导读:本文包含了细胞内化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:单核细胞增生李斯特菌,内化素Lmo0549,克隆,分子特征
细胞内化论文文献综述
王立霞,孟庆玲,乔军,郭晶,伍晔晖[1]（2019）在《单核细胞增生李斯特菌新型内化素lmo0549的分子特征及其表达》一文中研究指出应用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)新型内化素lmo0549基因进行克隆和测序,并对其进行生物信息学分析;通过扩增获得Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区序列,并将其亚克隆至pET-32a(+)表达载体,转入大肠杆菌中用异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,简称IPTG)诱导表达,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定重组蛋白的表达形式及其抗原特异性。序列分析结果表明,扩增得到的lmo0549基因全长为2 034 bp,编码677个氨基酸,其信号肽序列是前23个氨基酸,在Lmo0549蛋白氨基酸序列中,从N端到C端分别包括5个富含亮氨酸的重复基序(LRR)、1段PKD重复序列和1个WxL结构域;同时还存在N-联糖基化位点10个、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点14个、蛋白激酶C磷酸化位点15个。同源性分析显示,LM-SB5 lmo0549基因编码的蛋白氨基酸序列与标准株李斯特菌EGD-e,(NC_003210.1)蛋白氨基酸序列的同源性为88.04%,且在单核细胞增生李斯特菌中具有较高的保守性。SDS-PAGE分析显示,表达的Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区具有与理论值33.8 ku相符的分子质量;蛋白质印迹法分析表明,重组蛋白Lmo0549与LM阳性血清可发生特异性免疫反应,为进一步探讨Lmo0549在LM侵入宿主细胞的分子作用机制奠定了前期基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年18期）
潘春玲,吕雪雯,王宏岩,寇育荣,潘亚萍[2]（2019）在《牙龈卟啉单胞菌内化牙周膜干细胞抑制成骨分化的能力》一文中研究指出目的探讨牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)内化牙周膜干细胞对成骨分化能力的影响。方法通过组织块法培养原代牙周膜细胞,有限稀释法克隆纯化牙周膜干细胞。设立未成骨诱导分化的牙周膜干细胞为空白对照组,成骨诱导分化牙周膜干细胞为阳性对照组,成骨诱导分化并内化P. gingivalis的牙周膜干细胞为内化组。茜素红染色观察牙周膜干细胞矿化结节的形成能力,测定碱性磷酸酶(ALP)活性。实时定量PCR方法检测Runx相关转录因子2 (Runx2)和骨钙素(OCN)基因的表达。结果牙周膜细胞以组织块为中心呈放射状、旋涡状单层生长,有限稀释克隆传代后牙周膜干细胞生长状态良好。茜素红染色结果显示,阳性对照组和内化组牙周膜干细胞均可形成矿化结节。阳性对照组矿化结节大而多,而内化组矿化结节少而稀疏。阳性对照组和内化组牙周膜干细胞ALP活性较空白对照组升高,内化组ALP活性低于阳性对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。空白对照组牙周膜干细胞Runx2和OCN基因表达在第7和14天无明显变化,阳性对照组和内化组牙周膜干细胞Runx2和OCN基因表达较空白对照组上调,且内化组牙周膜干细胞Runx2基因表达低于阳性对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论牙周膜干细胞体外经过成骨诱导后可以分化成成骨细胞,形成矿化结节,P. gingivalis ATCC 33277内化牙周膜干细胞后可以抑制其成骨分化的能力。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2019年08期）
