导读:本文包含了液泡型焦磷酸酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:枸杞,液泡膜H+-转运焦磷酸酶,LbVP1,表达模式
液泡型焦磷酸酶论文文献综述
杨亚珺,石晶,郑国宝,王丽娟,梁文裕[1]（2019）在《枸杞液泡膜H~+-转运焦磷酸酶基因LbVP1克隆及表达分析》一文中研究指出液泡膜H~+-转运焦磷酸酶在调节植物生长发育和逆境胁迫应答中发挥重要作用。本研究在已构建的枸杞本地数据库中先进行VP基因电子克隆,然后结合RT-PCR方法克隆到一个枸杞液泡膜H~+-转运焦磷酸酶编码基因LbVP1,并对其序列结构、时空表达模式进行了初步分析。LbVP1开放阅读框全长2301 bp,编码766氨基酸残基。多序列比对显示该基因与拟南芥AVP基因相似性达87.9%,序列结构生物信息学预测和亚细胞定位实验表明,该基因具有液泡膜H~+-转运焦磷酸酶的保守结构域和跨膜区,可能在液泡膜发挥作用。荧光定量PCR结果显示,LbVP1在花、叶和不同发育阶段果实中存在时空表达差异,干旱胁迫处理下叶片和果实中该基因表达量与对照存在(极)显着差异(P<0.01,P <0.05)。研究结果将为阐明该基因在枸杞抗旱分子调控机制中的作用提供基础理论依据。(本文来源于《植物遗传资源学报》期刊2019年02期）
张晓芳[2]（2018）在《矮沙冬青液泡膜氢离子焦磷酸酶基因（AnVP1）的异源表达提高玉米耐旱性》一文中研究指出干旱制约着玉米的生产及发展,严重影响玉米生长发育及籽粒产量。传统育种方法选育耐旱品种周期长、效率低,更由于玉米自身耐旱种质资源狭窄,难以选育成能满足生产需求的耐旱品种。因此,挖掘具有自主知识产权的抗旱抗逆基因是玉米抗逆转基因研究的必须之路。转基因技术可克服物种间的生殖障碍,转化利用其他物种的耐旱基因,是克服干旱威胁最为经济有效的措施。在前期研究中,课题组从残遗超旱生植物矮沙冬青中,克隆了液泡膜氢离子焦磷酸酶基因(AnVP1),转化酵母和拟南芥突变体验证其对非生物逆境的抗性后,用农杆菌介导法转化玉米自交系,共获得47个T_1代转基因株系。本研究对AnVP1基因推导蛋白进行安全性预测后,结合除草剂抗性筛选、特异PCR扩增、高效热不对称交错式PCR(High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR,hiTAIL-PCR)、反转录PCR(Reverse-transcription PCR,RT-PCR)和RNA测序(RNA-sequencing,RNA-seq)、盆栽和田间耐旱性鉴定等方法,对这47个转基因株系进行了繁育和鉴定,主要结果如下:(1)数据库比对结果,AnVP1基因推导蛋白与所有已知毒蛋白、过敏原和抗营养因子均不同源,说明我们克隆的AnVP1基因是安全的,可用于转化玉米等作物。(2)在自交繁育的同时,结合田间抗除草剂筛选和特异PCR鉴定,繁育获得26个T_3代株系,其中12个株系在T_2代的阳性率即达100%,表明这12个T_3代株系已经纯合,可用于后续抗性鉴定(3)用hiTAIL-PCR扩增出A1、A16和A49叁个T_2代株系T-DNA整合位点右边界的侧翼序列,将这叁个株系T-DNA整合位点分别定位于第5、6和6号染色体,并且发现A31、A33和A37叁个株系T-DNA的整合携带了部分表达载体骨架。(4)用RT-PCR方法可从12个纯合的T_3代株系中均检测到AnVP1基因的表达,表明AnVP1基因不仅整合进玉米基因组,也在玉米中异源表达。