导读:本文包含了纯化鉴定论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:骨质疏松症,Qβ病毒样颗粒,原核表达,蛋白纯化
纯化鉴定论文文献综述
张树东,周建,田壮,刘长振,姚琦[1]（2019）在《骨质疏松疫苗载体:Qβ病毒样颗粒的表达、鉴定和纯化》一文中研究指出目的优化表达和纯化方式,制备出具有正确空间结构且纯度和产量较高的骨质疏松疫苗载体Qβ病毒样颗粒(Qβvirus-like particles,Qβ-VLPs)。方法在基因合成时删除A1基因序列中Qβ衣壳蛋白终止密码子之后的序列,只合成Qβ衣壳蛋白的基因序列。将Qβ衣壳蛋白基因序列克隆到p ET30a载体质粒上,用BL21(DE3)、BL21(DE3) p Lys S、Rosetta(DE3)叁种不同菌株进行蛋白表达,然后用SDS-PAGE和透射电镜验证是否表达出Qβ-VLPs的正确结构。设置2个蛋白表达诱导剂IPTG(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)浓度和3种菌体破碎方式,分别优化蛋白表达条件和菌体破碎方案,然后将得到的Qβ-VLPs上清液通过硫酸铵聚沉、高速离心和分子筛分选进行Qβ-VLPs的纯化。结果仅BL21(DE3) p Lys S菌株可以表达出SDS-PAGE中呈现5-6聚体、透射电镜下呈现25～30 nm球形结构的Qβ-VLPs。使用0. 5 m M浓度的IPTG表达的Qβ-VLPs产量较0. 2 m M时高2. 8倍,使用超声破碎菌体的方式可以获得较高的蛋白分离效率。将Qβ-VLPs上清液通过本实验过程中的方案进行纯化后纯度可达90%左右。结论该实验探索出具有正确空间结构、组成单一且纯度较高的Qβ-VLPs的制备方案,为相关疫苗制备和研究奠定基础。(本文来源于《武警医学》期刊2019年11期）
叶孟亮,张春晖,朱玲玉,贾伟,张鸿儒[2]（2019）在《牦牛骨胶原蛋白促成骨活性肽分离纯化及结构鉴定》一文中研究指出牦牛(Bos grunniens)是我国珍贵的畜种资源,牦牛骨中含有丰富的胶原蛋白(约占21.5%),补充胶原蛋白肽可以增加骨胶原纤维网架的规则性和牢固性。深入开展对牦牛骨精深加工技术的研究探讨,充分利用牦牛骨中丰富的骨胶原蛋白开发功能性食品,对提高牦牛附加值、增加藏区牧民收益、促进牧区社会经济发展和稳固边疆具有重要意义。本研究以前期实验室制备得到的牦牛骨胶原蛋白肽为研究对象,利用超滤、体积排阻色谱、反向液相色谱和液相色谱串联质谱联合Mascot 2.4 search engine技术对牦牛骨胶原蛋白肽进行了进一步分离、纯化和结构鉴定。结果表明,经超滤后收集得到的组分UF-Ⅳ(Mw <3 kDa)表现出较高的促成骨细胞增殖活性;经SuperdexTM peptide 10/300 GL色谱柱(体积排阻色谱法)分离后,组分SP-Ⅲ表现出较高的促成骨细胞增殖活性,在0.5 mg/mL作用浓度下,促成骨细胞增殖率高达160.6%;经RP-HPLC分离纯化,组分SP-Ⅲ经Innoval C18色谱柱进一步分离后的组分F8表现出较强的促成骨细胞增殖活性(190.6%)。利用反向液相色谱串联质谱法联合Mascot 2.4 search engine对其氨基酸序列进行测定,共鉴定得到35条肽段。基于相对丰度、分子量、比对标准得分等指标筛选出9条具有较高潜在促成骨细胞增殖活性肽进行化学合成验证其体外生物活性,GPAGPPGPIGNV(GP-12)肽相较其它8条肽段具有更高的促成骨细胞增殖活性(142.7%)。综上,牦牛骨胶原蛋白肽在未来工业生产功能性和促进营养健康的食品中具有很大的应用潜力,可用于介导治疗骨质疏松症。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
