导读:本文包含了经典株论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株,核酸扩增,标准物质
经典株论文文献综述
原霖,高旭年,董浩,陈亚娜,闫若潜[1](2018)在《猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株国家核酸标准物质的研制》一文中研究指出为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)美洲经典株国家核酸标准物质,将美洲经典株代表PRRSV VR2332接种Marc145细胞,出现细胞病变后,反复冻融并收集病毒液,并灭活分装。制备后进行均匀性评估、稳定性评估、数字PCR法定值和临床试用。结果表明制备的标准物质的定值为(2. 06±0. 31)×104copies/μL;样品均匀;-20℃稳定保存12个月以上、4℃稳定2个月以上。经全国标准物质管理委员会评审,该制备物达到了国家二级标准物质的要求,可以作为核酸扩增检测的PRRSV美洲经典株核酸标准物质。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2018年11期)
张媛媛[2](2018)在《一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株方法的建立与应用》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是 1987年首次在美国被确认,主要特征是仔猪发生呼吸道症状,母猪发生繁殖障碍,包括流产、产死胎和木乃伊胎。PRRS给养猪业造成了巨大的经济损失,被认为是世界上最重要的猪传染性疾病之一。该病病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)。根据抗原性差异,目前有两种公认的PRRSV基因型:以Lelystad virus(LV株)为代表的欧洲型和以ATCC VR-2332(VR株)毒株为代表的美洲型。我国于1996年由郭宝清等首次在爆发流产的胎儿中分离到PRRSV,2006年我国南方猪群爆发高致病性毒株(HP-PRRSV)。目前,我国防控PRRSV的主要措施仍是接种改良弱毒疫苗(MLV),疫苗的种类主要有JXA1-R、TJM-F92、Ingelvac。临床上,由于PRRSV高致病性株、经典株及疫苗株普遍存在,给病原学检测和诊断带来很大的困难。目前PRRSV检测方法主要有病原学、血清学和分子生物学诊断技术。其中病原学方法耗时费力;血清学方法特异性较低,容易出现交叉反应:分子生物学诊断技术敏感性和特异性较强,但不能同时检测和区分多种PRRSV毒株。因此,本研究主要是建立一种快速灵敏、可同时检测并区分我国5种常见PRRSV毒株的方法,并且成功地应用于我国养殖场、屠宰场PRRSV的检测。一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性毒株、经典株和疫苗株方法的建立本研究主要是基于Nsp2基因,设计特异性引物和探针,建立一种一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株的方法(PCR产物197 bp)。应用本研究建立的方法对PRRSV病毒株制备的标准品进行检测,表明其灵敏度达到单拷贝/反应体系。此外,本试验选择高致病性株(HP-BB)和疫苗株(JXA1-R),稀释成不同浓度与SPF猪的血液样品混合,进行Spiking试验验证该方法灵敏度,结果表明,本研究所建立的一步反转录FRET-qPCR方法具有高灵敏度。通过对5种PRRSV毒株的熔解曲线进行分析发现PRRSV毒之间Tm值存在差异,具体可以分为5组,说明该方法具有高特异性。综上所述,本研究建立的方法具有高灵敏度、高特异性可同时检测和区分出我国5种常见PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株。一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性毒株、经典株和疫苗株方法的应用应用本研究所建立的一步反转录FRET-qPCR方法进行PRRSV的检测和鉴定,研究表明,来自中国10个省的健康猪群的血液样品、肺、眼结膜、鼻腔及粪便拭子中PRRSV的总阳性率为3.3%(28/846),在5个省份7个地区的临床样品中检测到阳性PRRSV,其中肺的阳性最高。疫苗株和高致病性株阳性率高,且同时存在疫苗株与野毒株混合感染。综上所述,本研究建立了基于Nsp2基因,建立了快速、灵敏、特异的一步反转录FRET-qPCR方法,每个PCR系统可以检测到单拷贝的Nsp2基因,可以在单一的PCR系统中检测该5种PRRSV毒株,通过溶解曲线中Tm值的差异区分5种PRRSV,分为5组。应用该方法对我国10个省份地区的养殖场健康猪群的临床样品进行检测的结果表明,疫苗株和高致病性株阳性率高,且同时存在疫苗株与野毒株混合感染,为临床PRRS的监测和防控提供重要参考和技术支撑。(本文来源于《扬州大学》期刊2018-04-01)
