本文主要研究内容
作者赵乐恒,翟郑,吕昌龙,翟景波（2019）在《编码Ag85A基因突变体的设计与合成》一文中研究指出：自行设计和合成可转录mRNA不能翻译功能性蛋白分子的全长Ag85A编码基因突变体(Ag85A-M),克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,用于后续制备Ag85A-M疫苗,研究双股Ag85 DAN疫苗是否能通过RNA传感器提呈抗原信息,诱导固有和适应性免疫应答。设计Ag85A-M基因,将编码Ag85A基因(891 bp)中的第114位和230位的碱基C突变为G,使之含有TAG和TGA双重翻译终止子。合成Ag85A(M)全基因片段,利用普通PCR方法按照设计将Ag85A(M)全基因序列分别拆分成332 bp(A)、332 bp(B)、264 bp(C)三个小片段和488 bp(D)、423 bp(E)两个小片段进行扩增合成。构建pIRES2-EGFP-Ag85A(M)载体,将Ag85A(M)全长基因片段通过pIRES2-EGFP载体多克隆位点(multiple clone site, MCS)中双酶切位点EcoR I/BamH I插入载体,再经双酶切和基因测序鉴定,DC2.4中基因表达确认。结果显示,采用普通PCR法分段扩增合成获得与预先设计的长度一致的A、B、C、D和E小片段,合成的Ag85A-M的全部序列(891 bp)、突变位置和碱基正确。三片段拆分(A、B和C小片段)阳性克隆率平均值为87.67%,基因保真度为90.33%。二片段拆分(D和E小片段)阳性克隆率平均值为81.5%,基因保真度为23%。结果表明,本研究获得了可用于后续研究的含有114和230位点突变的全长Ag85A-M DNA片段,三片段基因拆分方法获得的332 bp及以下片段PCR法合成保真度显著高于二片段拆分方法获得的423 bp及以上片段。
Abstract
zi hang she ji he ge cheng ke zhuai lu mRNAbu neng fan yi gong neng xing dan bai fen zi de quan chang Ag85Abian ma ji yin tu bian ti (Ag85A-M),ke long zhi zhen he biao da zai ti pIRES2-EGFP,yong yu hou xu zhi bei Ag85A-Myi miao ,yan jiu shuang gu Ag85 DANyi miao shi fou neng tong guo RNAchuan gan qi di cheng kang yuan xin xi ,you dao gu you he kuo ying xing mian yi ying da 。she ji Ag85A-Mji yin ,jiang bian ma Ag85Aji yin (891 bp)zhong de di 114wei he 230wei de jian ji Ctu bian wei G,shi zhi han you TAGhe TGAshuang chong fan yi zhong zhi zi 。ge cheng Ag85A(M)quan ji yin pian duan ,li yong pu tong PCRfang fa an zhao she ji jiang Ag85A(M)quan ji yin xu lie fen bie ca fen cheng 332 bp(A)、332 bp(B)、264 bp(C)san ge xiao pian duan he 488 bp(D)、423 bp(E)liang ge xiao pian duan jin hang kuo zeng ge cheng 。gou jian pIRES2-EGFP-Ag85A(M)zai ti ,jiang Ag85A(M)quan chang ji yin pian duan tong guo pIRES2-EGFPzai ti duo ke long wei dian (multiple clone site, MCS)zhong shuang mei qie wei dian EcoR I/BamH Icha ru zai ti ,zai jing shuang mei qie he ji yin ce xu jian ding ,DC2.4zhong ji yin biao da que ren 。jie guo xian shi ,cai yong pu tong PCRfa fen duan kuo zeng ge cheng huo de yu yu xian she ji de chang du yi zhi de A、B、C、Dhe Exiao pian duan ,ge cheng de Ag85A-Mde quan bu xu lie (891 bp)、tu bian wei zhi he jian ji zheng que 。san pian duan ca fen (A、Bhe Cxiao pian duan )yang xing ke long lv ping jun zhi wei 87.67%,ji yin bao zhen du wei 90.33%。er pian duan ca fen (Dhe Exiao pian duan )yang xing ke long lv ping jun zhi wei 81.5%,ji yin bao zhen du wei 23%。jie guo biao ming ,ben yan jiu huo de le ke yong yu hou xu yan jiu de han you 114he 230wei dian tu bian de quan chang Ag85A-M DNApian duan ,san pian duan ji yin ca fen fang fa huo de de 332 bpji yi xia pian duan PCRfa ge cheng bao zhen du xian zhe gao yu er pian duan ca fen fang fa huo de de 423 bpji yi shang pian duan 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自微生物学杂志的赵乐恒,翟郑,吕昌龙,翟景波，发表于刊物微生物学杂志2019年02期论文，是一篇关于基因突变体论文,基因合成论文,微生物学杂志2019年02期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自微生物学杂志2019年02期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：基因突变体论文; 基因合成论文; 微生物学杂志2019年02期论文;