导读:本文包含了原代大鼠肺泡型上皮细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Ⅰ型肺泡上皮细胞,原代培养,鉴定
原代大鼠肺泡型上皮细胞论文文献综述
蒋玲,胡远东,徐菲菲,王廷华[1]（2017）在《新生大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞原代培养方法的改进》一文中研究指出目的改进体外SD大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial typeⅠ,ATⅠ)的原代培养方法,用更为简单的培养方法获得较高纯度的ATⅠ。方法选用新生1d的SD大鼠,消毒后待新生大鼠呼吸停止后断头取肺,采用胶原酶Ⅰ和DNaseⅠ消化分离法获取原代细胞,将细胞接种在Ⅰ型鼠尾胶原蛋白包被过的细胞板中,利用差速贴壁法纯化ATⅠ,同时细胞培养48h后进行换液,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,用细胞水通道蛋白5(AQP5)、肺表面活性物质相关蛋白(SPC)、植物凝集素(BSI)、波形蛋白(Vimentin)4种肺细胞的特异性表达产物鉴定细胞。结果接种2d时,细胞开始贴壁生长。4~6d时细胞开始增殖,呈现梭形、立方形、多角形等多种形态。8d时细胞增殖能力达到最大,细胞活力为(87±8)%,细胞纯度为(87±5)%。结论对组织取材、分离和培养进行改进可获得产量高、生长状态好、纯度高的ATⅠ。(本文来源于《四川大学学报(医学版)》期刊2017年02期）
严玉玲,周园红,叶红[2]（2016）在《构建一种分离培养原代小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞改良方法》一文中研究指出目的建立可靠稳定的小鼠肺泡Ⅱ上皮细胞(AECⅡ)的分离、原代培养技术,为进一步研究AECⅡ转分化分泌生长转化因子β1(TGF-β1)等物质与乳腺癌休眠细胞激活的相关机制奠定基础。方法采用传统的方法和改良后方法分别提取20只小鼠AECⅡ,将其所提取的细胞数量进行对比。结果传统组小鼠可获得(4.21±2.31)×106个,改良组小鼠可获得(13.0±2.20)×106个,差异有统计学意义(P<0.05),而两组小鼠在体质量、年龄以及肺组织重量方面比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论此改良方法可成功获得大量稳定的AECⅡ,为进一步研究AECⅡ转分化分泌TGF-β1等物质与乳腺癌休眠细胞激活的相关机制奠定基础。(本文来源于《海南医学》期刊2016年20期）
李勇[3]（2014）在《急性肺损伤微环境对大鼠原代Ⅰ型肺泡上皮细胞增殖、表型的影响》一文中研究指出肺脏是体内最为重要的生命器官之一，由于其特殊的解剖结构以及与外界相通的性质，容易受到各种损伤，在创伤时，特别是严重创伤，常伴发急性肺损伤(Acute lunginjury, ALI)。ALI，其病情严重阶段即ARDS。ALI后肺脏会启动修复过程，业已研究发现，多种类型的位于特殊微环境中的含量相对较少的细胞在损伤和修复过程中起到了非常重要的作用，包括外源性和内源性干/祖细胞。除干/祖细胞的可能性修复作用外，越来越多研究还显示，成熟的终末分化细胞在组织损伤后的修复中也可能发挥重要的作用。近年来，不少学者在多个器官组织内证实在一定条件下存在终末分化细胞的去分化现象。目前关于肺组织内是否也存在终末分化细胞的去分化现象，迄今尚未见文献报道。Ⅰ型肺泡上皮细胞(Alveolar type Ⅰ cell，ATⅠ)，是一种大而扁平的细胞，它覆盖了95%以上的肺泡表面积，是多种类型损伤的靶细胞，如呼吸机所致的肺损伤。传统观念认为，ATⅠ是“终末分化的细胞”，只有被动的屏障功能，没有主动的功能特性，其损伤后由Ⅱ型肺泡上皮细胞(Alveolar typeⅡcell，ATⅡ)分化补充。但近年的研究发现，ATⅠ可能具有多样的生物学功能，除了参与气血屏障的形成外，还能够转运水和离子，同时还有一定的免疫调节功能。然而，在损伤情况下ATⅠ的生物学行为会发生哪些改变以及能否发生去分化，目前尚未见文献报道。本研究在成功建立失血性休克复合内毒素损伤诱导的ALI动物模型和成功分离培养ATⅠ的基础上，利用ALI大鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)和肺组织匀浆液(Lung tissue homogenates，LTH)模拟ALI微环境，在体外观察损伤微环境对终末分化的ATⅠ增殖能力的影响以及表型相关标志物表达的影响，初步探究急性肺损伤条件下ATⅠ可能的修复作用。本研究主要发现如下：1.