(5)在T_2和T_3代株系反复多次的盆栽试验中,标记为A31、A33和A37的叁个株系的幼苗在干旱胁迫15 d后复水,能全部恢复生长,耐旱性显着高于未转基因对照,而其余株系只有部分恢复生长,与未转基因对照差异不明显。(6)RNA-seq分析表明,A31、A33和A37株系分别有285、169和288内源基因较未转基因对照差异表达。其中,上调表达的分别有149、92和115个,下调表达的分别有136、77和173个基因,在3个转基因株系中共同上调和下调表达的分别有6和12个。GO分析表明,在差异表达基因中,分子功能相关基因有326个,涉及催化活性、结合和转录调控等代谢途径,归分为12个种类;细胞组分相关基因有115个,涉及细胞和细胞器成分等,归分为11个类型;生物学过程相关基因有245个,涉及代谢过程、细胞进程、应激反应、生物调节和发育过程等,分为17类。由此说明,T-DNA的整合还可能通过对内源基因表达的影响间接调控胁迫应答、糖代谢及生长发育。(7)田间试验表明,转基因株系A765的单株粒重及其在干旱胁迫条件下的耐旱系数均显着高于未转基因对照和优良自交系郑58,转基因株系A737在非胁迫条件下的单株粒重也显着高于未转基因对照。上述结果表明,矮沙冬青AnVP1基因已整合到玉米基因组中,其异源表达提高了转基因株系的耐旱性。经进一步筛选繁育、表型鉴定和安全性评价后,所获转基因株系有望应用于耐旱玉米品种培育。(本文来源于《四川农业大学》期刊2018-06-01）
周夏玉[3]（2017）在《矮沙冬青液泡膜氢离子焦磷酸酶基因转化玉米》一文中研究指出干旱等非生物逆境是玉米生产的主要限制因素。培育推广耐旱品种是克服干旱威胁最为经济有效的措施。但是,玉米整个物种对水分敏感,耐旱性强的种质资源缺乏,常规育种对耐旱性的改良进展不大,难以满足农业生产的需求。转基因技术可克隆物种间的生殖障碍,转化利用基因其他物种的耐旱基因,为耐旱玉米品种的培育提供了新的途径。矮沙冬青是分布于干旱沙漠地带的超旱生植物,对干旱、盐碱、极端温度等非生物逆境耐受性极强。在前期研究中,课题组从矮沙冬青克隆了液泡膜氢离子焦磷酸酶基因AnVP1,并转化酵母和拟南芥突变体验证其抗性功能。本研究用以构建AnVP1基因单子叶植物表达载体,农杆菌介导法转化玉米胚性愈伤组织,通过筛选、分化再生植株,PCR检测外源基因整合的阳性株系,定量PCR检测AnVP1基因的过量表达,并进行初步的盆栽耐旱性鉴定,试图为耐旱玉米品种培育创造新种质。主要结果如下:(1)将矮沙冬青液泡膜氢离子焦磷酸酶基因AnVP1、玉米泛素启动子Ubiquitin和农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子T-nos,成功插入pZZ00026质粒,构建成AnVP1基因单子叶表达载体pZZ00026-Ubi-AnVP1-T-nos,酶切和测序鉴定正确。(2)用表达载体pZZ00026-Ubi-An1VP-T-nos,农杆菌介导法转化玉米自交系C01胚性愈伤组织,经抗性培养基筛选、分化再生、田间除草剂筛选和PCR检测,获得47个T1代株系,其中编号为737、760和765的3个株系阳性率高。(3)实时定量PCR检测表明,AnVP1基因在737、760和765叁个T2代株系中过量表达。在16%聚乙二醇6000模拟干旱处理下,AnVPI基因在T2代株系叶片和根系的表达量增高,在760株系的叶片和765株系的根系内显着高于未处理对照,但在其他株系叶片和根系内的表达量未显着高于未处理对照。(4)在16%聚乙二醇6000模拟干旱处理2 d和自然干旱2周后,737、760和765叁个T2代株系的萎焉程度明显小于未转化自交系C01。上述结果表明,矮沙冬青AnVP1基因已整合到玉米基因组中,过量表达可明显提高转基因株系的耐旱性。转基因株系经进一步筛选纯合、表型鉴定和安全性评价后,可用于耐旱玉米品种培育。(本文来源于《四川农业大学》期刊2017-06-01）