张合[3]（2018）在《岩藻糖环境对胶质细胞Aβ_(42)蛋白内化过程的影响》一文中研究指出目的探讨岩藻糖环境对胶质细胞内化不同形态Aβ_(42)蛋白过程的影响。方法分别测定岩藻糖富集及缺失两种环境中小鼠小胶质细胞及大鼠星型胶质细胞对单体及寡聚体Aβ_(42)蛋白的摄取量,检测被岩藻糖活化后小胶质细胞的MAPK激酶磷酸化程度变化,探明清道夫家族SRA受体及SRB受体在两种胶质细胞中的表达差异。结果小鼠小胶质细胞在岩藻糖预处理及岩藻糖环境持续作用下对Aβ_(42)单体摄取量均显着增加,岩藻糖预处理导致大鼠星型胶质细胞单体Aβ_(42)摄入量降低。岩藻糖预处理导致小鼠小胶质细胞和大鼠星型胶质细胞对寡聚体Aβ_(42)摄取量下降,岩藻糖持续作用后,该趋势出现反转。基因检测表明两种胶质细胞中SRB受体高表达,SRA受体在星型胶质细胞无表达。岩藻糖持续作用引起小鼠小胶质细胞p38-MAPK信号通路的激活,该信号可能引发小胶质细胞细胞吞饮过程。结论岩藻糖与胶质细胞清道夫受体的作用模式对细胞的Aβ_(42)的内化过程产生影响,SRA受体可能参与小胶质细胞吞噬过程中p38-MAPK激酶的激活过程而增强小胶质细胞对病理蛋白的摄取。为寻找阿尔茨海默病中胶质细胞相关的潜在免疫治疗靶标提供了理论依据。(本文来源于《中国医药生物技术》期刊2018年06期）
尹彩霞,于少雄,宋琨,李素,杨玉莹[4]（2018）在《E2蛋白介导猪瘟病毒的细胞吸附与内化》一文中研究指出【目的】已有研究显示,猪瘟病毒(CSFV)通过网格蛋白介导的内吞作用侵入宿主细胞,然而参与侵入过程的病毒蛋白尚待阐明。研究旨在明确E2蛋白在CSFV侵入过程中的作用。【方法】通过瞬时转染包装携带E2基因的慢病毒,将慢病毒转导悬浮293细胞构建稳定表达重组E2蛋白的悬浮293细胞系,利用亲和层析的方法纯化重组E2蛋白,同时优化表达时间以增加蛋白产量。利用SDS-PAGE和Western blotting分别鉴定了重组E2蛋白的表达水平及其反应原性。通过感染试验、吸附试验以及内化试验分别探究了E2蛋白对CSFV感染、吸附以及内化的影响。将重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过阻断ELISA检测血清中多克隆抗体的阻断率。利用制备的多克隆抗体与CSFV感作后进行吸附和内化试验,进一步探究了E2蛋白在介导CSFV吸附和内化中的作用。【结果】通过倒置荧光显微镜观察转导慢病毒后的细胞系,与对照细胞相比可见明显的绿色荧光,表明慢病毒成功转导悬浮293细胞。SDS-PAGE结果显示,在还原和非还原条件下均出现与预期大小相符的蛋白条带,经Western blotting验证,上清中表达的重组E2蛋白能够被抗E2蛋白单克隆抗体WH303所识别,表明构建的悬浮293细胞系能够表达重组E2蛋白。通过优化表达条件,悬浮293细胞培养第8天时上清中重组E2蛋白浓度最高可达5.84μg·m L-1。可溶性蛋白阻断试验结果显示,重组E2蛋白具有阻断CSFV感染的活性。利用重组E2蛋白在病毒入侵过程中处理细胞对CSFV的感染同样具有显着抑制作用;阻断ELISA和中和试验结果显示,针对E2蛋白的多克隆抗体能够阻断CSFV感染,且具有良好的中和活性;吸附试验和内化试验证明,重组E2蛋白处理细胞能够显着抑制CSFV的内化,而利用多克隆抗体与CSFV感作后能够显着抑制其吸附。【结论】E2蛋白参与CSFV吸附和内化。(本文来源于《中国农业科学》期刊2018年10期）
胡新月[5]（2018）在《自噬在骨化叁醇降低内化KB细胞的牙龈卟啉单胞菌活菌数量中的作用》一文中研究指出目的:P.gingivalis是公认的牙周可疑致病菌之一,并且可广泛内化入各种宿主细胞内,从而与全身疾病、癌症的发生发展密切相关。研究显示P.gingivalis可协助HIV-1进入Hela上皮细胞。本研究目的是观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)ATCC33277在Hela细胞亚系—KB细胞内的存在状态及与自噬体结构的关系;研究骨化叁醇(1α,25-二羟维生素D3,1α,25(OH)_2D_3,以下简称1,25D)和P.gingivalis对KB细胞自噬表达的影响,分析1,25D降低细胞内P.gingivalis活菌数量的可能机制。方法:1、透射电镜下观察P.gingivalis在细胞内的存在状态及与自噬体结构的关系。实验分为5组,分别为空白对照组、0.1%乙醇组、1,25D组、P.gingivalis组、1,25D+P.gingivalis组。