韩天娇,桓霏,刘萌,曹敏杰,刘光明[3]（2019）在《葡萄牙牡蛎中新型过敏原肌质钙结合蛋白的纯化、克隆及鉴定》一文中研究指出目的:牡蛎因其味道鲜美,蛋白含量丰富,受到人们的青睐,但随之引起的高过敏率也同样不容小觑,对牡蛎中过敏原的探究迫在眉睫。方法:本研究以葡萄牙牡蛎(Crassostrea angulata)为研究对象,利用硫酸铵盐析和柱层析等方法对葡萄牙牡蛎中的20 kDa左右的蛋白进行分离纯化,并利用液相串联质谱的方式对纯化蛋白进行鉴定,之后采用免疫学方式研究目的蛋白致敏性;选用pET-22b载体对目的蛋白进行克隆表达;之后采用多克隆抗体对天然及重组蛋白的IgG结合活性进行研究;通过Dot-blot、ELISA等方法对重组目的蛋白进行致敏性分析。结果:经质谱鉴定后确定纯化出的分子量在20 kDa的蛋白为葡萄牙牡蛎中的肌质钙结合蛋白(SCP);通过Western-blot结果得到天然及重组SCP均可与兔抗牡蛎SCP多克隆抗体结合;血清学试验表明天然与重组SCP均具有IgE结合能力,为牡蛎中一种新型过敏原。结论:本研究首次分离鉴定了葡萄牙牡蛎中的新型过敏原SCP,并对其进行克隆表达,为全面研究牡蛎中的过敏组分提供依据。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
李攀,刘术敏,邓丹妹,吴常伟,程英杰[4]（2019）在《GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定》一文中研究指出目的构建含有GⅡ.21型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1基因的重组质粒,通过PichiaPink毕赤酵母表达VP1蛋白,并鉴定纯化产物。方法合成NoV GⅡ.21 VP1蛋白基因序列,将其连接至pPink-HC载体,构建重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1;经测序鉴定后,电转化毕赤酵母PichiaPink,甲醇诱导目的蛋白表达;采用AKTA pure M150型纯化仪纯化目的蛋白,Western blot法分析其抗原性,SEC-HPLC法检测纯化蛋白出峰时间。结果经测序鉴定,重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1构建正确;纯化的目的蛋白VP1纯度在95%以上,能与抗NoV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗体发生反应;测定目的蛋白出峰时间为16. 923 min,与NoV VLP理论出峰时间一致。结论成功在毕赤酵母高表达了GⅡ.21衣壳蛋白VP1,并制备了高纯度及良好抗原性的目的蛋白,为多价重组NoV疫苗的研发及规模化生产奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年10期）
冯春明,杨笑谈,马德利[5]（2019）在《丹东地区常见鱼类水霉菌的分离、纯化、鉴定及拮抗菌的筛选》一文中研究指出水霉病是一类全球分布的鱼类疾病,目前池塘养殖尚没有有效、安全的防治方法。为探究水霉病的生物防治方法,以丹东地区发生水霉病的鱼体分离出的水霉致病菌为指示菌,对从土壤、水样中分离纯化获得的62株放线菌、17株细菌进行平板对峙实验,获得2株对水霉致病菌抑制效果最好的拮抗菌,经分子生物学鉴定,分别为淡紫灰链霉菌(S.lavendulae)及特基拉芽孢杆菌(B.tequilensis),均对鱼类无毒力。(本文来源于《河北渔业》期刊2019年10期）
吴海清,肖萍,何新益,王娜[6]（2019）在《“食品微生物学实验”改革案例——传统发酵食品中乳酸菌的分离 纯化及分子生物学鉴定综合性实验》一文中研究指出为了提高食品科学与工程专业实验课的教学质量,课题组针对"食品微生物学实验"进行了改革,设计了"传统发酵食品中乳酸菌的分离、纯化及分子生物学鉴定综合性实验"的案例。该实验项目激发了学生浓厚的好奇心和兴趣,极大地提高了学生的实践操作能力,取得了良好的教学效果。(本文来源于《农产品加工》期刊2019年19期）