刘向楠,饶丹,丛锋,练月晓,曾繁文[3](2018)在《猪流行性腹泻病毒经典株与变异株高分辨率熔解曲线方法的建立》一文中研究指出为了建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株与变异株的高分辨率溶解曲线方法,基于PEDV经典株与变异株在S基因上序列的差异设计1对PCR引物用于RT-PCR扩增,扩增产物通过高分辨率熔解曲线(HRM)分析,建立鉴别PEDV经典株与变异株的PCR-HRM分析方法。通过此方法检测了10份临床样品,PCR-HRM结果表明,4份为PEDV经典毒株,6份为PEDV变异毒株。该方法特异性好,灵敏度高,PCR后无需开盖分析,避免了污染问题,是一种新型的鉴别检测方法。(本文来源于《动物医学进展》期刊2018年03期)
刘正飞,王昕,宋先荣,胡睿铭,陈焕春[4](2017)在《伪狂犬病毒经典株与变异株的遗传与变异分析比较》一文中研究指出引言自2011年年底,伪狂犬病在我国北方猪场再次出现,并迅速扩大蔓延,Bartha疫苗对这些新毒株不能够提供有效保护。由于具有高致病性和不同的遗传分化特点,这些新毒株也被称为变异株。作为双链DNA病毒,PRV变异株如何进化而来值得深入研究。材料与方法通过空斑大小试验、一步法增殖曲线、全基因组序列及蛋白组比较对PRV经典株Ea、变异株HNX和疫苗株Bartha进行了分析,探索PRV的进化和变异过程。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集》期刊2017-08-20)
付祖权[5](2017)在《伪狂犬病毒变异株与经典株滴鼻感染小鼠后时空分布规律的研究》一文中研究指出近年来,伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)变异株的出现导致原有病毒疫苗的保护力下降,国内猪场伪狂犬病不断爆发,对养猪业造成了巨大的经济损失。本研究以PRV变异株(LY-2015)与经典株(Halv)为研究对象,滴鼻感染成年健康昆明鼠。通过免疫组织化学染色、原位杂交染色、PCR技术结合组织病理学技术,研究病毒在小鼠脑内的分布。同时通过不同时间点小鼠脑内病毒的分布差异分析PRV滴鼻感染小鼠后的上行传导通路,以填补变异株PRV感染小鼠后病毒在脑内分布相关研究的空白,并为临床上PRV的诊断与精确的阻断病毒传播提供基础资料。论文主要研究内容如下:1病毒感染小鼠后的临床症状在2,000TCID50的LY-2015株PRV感染组,小鼠在病毒感染48h后开始出现被毛粗乱、食欲不振;在病毒感染60h后,小鼠表现出精神振奋,抓挠头面部皮肤;病毒感染84h后,多数小鼠因瘙痒抓挠致皮肤破溃,小鼠死亡。用相同感染量的Halv株PRV滴鼻感染小鼠时,未见任何临床症状。在10,000TCID50的Halv株PRV感染组,小鼠在病毒感染72h后开始出现与LY-2015株PRV感染组相似的临床症状;在病毒感染96h后,大量小鼠死亡。结果表明LY-2015株PRV毒力较Halv株PRV强。2病毒感染后的上行传导通路LY-2015株PRV感染小鼠后,病毒首先出现在鼻黏膜下层细胞内,然后在叁叉神经相关神经核团、交感神经相关神经核团、面神经相关神经核团内均检测到PRV。表明变异病毒LY-2015株PRV滴鼻感染小鼠后可沿叁叉神经、交感神经与面神经通路上行传导,致中枢感染。Halv株PRV滴鼻感染小鼠后,在叁叉神经相关核团、交感神经相关核团、副交感神经相关核团与面神经相关核团内检测到PRV。说明经典病毒Halv株PRV滴鼻感染小鼠后可沿叁叉神经、交感神经、副交感神经和面神经上行传导。3病毒感染小鼠后在脑内的分布2,000TCID50的LY-2015株PRV感染小鼠后,病毒多分布于脊髓,脑桥和延髓,大脑内仅在丘脑可见少量病毒。在病毒感染84h后,小鼠脑内的病毒分布最为广泛。10,000TCID50的Halv株PRV感染组,病毒不仅分布于脊髓、脑桥和延髓,大脑中也存在多量病毒。病毒感染小鼠96h后在脑内的分布最为广泛。结果表明,经典病毒Halv株PRV感染小鼠后沿轴突上行传导较变异病毒LY-2015株PRV慢;且LY-2015株PRV的毒力较强,小鼠在病毒感染后过早死亡,仅少量病毒传导至中枢,分布于下丘脑外侧部、丘脑下中间核腹侧部等。此外,在2,000TCID50的LY-2015株PRV感染组,小鼠在病毒感染后120h,IHC染色呈PRV阴性,但ISH染色呈PRV阳性,结果表明小鼠脑内存在病毒基因,但病毒未复制。