P.gingivalis以感染复数(multiplicity of infection,MOI)300:1加入P.gingivalis组、1,25D+P.gingivalis组细胞中,6 h后将10~-88 mol/L的1,25D分别加入1,25D组、1,25D+P.gingivalis组,将无水乙醇加入0.1%乙醇,空白对照组细胞不做处理,18 h后观察P.gingivalis在KB细胞中的存在形式及与自噬体结构的关系。2、1,25D及P.gingivalis对KB细胞自噬表达的影响。(1)P.gingivalis处理:(1)空白对照组,MOI值10、100、300、500 P.gingivalis与KB细胞共同孵育18 h,提取总蛋白。(2)空白对照组,MOI值100:1 P.gingivalis与KB细胞共同孵育0、2、6、18、24 h、48 h提取总蛋白。(2)1,25D处理:(1)10~(-12)mol/L、10~-1010 mol/L、10~-88 mol/L 1,25D,0.1%乙醇,分别处理KB细胞18 h,提取总蛋白。(2)10~-88 mol/L 1,25D,0.1%乙醇,分别处理KB细胞0、2、6、18、24、48 h,提取总蛋白。(3)1,25D与P.gingivalis联合处理:实验组和对照组分别加入MOI值100:1 P.gingivalis与KB细胞共培养18 h后,实验组加入10~-88 mol/L的1,25D,对照组加入0.1%乙醇,18 h后提取总蛋白。Western Blot方法检测LC3蛋白和P62蛋白表达水平。3、观察自噬在1,25D抑制内化KB细胞P.gingivalis ATCC33277活菌数量过程中的影响。实验分为P.gingivalis+0.1%乙醇组、P.gingivalis+1,25D组、P.gingivalis+3-MA组、P.gingivalis+3-MA+1,25D组,其中P.gingivalis ATCC33277 MOI值为100:1,1,25D浓度为10~-88 mol/L。qRT-PCR法和琼脂培养法检测KB细胞内P.gingivalis活菌数量。结果:1、P.gingivalis内化入KB细胞后部分以游离形式存在,其中可见分裂细胞、双层膜包裹分裂细胞和不完整双层膜结构。1,25D处理后未见分裂细菌,包裹细菌的双层膜结构完整,有自噬溶酶体样结构形成并包裹细菌,部分细菌外膜破坏。2、(1)不同MOI值P.gingivalis处理KB细胞24 h后MOI值10:1-500:1时,LC3蛋白表达量随着MOI升高而升高,P62表达量逐渐下降。其中MOI值为500:1时,LC3蛋白表达量最高,P62表达量最低。(2)MOI值100:1的P.gingivalis作用KB细胞0、2、6、18、24、48 h,LC3蛋白表达量随时间增加而升高,P62的表达量在24 h最低。(3)1,25D以剂量依赖性促进KB细胞LC3 II蛋白表达,降低P62蛋白表达。10~-1212 mol/L、10~-1010 mol/L、10~-88 mol/L 1,25D处理KB细胞24 h后,各组LC3II/I比值与0.1%乙醇组相比均有提高,并呈现浓度依赖性,而P62表达量逐渐下降。(4)10~-88 mol/L 1,25D处理KB细胞0、2、6、18、24、48 h后,LC3 II/I比值从2 h开始上升,P62表达量逐渐下降,并在24h表达量最低,提示1,25D促进KB细胞自噬过程。(5)1,25D与P.gingivalis联合处理KB细胞各18 h后,LC3蛋白表达量显着高于0.1%乙醇+P.gingivalis处理组,说明1,25D与P.gingivalis协同促进细胞自噬。3、qRT-PCR方法检测KB细胞内P.gingivalis活菌数量,各组分别为P.gingivalis+0.1%乙醇组(8.36±0.08)CFU/cell,P.gingivalis+1,25D组(3.30±0.27)CFU/cell,P.gingivalis+3-MA组(7.41±0.11)CFU/cell,P.gingivalis+3-MA+1,25D组(6.22±0.06)CFU/cell。琼脂培养法检测结果为P.gingivalis+0.1%乙醇组(7.95±0.48)CFU/cell,P.gingivalis+1,25D组(1.25±0.28)CFU/cell,P.gingivalis+3-MA组(4.27±0.18)CFU/cell,P.gingivalis+3-MA+1,25D组(3.44±0.13)CFU/cell,qRT-PCR方法与琼脂培养法结果具有相同趋势。