（邯郸市第一医院056001）
【摘要】目的：通过回顾性研究观察上皮细胞黏附分子(EP-CAM)在上皮性卵巢组织中的表达，探讨EP-CAM在上皮性卵巢癌组织中表达的临床意义。方法：运用免疫组织化学技术(S-P法)检测EP-CAM在20例正常卵巢组织、20例卵巢良性肿瘤和43例EOC组织中的表达08。分析EP-CAM在卵巢癌中的表达与卵巢癌患者临床病理特征以及预后的关系。结果：EP-CAM在卵巢恶性肿瘤组织、卵巢良性肿瘤组织、正常卵巢组织中的表达分别为79%，65%，40%，差异有统计学意义(P<0.05)。在EP-CAM表达组中，其在正常卵巢组织及卵巢良性组织中的过表达均为0，在恶性肿瘤组织中过表达率为56%，差异有统计学意义(P=0.001)。EP-CAM过表达与肿瘤分化、月经、CA125定量测定、CA125下降满意度、腹水量等指标均无关，其过表达与患者年龄（P=0.037）和分期（P=0.018）相关。EP-CAM阳性表达与不表达、弱阳性表达与过表达患者预后生存时间比较的同一性检验中，差异均有统计学意义，后者差异更显著。结论：EP-CAM可能参与上皮性卵巢癌的恶变过程。EP-CAM的过表达与卵巢癌的不良预后相关。EP-CAM在卵巢癌组织中的过表达对卵巢癌预后评估有指导作用。
【主题词】上皮性卵巢癌；EP-CAM；免疫组化；预后评估；过表达
本文回顾性研究观察我院自2009～2012年收治的83例患者样本，重点观察上皮细胞黏附分子(EP-CAM)在上皮性卵巢组织中的表达，探讨EP-CAM在上皮性卵巢癌组织中表达的临床意义，现报告如下。
1资料与方法
1.1临床资料83例的年龄为28～75岁，平均53岁。其中20例为正常样本；20例卵巢良性肿瘤组织，均来自于卵巢良性肿瘤行卵巢切除术患者，其中卵巢单纯囊肿2例，浆液性囊肿12例，粘液性囊肿6例；43例上皮性卵巢癌，其中浆液性癌32例，粘液性癌1例，子宫内膜样癌8例，透明细胞癌1例，混合性上皮癌1例，见表1。其中卵巢癌病人均为初治者，均进行了满意的肿瘤细胞减灭术。术后行正规化疗6～8疗程。收集所有的病理学样本制成蜡块储存并经病理学诊断。生存数据来源于医院相关记录及随访结果。
1.2EP-CAM的免疫组化检测
免疫组化的方法：参照试剂盒说明书进行。因子的表达由2名病理学专家利用光学显微镜独立的完成，组织玻片的读取是双盲的。
1.3实验材料和设备
1.3.1试剂小鼠抗人EP-CAM(Ab-1)单克隆抗体，小鼠抗人β-catenin(E-5)单克隆抗体，SP试剂盒，DAB(二氨基联苯胺)均购自美国NeoMarker公司。
1.3.2仪器脱水机(Citadel2000)，包埋机(Histocentrez)，切片机(AS-325)均为英国姗顿公司产品显微镜：日本，BHS(欧林巴司)。
1.4免疫组织化学染色(采用SP方法)
(1)经10%中性福尔马林固定的卵巢组织标本用自来水洗涤掉才留的固体剂成分，以75%、85%、95%及纯乙醇顺序梯度脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后进行修整，组织四周残留约1mm～2mm的石蜡边，切片厚约5um,载玻片用多聚赖氨酸处理，切片常规脱蜡水化；(2)浸入3%H2O210～15分钟(去除内源性过氧化物酶活性)；(3)蒸馏水清洗3次，0.1MPBS(PH=7.4)浸泡5分钟；(4)抗原修复水煮法，β-catenin:医用微波炉抗原热修复，98℃～99℃20分钟，自然冷却至室温；EP-CAM：切片经胰蛋白酶溶液(0.1%胰蛋白酶和0.1%氯化钙，PH=7.4)37℃消化20min；(5)0.1MPBS冲洗5分钟×3次，滴加正常山羊血清封闭，室温孵育15分钟倾去，勿洗；(6)滴加稀释的一抗(β-catenin，EP-CAM稀释浓度为1：100)，湿盒内4℃冰箱内过夜；(7)磷酸盐缓冲液(PBS)洗5分钟×3次；DAB显色；(8)滴加生物素标记的羊抗鼠二抗，37℃一小时；(9)0.1MPBS洗5分钟×3次；(10)显色：PBS4ml，DAB5g，H2O25ul，显示5分钟左右(以镜下适度为好)；(11)自来水洗5次；苏木精复染1分钟，水洗；1%盐酸酒精分化，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片剂封片；(12)实验中阳性对照用已知乳腺癌细胞系(MCF-7)组织切片做阳性标本对照，阴性对照以PBS替代一抗，以特异性膜棕褐色颗粒为阳性。
2.结果
2.1EP-CAM的表达情况
20例正常卵巢组织中，12例卵巢组织上皮细胞EP-CAM缺乏表达，8例弱表达，无过表达，表达率为40%。
2.2EP-CAM在不同期别卵巢恶性肿瘤中的表达
卵巢恶性肿瘤共43例，其中7例(16%)EP-CAM缺乏表达，36例可见EP-CAM表达(84%)。早期卵巢癌(Ⅰ-Ⅱ)12例，占28%,晚期卵巢癌(Ⅲ-Ⅳ)31例，占72%。其中过表达25例(58%)，比较Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期中EP-CAM的过表达率，其差异有统计学意义(P=0.018)。
2.3EP-CAM在不同年龄卵巢恶性肿瘤中的表达
在≤60岁年龄组与>60岁年龄组中比较EP-CAM的过表达率，差异有统计学意义(P=0.037)。
2.4EP-CAM在其他相关因素卵巢恶性肿瘤中的表达
在分化、月经、CA125定量测定、CA125下降满意度、腹水量等指标比较下，EP-CAM过表达率无明显差异。
3.讨论
EP-CAM参与了上皮性卵巢癌的恶性转化过程，其表达可增加疾病的进展并在卵巢癌侵袭、增殖、转移中发挥作用[1-2]。并且其过表达可作为上皮性卵巢癌预后不良的独立指标。EP-CAM抗原作为晚期卵巢癌的标记物，也是一个重要的抗肿瘤免疫抑制剂，这一发现将我们带入一个新的特殊免疫基础治疗的领域。
参考文献:
[1]GastlG,SpizzoG,ObristP,etal.EP-CAMoverexpressioninbreastcancerasapredictorofsurvival.Lancet,2000,356:1981-1982
[2]BalzarM,WinterMJ,DeBoerCJ,etal.Thebiologyofthe17IAantigen(Ep-cam)[J].MolMed,1999,77(10):699-712