0h)和应激组(RWIS 1h,RWIS 2h,RWIS3h)后,采用免疫组化和免疫印迹法检测大鼠CRF及其受体表达的影响,以探讨CRF及其受体是否参与了RWIS过程。实验研究二:将大鼠分为对照组(侧脑室注射生理盐水)、CRF组(侧脑室注射CRF)和Astressin组(侧脑室注射CRF-R抑制剂Astressin),大鼠束缚-浸水应激1h后,免疫组化和免疫印迹法检测NTS、DMV以及肠神经系统中Fos、GFAP、p-ERK1/2、NOS表达,探讨CRF在束缚浸水过程中的作用?实验研究叁:将大鼠分为对照组(侧脑室注射生理盐水)、CRF组(侧脑室注射CRF)和PD98059+CRF组(侧脑室注射p-ERK1/2特异性抑制剂PD98059和CRF),大鼠束缚-浸水应激1h后,免疫组化和免疫印迹法检测NTS和DMV内Fos和星形胶质细胞的标记物GFAP表达的变化,探究CRF参与束缚-浸水的信号途径?实验研究四:将大鼠分为对照组(侧脑室注射生理盐水)、CRF组和Astressin组,大鼠束缚-浸水应激1h后,免疫组化和免疫印迹法检测肠神经系统中的Claudin-1、Occludin和胃黏膜中的MUC5AC表达变化,探究CRF对胃肠道功能的影响?实验结果:1.与对照组相比,实验组大鼠脑干迷走复合体内CRF-R1与肠神经系统内CRF的表达明显增加,且呈时间依赖性,在3h达到了最高。而与对照组相比,实验组大鼠迷走复合体内CRF-R2的表达明显降低,且呈时间依赖性,在3h达到了最低。表明肠神经系统内CRF及脑干(NTS、DMV)内CRF-R1被激活,参与了RWIS过程。2.与侧脑室注射生理盐水对照组相比,侧脑室注射CRF-R抑制剂Astressin,束缚-浸水应激1h后,实验组NTS、DMV以及肠神经系统中的Fos表达、星形胶质细胞GFAP、p-ERK1/2、NOS表达都显着降低。而侧脑室注射CRF,束缚-浸水应激1h后,实验组NTS、DMV以及肠神经系统中的Fos表达、星形胶质细胞GFAP、p-ERK1/2、NOS表达都显着升高,表明促肾上腺激素释放激素可能激活了脑干和肠神经系统内一氧化氮能神经元参与了在束缚-浸水应激过程。3.与侧脑室注射CRF对照组相比,侧脑室注射p-ERK1/2特异性抑制剂PD98059和CRF后,实验组NTS、DMV以及肠神经系统中的Fos和星形胶质细胞的标记物GFAP表达明显下降,表明CRF可能通过ERK1/2信号通路参与束缚-浸水过程。4.与侧脑室注射生理盐水对照组相比,侧脑室注射CRF组肠神经系统中的Claudin-1、Occludin和胃黏膜中的MUC5AC表达显着降低。表明束缚-浸水对大鼠造成胃机能的损伤和机体内部发生了紊乱,而CRF在这个过程中可能加速了炎症反应和胃溃疡,而且这个过程主要是通过ERK1/2信号通路进行调控的。实验结论如下:1、脑干内的CRF受体CRF-R和结肠内的CRF都参与了束缚浸水应激的过程。2、CRF主要是通过ERK1/2信号通路对束缚浸水后造成的胃肠机能紊乱进行调控的。(本文来源于《山东师范大学》期刊2019-05-25）
赵盼[3]（2019）在《“脑干-肠脑轴”中神经元与星形胶质细胞在束缚-浸水应激中的相互作用》一文中研究指出束缚-浸水应激(restraint water-immersion stress,RWIS)是一种复合型应激模型,在几个小时之内该应激就可以引起大鼠产生心理和生理反应,如胃酸分泌的迅速增多、胃黏膜的急性损伤、胃肠功能的紊乱及体温的降低等。中枢神经系统和胃肠道可通过神经-内分泌网络进行信息交流,调节胃肠功能,构成“脑-肠轴(brain-gut axis)”。与大部分应激反应导致的“脑-肠轴”中交感神经活动加强现象不同的是,在RWIS过程中是副交感神经活动得到加强。我们前期实验研究发现,在RWIS过程中迷走神经背核(dorsal motor nucleus of the vagus,DMV)、孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)以及肠神经系统(Enteric nervous system,ENS)中的c-Fos和GFAP蛋白表达明显增加,表明“脑干-肠脑轴”中的神经元和星形胶质细胞共同参与了RWIS过程。同时,已有研究发现海马星形胶质细胞参与了创伤后应激障碍及保护神经元细胞免受氧化应激和硝基应激的作用,但“脑干-肠脑轴”中星形胶质细胞在RWIS过程中的作用,星形胶质细胞与神经元的相互作用及机制尚未见报道。为此,我们提出以下几个问题:1.在RWIS过程中,星形胶质细胞是否对“脑干-肠脑轴”中NTS、DMV、肠道中神经元以及胃肠功能产生影响?2.在RWIS过程中,星形胶质细胞通过哪种途径对“脑干-肠脑轴”中NTS、DMV以及肠道中神经元产生影响?我们设计了以下实验:实验研究一:将实验动物随机分为四组(RWIS 0h、1h、2h、3h),用Western blot方法和免疫组织化学技术检测脑干NTS、DMV和空肠、结肠肌间神经丛中GFAP的表达。