抑制自噬后1,25D对KB细胞内P.gingivalis数量的抑制作用明显下降,说明细胞自噬在1,25D降低KB细胞内P.gingivalis活菌数量过程中发挥重要作用。结论:P.gingivalis对细胞自噬具有复杂的调节作用,这种作用可能是P.gingivalis在细胞内生存的重要手段。1,25D促进KB细胞自噬,并通过这一过程抑制细胞内P.gingivalis的存活。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-05-01）
武茜茗[6]（2018）在《Pyk2调控牙龈卟啉单胞菌内化及牙龈上皮细胞自噬的研究》一文中研究指出目的:牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis),作为慢性牙周炎的主要致病菌,具有侵入牙龈上皮细胞并长期存活的能力。前期研究表明,富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(protein-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)在P.gingivalis感染过程中发生活化。本课题通过对P.gingivalis感染牙龈上皮细胞过程中细胞自噬相关分子表达的研究,探讨Pyk2在牙龈上皮细胞自噬过程中的作用及其对P.gingivalis内化的影响,旨在揭示该菌的致病机理,为慢性牙周炎的防治提供新的靶点和思路。材料方法:建立P.gingivalis感染人类永生化牙龈上皮细胞epi4细胞模型(MOI 100:1),通过透射电镜下观察自噬囊泡及细菌内化情况;免疫荧光法观察自噬小体;Real-time PCR法检测LC3ⅡmRNA水平;Western blot法检测LC3Ⅱ、P62蛋白质水平。以特异性Pyk2抑制剂TAE226预处理细胞后进行P.gingivalis感染实验,Western blot法检测LC3Ⅱ蛋白质水平,抗生素保护法检测P.gingivalis的内化效率。结果:1、P.gingivalis感染epi4细胞后,细胞内可观察到大量双层膜结构自噬囊泡,也可见有菌体存在于囊泡中;2、免疫荧光显示P.gingivalis感染epi4细胞后,细胞内可观察到大量自噬小体;3、自噬相关分子LC3ⅡmRNA的表达水平随时间上调,在6 h达到峰值(P<0.05);4、自噬标记蛋白LC3Ⅱ的蛋白表达量随时间上调(P<0.05);P62的蛋白表达量则随时间下调(P<0.05);5、TAE226预处理后LC3Ⅱ的蛋白表达量显着下调(P<0.05);6、TAE226预处理后P.gingivalis对epi4细胞的内化显着减弱(P<0.05)。结论:1、P.gingivalis感染牙龈上皮细胞的过程,增强牙龈上皮细胞自噬并实现P.gingivalis内化;2、P.gingivalis感染能够通过Pyk2的表达影响P.gingivalis内化;3、P.gingivalis感染能够通过Pyk2的表达调控细胞自噬。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-02-01）
代建丽,张国彬[7]（2017）在《浅谈开发内化教学法的实施——以《植物细胞工程实验》为例》一文中研究指出开发内化教学法是我校承担国家教育体制改革综合性试点任务、结合我校学生实际情况推出的教学改革方法,以促进学生自主学习和知识内化为目的。作者结合所授课程《植物细胞工程实验》,在教学中从教学设计、教学管理和考核方法等方面进行了探索,探讨开发内化教学法的实施基础、组织形式和实施办法,研究开发内化教学法的教学效果及影响因素,为完善开发内化教学法和课程的教学改革提供基础。(本文来源于《高教学刊》期刊2017年22期）
吴芳升,管洲,王立权,林嘉平[8]（2017）在《环状纳米粒子细胞内化及其成孔行为研究》一文中研究指出环状纳米粒子类似于成孔蛋白的内腔结构,具有特殊的细胞内化行为。运用"粗粒化"分子动力学模拟方法,研究了环状纳米粒子与生物膜的相互作用。研究发现不同尺寸的纳米粒子会导致不同的内化途径,包括内嵌、成孔破裂、一般胞吞、成孔胞吞。成孔胞吞和成孔破裂可以根据膜上孔洞最终消失与否以及纳米粒子是否完成胞吞来区分。此外研究了各种内化途径的动力学过程以及环状纳米粒子与细胞膜的相互作用能变化,结果表明更大的配体密度和均匀的配体分布有利于细胞内化。研究明确了环状纳米粒子的细胞内化情况,分析了内化过程中出现的成孔现象和细胞毒性。这可为环状纳米粒子在生物载药等领域的应用提供理论指导。(本文来源于《中国化学会2017全国高分子学术论文报告会摘要集——主题E：高分子理论计算模拟》期刊2017-10-10）