张春蕊,王艳敏,张玉,王玉成,杨传平[4]（2016）在《刚毛柽柳液泡膜H~+转运无机焦磷酸酶ThVP3的克隆与表达分析》一文中研究指出通过对刚毛柽柳转录组的分析,获得并克隆了1个H~+-PPase基因cDNA全长,命名为ThVP3。序列分析结果表明:ThVP3全长3 500 bp,包含2 406 bp完整的开放读码框,618的5'非编码区和476 bp的3'非编码区。该cDNA编码1个801个氨基酸的多肽,等电点为5.67,推测分子质量为84.86 k D。通过与其他物种的氨基酸多序列比对及系统进化树分析,发现ThVP3氨基酸序列与AtVP2(拟南芥)一致性达88%,属于Ⅱ型VP成员。ThVP3基因有15个跨膜区,并具有高度保守的3个结构域(CS1,CS2,CS3)。相对荧光定量RT-PCR结果表明,ThVP3在高盐及干旱胁迫下均呈现为表达上调,但在各胁迫时间点和不同组织中的表达模式有所差异,0.4 mol/L Na Cl胁迫处理下,地下部分3 h达到最大值后有不同程度的降低,地上部分24 h达到最大值,与地下部分比,地上部分呈现较高的表达量;20%(w/v)PEG 6000胁迫处理下,地下部分在3 h和12 h达到峰值,地上部分表达量逐渐升高,24 h达到最大值后逐渐降低,96 h达到第2个峰值。ThVP3的表达受盐旱胁迫的诱导,推测其可能在柽柳的胁迫应答中起着重要的作用。(本文来源于《分子植物育种》期刊2016年10期）
杨小丽[5]（2016）在《獐茅液泡膜氢离子焦磷酸酶基因AlVP1的克隆与表达》一文中研究指出干旱严重影响农作物的生长及产量。氢离子焦磷酸酶作为一种独特的质子泵能够为无机离子跨液泡膜的主动运输提供动力,维持细胞的渗透势,增强水分胁迫条件下植物的吸水能力,从而提高其对于干旱胁迫的耐受性。本研究通过基因保守区的扩增、3'RACE及5'锚定技术从单子叶禾本科植物獐茅中克隆了液泡膜氢离子焦磷酸酶基因(AlVP1)的cDNA序列。该序列全长为2802 bp,其中3'端非编码区长度为370 bp,5'端非编码区长度为131 bp,开放性阅读框2301 bp,共编码766个氨基酸。AlVPl基因所编码蛋白同其他高等植物来源的Ⅰ型氢离子焦磷酸酶同源性为86～96%；疏水性分析显示AlVP1蛋白共包含14个跨膜区域,是一个典型的跨膜蛋白,并含有氢离子焦磷酸酶家族所共有保守功能位点CS1、CS2和CS3。实时定量PCR分析结果表明,AlVP1基因的表达受到干旱、ABA、缺钾、NaCl以及低温(4℃)胁迫的诱导。其中干旱、ABA、缺钾和NaCl胁迫条件下AlVP1基因在根部中显着上调表达,而叶片中则下调表达。低温胁迫条件下,根部中AlVP1基因显着下调表达,而叶片中则显着上调。采用无缝克隆法构建了PTF101-AlVP1植物表达载体,利用根癌农杆菌介导的叶盘法转化烟草。PCR及半定量RT-PCR结果表明,AlVP1基因已整合进烟草的基因组中并表达。干旱胁迫条件下,转基因烟草根系的生长状况明显优于野生型烟草,且其根部干重显着高于野生型烟草；同时,转基因烟草的叶片相对含水量、叶绿素含量及超氧化物歧化酶活性均高于野生型烟草,而丙二醛含量则低于野生型植株。上述结果表明,AlVP1基因的过表达能够提高转基因烟草的耐旱性。(本文来源于《大连理工大学》期刊2016-05-01）
