导读:本文包含了激光显微分离论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:黄梁木,不定根原基,激光显微切割,石蜡切片
激光显微分离论文文献综述
董甜甜,王雪,刘思雯,张立定,龙健梅[1]（2019）在《激光显微切割分离黄梁木不定根原基的技术体系建立》一文中研究指出为挖掘黄梁木不定根原基发生的关键基因,获取特异性高的根原基起始细胞群是分析根原基表达图谱的重要前提。激光显微切割是目前获取特异细胞群的一种常用手段。本研究通过分析石蜡切片过程中固定剂、脱水时间、渗透剂、切片厚度、粘片试剂和烘片温度等对RNA质量的影响,以及对激光显微切割参数的调试,建立了采用激光显微切割技术分离黄粱木不定根原基细胞的体系,获得的RNA可以满足后续RNA-seq文库构建的要求,为揭示黄粱木不定根原基发生的分子机制奠定了关键基础。(本文来源于《植物生理学报》期刊2019年05期）
贾慧慧[2]（2016）在《利用激光显微切割系统精细分离柑橘珠心胚起始细胞技术体系的构建》一文中研究指出大多数柑橘的单粒种子中合子胚与珠心胚共存,称为柑橘种子特有的多胚现象。多胚性遗传稳定,是繁殖整齐一致的砧木的前提,也是柑橘常规杂交育种的主要障碍。已有研究表明,柑橘的珠心胚起始于胚囊周围的珠心细胞。然而,由于取材限制,大部分研究以均质胚珠作为研究对象。并没有考虑到不同细胞类型的特异性问题,对珠心胚起始发生机制认识还相当有限。激光显微切割(Laser Microdissection,LMD)是一种精确取样技术,在显微镜下精确定位目标组织和细胞,利用激光束从组织切片中快速切割、收集目标组织或细胞用于大分子物质的提取。该技术简便、易行准确度高,已成功的运用于动植物研究,使得分离出珠心胚起始细胞成为可能。因此,利用该技术从特定细胞提取高质量RNA成为研究柑橘多胚形成分子机理的关键。本研究利用石蜡切片对‘伏令夏’橙(Citrus sinensis?Valencia‘)果实切片,观察种子中珠心胚起始发生过程,确定珠心胚起始的关键时期;对比不同切片方法、不同多胚材料珠心胚起始细胞形态、数量确定了显微切割配套切片方法及最佳材料;摸索显微切割参数、切割量、RNA提取及检测方法;成功切割收集‘华柑2号’椪柑的珠心胚起始细胞及其周围珠心组织细胞,并提取高质量的RNA,构建了激光显微切割珠心胚起始细胞体系。主要研究结果如下:1、对‘伏令夏’橙各时期的果实进行石蜡切片,观察了珠心胚起始发生全过程。7 DAF胚珠靠近合点端的胚囊外出现核大质浓的珠心胚起始细胞。21 DAF珠心胚起始细胞大量发生,细胞变大,分布相对集中且由合点端向珠孔端靠近。直到35 DAF珠心胚起始细胞开始分裂,并慢慢进入胚囊。之后进入珠心胚的快速发育时期,63DAF进入球形胚时期,胚发育程度表现不同步。最后发育成心形胚、子叶形胚。2、通过观察‘伏令夏’橙、‘华柑2号’椪柑(Citrus reticulata Blanco,PK)、‘鸡尾’葡萄柚(Citrus paradisi Osbeck.?cocktail‘,GF)、红橘(Citrus sunki Hort.)、‘国庆1号’温州蜜柑(Citrus unshiu Marc.)5个柑橘多胚材料10 DAF果实石蜡切片,发现在不染色情况下,‘华柑2号’椪柑每个胚珠中的珠心胚起始细胞数最多,且形态明显区分于周围细胞,是激光显微切割的最佳材料。3、以‘华柑2号’10 DAF果实为材料,卡诺固定液(无水乙醇:乙酸=3:1)固定12 h,后脱水至100%乙醇保存于4℃冰箱。低熔点石蜡paraplast Plus chips(Leica Microsystems)包埋,切片厚度8μm。切片在脱蜡后不经染色便用Leica AS LMD激光显微切割系统切割。在40×物镜下,经过优化的激光参数为:Aperture(孔径)7,power(能量)13,Speed(速度)8,Head Current(发射强度)98%,Pulse Frequency(脉冲频率)1300。收集细胞约10mm2。用RNA提取试剂盒Arcturus PicoPure RNA isolation kit(Life Technologies)抽提总RNA。Agilent 2100 Bioanalyzer检测RNA质量,获得rRNA Ratio[28 S/18 S]:0.5;RNA Integrity Number[RIN]:4.5,可用于构建cDNA文库。(本文来源于《华中农业大学》期刊2016-06-01）