利用“中性蛋白酶消化+IgG贴壁法+免疫磁珠法”成功分离、培养高纯度的大鼠ATⅠs，该方法稳定、高效；2.培养所得细胞表达ATⅠs特异性标志物PDPN、AQP5、Cav-1，几乎不表达ATⅡ标志物pro-SPC，符合ATⅠ的特性；3.急性肺损伤微环境均有一定的促进原代AT Ⅰ s增殖的作用，其中，ALI-D3-BALF，ALI-D3、D5-LTH能够在体外明显刺激ATⅠs增殖；4.进一步用ALI-D3-LTH处理ATⅠs，通过检测肺泡细胞表型相关基因的表达情况，ATⅠ特异性标志物AQP5和RAGE基因表达有所降低，ATⅠ分化调控基因Klf2表达明显降低，发现SPC和Nkx2.1mRNA的表达水平明显升高，通过免疫荧光和蛋白质印记的方法确认了pro-SPC蛋白的表达。其机制可能是肺损伤微环境诱导细胞去分化的结果。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2014-05-01）
焦宗宪,程航远,张强弩,朱艳芳,王晨昱[4]（2012）在《大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代分离》一文中研究指出目的建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial cells typeⅡ,AECⅡ)分离、纯化、原代培养及鉴定的方法。方法用4.2U/ml的弹性蛋白酶通过气管插管注入肺泡内,消化分离AECⅡ。把细胞悬液接种到包被有大鼠IgG的塑料平皿中纯化细胞。用电镜、碱性磷酸酶显色法、改良巴氏染色法、单宁酸染色法、免疫组化染色法鉴定AECⅡ。结果细胞纯度达到90%以上,倒置显微镜下可见细胞呈岛屿状生长。电镜下可见细胞内有大量板层小体,包膜上有绒毛结构。碱性磷酸酶染色法(BCIP/NBT)可见胞浆内有蓝色颗粒。改良巴氏染色法、单宁酸染色法可见胞浆内有黑色颗粒。抗大鼠肺泡表面活性蛋白A(surfactant protein A,SP-A)免疫组化染色呈阳性反应。结论弹性蛋白酶作用温和,不损伤胞膜,分离所得细胞活力好;IgG免疫粘附纯化法操作简单,纯化效率高。电镜、BCIP/NBT、巴氏染色、单宁酸染色及免疫组化染色等鉴定方法稳定可靠,特异性高。(本文来源于《中国组织化学与细胞化学杂志》期刊2012年03期）
陈坤,邓世雄,刘芳君,李虹,蒋朴[5]（2011）在《小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、原代培养及鉴定》一文中研究指出目的:建立系统可靠的小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养、纯化及鉴定技术,为进一步研究肺纤维化及肺肿瘤等疾病的发病机制奠定基础.方法:应用低质量分数胰酶联合胶原酶的方法消化小鼠胎鼠肺组织块,经差速离心和差速贴壁的方法纯化肺泡Ⅱ型上皮,进行原代培养.用改良巴氏染色法和透射电镜观察对所分离的细胞进行鉴定.结果:每只胎鼠可获得(5±2)×106的细胞产量,细胞活力为95%±2%,纯度达到92%±2%,改良巴氏法镜下观察可见胞质内含较多深色颗粒,透射电镜观察到特征性的嗜锇小体即板层小体和细胞膜上有明显的微绒毛.结论:该方法能成功分离出小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,且产量大、纯度高,能满足体外研究的需要.(本文来源于《西南大学学报(自然科学版)》期刊2011年12期）
曾悦翔,徐道妙[6]（2011）在《大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代培养及鉴定》一文中研究指出目的建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolarepithelium typeⅡcells AEC-Ⅱ)体外培养方法,并对其特异性标志物进行鉴定。方法采用低浓度胰酶联合Ⅰ型胶原酶消化肺组织,分离出大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,经差速离心、免疫黏附纯化后,行AKP染色、SP-A免疫细胞化学鉴定和透射电子显微镜鉴定。结果每只大鼠经消化后可获得AEC-Ⅱ(8.0±0.3)×107个,经纯化后产量为(5.8±0.5)×107个,纯度为(89.0±3.1)%,细胞活力为(94.2±1.6)%。结论低浓度胰酶联合Ⅰ型胶原酶消化法可获得较高产量的AEC-Ⅱ,免疫黏附后细胞纯度较高,可满足一般的体外实验要求。(本文来源于《中华医学会第五次全国重症医学大会论文汇编》期刊2011-05-26）
