导读:本文包含了蚀斑减少中和试验论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:乙型脑炎病毒,蚀斑试验,BHK-21细胞,Vero细胞
蚀斑减少中和试验论文文献综述
庞雪,张嵘,姚宇,孙非非,李鹤[1]（2016）在《不同细胞对乙型脑炎病毒蚀斑减少中和试验的影响》一文中研究指出目的分别使用不同细胞测定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)滴度及乙型脑炎灭活疫苗效价,分析不同细胞对检测结果的影响。方法将JEV P3株接种至长满单层的MDBK、Vero、LLC-MK2、BHK-21细胞的6孔板,采用蚀斑试验测定JEV的PFU;将乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)免疫小鼠,取静脉血,分离血清,经56℃灭能30 min后,与JEV P3株混合,接种至长满单层的Vero、BHK-21、LLC-MK2细胞的6孔板,采用蚀斑减少中和试验检测乙型脑炎灭活疫苗的效价。结果 JEV在4种细胞上均可产生细胞病变(cytopathic effect,CPE),但在MDBK细胞上不形成蚀斑,病毒感染的Vero、LLC-MK2、BHK-21细胞的收获液病毒滴度分别为10.02、9.42和9.21 lg PFU/ml;3种细胞测定乙型脑炎灭活疫苗效价T值Vero>LLC-MK2>BHK-21,其中Vero细胞与BHK-21和LLC-MK2细胞比较,蚀斑减少率及对应T值差异有统计学意义(P<0.05),LLC-MK2与BHK-21细胞比较,蚀斑减少率及对应T值差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4种细胞感染JEV后均可产生CPE,但MDBK细胞不能形成蚀斑;不同细胞测定疫苗效价,蚀斑减少率及对应T值也不同,其中Vero细胞测定T值最大,BHK-21细胞测定T值最小。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2016年02期）
金悦新[2]（2013）在《检测猪乙脑抗体的EDⅢ抗原间接ELISA与血凝抑制和蚀斑减少中和试验的相关性研究》一文中研究指出日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)又称流行性乙型脑炎,简称乙脑,是一种经蚊子传播的,由黄病毒科黄病毒属的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的人畜共患病。人和马的乙型脑炎临床特征是发热和脑炎,猪乙型脑炎主要表现为母猪流产和公猪睾丸炎。猪感染JEV后病毒血症持续时间长,滴度高,是JEV在自然界的扩增宿主。目前没有针对JE治疗的特效药,预防性疫苗接种是防控该病的主要措施之一。因此,对JEV易感动物群体的免疫状态及时有效的监测就显得十分重要。JEV囊膜蛋白(Envelope Protein, E)结构域Ⅲ (Domain Ⅲ, EDⅢ)是JEV主要结构蛋白E蛋白上的抗原结构域,能激发机体产生病毒特异性的体液免疫,在宿主抗JEV感染致病中起重要作用。血凝抑制试验(Hemagglutination Inhibition test, HI)和蚀斑减少中和试验(Plaque Reduction Neutralization Test, PRNT)是检测JEV抗体的经典方法。但是因为这些检测方法对试验材料、操作者的熟练度和特殊设备的依赖而在临床的广泛应用受到限制,酶联免疫吸附试验(ELISA)是目前检验常用的免疫学检测方法之一,主要因为其操作简单,检测快速,敏感性、特异性强,检测量大。但是ELISA检测结果的临床意义评价需要大量相关流行病学数据来支持。因此,本研究在实验室前期研究的基础上对检测JEV抗体的间接ELISA检测方法进行完善,对比检测临床血清样品,分析间接ELISA结果与HI以及PRNT检测结果的相关性,从而为建立JEV EDIII抗原间接ELISA提供临床意义的评价指标,为JEV抗体ELISA试剂盒的研制奠定基础。具体研究内容如下：1.原核表达乙脑病毒EDIII抗原进行间接ELISA的研究本试验室构建保存的pET-28a-EDⅢ勺BL21甘油菌,经表达条件优化,EDIII蛋白在大肠杆菌中IPTG低温诱导,呈可溶性表达,但是表达量低；37℃诱导表达EDIII可呈包涵体表达,以包涵体形式大量存在。