杨帆,黄江平,丰蕾,赵禾苗,徐程[3]（2014）在《FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验》一文中研究指出目的建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法。方法收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEPX SpectrumOrangeTMY SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增。结果荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞。捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%。随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低。30个精子检出率最高,为95%。结论激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验。(本文来源于《刑事技术》期刊2014年06期）
杨帆,曾宪海,丰蕾,徐程,赵禾苗[4]（2014）在《激光捕获显微分离技术分离多人混合精斑》一文中研究指出目的利用激光捕获显微分离技术(LCM)分离多供体混合精斑。方法将3名自愿者供给的精液混合后,制备成混合精斑,并涂于覆膜玻片上。用PALM激光捕获显微分离系统切割并捕获样本中的单个精子,利用低体积扩增技术(LV-PCR)扩增并进行检测,并对分型结果进行统计。结果联用LCM和低体积扩增技术捕获样本中单个精子细胞进行扩增,可获得每位自愿者的Y-STR分型,分型成功率为73.15%。结论激光捕获显微分离联用低体积扩增技术可完成多供体混合精斑的分离检验。(本文来源于《中国法医学杂志》期刊2014年04期）
党平,聂敏媛,董亮,崔叁哲,汤楚华[5]（2013）在《不同RNA抽提方法对激光显微切割分离小鼠牙胚样品总RNA浓度及完整度影响的研究》一文中研究指出目的观察不同RNA抽提方法对激光显微切割(laser microdissection,LMD)分离牙胚样品总RNA浓度及完整度影响。方法本实验按照RNA抽提的不同方式分为试剂盒组、经典Trizol法组以及改良Trizol法组。以LMD技术获取胚胎17d(embryonic 17,E17)和出生后2 d(postnatal 2,PN2)两时期CD1小鼠下颌第一磨牙的牙胚组织;以3种不同方法提取各组总RNA后再以安捷伦公司的2100生物分析仪所提供的核糖体RNA 28 S/18 S比值(28 S/18 S ratio)、RNA完整度数值(RNA in-tegrity number,RIN),以及样品电泳图的图形来综合判断样品完整度。比较各组RNA的浓度和完整度,以SPSS软件进行统计分析。结果改良Trizol法所获得RNA浓度最高,与其余2组相比,差异均有显着性;经典Trizol法组RNA浓度略高于试剂盒组,但差异并无显着性;3组间以RIN值、28 S/18 S以及样品电泳图的图形为完整度指标进行比较,均无显着性差异。结论3种RNA抽提方式对样品总RNA获得率和完整度的影响,以改良Trizol法提取的总RNA获得率最高,而3种方法对所提取总RNA完整度影响无统计学差异。改良Trizol法将有利于获得符合高通量实验质检标准的芯片实验样本。(本文来源于《口腔医学》期刊2013年07期）
王英旗,姚阳,陈彬丽,张淑静,李芳[6]（2013）在《不同的固定方法对激光显微切割分离油松胚珠雌配子体的影响》一文中研究指出为了精确分离油松胚珠雌配子体,获得单一种类的细胞,进一步研究油松胚珠发育分子调控的时空特异性,本文利用激光显微切割技术(LCM)对2年生油松胚珠雌配子体进行了微切割;比较了冷丙酮(4℃)、卡诺固定液、FAA固定液固定及冻藏处理4种不同方法对冰冻切片的影响。结果表明,冻藏处理结合冰冻切片可以保证雌配子体的完整性,采用该方法获得了不同时期油松胚珠雌配子体,为后续油松胚珠雌配子体发育相关分子机制的研究提供了实验材料。(本文来源于《植物生理学报》期刊2013年02期）
