导读:本文包含了基因沉寂论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:缺氧缺血性脑损伤,新生猪,水通道蛋白,4
基因沉寂论文文献综述
杨超[1]（2015）在《磁共振活体评价AQP4基因沉寂治疗早期缺血缺氧性脑损伤》一文中研究指出新生儿缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)是引起新生儿急性死亡和儿童智力低下、脑瘫和癫痫等神经系统损伤的主要原因之一,而脑水肿是脑细胞死亡的早期病理改变,其有效防治临床意义重大。水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)在脑水平衡和中枢渗透压调解中起重要作用,是脑水肿发生、发展的决定性因素。近十年基因治疗的研究进展迅速,新生大鼠AQP4基因敲除可减轻水中毒和局部缺血缺氧所引起的脑水肿症状,这为脑水肿的治疗提供了新的思路。但基因治疗的评价方法仍然难以令人满意,如何对基因表达进行无创伤的评价是基因治疗所必须面对的关键问题。磁共振扩散成像(diffusion weighted imaging,DWI)是目前在活体上进行水分子扩散测量与成像的唯一方法,并提供可以量化的表观弥散系数(apparent diffuse coefficient,ADC),这为在活体完整的微循环状态下研究脑水肿病理机制及评价基因治疗效果开辟了一条新路。RNA干扰技术(RNAi)是近年来产生的特异性基因阻断生物技术,能够快速、高效地下调特异基因的表达,是一种简单地可代替基因敲除的分子生物学研究工具。为了进一步在活体研究AQP4在HIE脑水肿形成中的作用机制及评估AQP4基因沉寂对缺血缺氧性脑水肿的治疗效果,我们拟用生后3~5天的约克种猪为动物模型,建立新生猪缺血缺氧脑损伤模型,利用RNA干扰技术,通过脑脊液注射给药途径将siRNA导入动物体内,采用3.0T磁共振扫描仪观察缺血缺氧后不同时间的脑MRI变化,为研究HIE脑水肿的发生机制及治疗方法寻求新线索。目的1.观察新生猪急性缺氧缺血脑损伤(hypoxicschemic brain damage,HIBD)早期DWI图像及ADC值的变化规律。2.探讨新生猪早期HIBD过程中ADC值与AQP4表达的相关性3.探讨DWI活体评价AQP4基因沉寂对新生猪HIBD的治疗效果。方法1.选择新生约克猪随机分为实验组10只,对照组12只,实验组进行hibd模型制备,对照组仅行假手术,分别在缺氧缺血前及缺氧缺血后1h、3h、6h、9h和12h进行常规mr扫描和dwi检查,得到tiwi、t2wi、t2-flair、dwi图像和相应adc图,观察图像变化,并选择皮层及皮层下、侧脑室旁区、海马区叁部分进行adc值测量,实验组在缺血缺氧后各时间点mr检查后各处死2只,取脑做病理学检查,处死前做神经行为学评分。2.选择新生约克猪随机分为实验组、对照组各24只,实验组进行hibd模型制备,对照组仅行假手术,分别在缺氧缺血前及缺氧缺血后1h、3h、6h、9h和12h进行mr扫描,得到dwi图像和相应adc图,观察dwi图像变化,并选择皮层及皮层下、侧脑室旁区、海马区叁部分进行adc值测量,实验组和对照在缺血缺氧后各时间点mr检查后各处死4只,取脑做免疫组织化学分析,检测aqp4蛋白表达情况。3.选择新生约克猪随机分为a组(实验组)11只,b组(对照组1)11只,c组(对照组2)6只,d组(对照组3)4只。a组给予脑脊液注射sirna-aqp4和缺血缺氧,b组给予脑脊液注射sirna-negative(aqp4非干扰序列)和缺血缺氧,c组给予脑脊液注射sirna-negative(aqp4非干扰序列)和假手术,d组不做任何处理。