导读:本文包含了重组重组子论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:铜绿假单胞菌,全基因组文库,抗原筛选,PscF
重组重组子论文文献综述
许婉婷[1]（2019）在《铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究》一文中研究指出目的旨在克服现有抗原筛选方法的不足,构建我国铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)临床分离株XN-1的全基因组文库,从中筛选PA疫苗的候选抗原,为防控PA感染打下基础。方法1.全基因组文库的构建:提取PA XN-1全基因组DNA,内切酶Sau3A I酶切DNA,内切酶BamH I酶切的载体pMal-c5x。通过连接酶将其与随机基因组片段连接,构建随机重组子质粒。转化随机重组子至大肠杆菌感受态细胞X-Blue中。挑选出随机重组子克隆,通过PCR反应和酶切鉴定等方法,对随机重组子进行初步鉴定,评价插入基因组片段的特点。IPTG诱导溶菌酶上清液的阳性重组子的MBP融合蛋白表达,SDS-PAGE检测其表达情况,从而构建PA XN-1全基因组文库。2.PA候选抗原的筛选及保护效果评价:为了进一步从随机重组子文库中筛选到PA疫苗候选抗原,本研究制备了抗MBP多克隆抗体,将其包被于ELISA板上,以捕获随机重组子表达的MBP融合蛋白。以PA感染患者恢复期血清作为一抗,检测随机重组子携带的未知抗原的反应性。测定强反应性抗原的编码序列,通过BLAST序列比对,获得强反应性抗原的基因信息。通过基因工程手段在大肠杆菌中制备候选抗原免疫Balb/c小鼠。ELISA方法检测抗原特异性IgG抗体效价。气管插管攻毒致死剂量PA XN-1,并统计小鼠生存率。综合评价候选抗原的免疫反应性、免疫原性和免疫保护效果,筛选出新的铜绿假单胞菌疫苗候选抗原。结果1.提取PA XN-1的全基因组,经过Sau3A I酶切处理后,DNA条带弥散分布在100-1000bp之间。这些基因组片段与pMal-c5x载体连接,获得随机重组子克隆若干。随机挑选3个重组子克隆,酶切鉴定发现其中2个有基因组片段的插入;PCR方法检测插入片段大小,发现其插入片段位于100-1000bp之间,具有良好的随机性;IPTG诱导随机重组子表达,SDS-PAGE检测重组子蛋白表达情况,发现随机挑选的6个重组子中,有4个成功表达出MBP融合蛋白。这些结果表明,构建PA全基因组文库成功,可用于下一步强反应性抗原的筛选。2.通过13轮试验,筛选获得随机重组子2392个,得到反应性重组子115个,其中,有13个强反应性抗原(相对于PcrV反应强度大于10%的抗原)。这13个抗原分别为:PpiA、PtsP、OprP、CAZ10_34235、HmuU_2、PcaK、CarAd、RecG、YjiR_5、LigD、KinB、RtcA、PscF。3.通过MBP亲和层析法,成功制备了这13个带有MBP标签的强反应性抗原。动物实验发现以上13个抗原免疫,可分别诱导小鼠产生抗原特异性IgG抗体,其效价与MBP诱导的抗体效价有显着统计学差异(P<0.05)。同时,动物攻毒保护实验发现,候选抗原保护率最高的前五名抗原分别是:PscF、LigD、RecG、OprP和PtsP。其中,抗原PscF的保护率最高达95%,抗原LigD和RecG的保护率达80%,抗原OprP和PtsP的保护率达65%。以上结果提示,抗原PscF的免疫保护效果最优。结论本研究成功建立了我国铜绿假单胞菌临床菌株XN-1的全基因组文库,并从中筛选到13个强反应性抗原。进一步通过动物实验证实,强反应性抗原PscF在小鼠上具有良好的免疫原性,且攻毒保护率为95%,提示其是良好的PA候选抗原。这些结果为下一步成功研制PA新型疫苗提供了新的实验依据,对PA感染的防控具有积极的意义。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
许婉婷,顾江,万闯,程新,杨峰[2]（2018）在《铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究》一文中研究指出目的构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)XN-1的全基因组文库,筛选铜绿假单胞菌新的疫苗候选抗原。方法提取我国分离的临床PA XN-1菌株全基因组,Sau3AⅠ酶切成随机片段后经连接至Bam HⅠ酶切后的pMal-c5x载体,转化至X-blue获得随机重组子。随机重组子经IPTG诱导后使用溶菌酶裂解,收集含有融合的麦芽糖结合蛋白(MBP)的随机重组子的裂解上清,制成含有PA全基因组的蛋白随机文库。通过ELISA方法分别检测单个随机文库蛋白的免疫反应性。将经典的PA强反应抗原PcrV做为参照,分别计算单个随机抗原的相对反应强度并进行比较。提取反应较强的重组子的质粒,测定DNA序列后进行翻译和比对,得到整个强反应性抗原的氨基酸信息。结果成功构建PA XN-1的全基因组文库,筛选到强反应性抗原13个,其中4个抗原的反应强度超过PcrV,分别为Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase D、Phosphoenolpyruvate-protein phosphotransferase(PtsP)、Phosphate-starvation-inducible E和Very short patch repair endonuclease。结论基于高效表达系统的PA全基因组文库构建成功,可用于PA及其它病原的疫苗候选抗原的筛选研究。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2018年12期）
