导读:本文包含了固定化胰蛋白酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:液相色谱-串联质谱,制备,整体柱,蛋白质组学
固定化胰蛋白酶论文文献综述
郑蒙蒙,韩颖,康经武[1]（2019）在《固定化胰蛋白酶整体小柱的制备及其用于微量蛋白质的快速酶解》一文中研究指出发展了一种光引发聚合法制备固定化胰蛋白酶整体小柱的方法,以用于微量蛋白质的快速酶解。整体小柱由功能单体4-戊烯酸琥珀酰亚胺酯、甲基丙烯酸羟乙酯,交联剂季戊四醇叁丙烯酸酯和叁元致孔剂二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、十二醇在20μL的移液器吸头尖端原位聚合而成。形成整体柱后,胰蛋白酶分子通过氨基与琥珀酰亚胺酯反应实现固定化。系统研究了聚合溶液中活性酯含量与柱床体积对胰蛋白酶固载量的影响,评价了固定化酶整体小柱对标准蛋白细胞色素C和牛血清白蛋白的酶解效率,以及整体小柱的稳定性和重复性。结果表明,在离心辅助下,酶解过程可在10 min内完成,批次间具有良好的重复性。最后将固定化酶整体小柱应用于1×10~5个人急性早幼粒白血病(NB4)细胞与人急性T细胞白血病(Jurkat T)细胞的快速酶解,经纳升级液相色谱与高分辨质谱联用分析后鉴定得到2 489个和2 572个蛋白质。相比于溶液状态下的酶解,分别提高了2.2%和6.1%的蛋白鉴定数量,展现了其在蛋白组学研究中的应用潜力。(本文来源于《色谱》期刊2019年12期）
李霞,栗安之,李晨[2]（2019）在《响应面法优化荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化条件》一文中研究指出目的:以大肠杆菌表达的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂为原材料,研究其固定化方法及条件。方法:以0.2%聚乙烯醇-3%海藻酸钠溶液为载体,CaCl2为固定剂,用物理包埋法对荞麦胰蛋白酶抑制剂进行固定化;在CaCl2浓度、载体与抑制剂体积比以及固定化时间3个单因素基础上,利用响应面法对荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化的影响因素进行优化。结果:建立了响应面法优化固定荞麦胰蛋白酶抑制剂的模型,经优化后得到如下最佳固定化条件:CaCl2浓度为5.5%,载体与抑制剂体积比为1.6∶1,固定化时间为31 min。在此条件下实际测得固定化抑制剂抑制率为72.4%,而模型预测此条件下的抑制率为74.3%,实测值与理论值相差很小。结论:所建模型拟合程度较高,用该模型优化荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化的工艺条件参数准确可信,可为进一步开发胰蛋白酶的应用提供重要参考。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年03期）
刘伟华,姜子涛,李荣[3]（2019）在《微波法高效制备固定化胰蛋白酶》一文中研究指出为探讨高效制备固定化酶的方法,研究采用微波固定化的方法来提高共价固定化过程的效率。以D151树脂为载体,采用中心组合设计响应面法优化制备固定化胰蛋白酶的条件。通过二次多项式回归方程的拟合,最终确定了制备固定化胰蛋白酶的最佳条件为:吸附时间1.5 h、戊二醛质量分数1.0%、加酶量8.2 mg/mL、pH 5.0、交联温度29.0℃及交联时间3.5 min。制备的固定化胰蛋白酶在25～45℃的温度范围内、pH在4.0～5.0和9.0～10.0范围内具有良好的稳定性;重复使用8次后,酶活力保留了初始酶活力的73.1%;储藏5周后酶活力仍保留了71.1%。进一步使用固定化胰蛋白酶水解酪蛋白,其效率比使用游离胰蛋白酶的水解效率更高。结果表明,采用微波辅助固定化胰蛋白酶是一种值得尝试的高效方法,制备的固定化胰蛋白酶也具有良好的催化性能。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2019年05期）
