导读:本文包含了分离与克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:解磷菌,NBRIP平板筛选,钼锑抗法,碱性磷酸酶
分离与克隆论文文献综述
宁清,刘迪,靳翔,弓亚杰,薛智权[1]（2019）在《磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达》一文中研究指出为了从磷矿区土壤分离高效溶磷菌,为开发施用于矿区复垦的高效微生物解磷菌肥提供试验基础,利用磷酸钙培养平板筛选磷矿区土壤中的解磷菌,采用PCR法扩增16S rDNA序列进行鉴定,探讨不同碳源、氮源、起始pH值和温度下菌株的生长情况,另外还进一步克隆表达该菌株的碱性磷酸酶。结果显示,经筛选得到1株高活性的解磷菌,16S rDNA鉴定其为成团泛生菌(Pantoea agglomerans);该菌株最佳碳源为甘油、氮源为NH4Cl类无机氮,起始pH值为9,培养温度为33℃;在最适培养条件下,有效溶磷量达到了287.48 mg/L;成功克隆了该菌株中的碱性磷酸酶基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,重组菌裂解液活性为原始菌株裂解液的32.77倍。分离得到的菌株及重组表达的碱性磷酸酶在矿区复垦、农业种植和工业上均具有广泛的应用前景。(本文来源于《山西农业科学》期刊2019年11期）
潘孝成,沈学怀,赵瑞宏,戴银,胡晓苗[2]（2019）在《猪流行性腹泻病毒安徽分离株N基因的克隆与表达》一文中研究指出[目的]克隆和表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的N基因。[方法]采用RT-PCR方法对PEDV FD株的N基因进行扩增,将扩增产物连接pET-28B载体,阳性质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白。[结果]PEDV FD株N基因序列全长为1 326个核苷酸,编码441个氨基酸;重组N蛋白为可溶性表达,大小约58 ku;Western blot检测结果表明,重组N蛋白与PEDV抗体阳性血清发生特异性反应。[结论]该试验制备的PEDV重组N蛋白具有较好的免疫原性,可用于PEDV诊断方法的开发及相关研究。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2019年17期）
张虎,景晓雅,孙柳清,崔爱民,张鹏华[3]（2019）在《玉米矮花叶病毒分离物基因组克隆及多样性分析》一文中研究指出玉米是重要的粮食和经济作物,在国民经济中占有重要地位。玉米矮花叶病毒(Sugercan mosaic virus,SCMV)广泛分布在世界各玉米主产区,严重威胁玉米的安全生产。系统研究SCMV的发生危害、遗传结构与进化机制,对病毒病的防治具有重要意义。从山西省4个玉米主产区采集122个玉米叶片样品(2015年62份,2016年60份)。经RT-PCR检测证实36个样品(2015年20个样品,2016年16个样品)为SCMV阳性,且广泛分布于山西省玉米各个产区。从这些阳性样品中分离、测序、克隆得到了一个新的SCMV分离物,该分离物(包括5'-UTR和3'-UTR端)基因组全长9 539 bp,编码3 063个氨基酸。该分离物与26个SCMV分离物(NCBI)进行一致率、系统发育分析表明SCMV存在较大遗传变异,27个分离物被划分为3个与地理位置无明显相关性的不同进化群体。选择压力分析表明,负向选择可能是SCMV遗传变异的原因之一。对变异位点统计分析发现,该结果将为评估SCMV在中国的流行病学特征奠定基础,有助于SCMV的长期可持续防控策略的制定。(本文来源于《中国农业科技导报》期刊2019年09期）
陈雪阳,梁雄燕,方春,顾玉芳,杨玉莹[4]（2019）在《禽白血病病毒A亚群分离株感染性克隆的构建》一文中研究指出为探究A亚群禽白血病病毒(ALV-A)的致病机理,对本实验室分离到的一株命名为HB2015012的ALV-A进行感染性克隆构建。采用PCR方法将基因组分为重迭的3段分别扩增该分离株的cDNA,经酶切按顺序连接至pTOPO-Blunt Simpie构建重组质粒TOPO-012-ABC,进而转染易感的DF-1细胞,进行病毒的拯救。经禽白血病抗原检测试剂盒检测,PCR及间接免疫荧光(IFA)鉴定,均表明拯救出了具有感染性的重组A亚群禽白血病病毒(rALV-A),命名为rHB2015012。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年08期）