随后将实验动物随机分为对照组和实验组,对照组侧脑室注射生理盐水,实验组侧脑室注射星形胶质细胞特异性抑制剂L-α-氨基己二酸(L-α-aminoadipate,L-AA),RWIS 1h后,用Western blot方法和免疫组织化学技术检测脑干NTS、DMV和空肠、结肠肌间神经丛中c-Fos、GFAP、NOS和ChAT的表达情况,探究RWIS过程中,星形胶质细胞对“脑干-肠脑轴”中神经元激活的影响。实验研究二:将实验动物随机分为对照组和实验组,对照组侧脑室注射生理盐水,实验组侧脑室注射甘珀酸(carbenoxolone,CBX),RWIS 1h后,用Western blot方法和免疫组织化学技术检测脑干NTS、DMV和空肠、结肠肌间神经丛中c-Fos、GFAP、NOS和ChAT的表达情况,探究RWIS过程中,星形胶质细胞对“脑干-肠脑轴”中神经元激活的调控机制。实验研究叁:将实验动物随机分为对照组和实验组,对照组侧脑室注射生理盐水,实验组侧脑室分别注射L-AA、CBX,RWIS 1h后,用Western blot方法检测肠道中咬合蛋白的表达变化,用ELISA试剂盒检测胃中MUC5AC蛋白的表达变化,探究RWIS过程中,星形胶质细胞对胃肠功能的影响。实验结果表明:1.RWIS不同时间段,大鼠脑干NTS、DMV和空肠、结肠肌间神经丛中GFAP均有不同程度的表达,并且在脑干NTS和DMV中GFAP在RWIS 1h时表达量最高,空肠和结肠肌间神经从中GFAP的表达量随着RWIS时间的增长而升高。之后与对照组相比,侧脑室注射L-AA,RWIS 1h后,脑干DMV、NTS和空肠、结肠中肌间神经丛内c-Fos、GFAP、ChAT和NOS表达均明显降低。表明“脑干-肠脑轴”星形胶质细胞通过激活神经元参与了RWIS过程。2.与对照组相比,侧脑室注射CBX,RWIS 1h后,脑干中DMV、NTS和空肠、结肠中肌间神经丛内c-Fos、GFAP、ChAT和NOS表达均明显降低。表明星形胶质细胞可能通过缝隙连接调控神经元的激活参与了RWIS过程。3.与对照组相比,侧脑室注射L-AA、CBX,RWIS 1h后,胃中MUC5AC蛋白的表达降低,肠道中咬合蛋白的表达升高,表明“脑干-肠脑轴”中的星形胶质细胞可能对胃肠功能起到保护作用。(本文来源于《山东师范大学》期刊2019-05-25）
王天霞[4]（2019）在《“下丘脑—脑干—肠脑轴”中催产素在大鼠束缚—浸水应激中的作用》一文中研究指出束缚-浸水应激(Restraint Water-Immersion Stress,RWIS)是一种复合型应激模型,同时给大鼠带来身体上和心理上的刺激。该模型使大鼠被迫接受冷水的刺激,造成大鼠胃黏膜出现急性损伤、胃酸分泌的迅速增多和胃肠功能的紊乱。我们课题组早期的研究发现脑干、下丘脑和肠神经系统内的Fos及星形胶质细胞GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)在RWIS应激后表达明显升高,因此,我们提出了“下丘脑-迷走神经复合体-肠脑轴”神经环路参与了束缚-浸水过程。催产素是一种由垂体后叶分泌,下丘脑室旁核和视上核合成的肽类激素。已研究发现催产素(Oxytocin,OXT)可以调节孕产妇早期生活压力(比如抑郁症)的代际传递~([65-68])。Lee等人研究发现鼻内给予催产素可通过催产素受体调节ERK活性,减少压力应激对大鼠海马突触可塑性和记忆的作用,表明外源性催产素可能是一种治疗有害神经认知效应的物质~([69-72])。大鼠接受恐惧应激刺激时,可检测到下丘脑内的催产素的表达明显升高,表明下丘脑内催产素参与了恐惧应激过程。但关于下丘脑-脑干神经环路中OXT及OXT受体是否参与了束缚-浸水应激过程以及对肠道肌间神经丛影响,尚未见详细报道。因此,我们提出以下几个问题:1、下丘脑-脑干神经通路内催产素及催产素受体是否参与RWIS过程,在RWIS中各时间段有何变化?2、侧脑室内注射OXTR抑制剂阿托西班或者OXT对RWIS大鼠肠肌间神经丛内神经元和星形胶质细胞有何影响?3、侧脑室内注射催产素受体抑制剂阿托西班或者注射催产素后,对RWIS大鼠胃肠功能的影响?所以我们设计了如下实验:1、将大鼠分为对照组(0h)和实验组(RWIS 1h、RWIS 2h和RWIS 3h),用免疫组织化学和Western Blot技术检测大鼠下丘脑视上核和室旁核内催产素及脑干迷走神经背核和孤束核内催产素受体的表达,以探究下丘脑-脑干神经通路内催产素及催产素受体是否参与RWIS过程?2、将大鼠分为对照组(侧脑室注射生理盐水)、OXT组(侧脑室注射OXT)和阿托西班组(侧脑室注射OXT受体抑制剂阿托西班),用免疫组织化学和Western Blot技术检测大鼠脑干内和肠肌间神经丛内Fos、ChAT、GFAP和NOS表达,探讨催产素在束缚-浸水中的作用?3、将大鼠分为对照组、OXT组和阿托西班组,用Western Blot和ELISA技术检测大鼠肠道内骨架蛋白Claudin 1、闭合蛋白Occludin和胃黏蛋白5AC的表达影响,探究催产素对胃肠功能的影响?