结果表明,感染PRV后,耐过小鼠呈隐性感染,病毒基因整合于小鼠外周神经细胞核内,但不复制产生新的病毒病毒粒子。以上结果表明,LY-2015株PRV毒力强于Halv株PRV;Halv株PRV只有在高病毒滴度下才能造成小鼠的有效感染。滴鼻感染昆明鼠造成有效感染时,变异病毒LY-2015株PRV感染小鼠后沿叁叉神经、交感神经与面神经上行传导,但病毒粒子多分布于延髓和脑桥;经典病毒Halv株PRV感染小鼠后可沿叁叉神经、交感神经、副交感神经与面神经上行传导,在小鼠脊髓、脑桥、延髓和大脑中均存在多量的病毒分布。在有效感染中耐过小鼠呈潜伏性感染,不表现出任何临床症状,病毒基因整合到小鼠外周神经细胞核中,但不复制。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01)
朱小甫,吴旭锦[6](2016)在《PRRSV经典株和变异株RT-nPCR鉴别诊断方法的建立》一文中研究指出【目的】建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测,达到快速诊断的目的。【方法】根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列,设计并合成了2对引物,通过改变不同的反应体系和反应条件,建立PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,并通过灵敏性试验、特异性试验、病料组织和血清或精液样品检测,验证建立RT-nPCR方法的适用性。【结果】建立了PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法,该方法检测的cDNA含量极限为1.3×10-7 pg/μL;且仅能从PRRSV毒株中扩增到目的条带,从CH-1R经典株扩增出649bp条带,从SXXY/2013变异株扩增出562bp条带,电泳后能清晰区别,而从其他参考毒株中均不能扩增出目的条带。从48份疑似病料组织和血清中能直接检测出31份阳性结果。【结论】建立了一种灵敏度高、特异性好、可直接从病料组织和血清中快速鉴别PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR方法。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2016年01期)
闵智宇[7](2015)在《原核表达PEDV经典株和流行株S基因N端片段的抗原性比较及单克隆抗体制备》一文中研究指出猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由绪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪的一种急性、高度接触性肠道传染病,临床上以腹泻、呕吐、脱水为主要特征。PEDV表面的纤突蛋白(S蛋白)是病毒的主要结构蛋白之一,在病毒侵入宿主和诱导机体产生中和抗体的过程中起到重要作用。国内外PEDV S基因的遗传进化分析显示,相比于经典毒株(CV777),近年的流行毒株S基因5'端发生了明显的插入和缺失。本研究针对PEDV经典株和流行株开展S蛋白N段片段免疫反应性差异研究,以期为PEDV的遗传变异分析、鉴别诊断及免疫保护机制研究提供参考依据。选取PEDV经典株CV777和流行株NB2011株S基因5'端差异较大的区段(CV777-S661,NB-S673)进行 RT-PCR 扩增,克隆至 pET-28a 载体并转化E.coli BL21菌株进行表达,分别获得S661和S673重组蛋白。Western blotting结果表明S661和S673表达蛋白均能与猪PEDV阳性血清发生特异性反应,且不与猪PEDV阴性血清反应。说明表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白为免疫原制备鼠多抗血清,对两种重组蛋白进行交叉Dot-ELISA试验。结果显示抗S661多抗血清对S661和S673蛋白的可见反应最低蛋白浓度分别为31.25μg/ml和125μg/ml,抗S673多抗血清对二种蛋白的可见反应最低蛋白浓度均为62.5μg/ml。分别制备了抗S673和抗S661的单克隆抗体,共获得4株分泌抗S673单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D7、2E11、3G9、4G5;2株分泌抗S661单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4A12、5G8。抗体亚型鉴定结果表明,3G9、5G8和4A12为IgGl型,1D7和2E11为IgG2a型,4G5为IgG2b型。抗体迭加ELISA试验表明,1D7、2E11、3G9、4G5所识别的抗原位点相同或相似,4A12、5G8所识别的抗原位点也没有差异。交叉Western-blot结果表明,抗S673和抗S661的单克隆抗体均能与相应重组蛋白发生特异性反应,且不与另一毒株蛋白发生反应。IFA结果显示,抗S673和S661的单克隆抗体均能与CV777感染的Vero细胞产生特异性免疫荧光。以上结果说明,PEDV经典株和流行株S蛋白N端片段存抗原性差异。(本文来源于《南京农业大学》期刊2015-06-01)