钱明江,陈淼,高飞,吴燕,杨学忠[7]（2011）在《阿司匹林对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞抗氧化损伤研究》一文中研究指出目的观察阿司匹林对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolarepithelial typeII cell,AEC-Ⅱ)的保护效应,探讨其抗氧化损伤的机制。方法将原代分离纯化培养的成年大鼠AEC-Ⅱ分为生理盐水组(NS组)、过氧化氢损伤组(H_2O_2组)、阿司匹林预处理1、2、3组(A1～3组)。A1～3组分别加入阿司匹林50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L预处理。NS组在培养40小时(h)后加入生理盐水,H_2O_2损伤组和A1～3组在培养40h后加入0.5mmol/LH_2O_2。3h后观察细胞形态学变化、贴壁细胞计数、检测细胞存活率。同时另外比较在无H_2O_2干预情况下NS组、A1～3组在培养20h、40h、60h血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白及HO-1 mRNA在AEC-Ⅱ中的表达。结果 (1)胰蛋白酶消化、免疫粘附法可收获AEC-Ⅱ2～2.5×107个/鼠,纯度和活性>90%。(2)与NS组比较,H2O2组细胞间隙增宽,贴壁细胞数量减少,细胞皱缩,细胞存活率明显下降;与H2O_2组比较,A1～3组贴壁细胞数增多,细胞形态较完整,无明显细胞皱缩,A1～3组中细胞存活率明显增加(P<0.05)。(3)与NS组比较,A1～3组HO-1蛋白及HO-1mRNA表达量明显增加(P<0.05)。结论 (1)阿司匹林对离体培养氧化损伤的大鼠AEC-Ⅱ具有保护效应。(2)阿司匹林在离体培养的大鼠AEC-Ⅱ中,上调HO-1表达,HO-1可能是阿司匹林对离体培养大鼠氧化损伤的AEC-Ⅱ保护的重要调节因子。(本文来源于《中华医学会第五次全国重症医学大会论文汇编》期刊2011-05-26）
钱明江,陈淼,王洪敏,高飞,吴燕[8]（2011）在《阿司匹林对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞》一文中研究指出目的观察阿司匹林对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AlveolarepithelialtypeⅡcell,AEC-Ⅱ)的保护效应,探讨其抗氧化损伤的机制。方法将原代分离纯化培养的成年大鼠AEC-Ⅱ分为生理盐水组(NS组)、过氧化氢氧化损伤组(H_2O_2组)、阿司匹林预处理1、2组(A1～3组)。A1～3组分别加入阿司匹林50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L预处理。NS组在培养40小时(h)后加入生理盐水,H_2O_2损伤组、A1～3组在培养40h后加入0.5mmol/L H_2O_2,3h后观察细胞形态学变化及贴壁细胞计数,四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测细胞存活率。同时应用免疫组化及PCR法测定在无H_2O_2干预情况下NS组、A1～3组在培养20h、40h、60h血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白及HO-1 mRNA在AEC-Ⅱ中的表达。结果 (1)胰蛋白酶消化、免疫粘附法可收获AEC-Ⅱ2～2.5×107个/鼠,纯度和活性>90%。(2)与NS组比较,H_2O_2组细胞间隙增宽,贴壁细胞数量减少,细胞皱缩,细胞存活率明显下降;与H_2O_2组比较,A1～3组贴壁细胞数增多,细胞形态较完整,无明显细胞皱缩,A1～3组中细胞存活率明显增加(P<0.05)。(3)与NS组比较,A1～3组HO-1蛋白及HO-1mRNA表达量明显增加(P<0.05)。结论 (1)阿司匹林对离体培养氧化损伤的大鼠AEC-Ⅱ具有保护效应。(2)阿司匹林在离体培养的大鼠AEC-Ⅱ中,上调HO-1表达,HO-1可能是阿司匹林对离体培养大鼠氧化损伤的AEC-Ⅱ保护的重要调节因子。(本文来源于《中华医学会第五次全国重症医学大会论文汇编》期刊2011-05-26）