何云富,张邵博,程浩,兰海鸥,李明生[4]（2018）在《胰蛋白酶在两种载体上的固定化效果比较》一文中研究指出以片状载体和偶联DEAE的纤维素微球作为固定化载体,以戊二醛作为交联剂,制备固定化胰蛋白酶,研究交联剂浓度、时间、交联温度等条件对交联效果的影响,并对固定化后的胰蛋白酶的效果进行探究.结果显示,在片状载体和纤维素微球上,固定化最适条件大致相同,最适交联剂浓度为2%,胰蛋白酶浓度为3%,最佳交联时间为10h,交联温度和固定化温度均为10℃.纤维素微球和片状载体在相同条件下酶固载量分别达到145mg/g和112.6mg/g,活力回收率分别为17.3%和14%.两种载体相比,纤维素微球作为固定胰蛋白酶的载体效果更佳.(本文来源于《西北民族大学学报(自然科学版)》期刊2018年04期）
黄冬丽,何云富,何亚涛,丁功涛[5]（2018）在《片状载体固定化胰蛋白酶的研究》一文中研究指出以片状载体作为固定化载体,戊二醛为交联剂,制备固定化胰蛋白酶。以固定化时间、固定化温度、固定化pH值和固定化酶质量分数对固定化效果进行评估。结果表明,在固定化时间1.5 h,固定化温度40℃,固定化pH值8.0,胰蛋白酶质量分数2%时,固定化效果最好,回收率最高。在最佳固定化条件下,固定化酶活力回收率可达46.89%,固定化胰蛋白酶表现出较好的热稳定性和酸碱稳定性。(本文来源于《农产品加工》期刊2018年16期）
刘伟华[6]（2017）在《固定化胰蛋白酶的微波法高效制备及其性质研究》一文中研究指出固定化酶技术是20世纪60年代发展起来的一种为克服游离酶稳定性能差、成本高、产物纯度低等缺点而应运而生的一种技术,固定化酶已在许多领域显示出重要的应用价值。但是固定化酶的制备过程通常耗时较长,少则几个小时,多则几十个小时。现今,随着科学技术的发展,人们对生活质量的要求越来越高,费时、繁杂的方式和方法不断被淘汰,快速测定技术迅猛发展,人们的生产生活方式越来越快捷。因此探索高效制备固定化酶的方法,以满足生产、应用的需求是必要的。近年来,微波作为一种高效的辅助手段被广泛地应用到科研之中。但目前为止,国内外对微波辅助固定化酶的研究相对较少,且还没有对胰蛋白酶进行微波固定化的研究。因此本课题采用微波固定化的方法来制备固定化胰蛋白酶。本课题研究包括以下四个部分:(1)以ES-105环氧基树脂为固定化胰蛋白酶的载体,在微波辅助的条件下,对胰蛋白酶进行固定化,应用Box-Behnken响应面法设计实验,优化确定了最佳的固定化条件。结果表明,在加酶量为41 mg/g、pH值6.2、微波温度为30℃、微波时间10 min的条件下,制备的固定化胰蛋白酶的活力为322.6 U/g。此酶在25℃~40℃的温度范围内、5~7和9~10的pH值范围内稳定性较好,经过9次使用后还可以保持63.2%的初始酶活力,在4℃环境下贮藏五周后仍能保持初始酶活力的64.6%。(2)以ESR-5伯氨基树脂为固定化载体,在微波辅助的条件下,以戊二醛为交联剂制备固定化胰蛋白酶。应用Box-Behnken响应面法设计实验,优化确定了最佳的固定化条件。结果表明,在加酶量为26 mg/g、戊二醛质量分数为0.53%、pH值为9.1,微波温度为35℃、微波时间为5 min的条件下,制得的固定化胰蛋白酶的活力为390.8U/g。此酶在25℃~45℃的温度范围内、在8.5~10.0的pH值范围内酶的稳定性较好,经过11次使用后还可以保持86.7%的初始酶活力,在4℃环境下贮藏五周后仍能保持初始酶活力的63.7%。