实验结果如下:1、与对照组相比,实验组大鼠迷走复合体内催产素受体与下丘脑室旁核和视上核内催产素的表达明显增加,且呈时间依赖性,在3h达到了最高。2、与侧脑室注射生理盐水对照组相比,侧脑室注射OXT脑干(NTS、DMV)和肠神经系统中大鼠中Fos、GFAP、ChAT和NOS的表达显着升高;大鼠侧脑室注射阿托西班脑干(NTS、DMV)和肠神经系统中Fos、NOS、GFAP、ChAT的表达明显降低,表明了催产素激活了脑干和肠神经系统内胆碱能神经元和一氧化氮能神经元的活性。3、与侧脑室注射生理盐水对照组相比,侧脑室内注射OXT后,检测到骨架蛋白Claudin 1、闭合蛋白Occludin以及胃黏蛋白5AC的表达显着增多;而侧脑室内注射阿托西班后,检测到骨架蛋白Claudin 1、闭合蛋白Occludin以及胃黏蛋白5AC的表达显着降低,表明催产素对束缚浸水造成的胃黏膜损伤起到了一定的保护作用。实验结论如下:1、下丘脑(PVN、SON)内的OXT与脑干(NTS、DMV)内OXTR参与了束缚-浸水应激的过程。2、催产素激活Fos和星形胶质细胞,还激活了脑干和肠神经系统内胆碱能神经元和一氧化氮能神经元的活性。3、催产素对束缚浸水造成的胃肠黏膜损伤可以起到一定的保护作用。(本文来源于《山东师范大学》期刊2019-05-25）
徐少群,屠伟峰,温君琳,赵高峰[5]（2016）在《舒芬太尼预先给药对浸水束缚应激大鼠胃组织ASIC3表达的影响》一文中研究指出目的观察舒芬太尼与APETx2预先给药对浸水束缚应激(WIRS)大鼠胃组织酸敏感离子通道3(ASIC3)表达及胃黏膜损伤的影响。方法 40只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组(C组)、应激组(W组)、舒芬太尼预先给药组(S组,腹腔内注射舒芬太尼25μg/kg)及ASIC3特异性拮抗剂APETx2预先给药组(A组,腹腔内注射APETx2 25μg/kg)。采用WIRS法复制应激性胃黏膜损伤模型,于应激6 h后留取标本测定溃疡指数(UI);黄嘌呤氧化酶法测定胃组织超氧化物歧化酶(SOD)活力与硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量;免疫组化和免疫印迹法测定胃组织ASIC3蛋白表达。结果与C组比较,W组、S组及A组的UI值显着升高(P均<0.01),SOD值显着下降(P均<0.01),MDA值显着升高(P均<0.01),胃组织ASIC3蛋白表达显着上调(P均<0.01)。与W组比较,S组及A组的UI值显着下降(P均<0.01),SOD值显着升高(P均<0.01),MDA值显着下降(P均<0.01);A组的ASIC3蛋白表达显着下调(P<0.01),S组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 APETx2调控胃组织ASIC3蛋白表达,逆转氧自由基代谢失衡起胃黏膜保护作用;舒芬太尼同样通过逆转氧自由基代谢失衡起胃黏膜保护作用,但其作用机制并非通过调控ASIC3完成。(本文来源于《中国临床研究》期刊2016年08期）
郑婵,朱祥路[6]（2016）在《文拉法辛对束缚-浸水应激大鼠胃粘膜损伤的保护作用》一文中研究指出目的:通过观测急性胃粘膜损伤大鼠的胃粘膜形态学变化、胃组织炎症损伤的病理学评分及丙二醛(MDA)含量的变化来探讨文拉法辛对大鼠急性胃粘膜损伤的影响及可能的相关机制。方法:取健康雄性SD大鼠32只,随机分为正常对照组(A组)、应激组(B组)、文拉法辛组+应激(C组),奥美拉唑组+应激(D组)每组8只。采用冷水浸束缚应激方法制作AGML模型,于应激7h后检测胃粘膜组织MDA水平、大体及光镜下胃粘膜损伤程度及组织学改变。结果显示文拉法辛组与应激组比较胃粘膜损伤程度减轻,但胃组织MDA未有明显变化。结论:本实验结果表明文拉法辛对大鼠ACML有保护作用,而文拉法辛组对胃组织MDA的改变不明显。(本文来源于《四川省医学会第十五次精神病学学术会议暨第叁次心身医学学术会议论文汇编集》期刊2016-05-26）
