吉林省现代中药工程研究中心有限公司吉林长春130000
【摘要】目的：对伤湿祛痛膏进行质量标准提升研究，以提高产品质量标准，保证产品质量。方法：气相色谱条件：聚乙二醇20000（PEG-20M）毛细管柱（柱长为30m，柱内径为0.25mm，膜厚度为0.25um），柱温130℃，检测器250℃，载气流速4.0，分流比30:1。结果冰片、樟脑、薄荷脑和水杨酸甲酯峰形良好，专属性强；液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（78:22）为流动相，流速1.0ml/min，检测波长300nm。结果：水杨酸甲酯在0.4548-2.274ug范围内线性良好，平均回收率为103.03%，RSD为1.59%。结论：该方法准确、灵敏、重现性好，专属性强，操作简单，可作为伤湿祛痛膏质量标准提升的依据。
【关键词】伤湿祛痛膏；冰片；樟脑；薄荷脑；水杨酸甲酯
【Abstract】Objectivetoselectshangshiqutongplasterborneol,camphor,mentholandmethylsalicylatequalityevaluationindex,inordertoimprovethequalitystandardofshangshiqutongplaster,toensurethequalityoftheproducts.Methodsgaschromatographyconditions:polyethyleneglycol20000(PEG-20M)capillarycolumn(columnlengthis30m,thediameterofthecolumnis0.25mm,thefilmthicknessis0.25um),thecolumntemperatureis130degreesCelsius,thedetector250degreesC,thecarriergasflowrate4,thesplitratio30:1.Resultsborneol,camphor,mentholandmethylsalicylateingoodshape,strongspecificity;liquidchromatographicconditions:withOctadecylsilanebondsilicagelasafiller,withmethanolwater(78:22)asmobilephase,ataflowrateof1.0ml/min.Thedetectionwavelengthof300nm.Resultstherelationshipbetweenthe0.4548-2.274ugandtherangewasgood,theaveragerecoveryratewas103.03%,andtheRSDwas1.59%.Conclusionthemethodisaccurate,sensitive,reproducible,strongspecificity,simpleoperation,astoenhanceshangshiqutongplasterqualitystandardbasis.
【KeyWords】Shangshiqutongplaster;Borneol;camphor;menthol;methylsalicylate
【中图分类号】R283【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-2-018-04
伤湿祛痛膏由生川乌、草乌、当归、冰片、水杨酸甲酯等组成，经药材提取、加工后而制成的外用橡胶膏剂，具有祛风湿、止痛的功效，主要用于头痛，风湿痛，神经痛，扭伤及肌肉酸痛等症。原标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第十册，标准编号：（WS3-B-1534-93），原质量标准中仅有性状、鉴别和检查项，没有含量测定项，所以产品质量可控性较差，为确保产品质量，本文对其进行了质量标准提升研究。
1仪器与试药
1.1仪器：HH-2数显水浴锅、GC1120气相色谱仪（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）、GA-2000A低噪音空气泵；GH-300高纯氢发生器；JQ-1气体净化器；戴安Uitimate3000型高效液相色谱仪；戴安Uitimate3000紫外检测器；美国安捷伦1260型液相色谱仪；美国安捷伦1260紫外检测器（DAD）；RIGOLL-3000液相色谱仪，RIGOLL-3500紫外检测器；MS-METTLERTOLEDO（梅特勒仪器有限公司）。
1.2试剂：乙酸乙酯
冰片对照品（批号：111688-200501）、薄荷脑对照品（批号：110728-200506）、樟脑对照品(批号：747-200106)、水杨酸甲酯对照品（批号110707-201413）、水杨酸甲酯对照品（批号110707-201413）购自中国食品药品检定研究院。
1.3试验材料：伤湿止痛膏由修正药业集团提供样品，批号为150401、150402、150403。
2方法与结果
2.1冰片、樟脑、薄荷、水杨酸甲酯气相色谱鉴别[1]
2.1.1色谱条件：聚乙二醇20000（PEG-20M）毛细管柱（柱长为30m，柱内径为0.25mm，膜厚度为0.25um），柱温130℃，检测器250℃，载气流速4.0，分流比30:1。
2.1.2对照品溶液的制备：取冰片对照品、薄荷脑对照片、樟脑对照品及水杨酸甲酯对照片适量，加乙酸乙酯制成每1ml含冰片、薄荷脑各10mg，樟脑6mg，水杨酸甲酯5mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3供试品溶液的制备：取本品5片，剪成小块，除去盖衬，置圆底烧瓶中，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录XD）试验，连接挥发油测定器，自测定器上端加蒸馏水400ml使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，加乙酸乙酯5ml至测定器中，加热回流2小时，冷却，分取乙酸乙酯层于10ml容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，混匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2ul，注入气相色谱仪。
2.1.4色谱条件耐用性试验：分别考察色谱条件即检测器温度的变化±5℃、柱温变化±5℃、载气流速变化±0.2，分流比20:1和30:1，试验结果见下表1。
表1耐用性试验结果
图1樟脑对照品
图4水杨酸甲酯对照品