王宇菲,陈超阳,王鑫,夏铭崎,武华[8](2015)在《猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病性株与疫苗株TJM-F92RT-PCR鉴别方法的建立》一文中研究指出根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株(LP-PRRSV CH-1a)、高致病性株(HPPRRSV TJ)及疫苗株(HP-PRRSV TJM-F92)的Nsp2基因核苷酸序列,设计2对特异性引物1st和2nd,建立鉴别LP-PRRSV、HP-PRRSV与HP-PRRSV TJM-F92的RT-PCR检测方法。用引物1st对LPPRRSV、HP-PRRSV与HP-PRRSV TJM-F92进行RT-PCR扩增,分别扩增587、497和497 bp的特异性片段;用引物2nd对HP-PRRSV与HP-PRRSV TJM-F92进行RT-PCR扩增,分别扩增1 004和644 bp的特异性片段,结合两步RT-PCR扩增结果可达到区分3者的目的;对RT-PCR的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果表明,建立的RT-PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于LP-PRRSV、HP-PRRSV与HP-PRRSV TJM-F92的鉴别诊断。(本文来源于《畜牧与饲料科学》期刊2015年02期)
施开创,官家明,胡杰,李凤梅,莫胜兰[9](2014)在《同时检测PRRSV美洲型经典株、变异株和TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及应用》一文中研究指出为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、变异株及弱毒活疫苗TJM-F92株的基因序列差异,设计了2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分PRRSV美洲型经典株、变异株及TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,与猪其他常见病毒无交叉反应;经典株、变异株、TJM-F92疫苗株重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL,比常规PCR敏感100倍;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5%。此外,该方法对324份疑似PPRSV感染的临床样品进行检测,结果显示PRRSV阳性114份,其中美洲型变异株105份、经典株6份、TJM-F92疫苗株3份,变异株和经典株混合感染4份。本研究建立的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可以为PRRSV美洲型野毒株、疫苗株的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2014年06期)
俞建萍,翁燕梅,刘昌林[10](2013)在《PRRSV经典株与变异株RT-PCR鉴别方法的建立及应用》一文中研究指出根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2基因的缺失信息,设计了3条特异性引物。通过对PCR体系、温度及循环次数等条件进行优化,建立了一种能够鉴别诊断高致性PRRSV和经典PRRSV的RT-PCR方法。应用此RT-PCR方法,对来自江西周边地区的283份临床病料进行检测,204份结果为PRRSV阳性,阳性率72.08%。单纯PRRSV变异株感染163份(163/283),占57.60%;PRRSV经典株与PRRSV变异株混合感染39份(39/283),占13.18%;单纯PRRSV经典株感染仅为2份(2/283),仅占0.71%。由此说明目前主要流行的还是高致病性PRRSV,PRRSV变异株阳性率很高,可能与该病毒在猪群中的持续感染特性有关。(本文来源于《福建畜牧兽医》期刊2013年06期)