(3)以D151大孔树脂为固定化载体,在微波辅助的条件下,采用吸附-交联法制备固定化胰蛋白酶。采用星点设计-响应面法优化确定了最佳的固定化条件。结果表明,在吸附时间1.5 h、加酶量81 mg/g、戊二醛质量分数1.0%、p H值5.0、微波温度29℃、微波时间3.5 min的条件下,制备的固定化胰蛋白酶的活力为221.5 U/g。此酶在25℃~45℃的温度范围内、在4.0~5.0和9.0~10.0的pH值范围内酶的稳定性较好,经过8次使用后还可以保持73.1%的初始酶活力,在4℃环境下贮藏五周后仍能保持初始酶活力的71.1%。(4)应用各种不同载体制备的固定化酶水解酪蛋白和紫苏饼粕蛋白,以考察各种固定化酶的酶解性能。结果表明,叁种不同载体制备的固定化胰蛋白酶水解蛋白后得到的产物有差别,但差别不显着。综上所述,以ESR-5伯氨基树脂为固定化载体制备的固定化胰蛋白酶的酶活力最高,制备过程中酶活力的损失最少;操作稳定性优于其他两种固定化胰蛋白酶,说明通过Schiff反应将树脂和胰蛋白酶交联在一起的化学固定化方式更牢固;其温度稳定性优于ES-105树脂固定化胰蛋白酶;酸碱稳定性和贮藏稳定性与另外两种相差不大;其催化水解蛋白的效果与另外两种固定化胰蛋白酶相差不大,总体而言是叁种固定化胰蛋白酶中性能最好的。(本文来源于《天津商业大学》期刊2017-05-01）
赵海杰[7]（2017）在《胰蛋白酶核酸适配体筛选及胰蛋白酶固定化新方法研究》一文中研究指出核酸适配体(Aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)从随机寡聚核苷酸文库中筛选获得的,与靶分子具有高亲和力,高特异性的寡核苷酸序列。用于核算适配体筛选的方法有很多,与其他适配体筛选技术相比,基于毛细管电泳的aptamer筛选(CE-SELEX)技术具有分离高效、快速,样品消耗量低的优点。在线酶解是蛋白质组学研究向通量化、集成化发展的必经之路,固定化酶反应器是实现在线酶解的关键。传统的酶固定化方法操作过程繁琐且对酶活性影响大、再生困难、成本较高。而酶的核酸适配体与酶结合稳定性强、再生能力突出、使用成本低、对酶活性影响小,具有其他酶固定化方法无法比拟的优点。本论文拟利用CE-SELEX筛选获得胰蛋白酶的核酸适配体,并利用筛选获得的适配体固定胰蛋白酶,制备固定化的胰蛋白酶。本论文的主要研究内容包括:(1)设计了适合胰蛋白酶适体筛选的随机寡聚核苷酸文库,优化了文库的扩增条件和次级文库的制备条件;(2)建立了适用于胰蛋白酶适体筛选的毛细管电泳方法,优化了电泳条件并对文库与胰蛋白酶的相互作用进行了表征;(3)以所设计的核苷酸文库和建立的毛细管电泳方法为基础,用基于毛细管电泳的适配体筛选技术(CE-SELEX)筛选获得了胰蛋白酶的核酸适配体;(4)对筛选获得的胰蛋白酶核酸适配体进行化学修饰后,通过化学交联和聚合的方法接枝于氨丙基硅胶颗粒表面,并将接枝有aptamer的硅胶颗粒与胰蛋白酶混合孵育,从而将胰蛋白酶修饰到硅胶颗粒表面,制备获得可用于固定化微酶反应器的填料。本研究经过4个轮次的筛选,随机寡聚核苷酸文库与胰蛋白酶的结合效率达到83.3%,并成功获得了25条与胰蛋白酶具有较高亲和力的适体,并以此为基础制备了固定化的胰蛋白酶,两种固定化方法的酶固载量分别为1.7μg/mg和5.3μg/mg。所用CE-SELEX技术高效、快速,基于核酸适配体的固定化酶稳定性强、再生能力突出、对酶活性影响小,对CE-SELEX法筛选蛋白类靶标的适体及固定化微酶反应器的制备均具有借鉴意义;制备的填料酶固载量较大,可用作固定化微酶反应器的填料。(本文来源于《青岛科技大学》期刊2017-03-27）