贾丽娜,彭效祥,李明萱,罗淑萍,张云芳[7]（2019）在《P2X7受体胞外段蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定》一文中研究指出目的:克隆嘌呤能离子通道型受体7(P2X7R)胞外段编码序列,体外表达和鉴定重组P2X7R胞外段蛋白。方法:采用德泰生物密码子优化软件MaxCodon~(TM)Optimization Program (V13),对P2X7R胞外段蛋白氨基酸编码序列进行优化并设计PCR扩增引物。采用重迭PCR扩增目标基因,通过限制性酶切位点NdeⅠ和HindⅢ,将P2X7R胞外段编码序列定向插入原核表达载体pET30a(+),构建pET30a-P2X7R重组表达质粒,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+)表达菌种中,进行融合表达,诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达。重组蛋白含6×His纯化标签,亲和层析(Ni-IDA树脂)纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot鉴定纯化产物。结果:PCR扩增的P2X7R胞外段蛋白编码序列长度为885 bp,成功构建重组pET30a-P2X7R质粒,并转化至E.coli BL21(DE3+)菌株中。融合型表达的重组蛋白分子量约为34 kD,可被抗His标签单克隆抗体特异性识别。结论:成功克隆P2X7R胞外段蛋白编码序列、诱导表达并纯化了重组P2X7R胞外段蛋白,为今后制备抗人P2X7R胞外段蛋白的单克隆抗体奠定了坚实的基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年19期）
侯慧,李娇,梁见楠,周玲,梁艳阳[8]（2019）在《嘌呤霉素介导的人真皮微血管内皮细胞的分离纯化培养与鉴定》一文中研究指出目的获取纯度较高的人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)。方法取手术切除的多余包皮剪碎,通过两次酶消化接种于35 mm 6孔板中,加入含0.5μg/mL嘌呤霉素的内皮细胞培养基,3 d后更换新鲜培养基;采用倒置单光子共聚焦显微镜观察内皮细胞形态;流式细胞术检测HDMEC细胞表面标志CD31的表达情况。结果培养72 h后可见内皮细胞长出,细胞呈圆形,生长至第5天左右,以梭形细胞为主,第6～10天迅速增殖,形成比较紧密的融合细胞,细胞集落中心为圆形细胞,周围为梭形,呈放射状,第10天可达80%融合,细胞呈典型铺路石样,可见"漩涡状"特征。流式细胞术检测显示HDMEC的CD31表达阳性,CD44表达阴性,内皮细胞纯度达98%以上。结论该方法能够成功获得高纯度的人真皮微血管内皮细胞HDMEC,对皮肤疾病致病机制以及HDMEC的生物学特性和功能的深入研究具有重要意义。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2019年11期）
杨亚茹,郝正祺,常明昌,孟俊龙,刘靖宇[9]（2019）在《绣球菌酸性多糖的分离纯化、结构鉴定及抗氧化活性研究》一文中研究指出采用超声波辅助水提醇沉法提取绣球菌(Sparasis crispa)多糖,并通过HZ-830大孔树脂、DEAE-52纤维素及Sephadex G-100凝胶纯化,收集绣球菌多糖SCP-Ⅱ;采用苯酚硫酸法和间羟基联苯法分别测定SCP-Ⅱ中总糖和糖醛酸含量;采用紫外-可见光谱、高效凝胶渗透色谱、离子色谱、红外光谱、扫描电镜和原子力显微镜对其结构进行鉴定;通过测定总还原力、清除DPPH、OH和O~-_2自由基的能力来研究其体外抗氧化活性。结果表明:SCP-Ⅱ的总糖、糖醛酸含量分别为98.7%、17.8%,相对分子质量为5.8×10~3,单糖组成为半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖(摩尔比为2∶7∶1∶2);其具有一定的清除自由基能力,清除DPPH、OH、O~-_2自由基的IC_(50)分别为1.64、0.94 mg/mL和7.25 mg/mL。(本文来源于《食用菌学报》期刊2019年03期）