王恒,屠伟峰,周红艳,郄文斌[7]（2016）在《TRPV1在急性术后疼痛加重浸水束缚应激大鼠胃黏膜损伤过程中的作用》一文中研究指出目的:探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)在急性术后疼痛加重浸水束缚应激(WIRS)大鼠胃黏膜损伤过程中的作用。方法:将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、WIRS模型组(WIRS组)、WIRS后SMIR组(WS组),各10只。观察各组胃黏膜损伤情况,测定UI、胃液p H、血清SOD/MDA值,免疫组化和Q-PCR法检测胃黏膜TRPV1平均光密度值及m RNA相对表达量。结果:与NC组相比,WIRS组UI升高(P<0.05),胃液p H、血清SOD/MDA、TRPV1下降(P<0.05);与WIRS组相比,WS组损伤加重,UI升高(P<0.05),胃液p H、血清SOD/MDA、TRPV1进一步下降(P<0.05);TRPV1与UI负相关,与胃液p H、血清SOD/MDA正相关。结论:急性术后疼痛抑制AMGL大鼠胃黏膜TRPV1表达,TRPV1参与了急性术后疼痛对AMGL大鼠胃黏膜进一步损伤过程。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2016年08期）
何峰[8]（2016）在《中央杏仁核对胃运动的调控作用及其在束缚—浸水应激反应中的活动特征》一文中研究指出“束缚-浸水”是一种特殊的生理-心理复合应激处理方式。通过将大鼠束缚固定,并浸入冷水中,动物在制动和低温2种外部应激因素的综合干预下,能在极短的时间内产生迷走神经介导的胃运动亢进、胃酸分泌增多以及胃粘膜损伤和溃疡形成等胃的机能障碍和病理现象。研究表明,延髓胃肠初级中枢——迷走复合体(dorsal vagal complex,DVC)神经元的活动亢进以及迷走神经的介导,是束缚-浸水应激(restraint water-immersion stress,RWIS)引起的应激性胃机能亢进及胃粘膜损伤的重要机制。研究还表明,边缘前脑的广泛区域在应激中的神经元c-Fos表达增强,但这些脑区在RWIS诱导的应激反应中扮演的角色尚未完全明了。中央杏仁核(central nucleus of amygdala,CEA)作为边缘应激环路的重要结构,在多种应激反应中表现出核团神经元活动的增强,并显着影响下丘脑-垂体-肾上腺皮质(hypothalamic-pituitary-adrenocortical,HPA)轴的活动。在发挥适应性的调控作用同时,CEA兴奋也可能是某些应激性功能障碍或疾病的发生机制。既往研究表明不同应激对动物CEA的兴奋诱导具有特异性。但是,就诱导出特殊胃病理损伤的复合应激方式——RWIS而言,应激引起的CEA神经元活动的特征如何?与其他应激反应有何不同?在RWIS所致的应激性胃机能障碍中扮演何种角色?这些或鲜见报道,或仍无定论。另外,CEA和胃肠机能的初级调控中枢——DVC间存在密切纤维联系,因此对胃的运动和分泌等机能具有调控效应。关于电刺激CEA对胃运动的调控效应的研究,不同时期的报道结论并不一致:早期报道为兴奋效应,后期有报道称以抑制效应为主。应激状态下的胃运动异常可能是导致各种胃肠疾病的重要外周原因——比如胃运动亢进被认为是动物应激性胃溃疡产生的最主要因素,而胃运动抑制引起胃的排空延迟,临床见于功能性消化不良和肠易激综合症。因此,明确CEA对胃运动的调控效应是确定其在应激性胃机能障碍中角色性质的重要前提之一。基于上述存在的问题,我们进行了以下2个方面的实验研究。首先,鉴于cea内部结构的异质性,我们在区分cea内、外侧亚核的基础上重新评价了cea的胃运动调控效应。主要通过电生理实验技术,我们比较了电刺激内、外侧cea对胃运动以及dvc神经元放电的影响效应。结果表明,电刺激内侧cea(medialsubdivisionofcea,mcea)引起胃运动的兴奋,而电刺激外侧cea(lateralsubdivisionofcea,lcea)引起胃运动的抑制;电刺激mcea抑制孤束核内侧亚核(medialsubdivisionofnucleustractussolitarious,mnts)的神经元放电、兴奋迷走背核(dorsalmotornucleusofvagus,dmv)的神经元放电,而电刺激lcea对mnts和dmv的神经元放电的影响效应相反。mcea和lcea对胃运动以及dvc神经元的相反效应可以用cea内部的gaba能抑制环路来解释,但直接证据还有待进一步通过实验获得。其次,基于上述发现的内、外侧cea对胃运动的不同调控效应,考虑到电刺激兴奋神经核团和应激过程中神经核的实际活动之间的不同,我们观察了cea神经元在rwis中的具体活动特征,具体包括2个实验内容:在第一个实验中,大鼠被随机分为非应激组,束缚应激(restraintstress,rs)组和rwis组,主要利用免疫组化技术和记录神经元放电技术,比较了大鼠内、外侧cea神经元的c-fos表达、神经元放电频率和放电间隔的变异系数(coefficientofvariation,cv)等。结果表明,只有rwis引起胃粘膜损伤;rwis引起cea的神经元活动增强;rwis引起的cea神经元活动特征不同于单纯rs,具体包括:1)两种应激均诱导lcea的神经元活动显着增强,但rwis大鼠lcea神经元的c-fos表达显着强于rs;2)mcea神经元的活动增强仅见于rwis大鼠;3)rwis大鼠cea神经元放电规律性增强,表现为cv显着低于非应激和rs大鼠。