通过His标签亲和层析柱分离纯化,得到较纯的EDIII蛋白,经叁次表达纯化,测得平均蛋白浓度为2.84mg/mL,平均每升菌液可得9.4mg纯化的蛋白。用Westen blot分析所表达的蛋白可以与JEV阳性抗体特异性反应,表明包涵体表达的EDIII蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原。用纯化的EDIII蛋白作为包被抗原,对各项反应条件进行优化,建立了检测JEV抗体的间接ELISA方法。确定ELISA的最佳反应条件如下,包被浓度0.7μg/mL,4℃过夜;1%BSA的PBST4℃封闭过夜；待检血清稀释度为1：40,37℃作用1h；二抗1:5000(0.2μg/mL)稀释,37℃作用1h。阴阳性判断,以OD450nm≥0.436判定为阳性,OD450nm≤0.363为阴性,中间值为可疑,复检仍为可疑值时判定为阴性,即OD450nm<0.436即判定为阴性。通过特异性试验表明与蓝耳病,猪瘟,伪狂犬病等的阳性血清OD45nm值低,无交叉反应。批间和批内重复性试验效果较好。此方法具有良好的特异性、重复性和敏感性。2.乙脑病毒EDⅢ抗原间接ELISA与血凝抑制及蚀斑减少中和试验的相关性研究用间接ELISA检测127份猪血清中JEV抗体,再对其进行HI效价测定,最后对其中21份进行PRNT,以测定其中和效价。经配对卡方检验表明,HI对ELISA的灵敏度为72.5%,特异度为52%,两种方法的符合率为68.5%,两种检测方法差异不显着(x2=5.535,P=0.17>0.05)；PRNT对HI试验的灵敏度为72.2%,特异度为33.3%,两种方法判定的符合率为66.7%,差异性不显着(X2=0.039, P=0.453>0.05);PRNT对ELISA的敏感度为80.0%,特异度为50.0%,两种方法判定的符合率为71.4%,差异不显着(x2=1.890,P=1>0.05)。说明此叁种检测方法都能有效检测猪血清中的乙脑抗体水平,但是ELISA检测更为敏感。3.猪血清乙脑抗体的流行病学调查为更好地了解不同免疫背景的猪血清中乙脑抗体水平,用建立的乙脑病毒EDIII抗原间接ELISA方法,对339份不同乙脑疫苗免疫的猪血清,以及安徽、江苏不同规模猪场采集的不同免疫背景的猪血清进行检测分析。并对不同地区、不同规模猪场以及不同免疫程序的猪血清中乙脑抗体流行情况进行分析。结果表明,乙脑抗体流行按照猪场所在地区、猪场规模化程度以及免疫程序,呈现一定的规律性；其次也表明所建立的EDIII抗原间接ELISA能真实反应乙脑抗体水平,为后续乙脑抗体检测试剂盒的研制提供了较详实可靠的依据。(本文来源于《南京农业大学》期刊2013-05-01）
过琴媛,安焕宇,范淑兰,高炬[3]（2006）在《蚀斑减少中和试验检测抗天花免疫球蛋白效价》一文中研究指出为了建立测定抗天花免疫球蛋白效价的检测方法,采用抗天花免疫球蛋白50%中和100PFU痘苗病毒的稀释度来确定其效价。通过与NIBSC提供的抗天花人免疫球蛋白标准品进行的对比试验,结果显示基本一致,证明该方法是可行的。(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2006年04期）
郭中平,李裕惠,张鹏燕[4]（2003）在《应用蚀斑减少中和试验检测健康人血浆中抗乙型脑炎病毒中和抗体》一文中研究指出目的 应用蚀斑减少中和试验,检测健康人血浆中抗乙型脑炎病毒中和抗体水平。方法 采用蚀斑减少中和试验。结果 四川和重庆地区健康人血浆中98％以上含有抗乙型脑炎病毒中和抗体,其中10％的健康人血浆中该抗体滴度高达1:500倍以上。结论 采用蚀斑减少中和试验方法用于健康人血浆中乙型脑炎病毒中和抗体测定是可行的。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2003年05期）
郑官增,姚苹苹,朱函平,朱智勇[5]（2001）在《水痘带状疱疹病毒蚀斑减少中和试验》一文中研究指出〔目的〕建立水痘带状疱疹病毒中和抗体测定方法。〔方法〕用VZV1毒种制备中和抗原 ,以 5 0pfu左右病毒量加待测血清 36℃中和 1h ,接种Vero-E6单层细胞 ,烛缸法培养 10d后 ,用结晶紫染色 ,计数pfu ;以中和后pfu减少 5 0 %的血清最高稀释度为中和抗体滴度。〔结果〕VZV1在Vero -E6细胞上形成的蚀斑呈椭圆形 ,平均Φ0 .85mm ,边界清晰 ;经试验 3只VZV1免前家兔血清中和抗体滴度 <1:2 ,免后分别为 1:16、1:31、1:6 4;5份中和抗体阳性血清经重复测试 3次 ,中和抗体最多相差 1个滴度 ;2 4份血清同时测定VZV中和、荧光、酶标抗体的GMT比值为 1:1.83:46 .2 5。〔结论〕VZV蚀斑减少中和试验特异性、重复性良好 ,可用于VZV疫苗免疫效果考核。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2001年05期）