各组分别在缺氧缺血前及缺氧缺血后1h、3h、6h、9h和12h进行mr扫描,得到dwi图像和相应adc图,观察dwi图像变化,并选择皮层及皮层下、侧脑室旁区、海马区叁部分进行adc值测量,并进行神经行为学评分,各组动物均在12h后取脑,然后进行免疫组织化学分析及realtimepcr检查,检测aqp4蛋白及aqp4mrna表达情况,缺血缺氧前及缺血缺氧后12h抽取动脉血行血气及脑酶学检查。结果1.实验组在缺血缺氧后各时间点神经行为学评分较对照组降低显着(p<0.05),新生猪hibd模型制备成功,实验组和对照组tiwi、t2wi、t2-flair图像均未见异常信号。实验组在缺血缺氧后1h,dwi图像上开始出现点状高信号区,随时间延长,在缺血缺氧后3h、6h、9h各点的dwi图像上,高信号区范围和强度明显扩大,主要分布于大脑皮层、侧脑室旁区及海马区,缺血缺氧后12h,dwi图像显示脑内呈弥漫性高信号改变。实验组各部位ADC值1h下降明显,3h最低,6h、9h、12hADC值回升,但仍明显低于缺血缺氧前ADC水平。对照组在不同时间DWI图像及ADC值未见异常改变。在缺血缺氧后1h、3h、6h、9h及12h,实验组ADC值较对照组ADC值降低,差异显着(P<0.05)。病理学显示缺血缺氧后1h部分细胞内即出现水肿,3h细胞内水肿加重,范围增大,6h出现少许血管源性水肿,至12h,血管源性水肿逐渐加重,但仍以细胞内水肿为主。2.免疫组织化学分析显示,实验组侧脑室旁区、海马区AQP4蛋白在缺血缺氧后1h、3h、6h、9h、12h各时间点表达量较对照组增多,差异显着(P<0.05),并与相应时间点ADC值呈负相关(P<0.05)。3.A组、C组、D组在各时间点DWI图像上未见明显异常高信号,B组在各时间点DWI表现同前两项研究结果,A组各部位ADC值在缺血缺氧后各时间点轻微降低,12h几乎恢复正常,较B组各时间点ADC值增高,差异显着(P<0.05)。神经行为学评分显示:A组在缺血缺氧后各时间点较B组评分增高,差异显着(P<0.05)。免疫组织化学检查显示A组较B组AQP4蛋白着色细胞数量减少,Real Time PCR检查结果显示:A组海马区较B组海马区AQP4mRNA相对表达量明显减少,差异显着(P<0.05);A组侧脑室旁区较B组侧脑室旁区AQP4mRNA相对表达量减少,但差异不显着(P=0.25);A、B组海马区AQP4mRNA相对表达量较侧脑室旁区增多,差异显着(P<0.05)。结论1.DWI是新生猪HIBD早期影像检查中敏感、有效的检查方法,ADC值的变化较DWI图像更能反映HIBD早期的病理生理变化。2.AQP4在新生猪HIBD早期过程中高表达,并与ADC值呈显着负相关。3.RNAi可有效抑制新生猪缺血缺氧后AQP4基因表达,减轻HIBD症状,可作为基因治疗的有效手段。4.海马区AQP4表达较侧脑室旁区增多,可作为海马较其它部位对缺血缺氧敏感的基础之一。5.ADC值测量可作为活体动态评价AQP4基因沉寂治疗HIBD的有效方法。(本文来源于《大连医科大学》期刊2015-03-01）
李洪杰[2]（2012）在《AQP4基因沉寂治疗早期缺氧缺血性脑水肿的DWI影像学研究》一文中研究指出目的：通过观察早期磁共振弥散加权成像（diffusion weighted imaging，DWI）图像及表观弥散系数（Apparent Diffuse Coefficient，ADC）图像的影像特点并监测ADC值的变化规律，从而探讨水通道蛋白-4（Aquaporin-4，AQP4）基因沉寂对新生猪缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）的干预效果，进而研究早期缺氧缺血性脑损伤AQP4mRNA表达的变化及意义。材料与方法：新生健康清洁级约克种猪40只（日龄3-5天，体重1.3-1.6kg，雌雄不限，由大连华侨种猪场提供）随机分成实验组及对照组（每组20只）。其中12只种猪（实验组5只及对照组7只）在实验过程中由于缺氧、手术创伤等原因死亡，实验组中2例因注射药物失败列入对照组，最终实验组13例、对照组15例。