佟澄碧,郝文波,罗树红,肖斌,程莎莎[6]（2015）在《兔抗弓形虫Ⅰ型液泡型质子焦磷酸酶多克隆抗体的制备及鉴定》一文中研究指出目的制备兔抗弓形虫I型液泡型质子焦磷酸酶(Tg VP1)多克隆抗体并鉴定其应用。方法选择弓形虫ME49株Tg VP1氨基酸序列中的两条多肽,Tg VP1-1与Tg VP1-2,进行人工合成,并将其与KLH偶联作为抗原免疫新西兰大耳白兔,收集血清制备多克隆抗体,并通过ELISA、Western blot、免疫荧光等方法进行鉴定。结果经间接ELISA测定,兔抗Tg VP1-1及Tg VP1-2的多克隆抗体效价均达1∶128 000;Western blot结果显示两种多抗均能识别弓形虫天然蛋白中85 000左右条带,与Tg VP1预测相对分子质量大小相符,且特异性较好;通过免疫荧光技术检测到两株多抗识别的蛋白均定位于细胞质中,与酸性钙体的分布相同。结论采用人工合成多肽为免疫原所获得的兔抗Tg VP1多克隆抗体效价高,特异性好,弓形虫Tg VP1和酸性钙体的深入研究奠定了基础,同时也为弓形虫病的诊断提供了新的有效工具。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2015年08期）
甘晓燕,巩檑,石磊,宋玉霞[7]（2014）在《梭梭液泡膜焦磷酸酶HaVVP基因克隆及序列分析》一文中研究指出以梭梭叶片为材料,根据其他植物液泡膜焦磷酸酶基因的保守序列设计引物,采用同源基因克隆及RACE-PCR方法克隆到1个H+-PPase基因,命名为HaVVP。HaVVP基因编码区长2 734bp,编码767个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的高等植物H+-PPase基因核苷酸序列的同源性均在68%以上、氨基酸序列的同源性达80%以上。(本文来源于《西北农业学报》期刊2014年11期）
贺怡,钱雯婕,袁磊,李榕,谭兰[8]（2014）在《费尔干猪毛菜液泡膜氢离子焦磷酸酶基因SfVP的克隆、序列分析及表达》一文中研究指出植物液泡膜氢离子焦磷酸酶(Vacuolar H+-PPase,VP)能够酸化液泡并为液泡的次级转运系统提供能量,在植物耐盐性方面发挥着着重要作用。本研究采用RT-PCR结合RACE方法,从费尔干猪毛菜中(Salsola ferganica)克隆得到液泡膜质子焦磷酸酶基因SfVP,该基因的cDNA全长2738 bp,包含1个2301 bp的完整开放读码框(ORF),编码766个氨基酸的多肽。氨基酸序列分析表明其属于H+-转运无机焦磷酸酶超家族成员,具有典型的H+-PPase结构域,其疏水性较强,含有12个跨膜螺旋结构。SfVP序列比对显示具有H+-PPase的3个保守序列CS1、CS2和CS3,其中CS1中含有保守的底物催化位点,与烟草的NtVP氨基酸序列相似性为95.3%。半定量RT-PCR结果表明,SfVP的转录表达丰度随着600 mmol/L NaCl处理时间的增加而升高,处理12 h后显着增加并一直维持在较高水平。(本文来源于《石河子大学学报(自然科学版)》期刊2014年03期）