吴微微,苏艳佳,郝宏蕾,任文彦[7]（2011）在《激光捕获显微分离技术在DNA检验中的应用研究》一文中研究指出目的建立一套显微细胞捕获技术用于法医学生物检材DNA检验方法。方法使用VeritasTM LCM激光捕获仪,采用紫外加红外的捕获方式,对框架覆膜玻片上经苏木素染色口腔上皮细胞进行捕获,采用改良硅珠法提取细胞DNA,使用Identifiler TM试剂盒在5μL体系中进行PCR扩增。结果成功获得20个口腔上皮细胞的13个以上完整STR基因座分型谱带。结论本研究建立的方法适合法医学生物检材制成的染色涂片上细胞的DNA检验。(本文来源于《刑事技术》期刊2011年06期）
谢宗义,陈维福,陈松,程远[8]（2011）在《激光捕获显微切割分离脑微血管及其蛋白质组学体系的建立》一文中研究指出目的:探讨应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术分离脑微血管及双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)研究微血管蛋白质的方法及可行性。方法:将新鲜大鼠脑皮质常规制备冰冻切片,采用快速免疫组织化学染色,应用LCM技术分离脑微血管,提取微血管蛋白质,建立双向凝胶电泳图谱。结果:通过LCM技术可以准确、快速地分离微血管。通过优化2-DE各参数,2-DE能充分分离微血管蛋白质,并获得了分辨率和重复性较好的2-DE图谱。结论:LCM技术可以成功解决组织异质性问题,获取纯度较高的脑微血管,2-DE技术能应用于微血管蛋白质组研究。这些结果表明2-DE联合免疫染色法-LCM技术运用于脑微血管蛋白质组学研究的可行性。(本文来源于《激光杂志》期刊2011年04期）
杨淑华,高青,李春晓,王超,张静[9]（2011）在《应用神经逆行示踪及激光显微切割技术精确分离mesostriatal亚群神经元》一文中研究指出目的中脑内向纹状体投射的mesostriatal多巴胺能细胞亚群是导致帕金森病的关键神经元,本实验拟寻找该亚群投射神经元的分布及有效分离方法。方法利用立体定位技术将绿色荧光逆行示踪剂注射到新生鼠纹状体内,24h后灌注取脑做冰冻切片;应用免疫荧光组织化学染色方法行酪氨酸羟化酶(TH)染色,采用激光显微切割技术将荧光示踪剂标记且呈TH染色阳性的神经元精确切割并收集。结果荧光示踪的神经元呈TH阳性者即属于mesostriatal亚群神经元,主要分布于中脑黑质,应用激光显微切割技术可精确分离这些逆行示踪且TH染色阳性的神经元。结论应用逆行荧光示踪和激光显微切割技术可精确分离mesostriatal亚群神经元。(本文来源于《山东大学学报(医学版)》期刊2011年05期）
刘芳,王静,俞丽娟,郭剑章,高俊薇[10]（2011）在《激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞》一文中研究指出目的评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值。方法配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液,分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测。结果 LCM法分离精子细胞的STR成功率为92.86%(13/14),采用差异裂解法检测的成功率为7.14%(1/14),二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LCM法可有效排除女性细胞成分的干扰,并捕获少量精子细胞得到单一的男性STR分型,显着优于差异裂解法。(本文来源于《法医学杂志》期刊2011年01期）
激光显微分离论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