吴波[9]（2017）在《CD147通过内化循环及贯序水解促进肝细胞肝癌恶性进展》一文中研究指出原发性肝癌俗称“癌中之王”,恶性进展快,治疗难度大,病死率高,是一种非常凶险的疾病,世界范围内肿瘤致死率排名第叁位,国内肿瘤致死率的排名第二位,对居民生命健康危害极大。CD147是早期我们科室筛选鉴定的肿瘤药靶分子,CD147在包括肝癌在内多种人类恶性肿瘤中表达,且其高表达是临床不良预后的指标,CD147既可以作为诱导因素,又可以作为效应分子通过不同的机制促进肿瘤细胞的生长代谢,浸润转移,促血管生成,耐药以及死亡抵抗等恶性行为,导致肿瘤进展。生理病理条件下,以跨膜形式定位于细胞膜表面的CD147可以内化进入胞浆而后重新循环到细胞膜上,内化到胞浆的CD147以囊泡形式存在;此外,CD147还可以外泌体的形式或者胞外段被水解后以游离形式(shedding)释放到细胞外基质中。近年来发现,内化循环异常是肿瘤恶性进展过程中获得的表型,这一特点已经逐渐被认可,但是CD147内化循环对于肿瘤进展具有什么意义?同时,CD147水解脱落胞外段之后剩余部分的去向以及有没有生理意义?这些问题的解答有助于我们进一步揭开CD147在肿瘤中发挥重要意义的神秘面纱,并为以CD147为靶点的药物研发提供理论依据。基于此,我们展开下面叁部分实验:研究第一部分,我们从CD98与肝癌不良预后密切相关出发,首先证实了细胞膜表达的CD98通过β1-integrin及其下游信号通路在肝癌细胞的铺展和成瘤方面具有重要作用;然后基于CD147正向调节CD98的细胞膜表达水平的流式结果,以及证实CD147与CD98相互作用的共定位、pull-down和SPR等实验结果,推测CD147能够调节CD98的细胞膜定位;进而我们采用K7721细胞过表达荧光蛋白标记的CD98,激光共聚焦结果发现在缺失CD147的情况下,CD98阻滞在内质网以及Rab5阳性的早期内体,而恢复CD147之后,CD98又可以重新定位到细胞膜上;而进一步实验证实,CD147和CD98的内化步骤,也就是囊泡循环的步骤都是由Flotilin-1介导的,而同时也都受Arf6分子的调节。于是,CD147通过与CD98胞外段直接相互作用实现共转运,呈现协同膜表达的现象,而后促进β1-integrin及其下游信号通路的活化,在肝癌细胞铺展和成瘤方面发挥重要作用。因此,CD147能够调节CD98的细胞膜定位和囊泡循环机制解释了CD147和CD98的协同作用,并在肝癌进展中具有重要意义。研究第二部分,我们从CD147分子的内化现象出发,使用胆固醇抑制剂MβCD在阻断CD147内化之后,流式结果却发现CD147在细胞膜上的表达水平反而下降;通过进一步研究,我们发现细胞膜胆固醇水平下降之后,ADAM10对CD147的膜外切割作用(shedding)增强,而使用HAb 18抗体能够阻断这一过程;在分别阻断蛋白酶体降解途径和溶酶体降解途径之后,我们发现CD147胞外切割之后剩余的片段会进一步走向溶酶体处理。于是,CD147的胞外切割以及随后的溶酶体降解可能组成了一种CD147的降解途径。但是,也有可能CD147的胞内段在经历贯续水解之后发挥更为重要的生理意义。研究第叁部分,我们首先分析发现CD147胞内段存在一个经典的核定位信号序列,且CD147胞内段能够指引融合的荧光蛋白定位到细胞核;然后,我们通过构建GFP-CD147-mCherry载体并转染入HEK293T细胞,发现由于CD147的贯续水解,CD147胞内段能够指引融合的mCherry定位到细胞核;通过自噬诱导、自噬阻断实验,我们发现CD147胞内段的产生很可能与肝癌细胞自噬过程相关,过表达CD147胞内段之后,肝癌细胞的自噬过程进一步增强;通过荧光报告基因筛选、转录组基因芯片分析以及RT-PCR和Western blot验证,CD147胞内段可能抑制NF-κb活性以及NF-κB-TRAIL-caspase8-ATG3通路使肝癌细胞具有自噬倾向;而具有自噬倾向的肝癌细胞在一定程度上赋予了肝癌细胞化疗药物顺铂抵抗的能力;鉴于HAb18在一定程度上阻断了CD147的贯续水解,我们发现顺铂联合HAb18能够显着抑制肝癌细胞生长。