杨艺,徐莉,张霞,张富春[9]（2014）在《灰绿藜液泡膜焦磷酸酶基因的克隆及表达分析》一文中研究指出采用同源克隆的方法,获得盐生植物灰绿藜的液泡膜焦磷酸酶基因(VP1)全长cDNA,命名为CgVP1。生物信息学预测分析表明,CgVP1基因包含一个2 292bp的开放阅读框,编码763个氨基酸。CgVP1不仅具有与植物液泡膜焦磷酸酶共有的氨基酸序列DVGADLVGKVE,而且CgVP1与其它植物的VP1相似性达86%。跨膜结构域预测显示,CgVP1氨基酸序列含有12个跨膜螺旋区,可能定位于细胞膜系统上。RT-PCR检测表明,200mmol/L NaCl条件下萌发生长的灰绿藜,再进行800mmol/L NaCl胁迫处理24h后,CgVP1基因表达显着增强。不同浓度KCl、CaCl2、MgCl2分别处理24h,KCl和MgCl2浓度增高,CgVP1基因表达下降,CaCl2则不影响CgVP1基因表达。研究结果表明,灰绿藜CgVP1基因表达对不同种类盐胁迫响应不同,NaCl胁迫可以上调CgVP1基因表达。该研究结果有助于阐明盐胁迫对盐生植物灰绿藜CgVP1基因表达的调控作用。(本文来源于《西北植物学报》期刊2014年03期）
佟澄碧,汪园园,廖小青,程莎莎,罗树红[10]（2013）在《弓形虫液泡型质子焦磷酸酶单克隆抗体的制备及其功能鉴定》一文中研究指出液泡型质子焦磷酸酶(vacuolar H+-pyrophosphatase,V-PPase)是一种特殊的生电质子泵,分为K+依赖型(I型)和非K+依赖型(II型),其功能是利用水解无机焦磷酸产生的能量,建立质膜内外氢离子梯度,维持细胞内正常pH值,从而保证细胞形态稳定和功能正常。该酶最先发现与植物细胞中,目前已在部分藻类,原生动物类,细菌和古细菌中报道发现。其中,有文献报道疟原虫中的V-PPase(PfVP1,PfVP2)与其侵袭力有关,所以我们认(本文来源于《2013年全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集》期刊2013-11-10）
液泡型焦磷酸酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
干旱制约着玉米的生产及发展,严重影响玉米生长发育及籽粒产量。传统育种方法选育耐旱品种周期长、效率低,更由于玉米自身耐旱种质资源狭窄,难以选育成能满足生产需求的耐旱品种。因此,挖掘具有自主知识产权的抗旱抗逆基因是玉米抗逆转基因研究的必须之路。转基因技术可克服物种间的生殖障碍,转化利用其他物种的耐旱基因,是克服干旱威胁最为经济有效的措施。在前期研究中,课题组从残遗超旱生植物矮沙冬青中,克隆了液泡膜氢离子焦磷酸酶基因(AnVP1),转化酵母和拟南芥突变体验证其对非生物逆境的抗性后,用农杆菌介导法转化玉米自交系,共获得47个T_1代转基因株系。本研究对AnVP1基因推导蛋白进行安全性预测后,结合除草剂抗性筛选、特异PCR扩增、高效热不对称交错式PCR(High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR,hiTAIL-PCR)、反转录PCR(Reverse-transcription PCR,RT-PCR)和RNA测序(RNA-sequencing,RNA-seq)、盆栽和田间耐旱性鉴定等方法,对这47个转基因株系进行了繁育和鉴定,主要结果如下:(1)数据库比对结果,AnVP1基因推导蛋白与所有已知毒蛋白、过敏原和抗营养因子均不同源,说明我们克隆的AnVP1基因是安全的,可用于转化玉米等作物。(2)在自交繁育的同时,结合田间抗除草剂筛选和特异PCR鉴定,繁育获得26个T_3代株系,其中12个株系在T_2代的阳性率即达100%,表明这12个T_3代株系已经纯合,可用于后续抗性鉴定(3)用hiTAIL-PCR扩增出A1、A16和A49叁个T_2代株系T-DNA整合位点右边界的侧翼序列,将这叁个株系T-DNA整合位点分别定位于第5、6和6号染色体,并且发现A31、A33和A37叁个株系T-DNA的整合携带了部分表达载体骨架。