经典株论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是 1987年首次在美国被确认,主要特征是仔猪发生呼吸道症状,母猪发生繁殖障碍,包括流产、产死胎和木乃伊胎。PRRS给养猪业造成了巨大的经济损失,被认为是世界上最重要的猪传染性疾病之一。该病病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)。根据抗原性差异,目前有两种公认的PRRSV基因型:以Lelystad virus(LV株)为代表的欧洲型和以ATCC VR-2332(VR株)毒株为代表的美洲型。我国于1996年由郭宝清等首次在爆发流产的胎儿中分离到PRRSV,2006年我国南方猪群爆发高致病性毒株(HP-PRRSV)。目前,我国防控PRRSV的主要措施仍是接种改良弱毒疫苗(MLV),疫苗的种类主要有JXA1-R、TJM-F92、Ingelvac。临床上,由于PRRSV高致病性株、经典株及疫苗株普遍存在,给病原学检测和诊断带来很大的困难。目前PRRSV检测方法主要有病原学、血清学和分子生物学诊断技术。其中病原学方法耗时费力;血清学方法特异性较低,容易出现交叉反应:分子生物学诊断技术敏感性和特异性较强,但不能同时检测和区分多种PRRSV毒株。因此,本研究主要是建立一种快速灵敏、可同时检测并区分我国5种常见PRRSV毒株的方法,并且成功地应用于我国养殖场、屠宰场PRRSV的检测。一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性毒株、经典株和疫苗株方法的建立本研究主要是基于Nsp2基因,设计特异性引物和探针,建立一种一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株的方法(PCR产物197 bp)。应用本研究建立的方法对PRRSV病毒株制备的标准品进行检测,表明其灵敏度达到单拷贝/反应体系。此外,本试验选择高致病性株(HP-BB)和疫苗株(JXA1-R),稀释成不同浓度与SPF猪的血液样品混合,进行Spiking试验验证该方法灵敏度,结果表明,本研究所建立的一步反转录FRET-qPCR方法具有高灵敏度。通过对5种PRRSV毒株的熔解曲线进行分析发现PRRSV毒之间Tm值存在差异,具体可以分为5组,说明该方法具有高特异性。综上所述,本研究建立的方法具有高灵敏度、高特异性可同时检测和区分出我国5种常见PRRSV高致病性株、经典株和疫苗株。一步反转录FRET-qPCR检测和区分PRRSV高致病性毒株、经典株和疫苗株方法的应用应用本研究所建立的一步反转录FRET-qPCR方法进行PRRSV的检测和鉴定,研究表明,来自中国10个省的健康猪群的血液样品、肺、眼结膜、鼻腔及粪便拭子中PRRSV的总阳性率为3.3%(28/846),在5个省份7个地区的临床样品中检测到阳性PRRSV,其中肺的阳性最高。疫苗株和高致病性株阳性率高,且同时存在疫苗株与野毒株混合感染。综上所述,本研究建立了基于Nsp2基因,建立了快速、灵敏、特异的一步反转录FRET-qPCR方法,每个PCR系统可以检测到单拷贝的Nsp2基因,可以在单一的PCR系统中检测该5种PRRSV毒株,通过溶解曲线中Tm值的差异区分5种PRRSV,分为5组。应用该方法对我国10个省份地区的养殖场健康猪群的临床样品进行检测的结果表明,疫苗株和高致病性株阳性率高,且同时存在疫苗株与野毒株混合感染,为临床PRRS的监测和防控提供重要参考和技术支撑。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
经典株论文参考文献
[1].原霖,高旭年,董浩,陈亚娜,闫若潜.猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株国家核酸标准物质的研制[J].畜牧与兽医.2018
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[4].刘正飞,王昕,宋先荣,胡睿铭,陈焕春.伪狂犬病毒经典株与变异株的遗传与变异分析比较[C].中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会论文集.2017
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[9].施开创,官家明,胡杰,李凤梅,莫胜兰.同时检测PRRSV美洲型经典株、变异株和TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及应用[J].中国预防兽医学报.2014
[10].俞建萍,翁燕梅,刘昌林.PRRSV经典株与变异株RT-PCR鉴别方法的建立及应用[J].福建畜牧兽医.2013
标签:猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株; 核酸扩增; 标准物质;