综上所述,我们的研究证实了CD147通过内化循环促进了CD98的膜定位表达,以及其下游的integrin信号通路,在肝癌细胞的粘附以及裸鼠的皮下成瘤方面发挥了重要作用;通过探寻CD147的贯续水解现象,我们发现CD147是在ADAM10和溶酶体的联合作用下,实现了分步切割,这可能是细胞蛋白降解维持稳态的机制;最后我们通过体外过表达CD147胞内段分析发现,具有核定位作用的CD147胞内段通过自噬促进作用增强了肝癌细胞的顺铂耐药能力,HAb18通过抑制CD147的贯续水解,在化疗药物的增敏作用中发挥显着的作用。(本文来源于《第四军医大学》期刊2017-05-01）
赵丹,姚浩,蔡雪薛,孔苏伟,恽茜[10]（2017）在《4b型单核细胞增生李斯特菌内化素基因NTSN_0462的功能初探》一文中研究指出目的单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)对宿主的粘附、侵袭作用与其多种内化素蛋白密切相关。本研究以4b型菌株LmNTSN的内化素基因NTSN_0462为研究对象,初步探究其致病作用。方法利用同源重组技术构建该基因缺失的突变株,研究0462基因对NTSN在生长、细胞侵袭和体内定植中的作用。人结肠腺癌细胞Caco-2、人肝癌细胞HepG2的侵袭率,以及BALB/c小鼠体内肝、脾脏中定植能力的差异。结果缺失株的生长曲线结果显示,NTSN_0462基因对Lm在BHI培养基中的生长及代谢未造成明显影响。以人结肠腺癌细胞Caco-2、人肝癌细胞HepG2进行的体外试验表明,缺失株的侵袭能力低于野生株(P<0.001)。以BALB/c小鼠进行的体内试验显示,缺失株在肝脏中定殖的能力显着低于野生株(P<0.001),在脾脏中无统计学差异。结论 NTSN_0462基因在LmNTSN入侵肝脏和定植中发挥重要作用,是侵袭相关的重要毒力因子。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2017年02期）
细胞内化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)内化牙周膜干细胞对成骨分化能力的影响。方法通过组织块法培养原代牙周膜细胞,有限稀释法克隆纯化牙周膜干细胞。设立未成骨诱导分化的牙周膜干细胞为空白对照组,成骨诱导分化牙周膜干细胞为阳性对照组,成骨诱导分化并内化P. gingivalis的牙周膜干细胞为内化组。茜素红染色观察牙周膜干细胞矿化结节的形成能力,测定碱性磷酸酶(ALP)活性。实时定量PCR方法检测Runx相关转录因子2 (Runx2)和骨钙素(OCN)基因的表达。结果牙周膜细胞以组织块为中心呈放射状、旋涡状单层生长,有限稀释克隆传代后牙周膜干细胞生长状态良好。茜素红染色结果显示,阳性对照组和内化组牙周膜干细胞均可形成矿化结节。阳性对照组矿化结节大而多,而内化组矿化结节少而稀疏。阳性对照组和内化组牙周膜干细胞ALP活性较空白对照组升高,内化组ALP活性低于阳性对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。空白对照组牙周膜干细胞Runx2和OCN基因表达在第7和14天无明显变化,阳性对照组和内化组牙周膜干细胞Runx2和OCN基因表达较空白对照组上调,且内化组牙周膜干细胞Runx2基因表达低于阳性对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论牙周膜干细胞体外经过成骨诱导后可以分化成成骨细胞,形成矿化结节,P. gingivalis ATCC 33277内化牙周膜干细胞后可以抑制其成骨分化的能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞内化论文参考文献
[1].王立霞,孟庆玲,乔军,郭晶,伍晔晖.单核细胞增生李斯特菌新型内化素lmo0549的分子特征及其表达[J].江苏农业科学.2019
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[4].尹彩霞,于少雄,宋琨,李素,杨玉莹.E2蛋白介导猪瘟病毒的细胞吸附与内化[J].中国农业科学.2018
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标签：单核细胞增生李斯特菌; 内化素Lmo0549; 克隆; 分子特征;