于海宁,张鹏,沈生荣,单伟光[8]（2016）在《肝素提取中膜分离回收固定化胰蛋白酶的工艺研究》一文中研究指出以微滤膜分离肝素酶解液,回收固定化胰蛋白酶,研究蛋白酶重复提取肝素,具有较大的经济价值.通过单因素试验和正交试验,研究膜组件运行参数对膜分离回收固定化酶工艺的影响,通过考察肝素透过率、固定化胰蛋白酶拦截率、平均膜通量和膜通量恢复率为指标,获得膜分离回收固定化胰蛋白酶的最佳工艺条件和清洗陶瓷膜的最佳NaOH浓度.实验结果表明:在最佳膜分离条件下,固定化酶和肝素能够有效分离,平均膜通量达到656.13L/(m2·h),在该条件下回收的固定化胰蛋白酶仍具有良好的活性,可重复利用.采用最佳的2%NaOH溶液清洗陶瓷膜,陶瓷膜平均通量恢复至初始通量的97.9%.(本文来源于《浙江工业大学学报》期刊2016年05期）
牛红鑫,陆峻宇,李亚楠,王明玉,张横[9]（2015）在《壳聚糖固定化胰蛋白酶制备牡蛎肽的研究》一文中研究指出以壳聚糖为载体固定化胰蛋白酶,制备牡蛎肽,然后以肽得率为指标,分别研究了pH值,酶加量,酶解时间和温度等单因子对固定化胰蛋白酶酶解牡蛎蛋白质的影响。实验结果表明,酶解牡蛎蛋白的最佳工艺条件是:底物浓度为200μg/mL,加固定化胰蛋白酶量7mg/3mL,酶解时间3h,pH 8.0,温度40℃。在此条件下水解牡蛎蛋白,肽得率可达到20.39%。(本文来源于《河北渔业》期刊2015年09期）
董姝婷[10]（2015）在《SBA-15介孔材料上胰蛋白酶的固定化研究》一文中研究指出本研究由吉林省科技发展计划项目（2013010267JC）——“酶固定化中活性中心的构象保护及其在玉米肽制备中的应用研究”课题资助。以提高胰蛋白酶固定化性能为目的，针对目前的胰蛋白酶固定化技术所存在的缺陷，提出了“锁闭-固定化-激活”的固定化酶战略技术，来减少或避免固定化过程中胰蛋白酶活性构象的损伤。实验以胰蛋白酶的固定化为研究载体，选取抑肽酶、KTI和BBI叁种生物抑制剂为锁闭因子，借助荧光猝灭法、同步荧光光谱法、紫外光谱法、CD圆二色谱法等研究手段，通过比较叁种锁闭因子与胰蛋白酶相互作用过程中对胰蛋白酶的猝灭效应、二级结构和活性的影响，筛选出表现优秀的抑制剂——抑肽酶作为锁闭因子进行固定化前胰蛋白酶活性中心的锁闭。选取APTES对SBA-15介孔材料进行氨基修饰，对锁闭的胰蛋白酶（锁闭酶）进行固定化。对固定化过程中的操作条件进行了优化，并探究了固定化锁闭酶的pH稳定性和温度稳定性。选取叁种不同的洗脱液作为激活剂对固定化之后的锁闭酶进行洗脱激活，探究了洗脱过程中的操作条件及洗脱后固定化胰蛋白酶的稳定性，以确保固定化酶的有效活性。（1）当酶和抑制剂的浓度比合适时，叁种抑制剂对胰蛋白酶的荧光猝灭效应都比较显着。对荧光猝灭Stern–Volmer曲线进行分析得出：叁种抑制剂与胰蛋白酶均以1:1的摩尔比结合成稳定的复合物，结合热力学参数的计算结果，可以知道，这种结合都是自发的。这就为以后的胰蛋白酶的锁闭及固定化之后的激活奠定了基础。（2）同步荧光和紫外光谱的结果均显示，抑肽酶对胰蛋白酶的抑制效果最显着。CD圆二色谱进一步分析了叁种抑制剂对胰蛋白酶二级结构的具体影响，得出总体影响抑肽酶影响最大，BBI次之，KTI最小。以BAEE为底物，测定叁种抑制剂对胰蛋白酶活性的影响。随着抑制剂浓度的增加，叁种抑制剂对胰蛋白酶活性的影响程度依次为：抑肽酶>BBI>KTI。抑制剂浓度较高时，反应时间对胰蛋白酶活性的抑制作用明显，其中，反应时间对胰蛋白酶与KTI的反应影响最为明显。综合比较得出，选取抑肽酶作为胰蛋白酶的锁闭因子。（3）以重蒸甲苯为溶剂，用APTES对SBA-15进行氨基改性，改性后介孔材料对锁闭的胰蛋白酶进行固定化。XRD、N2吸附脱附等温线法以及傅里叶红外光谱对氨基改性的SBA-15进行了表征。