鲁荣光,刘维全,闫喜军[5]（2019）在《新型RDPV的分离鉴定及其感染性克隆的构建》一文中研究指出貉细小病毒(Raccoon dog parvovirus, RDPV)是细小病毒科,细小病毒属的成员,可引起貉和多种野生动物发生呕吐,腹泻等临床症状,幼龄动物感染后多因脱水和电解质失衡而死亡,是危害野生动物健康的重要病原。为了探索RDPV在我国的发生情况,本文对采集自河北,辽宁等多个地区的貉腹泻样品进行了流行病学调查,并对RDPVVP2基因进行测序,遗传进化及同源性分析结果表明,与2010年流行的RDPV的毒株相比,目前在我国流行的毒株在VP2基因上的多个氨基酸位点发生了非同义性突变,其中包括S297A,S27T和(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
张富军,张振鲁,张蕊芬,王寻,由春香[6]（2019）在《苹果锈果类病毒火焰海棠分离物全基因组克隆及序列分析》一文中研究指出【目的】检测从山东青岛采集的有"花脸"症状的火焰海棠(Malus‘Flame’)果实是否带有苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)。【方法】提取带有"花脸"症状的火焰海棠果皮总RNA,设计ASSVd特异性引物,利用RTPCR方法进行检测。设计基因特异性引物扩增ASSVd基因组全长,并进行克隆、测序,利用CLC RNA Workbench4预测其二级结构。用DANMAN软件比对来自中国不同地区、不同寄主的苹果锈果类病毒分离物基因序列。用MEGA-7软件分析山东火焰海棠ASSVd分离物与来自不同国家、不同寄主ASSVd分离物的遗传关系。【结果】从山东青岛采集的表现"花脸"症状的火焰海棠果皮中检测到ASSVd,推测火焰海棠果皮的"花脸"症状可能由ASSVd引起。利用基因特异性引物克隆4条ASSVd基因组全长序列,其长度为333～334 bp,在GenBank的登录号依次为MK102981-MK102984。ASSVd序列比对结果显示,来源于不同寄主的分离物存在差异。系统进化树显示ASSVd不存在明显的地区专化性,进一步对ASSVd二级结构分析发现不同寄主的ASSVd致病区(P)存在明显的差异。【结论】从山东青岛采集的带有"花脸"症状的火焰海棠果实带有ASSVd。本研究从火焰海棠检测到ASSVd,明确其为自然寄主之一,且火焰海棠果实的"花脸"症状形成可能与ASSVd侵染有关。(本文来源于《果树学报》期刊2019年08期）
刘芳,卢婷,蔡梦迪,吴芳草,陈相好[7]（2019）在《Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备》一文中研究指出目的:获得高纯度Cas9蛋白,制备Cas9蛋白特异性抗体。方法:以Cas9基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得Cas9基因全长序列,利用无缝拼接技术构建pET28a-Cas9重组表达载体;转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达Cas9蛋白,并利用His-Tag技术分离纯化Cas9蛋白;将纯化获得的Cas9蛋白免疫新西兰大白兔,制备Cas9蛋白多克隆抗体。结果:pET28a-Cas9重组表达载体转化的E.coli BL21(DE3)可表达Cas9蛋白,纯化的Cas9蛋白免疫家兔得到的多克隆抗体效价>1∶256 K。结论:本研究获得了高质量Cas9蛋白及多克隆抗体,为后续CRISPR-Cas9基因编辑的应用奠定了良好的基础。(本文来源于《贵州医科大学学报》期刊2019年07期）
郝桂英,周仁坤,严可,韩松伟[8]（2019）在《猪肺炎支原体西昌分离株16S rRNA和P46部分基因的克隆与序列分析》一文中研究指出为了解西昌猪肺炎支原体的遗传变异情况,对西昌市Mhp分离株XC01的16S rRNA和P46基因部分序列进行PCR扩增和序列分析,并构建NJ树。结果显示,XC01的16S rRNA和P46基因片段的长度分别为1 146 bp和1 059 bp,与Mhp参考株的核苷酸序列同源性分别为97.5%～99.8%和98.6%～99.4%;构建的NJ树显示不同地方的Mhp株未形成明显的地理分支。结果表明,Mhp分离株的16S rRNA和P46基因序列高度保守,在遗传演化中未发生太大的变化。研究结果为猪肺炎支原体的分子遗传变异研究和开展分子流行病学调查提供参考依据。(本文来源于《现代畜牧兽医》期刊2019年07期）