实验组给予脑室注射siRNA-AQP4（AQP4干扰序列）+缺氧缺血（双侧颈总动脉永久结扎+4%低氧通气30min），对照组给予siRNA-Negative（AQP4非干扰序列）+缺氧缺血。术后给予青霉素肌肉注射预防感染。两组种猪均根据具体情况酌情喂养，以保证充足的热量及液体供给。模型制备结束后，采用1.5T MR扫描仪扫描，使用标准头线圈，冠状位扫描。分别在缺氧缺血后0h、1h、3h、6h、9h及12h时间点进行MR扫描；扫描序列包括T1加权像(T1WI)、T2加权像（T2WI）、FLAIR及DWI。其中DWI扫描参数如下：TR6000ms，TE91.1ms，层厚4mm，2次采集，矩阵128×128，b值分别为0/1000s/mm2。将采集后的原始图像传送至GE advantage workstation AW4.4工作站上进行后处理，分别于双侧大脑半球额叶皮层、脑室旁及海马区域选择感兴趣区(Regions of interest，ROI)，测量并得到ADC值。所有时间点扫描结束后给予3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后断头取脑。一侧脑组织进行SP免疫组织化学染色，光镜下观察病理改变；另一侧行实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测，观察脑组织中目的基因的表达情况，检测待测样品的Ct值。应用社会科学统计软件包（statistics package for social science，SPSS）16.0版进行数据分析：对两组间不同部位及不同时间点的ADC值进行重复测量方差分析方法进行检验；对两组间相同部位AQP4mRNA相对表达量及Ct值进行独立样本T检验；对两组的不同部位间AQP4mRNA相对表达量及Ct值进行配对样本T检验。结果：1．实验组大脑额叶皮层、海马区及侧脑室旁区域未见明显高信号，且各时间点ADC值无统计学差异（p>0.05）；对照组各区域出现不同程度高信号，相应的ADC值均不同程度的减低，表现为：1小时内下降明显，3小时最低，6小时开始回升，12小时接近正常，且各时间点之间差异有统计学意义（p<0.05）。同一区域对照组各时间点ADC值较相应实验组均减低，且有统计学意义（p<0.05）。2．独立样本T检验结果显示：两组间海马区AQP4mRNA相对表达量明显不同，实验组低于对照组（相对表达量=0.80，1.48），且两组间差异有统计学意义（p=0.04）；实验组脑室旁区AQP4mRNA相对表达量同样低于对照组（相对表达量=0.69，1.10），但差异没有统计学意义（p=0.31）。实验组海马区及侧脑室旁区Ct值较对照组均增高（海马区=20.62，18.47；侧脑室旁区=20.53，18.93），但这些差别缺乏统计学意义（p=0.05，0.92）。3．配对样本T检验结果显示：海马区相对表达量明显高于侧脑室旁白质区域（均差=0.25），且两者差异有统计学意义（p=0.00）；海马区Ct值较脑室旁白质区域减低（均差=-0.21），但差异没有统计学意义（p=0.09）。结论：1．新生猪HIE模型可操作性好。双侧颈总动脉结扎+4%低氧通气30min可以造成程度较为一致的HIE，为研究新生儿HIE提供较为可靠的动物模型。2．DWI在诊断早期缺氧缺血性脑水肿并揭示其微观病理生理学的演变规律有明显的优势。ADC值从病理生理水平反映了早期缺氧缺血性脑水肿的变化规律。3．AQP4的表达与HIBD脑水肿病理变化的发生发展有关。在缺氧缺血性脑水肿早期干预AQP4基因可以预防脑水肿的发生。(本文来源于《大连医科大学》期刊2012-04-01）