王洪敏[9]（2010）在《血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞抗氧化损伤的研究》一文中研究指出目的：研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell,AEC-Ⅱ)生长的直接影响,并探讨HO-1预处理对AEC-Ⅱ在过氧化氢(hygrogen peroxide,H2O2)造成氧化损伤中的作用。方法：免疫粘附法分离纯化SD大鼠AEC-Ⅱ,台盼蓝(trypan blue)拒染法鉴定细胞活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)法鉴定细胞纯度,倒置显微镜和电镜观察细胞的形态学和特征性结构。调节AEC-Ⅱ终浓度至1×106个／ml。①观察HO-1对原代培养AEC-Ⅱ生长的影响。细胞随机分为7组：A组(正常对照组)；B组(H2O2对照组,0.5mmol／L H2O2)；C组(0.01μmol／L HO-1)；D组(0.1μmol／L HO-1)；E组(1μmol／L HO-1)；F组(10μmol／L HO-1)；G组(50μmol／L HO-1)。②观察HO-1预处理对原代培养AEC-Ⅱ氧化损伤的影响。细胞随机分为6组：A组(正常对照组)；B组(H2O2对照组,0.5mmol／L H2O2),C组(0.01μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2)；D组(0.1μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2)；E组(1μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2)；F组(10μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2)。细胞分别接种于24孔、96孔培养板中,培养24h加入HO-1,26h加入H2O2。培养至29h进行细胞形态学观察、细胞计数和以四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)测定细胞光密度值(OD值)。结果：①免疫粘附法纯化建立AEC-Ⅱ原代培养的方法可收获细胞2～2.5×107个／鼠,活性和纯度均>90%；电镜下可见AEC-Ⅱ特征性结构-嗜锇性板层小体(lamellar body,Lb)。②培养AEC-Ⅱ至29h,H2O2对照组与正常对照组比较贴壁细胞数量减少,细胞体积减小,胞内可见反光增强的空泡,大量细胞脱壁,上清液中可见较多的细胞碎片。③0.01～50μmol／L HO-1各处理组与正常对照组比较细胞计数、OD值差异无统计学意义(P>0.05),细胞形态无明显改变；与H2O2对照组比较细胞计数、OD值差异有统计学意义(P<0.05)；④0.1～10μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2组与正常对照组比较细胞计数、OD值差异无统计学意义(P>0.05),细胞形态无明显改变；与H2O2对照组和0.01μmol／L HO-1预处理组比较细胞计数、OD值差异有统计学意义(P＜0.05)；0.01μmol／L HO-1预处理组与H2O2对照组比较细胞计数、OD值差异无统计学意义(P>0.05)。结论：①免疫粘附法纯化建立AEC-Ⅱ原代培养的方法可收获细胞2～2.5×107个／鼠,纯度和活性均>90%；H2O2造成的氧化损伤模型,细胞形态学改变明显,是一种较好的获得AEC-Ⅱ氧化损伤模型的方法；②0.01～50μmol/L HO-1对原代培养的AEC-Ⅱ没有直接的细胞学毒性；③经0.1～10μmol/L HO-1预处理的AEC-Ⅱ在H2O2氧化损伤环境中仍生长良好,提示此浓度的HO-1对离体原代培养大鼠AEC-Ⅱ氧化损伤起保护作用。(本文来源于《遵义医学院》期刊2010-05-01）
郑金旭,黄振杰,汤艳,丁明[10]（2010）在《构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型》一文中研究指出背景:肺泡Ⅱ型上皮细胞在肺发育和肺功能调节中起重要作用,它与肺纤维化和肺癌等疾病的发生发展有密切联系,为了对这些疾病进行体外实验研究,必须对肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、原代培养与鉴定以建立一个稳定高效的细胞模型。目的:建立一套可靠的小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化、原代培养与鉴定的方法,为肺纤维化及肺癌等疾病的进一步研究奠定基础。方法:①用低浓度胰酶联合Ⅰ型胶原酶消化法,分离小鼠肺组织细胞成分。取出小鼠肺组织,剪成小块,加入胰蛋白酶,移出细胞悬液,加入含胎牛血清的DMEM中止消化;同法用胰蛋白酶再消化1次,中止消化后加入Ⅰ型胶原酶,再中止消化。②经差速离心差速贴壁和免疫黏附法纯化肺泡Ⅱ型上皮细胞,进行原代培养。