在第二个实验中,大鼠被随机分为非应激组,rwis1h组、rwis3h组,rs1h组,rs3h组,利用免疫组化双标技术,我们观察了cea中促肾上腺皮质激素释放激素(corticotrophin-releasinghormone,crh)能神经元在rwis中的c-fos表达特征,并用放免法测定了反映hpa轴活动的促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophichormone,acth)和皮质酮(corticosterone,cort)的血浆浓度。结果表明,复合了束缚和寒冷2种因素的rwis,cea中crh神经元的c-fos表达显着增强,且在不同时间段均超过单纯束缚的相关应激反应,类似报道此前未见。该结果反映了复合应激的诱导效应并非每种应激效应的简单迭加(据文献报道,单独寒冷应激抑制crh神经元活动)。上述cea中crh神经元的活动在rwis中随应激时间延长而增强,而在rs中随应激时间延长而减弱。我们的实验还表明,两种应激均诱导了大鼠HPA轴活动的增强,应激相同时间段的血浆ACTH和CORT浓度的比较结果表明,RWIS大鼠的HPA轴活动显着强于RS大鼠。而且,当应激从1h持续到3h时,RWIS大鼠的HPA轴活动呈显着增强趋势,表现为ACTH和CORT的血浆浓度继续显着升高;而同时RS大鼠的HPA活动却呈现显着减弱的趋势。RWIS中,CEA的CRH神经元和HPA轴的活动之间呈现出明显的互相促进的效应。上述有关RWIS诱导的CEA神经元的活动特征的描述,为阐明CEA介导RWIS应激反应的中枢机制提供了必要的资料。综上所述,我们研究发现,电刺激内、外侧CEA对胃运动分别具有兴奋和抑制的相反调控效应;RWIS过程中,大鼠表现出CEA内、外侧亚核神经元活动增强(lCEA的活动强于m CEA)、CEA中CRH神经元活动的增强以及HPA轴活动的增强等特点,且和单纯RS的应激效应存在显着不同。综合这些效应及相关研究结论来分析,其中m CEA神经元活动增强,可能引起胃运动兴奋,对应激过程中的胃粘膜是具有“损伤”意义的;而l CEA神经元的兴奋、CRH神经元的兴奋以及HPA轴的活动增强等,对于应激过程中的胃粘膜均是(或非常可能是)具有“保护”意义的。相关实验结果反映出CEA在应激调控中所扮演角色的复杂性。因此,虽然CEA神经元活动增强和应激性胃溃疡同时发生在RWIS大鼠,但轻言二者之间存在“因果”关系显然为时过早。CEA在应激性胃粘膜损伤中的作用以及RWIS致胃粘膜损伤的中枢机制均有待进一步研究。(本文来源于《山东师范大学》期刊2016-04-01）
李泽培,唐川康,史孝敏,彭燕[9]（2016）在《辣椒素对浸水-束缚应激大鼠胃动力作用及机制研究》一文中研究指出目的:研究辣椒素(CAP)对浸水束缚应激(模型)导致的大鼠胃动力障碍的作用及其机制。方法:选取雄性SPF级SD大鼠40只随机均分为对照组、模型组、模型组+CAP组和CAP组4组,每组10只。采用浸水束缚应激法建立胃动力障碍大鼠模型,胃管注入CAP 1 mg/g,连续4周。实验末测定大鼠胃酚红排空率,并取胃窦组织用RT-PCR方法检测c-kit m RNA、SCF m RNA的转录水平。结果:1胃酚红排空率:CAP组胃酚红排空率显着高于对照组和模型组(P<0.05),模型组+CAP组、对照组胃酚红排空率显着高于模型组(P<0.05);2c-kit m RNA、SCF m RNA的转录水平:模型组c-kit m RNA转录水平显着低于对照组,CAP组c-kit m RNA转录水平显着高于模型组(P<0.05);模型+CAP组、CAP组SCF m RNA转录水平显着高于对照组和模型组(P<0.05),对照组SCF m RNA转录水平显着高于模型组(P<0.05)。结论:小剂量CAP 4周可促进正常大鼠及模型大鼠胃动力,其机制可能与CAP调节SCF的表达有关,但与c-kit、Cajal间质细胞的相关性尚不明确。(本文来源于《泸州医学院学报》期刊2016年01期）
祝建平[10]（2015）在《束缚—浸水应激大鼠内侧前额叶皮质对胃机能的调控作用及机制的研究》一文中研究指出前额叶(Prefrontal cortex,PFC)又称额前皮质,为额叶初级运动皮质和次级运动皮质之前的全部额叶皮质,属最高级别的联合皮质。该结构在“系统发生中最晚出现,个体发育时最迟成熟”,是唯一与丘脑背内侧核有交互纤维联系的新皮质。大鼠PFC依据其形态学特征分为背外侧前额叶、眶额叶和内侧前额叶。其中,内侧前额叶(Medial prefrontal cortex,MPFC)主要包括背侧部和腹侧部,背侧部范围较小,与灵长类背外侧部同源,主要参与各种运动行为的调节(如眼球运动等);腹侧部占据MPFC大部分,与边缘系统间存在大量的纤维投射,参与情感、认知、内脏活动的调控,依其结构与功能可分为边缘前皮质(Prelimbic cortex,PL)和边缘下皮质(Infralimbic cortex,IL)两部分。