郭晋宏,黄荣师,张瑶尧,潘剑,陈承晓[3]（2018）在《肝癌相关抗原SMP30慢病毒重组子的构建及其对DC成熟作用的观察》一文中研究指出目的构建小鼠肝癌相关抗原SMP30基因的慢病毒重组子,经体外转染小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)后,检测SMP30慢病毒重组子对DC成熟的影响。方法运用基因重组技术,将小鼠SMP30基因连接到带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒表达载体Lentivirus中,将上述重组子感染小鼠DC并用荧光显微镜观察感染效果。用流式细胞仪检测感染前后的DC表面分子的差异,判断SMP30慢病毒重组子对DC成熟的影响。结果将该重组子转染DC后,在荧光倒置显微镜下可观察到被转染的DC有绿色荧光蛋白(GFP)高表达,SMP30慢病毒重组子滴度为4×108TU/mL。流式细胞仪检测表明转染后DC表面CD80的表达高于感染前对照组(P<0.05),DC表面CD123表达高于CD11c(P<0.05)。结论成功构建了表达小鼠SMP30的慢病毒重组子,并有效转染小鼠DC使其稳定表达SMP30基因,实验用到的DC主要是DC123型的DC,DC转染SMP30慢病毒重组子后表面CD80表达升高,表明SMP30慢病毒重组子能促进DC的成熟。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2018年38期）
李新鸣,孙冶,肖纯凌[4]（2017）在《表达人源SOD的毕赤酵母重组子的构建》一文中研究指出目的研究在毕赤酵母重组子中高表达有活性人源超氧化物歧化酶(SOD)方法。方法在毕赤酵母构建表达重组人源SOD,对培养时间、培养基中铜离子浓度和甲醇诱导条件进行优化,并初步纯化SOD。结果获得了5个稳定表达人源SOD的毕赤酵母重组子。色谱层析方法分离纯化重组子培养上清中的SOD。在培养48 h,培养基中铜离子浓度0.5%、甲醇诱导浓度1%时上清中SOD分泌量多,同时活力最好。结论建立毕赤酵母表达可溶性人源SOD的有效方法,实现了在毕赤酵母系统高效表达有活性人源SOD。为发酵生产人源SOD提供了研究基础。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2017年12期）
王志伟,杨国锋[5]（2016）在《重组子是什么——对2016年课标理综卷(丙卷)第40题中术语的辨析》一文中研究指出1试题与答案2016年课标理综卷(丙卷)第40题摘选:图1中的3个DNA片段上依次表示出了Eco RⅠ,BamHⅠ和Sau3AⅠ3种限制性内切酶的识别序列与切割位点,图2为某种表达载体示意图(载体上的EcoRⅠ和Sau3AⅠ的切点是唯一的)。根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(2)若某人利用图2所示的表达载体获得了甲、乙、丙3种含有目的基因的重组子,如图3所示。这3种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的(本文来源于《中学生物教学》期刊2016年23期）
吕新,陈丽华,李玥仁[6]（2016）在《一种利用碱裂解法快速筛选重组子的方法》一文中研究指出根据碱裂解法提取质粒DNA的原理,利用碱裂解法快速筛选到重组子,该方法快迅、准确,可应用于基因克隆中的重组菌落快迅检测。(本文来源于《福建农业科技》期刊2016年05期）
王庆华,梁兰,陈晶晶,巩婷,侯琦[7]（2015）在《毕赤酵母Mut~s与Mut~+重组子表达蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1水平比较》一文中研究指出蝎毒镇痛活性肽Bm K Ang M1是从东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)蝎毒中分离得到的一种新型长链蝎毒素,其镇痛活性强且毒性低,有望开发成镇痛新药。本文将Bm K Ang M1基因转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,筛选得到甲醇利用缓慢型(Muts)和快速型(Mut+)的重组子;采用实时荧光定量PCR方法,检测了Mut+重组子中Bm K Ang M1基因的拷贝数,筛选出含单拷贝Bm K Ang M1基因的Mut+重组子;在相同培养条件下,比较了含单拷贝Bm K Ang M1基因的Muts和Mut+重组子表达Bm K Ang M1的水平。结果表明,Muts重组子中Bm K Ang M1基因转录水平是Mut+重组子的2.7倍,Muts重组子中Bm K Ang M1蛋白表达量是Mut+重组子的1.5倍。因此,Muts重组子比Mut+重组子具有更强的Bm K Ang M1表达能力。(本文来源于《药学学报》期刊2015年07期）