大多数柑橘的单粒种子中合子胚与珠心胚共存,称为柑橘种子特有的多胚现象。多胚性遗传稳定,是繁殖整齐一致的砧木的前提,也是柑橘常规杂交育种的主要障碍。已有研究表明,柑橘的珠心胚起始于胚囊周围的珠心细胞。然而,由于取材限制,大部分研究以均质胚珠作为研究对象。并没有考虑到不同细胞类型的特异性问题,对珠心胚起始发生机制认识还相当有限。激光显微切割(Laser Microdissection,LMD)是一种精确取样技术,在显微镜下精确定位目标组织和细胞,利用激光束从组织切片中快速切割、收集目标组织或细胞用于大分子物质的提取。该技术简便、易行准确度高,已成功的运用于动植物研究,使得分离出珠心胚起始细胞成为可能。因此,利用该技术从特定细胞提取高质量RNA成为研究柑橘多胚形成分子机理的关键。本研究利用石蜡切片对‘伏令夏’橙(Citrus sinensis?Valencia‘)果实切片,观察种子中珠心胚起始发生过程,确定珠心胚起始的关键时期;对比不同切片方法、不同多胚材料珠心胚起始细胞形态、数量确定了显微切割配套切片方法及最佳材料;摸索显微切割参数、切割量、RNA提取及检测方法;成功切割收集‘华柑2号’椪柑的珠心胚起始细胞及其周围珠心组织细胞,并提取高质量的RNA,构建了激光显微切割珠心胚起始细胞体系。主要研究结果如下:1、对‘伏令夏’橙各时期的果实进行石蜡切片,观察了珠心胚起始发生全过程。7 DAF胚珠靠近合点端的胚囊外出现核大质浓的珠心胚起始细胞。21 DAF珠心胚起始细胞大量发生,细胞变大,分布相对集中且由合点端向珠孔端靠近。直到35 DAF珠心胚起始细胞开始分裂,并慢慢进入胚囊。之后进入珠心胚的快速发育时期,63DAF进入球形胚时期,胚发育程度表现不同步。最后发育成心形胚、子叶形胚。2、通过观察‘伏令夏’橙、‘华柑2号’椪柑(Citrus reticulata Blanco,PK)、‘鸡尾’葡萄柚(Citrus paradisi Osbeck.?cocktail‘,GF)、红橘(Citrus sunki Hort.)、‘国庆1号’温州蜜柑(Citrus unshiu Marc.)5个柑橘多胚材料10 DAF果实石蜡切片,发现在不染色情况下,‘华柑2号’椪柑每个胚珠中的珠心胚起始细胞数最多,且形态明显区分于周围细胞,是激光显微切割的最佳材料。3、以‘华柑2号’10 DAF果实为材料,卡诺固定液(无水乙醇:乙酸=3:1)固定12 h,后脱水至100%乙醇保存于4℃冰箱。低熔点石蜡paraplast Plus chips(Leica Microsystems)包埋,切片厚度8μm。切片在脱蜡后不经染色便用Leica AS LMD激光显微切割系统切割。在40×物镜下,经过优化的激光参数为:Aperture(孔径)7,power(能量)13,Speed(速度)8,Head Current(发射强度)98%,Pulse Frequency(脉冲频率)1300。收集细胞约10mm2。用RNA提取试剂盒Arcturus PicoPure RNA isolation kit(Life Technologies)抽提总RNA。Agilent 2100 Bioanalyzer检测RNA质量,获得rRNA Ratio[28 S/18 S]:0.5;RNA Integrity Number[RIN]:4.5,可用于构建cDNA文库。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
激光显微分离论文参考文献
[1].董甜甜,王雪,刘思雯,张立定,龙健梅.激光显微切割分离黄梁木不定根原基的技术体系建立[J].植物生理学报.2019
[2].贾慧慧.利用激光显微切割系统精细分离柑橘珠心胚起始细胞技术体系的构建[D].华中农业大学.2016
[3].杨帆,黄江平,丰蕾,赵禾苗,徐程.FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验[J].刑事技术.2014
[4].杨帆,曾宪海,丰蕾,徐程,赵禾苗.激光捕获显微分离技术分离多人混合精斑[J].中国法医学杂志.2014
[5].党平,聂敏媛,董亮,崔叁哲,汤楚华.不同RNA抽提方法对激光显微切割分离小鼠牙胚样品总RNA浓度及完整度影响的研究[J].口腔医学.2013
[6].王英旗,姚阳,陈彬丽,张淑静,李芳.不同的固定方法对激光显微切割分离油松胚珠雌配子体的影响[J].植物生理学报.2013
[7].吴微微,苏艳佳,郝宏蕾,任文彦.激光捕获显微分离技术在DNA检验中的应用研究[J].刑事技术.2011
[8].谢宗义,陈维福,陈松,程远.激光捕获显微切割分离脑微血管及其蛋白质组学体系的建立[J].激光杂志.2011
[9].杨淑华,高青,李春晓,王超,张静.应用神经逆行示踪及激光显微切割技术精确分离mesostriatal亚群神经元[J].山东大学学报(医学版).2011
[10].刘芳,王静,俞丽娟,郭剑章,高俊薇.激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞[J].法医学杂志.2011