杜晓辉罗新鹏(湖北省黄冈市食品药品监督检验中心438000)
【摘要】目的：建立祛痘除螨类化妆品中非法添加甲硝唑、替硝唑、氯霉素、醋酸地塞米松的快速鉴别方法。方法：采用薄层色谱方法鉴别，再用高效液相色谱法加以验证。结果：建立的薄层色谱鉴别方法稳定性和重现性均较好。结论：本方法适用于祛痘除螨类化妆品中非法添加甲硝唑、替硝唑、氯霉素、醋酸地塞米松的快速筛查。
【关键词】祛痘除螨化妆品非法添加鉴别
【中图分类号】R1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）06-0009-02
抗菌药是指能抑制或杀灭细菌，用于预防和治疗细菌性感染的药物。为了达到迅速祛痘除螨等作用，有不法厂家在化妆品中非法添加甲硝唑、替硝唑、氯霉素、醋酸地塞米松等化学物质。本文建立了快速鉴别化妆品中非法添加甲硝唑、替硝唑、氯霉素、醋酸地塞米松的薄层色谱法，并用高效液相色谱法加以验证。
1.仪器与材料
美国DIONEX高效液相色谱仪，P680A型泵，PDA-100二极管阵列检测器，ASI-100自动进样器，TCC-100柱温箱，Chromeleon色谱工作站。
硅胶GF254薄层快检板（5×10cm）、硅胶G薄层快检板（5×10cm）、超声清洗仪、水浴锅。
冰醋酸、丙酮、乙酸乙酯、氨水、三氯甲烷、乙醇、甲醇、硫酸、无水乙醇均为分析纯。
对照品：甲硝唑（100191－200606）、替硝唑(100336－200703)、氯霉素（130303－200614）、醋酸地塞米松（100122－201206）均为中国食品药品检定研究院供。
样品信息：共收集了不同企业的3批样品，批号分别为：20120301、110401A、11042603。
2.方法及结果
2.1甲硝唑、替硝唑薄层色谱鉴别方法
供试品溶液：取供试品约0.2g，加冰醋酸—丙酮（1:9）溶液10ml，研溶，滤过，取续滤液[1]。
对照品溶液：取甲硝唑、替硝唑对照品约5mg，分别加冰醋酸—丙酮（1:9）溶液1ml，使溶。
阳性样品溶液：取供试品0.2g，加甲硝唑、替硝唑对照品各5mg，同法制成阳性样品溶液。
结果判断：供试品色谱中在与甲硝唑、替硝唑对照品相应的位置上不应出现相同颜色的斑点。在阳性样品溶液色谱图中在与甲硝唑、替硝唑对照品相应的位置上均出现相同的斑点，分离度较好。
2.2氯霉素薄层色谱鉴别方法
供试品溶液：取供试品约0.5g，加入乙醇5ml，振摇使溶解，超声提取20min，取上清液[2]。
对照品溶液：取氯霉素对照品约1mg，加入10ml乙醇，振摇使溶解。
阳性样品溶液：取供试品0.2g，加氯霉素对照品1mg，同法制成阳性样品溶液。
结果判断：供试品色谱中在与氯霉素对照品相应的位置上不应出现相同的斑点。在阳性样品溶液色谱图中在与氯霉素对照品相应的位置上出现相同的斑点。
2.3地塞米松薄层鉴别方法
供试品溶液：取供试品约5g，加无水乙醇30ml，在水浴上加热使溶解，放冷，置冰浴中约30min，滤过，取滤液，用无水乙醇稀释至20ml，摇匀。
对照品溶液：取地塞米松对照品12.5mg，加无水乙醇溶解并稀释至100ml，摇匀。
阳性样品溶液：取供试品0.2g，加地塞米松对照品12.5mg，同法制成阳性样品溶液。
结果判断：供试品色谱中，在与地塞米松对照品相应的位置上不应出现相同的斑点。在阳性样品溶液色谱图中，在与地塞米松对照品相应的位置上出现相同的斑点。
2.4高效液相色谱法验证
2.4.1甲硝唑、替硝唑、氯霉素
2.4.1.1色谱条件：DIONEX4.6×250mmC18柱；检测波长：268nm；流速0.8mL/min；柱温：30℃；流动相：0.01mol/L草酸溶液（磷酸调节水溶液的pH至2.0）：甲醇：乙腈（67：11：22）
供试品溶液的制备：准确称取样品1g于10ml具塞比色管中，加入甲醇：盐酸（0.1mol/L）=1:1混合溶液至刻度，振摇，超声提取30min，冰浴，过滤。
对照品溶液的制备：称取甲硝唑、替硝唑、氯霉素对照品各约5mg，分别置10ml容量瓶中，用少许甲醇及盐酸（0.1mol/L）溶解，甲醇定容至刻度，摇匀。
阳性样品溶液的制备：取供试品溶液10ml，分别加入甲硝唑、替硝唑、氯霉素对照品溶液各1ml，摇匀。
混合对照品溶液的制备：分别取甲硝唑、替硝唑、氯霉素对照品溶液各2ml，混匀。
2.4.1.2测定：分别取供试品溶液，对照品溶液，阳性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
2.4.1.3结果：供试品色谱图中，样品1、2在与甲硝唑对照品相应保留时间处均未检出色谱峰；供试品3色谱图中与甲硝唑对照品相应保留时间处有峰，经光谱图比较，确认非甲硝唑。阳性样品溶液色谱图中均检出甲硝唑、替硝唑、氯霉素。代表性图谱如下：
图1甲硝唑(1)、替硝唑(2)、氯霉素(3)混合对照品溶液图2样品溶液
2.4.2地塞米松
2.4.2.1色谱条件：色谱柱：DIONEX4.6×250mmC18柱；检测波长：240nm；流速0.8mL/min；柱温：30℃；流动相：乙腈：水（28：72）。
供试品溶液的制备：准确称取样品1g于10ml具塞比色管中，加入甲醇至刻度，振摇，超声提取30min，冰浴，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：称取地塞米松对照品约0.5mg，置入10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。制成含地塞米松约0.05mg/ml的溶液。
阳性样品溶液的制备：取供试品溶液10ml，加入地塞米松对照品溶液1ml，摇匀。
2.4.2.2测定：分别取供试品溶液，对照品溶液，阳性样品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定。
2.4.2.3检测结果：供试品色谱中，样品在与地塞米松对照品相应保留时间处均未检出色谱峰；阳性样品溶液色谱图中，均检出地塞米松，但与相邻峰的分离度较小。代表性图谱如下：
图3阳性样品溶液图4地塞米松对照品溶液
3.讨论
样品在与甲硝唑对照品相应保留时间处有的有吸收峰，但经光谱图比较，确认非甲硝唑，因此薄层色谱检查后应用高效液相色谱验证，并用光谱图确证。
样品中在与地塞米松对照品相应保留时间处有一干扰峰，分离度不佳，色谱条件还有改进的必要。
以上实验情况表明，用薄层色谱鉴别祛痘除螨类化妆品中非法添加甲硝唑、替硝唑、氯霉素、地塞米松的方法灵敏度高、专属性强、快速简便，易于操作。
参考文献
[1]周修森，方永凯.薄层色谱法快速鉴别4种咪唑类药物[J].药物鉴定，2007，16:27-29
[2]莫金娜，温玉莹.薄层色谱发检测化妆品中的氯霉素[J].中国卫生检验杂志，2008，18（9）：1767-1768