郭慧[3]（2010）在《Toll样受体介导角膜真菌感染炎症反应的作用及基因沉寂治疗研究》一文中研究指出第一部分：TLRs介导的角膜上皮细胞对烟曲霉菌的天然免疫反应目的：研究角膜上皮细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4分别对配体刺激的免疫反应及其介导角膜上皮细胞对烟曲霉菌炎症反应的作用。方法：培养永生化人角膜上皮细胞,利用TLR2配体酵母聚糖、TLR4配体LPS及烟曲霉菌菌丝分别刺激角膜上皮细胞,于不同时间点(1h,3h,6h,12h)收取培养上清进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子IL-1β和IL-6水平。分别设计靶向人TLR2、TLR4的siRNA序列,构建表达TLR2-或TLR4-siRNA的质粒,分别转染角膜上皮细胞,利用RT-PCR及Western blot检测TLR2、TLR4表达以评价抑制效果。利用烟曲霉菌菌丝并分别刺激转染siRNA的角膜上皮细胞及未转染对照细胞,于不同时间点(1h,3h,6h,12h)利用ELISA检测上清中细胞因子IL-1β和IL-6水平。结果：TLR2配体酵母聚糖、TLR4配体LPS及烟曲霉菌均可刺激永生化人角膜上皮细胞(THCE)分泌炎性细胞因子IL-1β和IL-6。酵母聚糖刺激角膜上皮细胞后6h IL-1β和IL-6水平开始升高,并呈时间依赖性。LPS刺激后12h可见细胞因子显着性升高,但表达水平不如酵母聚糖刺激明显。烟曲霉菌刺激后3h细胞因子水平即明显升高,随刺激时间延长进一步上调。TLR2-或TLR4-siRNA贡粒转染角膜上皮细胞后,TLR2、TLR4 mRNA及蛋白水平表达均受到显着抑制。烟曲霉菌菌丝刺激后对照组IL-1β和IL-6表达明显上调,而TLR2-或TLR4-siRNA处理组IL-1β和IL-6水平均较对照组显着降低。结论：TLR2配体和TLR4配体可诱导角膜上皮细胞的天然免疫反应；角膜上皮细胞通过TLR2和TLR4识别烟曲霉菌并介导炎性细胞因子表达。角膜上皮细胞表达的TLR2和TLR4在角膜抗真菌感染天然免疫中发挥重要作用。第二部分：TLR2介导茄病镰刀菌诱导的人角膜基质细胞抗炎细胞因子表达目的：研究TLR2在茄病镰刀菌诱导的人角膜基质细胞促炎细胞因子和抗炎细胞因子表达中的作用。方法：设计靶向人TLR2 siRNA序列,连接入p-silencer 2.0 U6载体构建能表达TLR2-siRNA的质粒。分别转染永生化人角膜基质细胞,利用免疫荧光、RT-PCR及Western blot检测TLR2的表达。制备茄病镰刀菌菌丝和孢子刺激液并分别刺激转染siRNA的角膜基质细胞及未转染对照细胞,刺激12h后利用实时荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β和IL-10的表达。结果：TLR2-siRNA质粒转染人角膜基质细胞后,TLR2 mRNA及蛋白水平表达均明显被抑制,mRNA抑制效率为60%,蛋白抑制效率可达65%左右。对照siRNA转染组、空载体组及空白对照组TLR2表达无显着差异。单纯镰刀菌菌丝和孢子均可刺激人角膜基质细胞IL-10和IL-1β表达明显上调,与对照组有显着差异(P<0.01),其中菌丝刺激组细胞因子表达水平比孢子刺激组高。分别使用茄病镰刀菌菌丝及孢子刺激后,对照组IL-1β及IL-10的表达均明显上调,且菌丝诱导的表达上调比孢子更显着；RNA干扰组,IL-10表达较对照组明显降低,菌丝刺激组IL-10表达下调82%,孢子刺激组下调70%,与未干扰组表达水平比较均具有显着差异(P<O.01)；IL-1β的表达亦有降低,菌丝刺激组下调60%,孢子刺激组约下调54%,具有统计学差异,但不如IL-10下调显着。结论：TLR2是人角膜基质细胞识别茄病镰刀菌的重要识别受体,它可能通过介导IL-10的表达发挥一种抗炎性作用。这将为探索角膜真菌感染发病机理和免疫防御反应机制提供新的思路。