又利用傅里叶红外光谱对固定化的胰蛋白酶进行表征，结果显示胰蛋白酶被成功地固定在了氨基改性的SBA-15上。固定化操作条件的优化结果显示，固定化时间为3h，pH为8左右时，酶的固载量最高，达到619.854ug/mg。这些参数可以为固定化锁闭酶在实际操作中提供理论指导。（4）以洗脱液中的蛋白质含量以及抑肽酶的抑制剂活性为指标，优化了作为激活剂的洗脱液种类及洗脱流速对抑肽酶洗脱结果的影响。选取叁种不同的洗脱液作为洗脱剂激活固定化锁闭酶。（1）0.01M pH为3的HCl溶液；（2）0.1M pH7.5的硼酸缓冲液、0.25MpH4.5的醋酸铵-醋酸缓冲液以及0.5M pH1.5的醋酸钠-盐酸缓冲液；（3）1M NaCl、0.01M CaCl2和15%异丙醇的0.01M pH分别为5、4、3、2的HCl溶液。优化结果显示，第叁种洗脱液对抑肽酶的洗脱效果最好。且流速为1.5mL·min-1时洗脱的抑肽酶的抑制活力最高。锁闭的胰蛋白酶被氨基修饰的SBA-15固定化再激活之后，温度稳定性和pH稳定性不仅较游离酶有很大提高，相对于SBA-15直接固定化的胰蛋白酶，稳定性都有较大提高。(本文来源于《吉林大学》期刊2015-06-01）
固定化胰蛋白酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:以大肠杆菌表达的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂为原材料,研究其固定化方法及条件。方法:以0.2%聚乙烯醇-3%海藻酸钠溶液为载体,CaCl2为固定剂,用物理包埋法对荞麦胰蛋白酶抑制剂进行固定化;在CaCl2浓度、载体与抑制剂体积比以及固定化时间3个单因素基础上,利用响应面法对荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化的影响因素进行优化。结果:建立了响应面法优化固定荞麦胰蛋白酶抑制剂的模型,经优化后得到如下最佳固定化条件:CaCl2浓度为5.5%,载体与抑制剂体积比为1.6∶1,固定化时间为31 min。在此条件下实际测得固定化抑制剂抑制率为72.4%,而模型预测此条件下的抑制率为74.3%,实测值与理论值相差很小。结论:所建模型拟合程度较高,用该模型优化荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化的工艺条件参数准确可信,可为进一步开发胰蛋白酶的应用提供重要参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
固定化胰蛋白酶论文参考文献
[1].郑蒙蒙,韩颖,康经武.固定化胰蛋白酶整体小柱的制备及其用于微量蛋白质的快速酶解[J].色谱.2019
[2].李霞,栗安之,李晨.响应面法优化荞麦胰蛋白酶抑制剂固定化条件[J].生物技术通讯.2019
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[5].黄冬丽,何云富,何亚涛,丁功涛.片状载体固定化胰蛋白酶的研究[J].农产品加工.2018
[6].刘伟华.固定化胰蛋白酶的微波法高效制备及其性质研究[D].天津商业大学.2017
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[8].于海宁,张鹏,沈生荣,单伟光.肝素提取中膜分离回收固定化胰蛋白酶的工艺研究[J].浙江工业大学学报.2016
[9].牛红鑫,陆峻宇,李亚楠,王明玉,张横.壳聚糖固定化胰蛋白酶制备牡蛎肽的研究[J].河北渔业.2015
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