黄薇园,李建军,陈旺生,李么明[9]（2019）在《EV71临床毒株分离及其VP1单克隆抗体制备》一文中研究指出目的对手足口病肠道病毒71型(EV71)流行临床株进行分型和鉴定,制备抗EV71外壳蛋白VP1的特异性单克隆抗体,为EV71生物学特征研究和疫苗株的筛选奠定基础。方法从患者咽拭子中分离出流行的EV71毒株,原核表达纯化该毒株EV71 VP1衣壳蛋白,以此蛋白为免疫原制备VP1的特异性小鼠单克隆抗体,采用免疫荧光法(ELISA)观察抗体能否特异性识别EV71感染的细胞。结果测序结果显示分离出的EV71病毒株为肠道病毒C4亚型。筛查出12株分泌针对VP1蛋白的抗体杂交瘤细胞株,将其中结合特异性和结合力最强的一株命名为11T12。复苏的11T12活化后接种于液体石蜡免疫的小鼠腹腔,收集腹水经过protein-G柱纯化后对抗体的效价进行ELISA评价,结果显示纯化抗体稀释10万倍后仍可以结合蛋白,证实成功制备了抗EV71 C4亚型外壳蛋白VP1单克隆抗体。抗体结合特征分析结果显示该抗体具有特异性识别能力。结论从感染的临床样本中分离到一株C4型EV71毒株,以该病毒VP1蛋白为免疫原获得一株相应的单克隆抗体11T12,该单克隆抗体的获得为病毒的检测、试剂盒的研发提供了核心材料。(本文来源于《中国热带医学》期刊2019年06期）
李立梅,毛赫,左彤彤,赵秀香,刘庆珍[10]（2019）在《黄瓜绿斑驳花叶病毒辽宁营口分离物基因组测定及分段基因克隆》一文中研究指出黄瓜绿斑驳花叶病毒Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV)是葫芦科作物的重要检疫性病毒。本研究以田间自然感病的西瓜叶片为试材,采用RT-PCR获得该病毒(CGMMV-LNYK)基因组全长(登录号MG745849),以pBluescriptⅡSK(-)为载体,分别克隆其所编码的4段基因,并采用人工接种验证它们的体外侵染活性。结果表明:该病毒与韩国分离物KW(登录号AF417242)亲缘关系最近,相似度达99.8%,并成功克隆了CGMMV-LNYK编码的4段基因,分别记为RNA1～RNA4。经人工接种,发现RNA1和RNA4能侵染葫芦,表现明显花叶症状,与该病毒接种葫芦症状一致,且接种RNA1后的症状较RNA4明显,4种RNA混合接种症状最为明显,经RT-PCR检测,发病植株可扩增到与接种的RNA大小相等的片段。(本文来源于《植物保护》期刊2019年03期）
分离与克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
[目的]克隆和表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的N基因。[方法]采用RT-PCR方法对PEDV FD株的N基因进行扩增,将扩增产物连接pET-28B载体,阳性质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白。[结果]PEDV FD株N基因序列全长为1 326个核苷酸,编码441个氨基酸;重组N蛋白为可溶性表达,大小约58 ku;Western blot检测结果表明,重组N蛋白与PEDV抗体阳性血清发生特异性反应。[结论]该试验制备的PEDV重组N蛋白具有较好的免疫原性,可用于PEDV诊断方法的开发及相关研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
分离与克隆论文参考文献
[1].宁清,刘迪,靳翔,弓亚杰,薛智权.磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达[J].山西农业科学.2019
[2].潘孝成,沈学怀,赵瑞宏,戴银,胡晓苗.猪流行性腹泻病毒安徽分离株N基因的克隆与表达[J].安徽农业科学.2019
[3].张虎,景晓雅,孙柳清,崔爱民,张鹏华.玉米矮花叶病毒分离物基因组克隆及多样性分析[J].中国农业科技导报.2019
[4].陈雪阳,梁雄燕,方春,顾玉芳,杨玉莹.禽白血病病毒A亚群分离株感染性克隆的构建[J].畜牧与兽医.2019
[5].鲁荣光,刘维全,闫喜军.新型RDPV的分离鉴定及其感染性克隆的构建[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[6].张富军,张振鲁,张蕊芬,王寻,由春香.苹果锈果类病毒火焰海棠分离物全基因组克隆及序列分析[J].果树学报.2019
[7].刘芳,卢婷,蔡梦迪,吴芳草,陈相好.Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备[J].贵州医科大学学报.2019
[8].郝桂英,周仁坤,严可,韩松伟.猪肺炎支原体西昌分离株16SrRNA和P46部分基因的克隆与序列分析[J].现代畜牧兽医.2019
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