其中,PL主要与认知(注意力调控、工作记忆等)、情感(条件性恐惧、焦虑等)及执行控制等功能相关,又称“认知-情感活动皮质”;IL主要与内脏自主神经功能活动相关,可发出纤维广泛投射到皮质下参与调控内脏自主神经功能活动的核团(如下丘脑、孤束核、迷走背核、疑核等),参与心血管、胃肠功能活动的调节等,故又称“内脏运动皮质”。另外PL和IL二者相互之间还存在密集的纤维投射。大鼠束缚-浸水应激(Restraint water-immersion stress,RWIS)为生理学、医学、心理学研究中常用的应激模型。RWIS是一种强度较大的复合应激,既包含生理性应激成分(如饥饿、制动、冷水等刺激因素),又有心理性应激成分(如大鼠因RWIS而产生的愤怒、恐惧、焦虑等情绪变化刺激因素)。两类应激成分共同作用可致严重的胃肠机能紊乱(如胃运动亢进、胃酸分泌增多等),甚至胃黏膜损伤。本实验室前期研究证实,RWIS所致胃肠机能紊乱的外周神经机制,主要是因为“副交感神经系统活动加强”所致。关于其中枢神经机制,经多年研究已知,初级中枢—延髓胃肠中枢、较高位中枢—下丘脑都参与了这一生理过程,但对于最高位中枢—大脑皮质的作用及其调节机制,目前尚未确定,鲜见文献报道。本实验室前期工作发现,大鼠RWIS不同时间段(0min、30 min、60 min、120 min、180 min),除延髓胃肠中枢和下丘脑神经元有强烈的Fos阳性表达外,大鼠MPFC(主要是PL和IL)内神经元的Fos蛋白的表达也显着增加,表明PL和IL参与了RWIS反应。那么PL和IL在RWIS所致胃粘膜损伤中是否参与对胃功能活动的调控?分别发挥何种作用?与非应激状态下相比,这种调控作用是否相同?其可能的调控机制是什么?PL和IL二者之间在功能上有无内在联系?目前均未见相关文献报道。本研究重点以RWIS大鼠为研究对象,同时将非应激大鼠作为参照,研究MPFC(PL和IL)与胃功能活动之间的调控关系及PL和IL二者之间的相互关系。本论文共设计了五部分实验:实验一:DA作为一种重要的神经递质,可与MPFC内的多种受体(如D1、D2受体)结合,广泛参与大鼠的情感、认知及自主功能的活动过程;L-Glu为常用的谷氨酸受体激动剂,MPFC内大部分神经元胞体膜上皆有其受体。本研究利用中枢微量给药技术,研究了向PL和IL微量注射DA和L-Glu,对比观察给药前后胃运动、胃酸分泌的变化。结果:1)向PL中段和后段微量注射DA(0.2 mol/L,200 n L),在注药后的叁个连续5 min内,大鼠胃运动的频率显着降低(P﹤0.05),同时伴随短时(5 min)的收缩波平均时程延长(P﹤0.05),但对胃运动其他指标,则几乎没有影响;对胃酸分泌也无影响。2)将DA注射到大鼠IL的前、中、后段,均未引起胃收缩活动及胃酸分泌的显着性变化(P﹥0.05)。3)向PL和IL内微量注射L-Glu,对大鼠的胃运动、胃酸分泌、呼吸频率及心率均未产生显着影响。小结:1)大鼠麻醉状态下,PL中段和后段神经元受DA调控,产生的综合信息下行对大鼠胃运动有一定的抑制作用,但对胃酸分泌无影响;IL内的DA敏感神经元不参与对胃功能活动的调控作用;2)大鼠麻醉状态下,PL和IL内L-Glu所兴奋的神经元与大鼠胃功能活动之间无功能上的联系。实验二:RWIS致胃肠机能紊乱的同时,可使MPFC内神经元的Fos蛋白表达增多,表明MPFC参与了RWIS反应,那么MPFC在RWIS所致的胃黏膜损伤中发挥何种作用?本研究以胃黏膜损伤指数为指标,以清醒大鼠为实验对象,比较观察单侧、双侧MPFC损毁大鼠与假手术大鼠,RWIS对其胃黏膜损伤程度的不同。结果:1)与假手术组相比,单侧、双侧损毁MPFC皆可有效降低由RWIS引起的胃黏膜损伤程度(P﹤0.01);2)双侧MPFC损毁降低胃黏膜损伤的效果优于单侧损毁(P﹤0.05)。小结:大鼠MPFC在RWIS所致胃黏膜损伤中,对胃功能活动具有重要的调节作用。实验叁:结合实验一和实验二结果,为进一步探究大鼠在RWIS过程中,MPFC的两个部分—PL和IL,各自对胃功能活动(胃运动及胃酸分泌)的调控作用,本研究以清醒大鼠为实验对象,将大鼠分为假手术组、双侧PL损毁组、双侧IL损毁组、双侧PL和IL同时损毁组。比较观察四组大鼠在清醒非应激状态下和清醒RWIS 4 h过程中的胃运动(重点关注胃运动的平均幅度、胃运动指数及收缩分数)、胃酸分泌变化情况。结果:1)大鼠处于清醒非应激状态下,实验组大鼠胃运动的平均幅度、胃运动指数及收缩分数较假手术组均有明显增加,增加程度:双侧PL和IL同时损毁组>双侧IL损毁组>双侧PL损毁组;2)当大鼠处于RWIS 4 h过程中,假手术组大鼠的胃运动表现出了显着的亢进:各项统计指标与自身应激前相比均存在显着性差异(P﹤0.05或P﹤0.01)。双侧PL损毁组大鼠的胃运动平均幅度、胃运动指数在整个应激过程中,与自身应激前相比,并无显着性变化。