将肺细胞悬液接种入包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出含未黏附细胞的液体接种于另一包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出未黏附细胞,去上清,重悬沉淀,将细胞接种于培养皿和培养板中培养。倒置显微镜观察细胞形态及生长特点,测定肺泡Ⅱ型上皮细胞产量、纯度及活力,免疫细胞化学染色鉴定肺泡表面活性蛋白A和肺泡表面活性蛋白C的表达,透射电镜鉴定肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性细胞结构。结果与结论:用此方法,每只小鼠获得肺泡Ⅱ型上皮细胞(4.8±1.2)×106,纯度达到(85.0±2.4)%,细胞活力为(92.0±2.4)%,倒置显微镜下原代肺泡Ⅱ型上皮细胞呈圆形或立方形,细胞质内有大量反差明显的细小颗粒,细胞为岛状生长方式;免疫细胞化学鉴定,肺泡表面活性蛋白A呈棕黄色,肺泡表面活性蛋白C呈绿色,均定位表达于细胞浆;透射电镜见特征性板层小体和细胞游离面大量微绒毛。证实利用胰酶联合胶原酶消化,差速离心差速贴壁和免疫黏附纯化的方法可获得高产量高纯度的AECⅡ,能满足一般的体外实验要求。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2010年15期）
原代大鼠肺泡型上皮细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立可靠稳定的小鼠肺泡Ⅱ上皮细胞(AECⅡ)的分离、原代培养技术,为进一步研究AECⅡ转分化分泌生长转化因子β1(TGF-β1)等物质与乳腺癌休眠细胞激活的相关机制奠定基础。方法采用传统的方法和改良后方法分别提取20只小鼠AECⅡ,将其所提取的细胞数量进行对比。结果传统组小鼠可获得(4.21±2.31)×106个,改良组小鼠可获得(13.0±2.20)×106个,差异有统计学意义(P<0.05),而两组小鼠在体质量、年龄以及肺组织重量方面比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论此改良方法可成功获得大量稳定的AECⅡ,为进一步研究AECⅡ转分化分泌TGF-β1等物质与乳腺癌休眠细胞激活的相关机制奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原代大鼠肺泡型上皮细胞论文参考文献
[1].蒋玲,胡远东,徐菲菲,王廷华.新生大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞原代培养方法的改进[J].四川大学学报(医学版).2017
[2].严玉玲,周园红,叶红.构建一种分离培养原代小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞改良方法[J].海南医学.2016
[3].李勇.急性肺损伤微环境对大鼠原代Ⅰ型肺泡上皮细胞增殖、表型的影响[D].第叁军医大学.2014
[4].焦宗宪,程航远,张强弩,朱艳芳,王晨昱.大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代分离[J].中国组织化学与细胞化学杂志.2012
[5].陈坤,邓世雄,刘芳君,李虹,蒋朴.小鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、原代培养及鉴定[J].西南大学学报(自然科学版).2011
[6].曾悦翔,徐道妙.大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代培养及鉴定[C].中华医学会第五次全国重症医学大会论文汇编.2011
[7].钱明江,陈淼,高飞,吴燕,杨学忠.阿司匹林对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞抗氧化损伤研究[C].中华医学会第五次全国重症医学大会论文汇编.2011
[8].钱明江,陈淼,王洪敏,高飞,吴燕.阿司匹林对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞[C].中华医学会第五次全国重症医学大会论文汇编.2011
[9].王洪敏.血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞抗氧化损伤的研究[D].遵义医学院.2010
[10].郑金旭,黄振杰,汤艳,丁明.构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型[J].中国组织工程研究与临床康复.2010