雷声,杨乾栩,师艳萍,蒋举兴,刘秀明[10]（2019）在《成品卷烟霉变微生物的分离纯化与鉴定》一文中研究指出从霉变成品卷烟中分离、纯化得到5种菌株,并采用真菌形态学和显微镜检的方法进行鉴定。结果表明,引起卷烟霉变的微生物主要为曲霉菌、青霉菌、链格孢菌和枝孢菌;通过18SrDNA-ITS序列分析及构建系统进化树,鉴定为5个种,分别为聚多曲霉、黄曲霉、极细枝孢霉、指状青霉和链格孢属霉菌;通过致霉性试验得出黄曲霉菌为导致卷烟霉变的主要菌株。(本文来源于《食品与机械》期刊2019年09期）
纯化鉴定论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
牦牛(Bos grunniens)是我国珍贵的畜种资源,牦牛骨中含有丰富的胶原蛋白(约占21.5%),补充胶原蛋白肽可以增加骨胶原纤维网架的规则性和牢固性。深入开展对牦牛骨精深加工技术的研究探讨,充分利用牦牛骨中丰富的骨胶原蛋白开发功能性食品,对提高牦牛附加值、增加藏区牧民收益、促进牧区社会经济发展和稳固边疆具有重要意义。本研究以前期实验室制备得到的牦牛骨胶原蛋白肽为研究对象,利用超滤、体积排阻色谱、反向液相色谱和液相色谱串联质谱联合Mascot 2.4 search engine技术对牦牛骨胶原蛋白肽进行了进一步分离、纯化和结构鉴定。结果表明,经超滤后收集得到的组分UF-Ⅳ(Mw <3 kDa)表现出较高的促成骨细胞增殖活性;经SuperdexTM peptide 10/300 GL色谱柱(体积排阻色谱法)分离后,组分SP-Ⅲ表现出较高的促成骨细胞增殖活性,在0.5 mg/mL作用浓度下,促成骨细胞增殖率高达160.6%;经RP-HPLC分离纯化,组分SP-Ⅲ经Innoval C18色谱柱进一步分离后的组分F8表现出较强的促成骨细胞增殖活性(190.6%)。利用反向液相色谱串联质谱法联合Mascot 2.4 search engine对其氨基酸序列进行测定,共鉴定得到35条肽段。基于相对丰度、分子量、比对标准得分等指标筛选出9条具有较高潜在促成骨细胞增殖活性肽进行化学合成验证其体外生物活性,GPAGPPGPIGNV(GP-12)肽相较其它8条肽段具有更高的促成骨细胞增殖活性(142.7%)。综上,牦牛骨胶原蛋白肽在未来工业生产功能性和促进营养健康的食品中具有很大的应用潜力,可用于介导治疗骨质疏松症。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
纯化鉴定论文参考文献
[1].张树东,周建,田壮,刘长振,姚琦.骨质疏松疫苗载体:Qβ病毒样颗粒的表达、鉴定和纯化[J].武警医学.2019
[2].叶孟亮,张春晖,朱玲玉,贾伟,张鸿儒.牦牛骨胶原蛋白促成骨活性肽分离纯化及结构鉴定[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
[3].韩天娇,桓霏,刘萌,曹敏杰,刘光明.葡萄牙牡蛎中新型过敏原肌质钙结合蛋白的纯化、克隆及鉴定[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
[4].李攀,刘术敏,邓丹妹,吴常伟,程英杰.GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定[J].中国生物制品学杂志.2019
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[6].吴海清,肖萍,何新益,王娜.“食品微生物学实验”改革案例——传统发酵食品中乳酸菌的分离纯化及分子生物学鉴定综合性实验[J].农产品加工.2019
[7].贾丽娜,彭效祥,李明萱,罗淑萍,张云芳.P2X7受体胞外段蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定[J].中国免疫学杂志.2019
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[10].雷声,杨乾栩,师艳萍,蒋举兴,刘秀明.成品卷烟霉变微生物的分离纯化与鉴定[J].食品与机械.2019