第叁部分：RNA干扰大鼠角膜TLR2表达对角膜真菌感染的影响目的：研究RNA干扰大鼠角膜TLR2对角膜烟曲霉菌感染的影响。方法：分别合成对照siRNA或TLR2siRNA,与转染试剂混合制备siRNA悬液,于感染前1天给予结膜下注射联合表面点眼。利用角膜接触镜法建立大鼠烟曲霉菌性角膜炎模型,进行裂隙灯检查、临床评分及组织病理学分析评价感染情况。利用免疫荧光技术检测大鼠角膜TLR2表达以评价TLR2 siRNA转染的效率。利用实时定量PCR技术检测炎性细胞因子TNFa, IL-1β, IL-4, IL-6, IL12p40和趋化因子MCP-1和MIP-2表达水平。利用髓过氧化物酶(MPO)法检测多型核白细胞(PMN)浸润。结果：TLR2 siRNA转染后,大鼠角膜TLR2表达明显减少,呈区域性、节段性分布。对照siRNA转染组角膜TLR2呈正常表达。对照组大鼠角膜给予烟曲霉菌接种后,角膜炎呈进行性发展,第1天可见角膜上皮呈毛玻璃样水肿,第3天可见明显的黄白色溃疡,边界不清,角膜缘充血明显；病变发展迅速,第4-5天为感染高峰期,溃疡面进一步扩大,表面凹凸不平,角膜中央区坏死组织脱落呈典型的龛状溃疡,可见后弹力层膨出、角膜葡萄肿甚至角膜穿孔。转染组感染后第1天角膜见轻度炎性浸润,第3天角膜浸润较前加重,但未见明显溃疡,第5天浸润开始减轻,面积逐渐局限、缩小,于2周左右完全愈合,仅存小片云翳及新生血管。对照组大鼠角膜炎性细胞因子TNFa, IL-1β, IL-4, IL-6, IL12p40及趋化因子MCP-1、MIP-2表达水平在第1天开始上调,于3-5天达到高峰,第7天开始下降并于2周后恢复至低水平。相比之下,TLR2 siRNA转染组炎性细胞因子TNFa, IL-1β, IL-6, IL12p40及趋化因子MCP-1、MIP-2水平明显降低,IL-4水平未见显着下调。TLR2 siRNA转染组PMN浸润较对照组明显减轻。结论：siRNA可通过结膜下注射联合点眼的方式成功转入角膜组织。TLR2是角膜识别烟曲霉菌感染的主要受体,在诱导炎性细胞因子产生和炎性浸润发挥关键作用。TLR2siRNA可通过下调炎性细胞因子及炎性细胞浸润达到抑制角膜过度炎症反应和减少角膜损伤的目的,为探索利用TLR2基因沉寂治疗角膜真菌感染的新方法提供了理论依据。(本文来源于《山东大学》期刊2010-05-10）
张勇,张巍,薛茜,李伟,孟艳玲[4]（2006）在《Caspase-9特异性siRNA表达载体构建及基因沉寂效应研究》一文中研究指出目的:构建Caspase9特异性siRNA表达载体,检测干涉效果及其对细胞功能的影响。方法:选取干涉靶序列证实,设计合成siRNA的编码序列,将其克隆进表达载体pSUPER-puro,经酶切鉴定和DNA测序,用脂质体介导方法转染宫颈癌HeLa细胞,RT-PCR、Western Blot等方法检测干涉效果,放(本文来源于《中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要》期刊2006-11-01）
巢时斌[5]（2003）在《小片段发夹RNA的制备及其对Hela细胞端粒酶基因沉寂作用研究》一文中研究指出目的：建立简便、高效、低成本制备小片段发夹RNA(small halrpin RNA shRNA)的方法，为广泛开展RNA干扰实验创造条件。探讨针对人端粒酶的shRNA对Hela细胞端粒酶基因表达的干扰作刚，为shRNA对端粒酶基因表达的沉寂作用提供实验依据。 方法：根据端粒酶hTERT基因1573—1591位的核酸序列，构建带T7启动子的部分双链DNA模板，用T7RNA聚合酶体外合成短链shRNA。以磷酸钙共沉淀转染法将shRNA转染Hela细胞。于不同的时间用台盼蓝染色法检测细胞生存能力。用TRAP-银染法和PCR-EIA分别检测经转染不同shRNA量和作用时间Hela细胞端粒酶活性。 