双侧IL损毁组大鼠和双侧PL和IL同时损毁组大鼠的胃运动平均幅度、胃运动指数及收缩分数则皆受到了显着的抑制(P﹤0.05或P﹤0.01)。该结果与实验二的结果前后呼应,提示PL和IL的损毁对RWIS所致的胃运动亢进有抑制作用,抑制程度:双侧PL和IL同时损毁组>双侧IL损毁组>双侧PL损毁组;3)大鼠在RWIS 4 h过程中,与假手术组相比,双侧PL和IL同时损毁组大鼠的胃液分泌量及H+分泌量均显着增多(P﹤0.05)、同时碳酸氢盐含量显着下降(P﹤0.05)。小结:1)大鼠在清醒非应激状态下,MPFC的传出信息对胃运动起抑制作用,且IL的抑制效果强于PL,二者联合作用效果更强;2)大鼠在清醒RWIS应激过程中,MPFC的传出信息对胃运动起促进作用,且IL的促进效果强于PL,二者联合作用效果最强;同时MPFC的传出信息对胃酸分泌也有一定影响。实验四:结合实验叁结果,为进一步探明PL和IL内不同类型的神经元在大鼠清醒RWIS过程中分别所扮演的角色,以及PL和IL二者之间神经元活动的相互关系,本研究利用在体多通道神经信号采集技术,同时监测两种不同模态的神经信号—锋电位(Spike)和局部场电位(Local field potentials,LFPs),进而研究大鼠在清醒非应激状态下和清醒RWIS过程中PL和IL内锥体神经元、中间神经元Spike电活动规律及LFPs活动规律。结果:1)大鼠在清醒非应激状态下,PL内的锥体神经元爆发式放电率显着高于IL(P﹤0.05),而IL内中间神经元的爆发式放电率则显着高于PL(P﹤0.05);2)大鼠在RWIS 4 h过程中,PL内的绝大部分锥体神经元和所有的中间神经元皆表现出了抑制效应(P﹤0.05或P﹤0.01),且随应激时间延长,其放电率、爆发式放电率及爆发式放电百分比均显着下降(P﹤0.05或P﹤0.01)。同时,RWIS导致PL内LFPs中的低频段分量信号(0.5-3 Hz,3-7 Hz)显着增多而中高频段分量信号(7-12 Hz,12-30 Hz,30-100 Hz)显着减少(P﹤0.05或P﹤0.01),且LFPs的功率谱密度分析及时域分析结果均与该结果的变化趋势相一致。提示大鼠在RWIS过程中,整个PL表现出了兴奋程度降低的趋势。3)大鼠在RWIS 4 h过程中,IL内所有的中间神经元和少部分锥体神经元表现出了抑制效应(P﹤0.05或P﹤0.01)。其余大部分锥体神经元皆因RWIS表现出了兴奋效应,但兴奋仅在应激第1 h、第2 h较明显,与应激前相比有显着性差异(P﹤0.05或P﹤0.01)。同时,与PL的LFPs活动规律相反,RWIS导致IL内LFPs中的低频段分量信号(0.5-3 Hz,3-7 Hz)显着减少而高频段分量信号(12-30 Hz,30-100 Hz)显着增多(P﹤0.05或P﹤0.01),且LFPs的功率谱密度分析及时域分析结果均与该结果的变化趋势相一致。提示大鼠在RWIS过程中,整个IL表现出了兴奋程度升高的趋势。小结:1)大鼠在清醒非应激状态下,PL内锥体神经元的兴奋程度相对较高,使得整个PL表现出了相对兴奋状态;而IL内中间神经元的兴奋程度相对较高,且多数可能是抑制性神经元,所以使得整个IL表现出了相对抑制状态;2)RWIS可对大鼠PL内的锥体神经元产生抑制作用,而对IL内的锥体神经元产生兴奋作用。3)大鼠无论在清醒非应激状态下,还是在RWIS过程中,其PL和IL内的神经元活动规律均不同,并表现出了相对立的活动状态。实验五:考虑到PL和IL在认知、情感及执行控制中的重要作用,结合RWIS中的心理性应激因素与MPFC的关系,本研究设计了旷场实验,观察损毁MPFC后大鼠的情绪、情感及认知能力的变化。结果:与假手术组相比,损毁MPFC可导致大鼠的焦虑情绪和条件性恐惧情绪加重,对外界刺激更敏感,更胆小怯懦;同时伴随认知能力的下降。小结:MPFC在大鼠情绪、情感的表达中主要执行抑制功能。(本文来源于《山东师范大学》期刊2015-11-30）
束缚浸水应激论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
束缚-浸水应激模型(Restraint Water-Immersion Stress,RWIS)是一种快速对大鼠心理和生理造成伤害的刺激模型。在这种应激模型中,大鼠在短时间内因受到刺激,体温下降,胃肠功能紊乱,导致胃酸分泌增加和急性胃黏膜损伤。肠神经系统是位于胃肠道壁中的神经元、神经递质和肠细胞组成的网络,控制和调节胃肠道中的平滑肌,黏膜上皮和血管效应系统,它的调节具有高度的自主性,因此也被称为“肠脑”。