蒋一得[6]（1990）在《IgA、IgG和IgM酶联免疫吸附试验、蚀斑减少中和试验及补体结合试验检测对轮状病毒疫苗候选株血清应答的比较》一文中研究指出对11O名1～5月龄婴儿分成5组,分别服用以下制剂:(1)人-恒河猴重组轮状病毒疫苗D×RRV(1型),(2)DS-1×RRV(2型),(3)RRV(3型),(4)D×RRV和RRV,(5)安慰剂.于服前1～3天和服后4周各采1次血清样本.单价疫苗病毒含量为10~4蚀斑形成单位(PFU)/剂,双价疫苗中每型病毒含(本文来源于《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》期刊1990年05期）
王宇一,A,A,Andersen[7]（1979）在《在蚀斑减少中和试验和放射免疫扩散试验中正常牛血清对口蹄疫病毒的交叉反应》一文中研究指出摘要 曾用蚀斑减少中和技术和放射免疫扩散技术对150头非已知接触口蹄疫病毒的牛血清进行了检验,以估价在这些试验中交叉反应的意义和程度。对采自五个地区每个地区30头牛的血清,用7个型中各型有代表性的口蹄疫病毒进行检验。在特定的组群血清中,用放射免疫扩散技术和蚀斑减少中和技术发现在同一时间中均 有交叉反应的高水平。也看到用蚀斑减少中和技术对亚洲、南非Ⅰ、南非Ⅱ、南非Ⅲ型比对A、O或C型毒交叉反应的水平高,而用放射兔疫扩散技术对南非Ⅱ和南非Ⅲ型交叉反应水平也较高。对大多数血清反应的表现是颇为特异性的;已知血清往往仅同一或二种病毒有反应。(本文来源于《兽医科技资料》期刊1979年S1期）
张伯澄,J,W,McVicar,P[8]（1979）在《口蹄疫病毒:蚀斑减少中和试验》一文中研究指出对口蹄疫传播和发病机理的研究。需要一种定量测定某些体液的中和效能的方法,用以估价动物对感染或免疫的反应。通常这些研究需从每一动物采集大量的各种样品,包括血清,食道—咽液,鼻粘液和泪液。标准量病毒—变量血清(50％保护量,PD_(50))的乳鼠中和试验既费时间又昂贵。组织培养微量滴定技术效率较高,但是,对于中和效能极低的样品只能用低倍稀释液,这常常对所用的细胞系统产生有害影响。Capstick、Sellers和Sewtart叁氏曾建议对口蹄疫病毒应用蚀斑减少中和(PRN)试验,但是缺乏有关应用于口蹄疫病毒(本文来源于《兽医科技资料》期刊1979年04期）
蚀斑减少中和试验论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)又称流行性乙型脑炎,简称乙脑,是一种经蚊子传播的,由黄病毒科黄病毒属的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的人畜共患病。人和马的乙型脑炎临床特征是发热和脑炎,猪乙型脑炎主要表现为母猪流产和公猪睾丸炎。猪感染JEV后病毒血症持续时间长,滴度高,是JEV在自然界的扩增宿主。目前没有针对JE治疗的特效药,预防性疫苗接种是防控该病的主要措施之一。因此,对JEV易感动物群体的免疫状态及时有效的监测就显得十分重要。JEV囊膜蛋白(Envelope Protein, E)结构域Ⅲ (Domain Ⅲ, EDⅢ)是JEV主要结构蛋白E蛋白上的抗原结构域,能激发机体产生病毒特异性的体液免疫,在宿主抗JEV感染致病中起重要作用。血凝抑制试验(Hemagglutination Inhibition test, HI)和蚀斑减少中和试验(Plaque Reduction Neutralization Test, PRNT)是检测JEV抗体的经典方法。但是因为这些检测方法对试验材料、操作者的熟练度和特殊设备的依赖而在临床的广泛应用受到限制,酶联免疫吸附试验(ELISA)是目前检验常用的免疫学检测方法之一,主要因为其操作简单,检测快速,敏感性、特异性强,检测量大。但是ELISA检测结果的临床意义评价需要大量相关流行病学数据来支持。因此,本研究在实验室前期研究的基础上对检测JEV抗体的间接ELISA检测方法进行完善,对比检测临床血清样品,分析间接ELISA结果与HI以及PRNT检测结果的相关性,从而为建立JEV EDIII抗原间接ELISA提供临床意义的评价指标,为JEV抗体ELISA试剂盒的研制奠定基础。