结果：本法制备的shRNA的纯度为(OD260／280 1.961)产量为(7.88μg／20μL反应体系)。用该法制备的shRNA转染Hela细胞后端粒酶活性降低。 结论：以带T7启动子部分双链DNA为模板，用T7RNA聚合酶体外合成出的shRNA产量较高，纯度较好，是一种简便、高效、低成本的短链RNA的制备方法，适合于普通实验室用来进行短链RNA的合成和RNA干扰实验。以端粒酶TERT基因1573—1591位的核酸序列构建的shRNA可对Hela细胞端粒酶基因表达产生一定的沉寂作用。(本文来源于《中南大学》期刊2003-06-30）
汪之沫,廖玲洁[6]（2003）在《RNA干涉和基因沉寂》一文中研究指出RNA干涉是新近认识到的一种自然现象 ,但已被作为一种研究基因功能的有效工具 ,广泛运用于植物、真菌、线虫、果蝇以及哺乳动物。随着人们对 RNA干涉机制认识的不断深入 ,RNA干涉技术将不断完善并应用到更为广阔的领域 ,为人类揭示生物界功能基因组功能的奥秘作出突出贡献 ,同时为人们探索基因治疗提供新的思路(本文来源于《国外医学.遗传学分册》期刊2003年03期）
李兵[7]（2002）在《RNA干涉让致病基因沉寂关闭》一文中研究指出当前,一项新的基因治疗技术正日益引起全球医药界的高度关注,今年欧美的主要科学杂志几乎每期都刊登有关研究的最新成果——“双链RNA(核糖核酸)干涉技术”。至今约有500多个基因治疗方案处于不同阶段的临床研究之中,但绝大部分是用功能性基因进行治疗,即采用有(本文来源于《当代医学》期刊2002年11期）
李兵[8]（2002）在《RNA干涉从“根”上治病》一文中研究指出当前，一项新的基因治疗技术正日益引起全球医药界的高度关注，今年欧美的主要科学杂志几乎每期都刊登有关研究的最新成果———“双链RNA（核糖核酸）干涉技术”。刚刚从美国进行学术交流归来的第二军医大学南京军医学院分子医学研究所所长徐根兴教授，近日向介绍了这(本文来源于《健康报》期刊2002-10-01）
基因沉寂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的：通过观察早期磁共振弥散加权成像（diffusion weighted imaging，DWI）图像及表观弥散系数（Apparent Diffuse Coefficient，ADC）图像的影像特点并监测ADC值的变化规律，从而探讨水通道蛋白-4（Aquaporin-4，AQP4）基因沉寂对新生猪缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）的干预效果，进而研究早期缺氧缺血性脑损伤AQP4mRNA表达的变化及意义。材料与方法：新生健康清洁级约克种猪40只（日龄3-5天，体重1.3-1.6kg，雌雄不限，由大连华侨种猪场提供）随机分成实验组及对照组（每组20只）。其中12只种猪（实验组5只及对照组7只）在实验过程中由于缺氧、手术创伤等原因死亡，实验组中2例因注射药物失败列入对照组，最终实验组13例、对照组15例。实验组给予脑室注射siRNA-AQP4（AQP4干扰序列）+缺氧缺血（双侧颈总动脉永久结扎+4%低氧通气30min），对照组给予siRNA-Negative（AQP4非干扰序列）+缺氧缺血。术后给予青霉素肌肉注射预防感染。两组种猪均根据具体情况酌情喂养，以保证充足的热量及液体供给。模型制备结束后，采用1.5T MR扫描仪扫描，使用标准头线圈，冠状位扫描。分别在缺氧缺血后0h、1h、3h、6h、9h及12h时间点进行MR扫描；扫描序列包括T1加权像(T1WI)、T2加权像（T2WI）、FLAIR及DWI。其中DWI扫描参数如下：TR6000ms，TE91.1ms，层厚4mm，2次采集，矩阵128×128，b值分别为0/1000s/mm2。