经本实验室的早期研究发现,大鼠在一定的应激时间段内,随着束缚-浸水的时间增长,下丘脑的室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)、视上核(supraoptic nucleus,SON)、孤束核(Solitary Nucleus,NTS)、迷走神经背核(dorsal motor nucleus of the vagus,DMV)和肠道肌间神经丛中Fos和GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)的表达水平显着升高,我们推测束缚-浸水应激造成胃黏膜损伤不只是涉及到脑干内神经元的过度活动这种初级中枢机制~([75]),所以我们提出了“下丘脑-脑干-肠脑轴”环路参与了对应激的调控。而促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-Releasing Factor,CRF)作为下丘脑的室旁核、视上核释放的非常重要的激素之一,已研究表明其参与了多种应激(热刺激、冷刺激、感染和毒物刺激)反应,但促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)及其受体是否参与了束缚-浸水应激尚未见报道。因此,我们提出以下几个问题:1.CRF及其受体是否介导和参与了RWIS过程,并在RWIS中各时间段有何变化?2.侧脑室注射CRF受体阻断剂Astressin和CRF后,对孤束核及肠道内的神经元和胶质细胞有何影响?3.CRF若参与束缚-浸水的过程,是通过哪条信号路径起作用?为了解决上述问题,我们实验设计如下:实验研究一:大鼠随机分为对照组(RWIS 0h)和应激组(RWIS 1h,RWIS 2h,RWIS3h)后,采用免疫组化和免疫印迹法检测大鼠CRF及其受体表达的影响,以探讨CRF及其受体是否参与了RWIS过程。实验研究二:将大鼠分为对照组(侧脑室注射生理盐水)、CRF组(侧脑室注射CRF)和Astressin组(侧脑室注射CRF-R抑制剂Astressin),大鼠束缚-浸水应激1h后,免疫组化和免疫印迹法检测NTS、DMV以及肠神经系统中Fos、GFAP、p-ERK1/2、NOS表达,探讨CRF在束缚浸水过程中的作用?实验研究叁:将大鼠分为对照组(侧脑室注射生理盐水)、CRF组(侧脑室注射CRF)和PD98059+CRF组(侧脑室注射p-ERK1/2特异性抑制剂PD98059和CRF),大鼠束缚-浸水应激1h后,免疫组化和免疫印迹法检测NTS和DMV内Fos和星形胶质细胞的标记物GFAP表达的变化,探究CRF参与束缚-浸水的信号途径?实验研究四:将大鼠分为对照组(侧脑室注射生理盐水)、CRF组和Astressin组,大鼠束缚-浸水应激1h后,免疫组化和免疫印迹法检测肠神经系统中的Claudin-1、Occludin和胃黏膜中的MUC5AC表达变化,探究CRF对胃肠道功能的影响?实验结果:1.与对照组相比,实验组大鼠脑干迷走复合体内CRF-R1与肠神经系统内CRF的表达明显增加,且呈时间依赖性,在3h达到了最高。而与对照组相比,实验组大鼠迷走复合体内CRF-R2的表达明显降低,且呈时间依赖性,在3h达到了最低。表明肠神经系统内CRF及脑干(NTS、DMV)内CRF-R1被激活,参与了RWIS过程。2.与侧脑室注射生理盐水对照组相比,侧脑室注射CRF-R抑制剂Astressin,束缚-浸水应激1h后,实验组NTS、DMV以及肠神经系统中的Fos表达、星形胶质细胞GFAP、p-ERK1/2、NOS表达都显着降低。而侧脑室注射CRF,束缚-浸水应激1h后,实验组NTS、DMV以及肠神经系统中的Fos表达、星形胶质细胞GFAP、p-ERK1/2、NOS表达都显着升高,表明促肾上腺激素释放激素可能激活了脑干和肠神经系统内一氧化氮能神经元参与了在束缚-浸水应激过程。3.与侧脑室注射CRF对照组相比,侧脑室注射p-ERK1/2特异性抑制剂PD98059和CRF后,实验组NTS、DMV以及肠神经系统中的Fos和星形胶质细胞的标记物GFAP表达明显下降,表明CRF可能通过ERK1/2信号通路参与束缚-浸水过程。4.与侧脑室注射生理盐水对照组相比,侧脑室注射CRF组肠神经系统中的Claudin-1、Occludin和胃黏膜中的MUC5AC表达显着降低。表明束缚-浸水对大鼠造成胃机能的损伤和机体内部发生了紊乱,而CRF在这个过程中可能加速了炎症反应和胃溃疡,而且这个过程主要是通过ERK1/2信号通路进行调控的。实验结论如下:1、脑干内的CRF受体CRF-R和结肠内的CRF都参与了束缚浸水应激的过程。2、CRF主要是通过ERK1/2信号通路对束缚浸水后造成的胃肠机能紊乱进行调控的。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
束缚浸水应激论文参考文献
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[4].王天霞.“下丘脑—脑干—肠脑轴”中催产素在大鼠束缚—浸水应激中的作用[D].山东师范大学.2019
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