(4)用RT-PCR方法可从12个纯合的T_3代株系中均检测到AnVP1基因的表达,表明AnVP1基因不仅整合进玉米基因组,也在玉米中异源表达。(5)在T_2和T_3代株系反复多次的盆栽试验中,标记为A31、A33和A37的叁个株系的幼苗在干旱胁迫15 d后复水,能全部恢复生长,耐旱性显着高于未转基因对照,而其余株系只有部分恢复生长,与未转基因对照差异不明显。(6)RNA-seq分析表明,A31、A33和A37株系分别有285、169和288内源基因较未转基因对照差异表达。其中,上调表达的分别有149、92和115个,下调表达的分别有136、77和173个基因,在3个转基因株系中共同上调和下调表达的分别有6和12个。GO分析表明,在差异表达基因中,分子功能相关基因有326个,涉及催化活性、结合和转录调控等代谢途径,归分为12个种类;细胞组分相关基因有115个,涉及细胞和细胞器成分等,归分为11个类型;生物学过程相关基因有245个,涉及代谢过程、细胞进程、应激反应、生物调节和发育过程等,分为17类。由此说明,T-DNA的整合还可能通过对内源基因表达的影响间接调控胁迫应答、糖代谢及生长发育。(7)田间试验表明,转基因株系A765的单株粒重及其在干旱胁迫条件下的耐旱系数均显着高于未转基因对照和优良自交系郑58,转基因株系A737在非胁迫条件下的单株粒重也显着高于未转基因对照。上述结果表明,矮沙冬青AnVP1基因已整合到玉米基因组中,其异源表达提高了转基因株系的耐旱性。经进一步筛选繁育、表型鉴定和安全性评价后,所获转基因株系有望应用于耐旱玉米品种培育。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
液泡型焦磷酸酶论文参考文献
[1].杨亚珺,石晶,郑国宝,王丽娟,梁文裕.枸杞液泡膜H~+-转运焦磷酸酶基因LbVP1克隆及表达分析[J].植物遗传资源学报.2019
[2].张晓芳.矮沙冬青液泡膜氢离子焦磷酸酶基因（AnVP1）的异源表达提高玉米耐旱性[D].四川农业大学.2018
[3].周夏玉.矮沙冬青液泡膜氢离子焦磷酸酶基因转化玉米[D].四川农业大学.2017
[4].张春蕊,王艳敏,张玉,王玉成,杨传平.刚毛柽柳液泡膜H~+转运无机焦磷酸酶ThVP3的克隆与表达分析[J].分子植物育种.2016
[5].杨小丽.獐茅液泡膜氢离子焦磷酸酶基因AlVP1的克隆与表达[D].大连理工大学.2016
[6].佟澄碧,郝文波,罗树红,肖斌,程莎莎.兔抗弓形虫Ⅰ型液泡型质子焦磷酸酶多克隆抗体的制备及鉴定[J].南方医科大学学报.2015
[7].甘晓燕,巩檑,石磊,宋玉霞.梭梭液泡膜焦磷酸酶HaVVP基因克隆及序列分析[J].西北农业学报.2014
[8].贺怡,钱雯婕,袁磊,李榕,谭兰.费尔干猪毛菜液泡膜氢离子焦磷酸酶基因SfVP的克隆、序列分析及表达[J].石河子大学学报(自然科学版).2014
[9].杨艺,徐莉,张霞,张富春.灰绿藜液泡膜焦磷酸酶基因的克隆及表达分析[J].西北植物学报.2014
[10].佟澄碧,汪园园,廖小青,程莎莎,罗树红.弓形虫液泡型质子焦磷酸酶单克隆抗体的制备及其功能鉴定[C].2013年全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集.2013
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