将采集后的原始图像传送至GE advantage workstation AW4.4工作站上进行后处理，分别于双侧大脑半球额叶皮层、脑室旁及海马区域选择感兴趣区(Regions of interest，ROI)，测量并得到ADC值。所有时间点扫描结束后给予3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后断头取脑。一侧脑组织进行SP免疫组织化学染色，光镜下观察病理改变；另一侧行实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测，观察脑组织中目的基因的表达情况，检测待测样品的Ct值。应用社会科学统计软件包（statistics package for social science，SPSS）16.0版进行数据分析：对两组间不同部位及不同时间点的ADC值进行重复测量方差分析方法进行检验；对两组间相同部位AQP4mRNA相对表达量及Ct值进行独立样本T检验；对两组的不同部位间AQP4mRNA相对表达量及Ct值进行配对样本T检验。结果：1．实验组大脑额叶皮层、海马区及侧脑室旁区域未见明显高信号，且各时间点ADC值无统计学差异（p>0.05）；对照组各区域出现不同程度高信号，相应的ADC值均不同程度的减低，表现为：1小时内下降明显，3小时最低，6小时开始回升，12小时接近正常，且各时间点之间差异有统计学意义（p<0.05）。同一区域对照组各时间点ADC值较相应实验组均减低，且有统计学意义（p<0.05）。2．独立样本T检验结果显示：两组间海马区AQP4mRNA相对表达量明显不同，实验组低于对照组（相对表达量=0.80，1.48），且两组间差异有统计学意义（p=0.04）；实验组脑室旁区AQP4mRNA相对表达量同样低于对照组（相对表达量=0.69，1.10），但差异没有统计学意义（p=0.31）。实验组海马区及侧脑室旁区Ct值较对照组均增高（海马区=20.62，18.47；侧脑室旁区=20.53，18.93），但这些差别缺乏统计学意义（p=0.05，0.92）。3．配对样本T检验结果显示：海马区相对表达量明显高于侧脑室旁白质区域（均差=0.25），且两者差异有统计学意义（p=0.00）；海马区Ct值较脑室旁白质区域减低（均差=-0.21），但差异没有统计学意义（p=0.09）。结论：1．新生猪HIE模型可操作性好。双侧颈总动脉结扎+4%低氧通气30min可以造成程度较为一致的HIE，为研究新生儿HIE提供较为可靠的动物模型。2．DWI在诊断早期缺氧缺血性脑水肿并揭示其微观病理生理学的演变规律有明显的优势。ADC值从病理生理水平反映了早期缺氧缺血性脑水肿的变化规律。3．AQP4的表达与HIBD脑水肿病理变化的发生发展有关。在缺氧缺血性脑水肿早期干预AQP4基因可以预防脑水肿的发生。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因沉寂论文参考文献
[1].杨超.磁共振活体评价AQP4基因沉寂治疗早期缺血缺氧性脑损伤[D].大连医科大学.2015
[2].李洪杰.AQP4基因沉寂治疗早期缺氧缺血性脑水肿的DWI影像学研究[D].大连医科大学.2012
[3].郭慧.Toll样受体介导角膜真菌感染炎症反应的作用及基因沉寂治疗研究[D].山东大学.2010
[4].张勇,张巍,薛茜,李伟,孟艳玲.Caspase-9特异性siRNA表达载体构建及基因沉寂效应研究[C].中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要.2006
[5].巢时斌.小片段发夹RNA的制备及其对Hela细胞端粒酶基因沉寂作用研究[D].中南大学.2003
[6].汪之沫,廖玲洁.RNA干涉和基因沉寂[J].国外医学.遗传学分册.2003
[7].李兵.RNA干涉让致病基因沉寂关闭[J].当代医学.2002
[8].李兵.RNA干涉从“根”上治病[N].健康报.2002