图6阴性样品
2.2水杨酸甲酯含量测定[2-4]
2.2.1色谱条件与系统适用性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（78:22）为流动相；检测波长300nm，流速1.0ml/min，理论板数按水杨酸甲酯(C8H8O3)峰计算应不低于8000。
2.2.2对照片溶液的制备：取水杨酸甲酯对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。
2.2.3供试品溶液的制备：取本品2片，剪成小块，除去衬盖，置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录XD）试验，自测定器上端加蒸馏水200ml使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，精密吸取5ml乙酸乙酯至测定器中，加热回流2小时，冷却，分取乙酸乙酯层至100ml容量瓶中，用少量乙酸乙酯洗涤测定器数次，洗液并入容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，混匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.2.4标准曲线的制备：精密称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成浓度为0.2274mg/ml的对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标(Y)，以水杨酸甲酯进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线，得Y=27.39X+0.004，R2=0.9999，试验结果表明:水杨酸甲酯在0.4548～2.274μg范围内呈良好的线性关系。结果见表2，附图7。
图7水杨酸甲酯标准曲线
2.2.5专属性试验：按处方比例制备缺水杨酸甲酯的阴性样品，照供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，按含量测定项下色谱条件，分别吸取水杨酸甲酯对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液和溶剂各5ul注入液相色谱仪，记录色谱图。结果阴性对照样品的色谱图中，在水杨酸甲酯吸收峰保留时间的相应位置上，无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强，结果见附图8-11。
图10伤湿祛痛膏样品-DAD图
图11阴性-DAD图
2.2.6精密度试验：取供试品溶液，在相同液相条件下，连续进样6次，记录峰面积，以供试品溶液中水杨酸甲酯吸收峰面积的变化，考察仪器精密度，结果表明：该仪器精密度良好。见表3：
表3精密度试验结果
2.2.8中间精密度试验：取本品（批号：150401），由不同人员、不同时间、使用不同高效液相色谱仪，按含量测定项下方法操作，测定水杨酸甲酯含量。试验结果表明：＝12.4745RSD＝2.49%该方法中间精密度良好。见表5。
表5中间精密度试验结果
2.2.10回收率试验：取已知含量样品（批号：150401批，含水杨酸甲酯13.0788/片）1片，共6份，分别置于圆底烧瓶中，分别精密加入对照品溶液（浓度为13.1892mg/ml）1ml，连接挥发油测定器，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录XD）试验，自测定器上端加蒸馏水200ml使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，精密吸取5ml乙酸乙酯至测定器中，加热回流2小时，冷却，分取乙酸乙酯层至100ml容量瓶中，用少量乙酸乙酯清洗测定器，洗液并入容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，混匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。试验结果表明：供试品中水杨酸甲酯的平均回收率为103.03%，RSD＝1.59%，此方法准确可行。见表7。
表7回收率试验结果
2.2.11耐用性试验
分别考察色谱条件检测波长的变化±2nm、柱温变化±5℃、流动相比例的变化±2，流速变化±0.2，不同色谱柱，每个条件下各测试两次，结论：在上述试验条件变化时，色谱图中水杨酸甲酯与其它杂质峰的分离度均符合规定，RSD%值为2.65%。试验结果表明当色谱条件有小的变动时，对测定结果的影响不大，故本方法有很好的耐用性。见下表8。
3结果与讨论
3.1伤湿祛痛膏由9味中药经提取后和4种化药混合制成，原标准中只有一个中药--当归的薄层鉴别，没有含量测定项。众所周知，挥发性成分是伤湿祛痛膏主要止痛消炎的有效成分，所以选定冰片、樟脑、薄荷脑及水杨酸甲酯作为评价伤湿祛痛膏的质量提升的检测指标。
3.2采用气相色谱法对冰片、樟脑、薄荷脑及水杨酸甲酯进行定性鉴别，与常规的薄层鉴别相比优势明显，该方法操作简单，节约时间，且专属性强；采用高效液相色谱法对水杨酸甲酯进行含量测定，与常规气相色谱法测定相比，无需校正因子，操作简单、成本低、时间短，专属性强，准确度高。
3.3在供试品的制备过程中，刘翔[5]等采用无水硫酸钠的漏斗滤过，以得到无水的乙酸乙酯层提取液。本文将两种方法进行对比后，发现用无水硫酸钠过滤得到的样品含量较本法低约30%，原因与成分的易挥发性以及不可避免的过滤损失有关。而本文采用长吸管从上自下吸取乙酸乙酯层，操作简便、快速、含量高，重现性好。
3.4本文对伤湿祛痛膏进行质量标准提升，建立用气相色谱法进行定性鉴别，用高效液相色谱法进行水杨酸甲酯含量测定，方法灵敏、准确、重现性好。可作为伤湿祛痛膏的质量标准提升的参考依据，以提高产品质量水平。
参考文献
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[3]李玮玲，邱娟.HPLC法测定复方水杨酸甲酯搽剂的含量[J].广东药学院学报，2007，23（5）：533-535.
[4]游佳清,余新启.麝香壮骨膏中樟脑和水杨酸甲酯含量的测定[J].黄石理工学院学报，2006，22（1）：12-144.
[5]刘翔，孙飞.气相法测定麝香壮骨膏中樟脑、薄荷脑、冰片、水杨酸甲酯含量[J].中成药，2009，31(2):231-234.
作者简介：
王孝方，女，1986年生，本科毕业于吉林农业大学中药学专业，硕士毕业于长春中医药大学中药制剂方向。现工作于吉林修正药业子公司-吉林省现代中药工程研究中心有限公司，就职研发员，从事中药及保健品研发方向。