翟永贞,常彩芳,冯国和[8]（2014）在《乙型脑炎病毒非结构4A蛋白编码基因重组子的构建及表达》一文中研究指出目的构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)非结构4A(NS4A)蛋白编码基因重组子并鉴定。方法以JEV SA14-14-2株Total RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增JEV NS4A蛋白编码基因,克隆至pMD19-T Simple载体并测序。为便于分析JEV NS4A蛋白编码基因重组子在哺乳动物细胞中的表达,在JEV NS4A蛋白编码基因5'端附加FLAG序列,亚克隆至pcDNA3.1(+)载体中,构建重组子pJNS4A并作酶切及DNA测序分析;采用脂质体法将pJNS4A转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞,采用免疫荧光法检测转染的CHO细胞中JEV NS4A蛋白分布与表达。结果重组质粒pJNS4A经BamHⅠ/EcoRⅠ酶切释出的插入子在830bp左右,与JEV NS4A蛋白编码基因和FLAG基因序列之和(834bp)相一致。JEV NS4A蛋白编码基因重组质粒转染的CHO细胞可见绿色荧光标记,主要分布在胞膜。结论 pJNS4A构建成功,转染的CHO细胞可稳定表达JEV NS4A蛋白。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2014年07期）
王亚男,黄培华,樊宝良[9]（2014）在《一种高通量快速鉴定重组子方法的建立》一文中研究指出利用添加了RNaseA的1X cracking buffer直接裂解细菌增强观测效果,排除RNA干扰,通过琼脂糖凝胶电泳与空载体质粒进行比较,建立一种高通量快速鉴定重组子的方法。该方法方便易行,大大提高了工作效率。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2014年05期）
赖芳芳,李中圣,赵焱,罗钧,王贵平[10]（2014）在《PCR快速鉴定毕赤酵母重组子几种模板制备方法的比较》一文中研究指出为了筛选出简单、快速、准确、稳定的毕赤酵母重组子鉴定技术,试验采用直接法、微波炉煮菌液法、煮-冻-煮法、端粒酶(TE)/0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液处理菌体法、Lysis Buffer处理菌液法和蜗牛酶处理菌液法6种方法制备毕赤酵母重组子DNA模板,进行PCR扩增效果的比较研究。结果表明:TE/0.1%SDS溶液处理菌液法和Lysis Buffer处理菌液法制备的酵母重组子DNA模板进行PCR可取得理想的结果;其他4种方法制备的酵母重组子DNA模板PCR结果不稳定。说明TE/0.1%SDS溶液处理菌液法耗时短、试剂简易、操作过程简便,且鉴定结果稳定,可以作为PCR鉴定毕赤酵母重组子DNA模板的首选快速制备方法。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2014年03期）
重组重组子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)XN-1的全基因组文库,筛选铜绿假单胞菌新的疫苗候选抗原。方法提取我国分离的临床PA XN-1菌株全基因组,Sau3AⅠ酶切成随机片段后经连接至Bam HⅠ酶切后的pMal-c5x载体,转化至X-blue获得随机重组子。随机重组子经IPTG诱导后使用溶菌酶裂解,收集含有融合的麦芽糖结合蛋白(MBP)的随机重组子的裂解上清,制成含有PA全基因组的蛋白随机文库。通过ELISA方法分别检测单个随机文库蛋白的免疫反应性。将经典的PA强反应抗原PcrV做为参照,分别计算单个随机抗原的相对反应强度并进行比较。提取反应较强的重组子的质粒,测定DNA序列后进行翻译和比对,得到整个强反应性抗原的氨基酸信息。结果成功构建PA XN-1的全基因组文库,筛选到强反应性抗原13个,其中4个抗原的反应强度超过PcrV,分别为Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase D、Phosphoenolpyruvate-protein phosphotransferase(PtsP)、Phosphate-starvation-inducible E和Very short patch repair endonuclease。结论基于高效表达系统的PA全基因组文库构建成功,可用于PA及其它病原的疫苗候选抗原的筛选研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组重组子论文参考文献
[1].许婉婷.铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究[D].重庆医科大学.2019
[2].许婉婷,顾江,万闯,程新,杨峰.铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究[J].免疫学杂志.2018
[3].郭晋宏,黄荣师,张瑶尧,潘剑,陈承晓.肝癌相关抗原SMP30慢病毒重组子的构建及其对DC成熟作用的观察[J].世界最新医学信息文摘.2018
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[10].赖芳芳,李中圣,赵焱,罗钧,王贵平.PCR快速鉴定毕赤酵母重组子几种模板制备方法的比较[J].黑龙江畜牧兽医.2014