具体研究内容如下：1.原核表达乙脑病毒EDIII抗原进行间接ELISA的研究本试验室构建保存的pET-28a-EDⅢ勺BL21甘油菌,经表达条件优化,EDIII蛋白在大肠杆菌中IPTG低温诱导,呈可溶性表达,但是表达量低；37℃诱导表达EDIII可呈包涵体表达,以包涵体形式大量存在。通过His标签亲和层析柱分离纯化,得到较纯的EDIII蛋白,经叁次表达纯化,测得平均蛋白浓度为2.84mg/mL,平均每升菌液可得9.4mg纯化的蛋白。用Westen blot分析所表达的蛋白可以与JEV阳性抗体特异性反应,表明包涵体表达的EDIII蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原。用纯化的EDIII蛋白作为包被抗原,对各项反应条件进行优化,建立了检测JEV抗体的间接ELISA方法。确定ELISA的最佳反应条件如下,包被浓度0.7μg/mL,4℃过夜;1%BSA的PBST4℃封闭过夜；待检血清稀释度为1：40,37℃作用1h；二抗1:5000(0.2μg/mL)稀释,37℃作用1h。阴阳性判断,以OD450nm≥0.436判定为阳性,OD450nm≤0.363为阴性,中间值为可疑,复检仍为可疑值时判定为阴性,即OD450nm<0.436即判定为阴性。通过特异性试验表明与蓝耳病,猪瘟,伪狂犬病等的阳性血清OD45nm值低,无交叉反应。批间和批内重复性试验效果较好。此方法具有良好的特异性、重复性和敏感性。2.乙脑病毒EDⅢ抗原间接ELISA与血凝抑制及蚀斑减少中和试验的相关性研究用间接ELISA检测127份猪血清中JEV抗体,再对其进行HI效价测定,最后对其中21份进行PRNT,以测定其中和效价。经配对卡方检验表明,HI对ELISA的灵敏度为72.5%,特异度为52%,两种方法的符合率为68.5%,两种检测方法差异不显着(x2=5.535,P=0.17>0.05)；PRNT对HI试验的灵敏度为72.2%,特异度为33.3%,两种方法判定的符合率为66.7%,差异性不显着(X2=0.039, P=0.453>0.05);PRNT对ELISA的敏感度为80.0%,特异度为50.0%,两种方法判定的符合率为71.4%,差异不显着(x2=1.890,P=1>0.05)。说明此叁种检测方法都能有效检测猪血清中的乙脑抗体水平,但是ELISA检测更为敏感。3.猪血清乙脑抗体的流行病学调查为更好地了解不同免疫背景的猪血清中乙脑抗体水平,用建立的乙脑病毒EDIII抗原间接ELISA方法,对339份不同乙脑疫苗免疫的猪血清,以及安徽、江苏不同规模猪场采集的不同免疫背景的猪血清进行检测分析。并对不同地区、不同规模猪场以及不同免疫程序的猪血清中乙脑抗体流行情况进行分析。结果表明,乙脑抗体流行按照猪场所在地区、猪场规模化程度以及免疫程序,呈现一定的规律性；其次也表明所建立的EDIII抗原间接ELISA能真实反应乙脑抗体水平,为后续乙脑抗体检测试剂盒的研制提供了较详实可靠的依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蚀斑减少中和试验论文参考文献
[1].庞雪,张嵘,姚宇,孙非非,李鹤.不同细胞对乙型脑炎病毒蚀斑减少中和试验的影响[J].中国生物制品学杂志.2016
[2].金悦新.检测猪乙脑抗体的EDⅢ抗原间接ELISA与血凝抑制和蚀斑减少中和试验的相关性研究[D].南京农业大学.2013
[3].过琴媛,安焕宇,范淑兰,高炬.蚀斑减少中和试验检测抗天花免疫球蛋白效价[J].微生物学免疫学进展.2006
[4].郭中平,李裕惠,张鹏燕.应用蚀斑减少中和试验检测健康人血浆中抗乙型脑炎病毒中和抗体[J].中国生物制品学杂志.2003
[5].郑官增,姚苹苹,朱函平,朱智勇.水痘带状疱疹病毒蚀斑减少中和试验[J].中国卫生检验杂志.2001
[6].蒋一得.IgA、IgG和IgM酶联免疫吸附试验、蚀斑减少中和试验及补体结合试验检测对轮状病毒疫苗候选株血清应答的比较[J].国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册.1990
[7].王宇一,A,A,Andersen.在蚀斑减少中和试验和放射免疫扩散试验中正常牛血清对口蹄疫病毒的交叉反应[J].兽医科技资料.1979
[8].张伯澄,J,W,McVicar,P.口蹄疫病毒:蚀斑减少中和试验[J].兽医科技资料.1979