齐齐哈尔市第一医院病理科161000
【摘要】目的：研究比较FISH法与IHC法检测HER2蛋白的一致性，并分析FISH法在乳腺癌组织中HER2基因扩增的检测价值。方法：对2017年2月到2018年2月我院保存的乳腺癌标本58例用FISH法检测其中HER2基因扩增，分析和临床病理特征间的关系；用IHC法检测HER2蛋白表达，并对比FISH、IHC法检测HER2基因扩增和蛋白表达的一致性。结果：IHC法检测HER2蛋白和FISH法检测HER2基因扩增的一致性较好，且HER2基因扩增和病理组织学分级有密切联系（P＜0.05）。结论：IHC检测乳腺癌HER2蛋白和FISH检测HER2基因结果的一致性比较高。
【关键词】IHC；FISH；乳腺癌；HER2
HER2作为一种原癌基因，正常的情况下在细胞生长发育调节中有所参与，但当受到一些促癌因素的刺激，它会因为发生突变、过度表达和扩增等异常反应而促使形成恶性肿瘤[1]。通过对HER2基因与蛋白的检测，可实现在分子层面上对乳腺癌的诊断。本次研究旨在通过比较FISH（荧光原位杂交法）和IHC（常规免疫组织化学法）技术的相关性，分析FISH法检测所得HER2基因扩增和病理因素间存在的关联。
1材料和方法
1.1材料
所选材料为2017年2月～2018年2月我院保存的乳腺癌标本，共计58例，皆为女性，年龄阶段在42岁～75岁，平均年龄58.5±4.7岁。
1.2方法
1.2.1FISH法
采用浓度为10%的福尔马林固定住标本材料，常规做石蜡包埋处理，4um切片之后做切片的预处理工作，放入到100℃的沸水中煮半小时，再用蛋白酶K消化5分钟，10ul探针和杂交缓冲液在98℃的水浴箱中变性5分钟，将切片标本和探针都放置到杂交盒里，并将盒内温度调节在42℃，过夜杂交后，将切片取出、洗涤，行DAPI复染，10～20分钟之后，在暗处、于荧光显微镜下选择合适的滤波片进行观察。
癌细胞核为蓝色的荧光信号显示；17号染色体着丝粒在核内为绿色荧光信号显示；HER2基因在核内为红色荧光信号显示；正常细胞核里单个的间期细胞核为红色信号2个、绿色信号2个。共计细胞20个，对比值加以计算，计算方法为：20个细胞核中的红信号总数/绿信号总数。所得结果低于1.8代表阴性，表示并无HER2基因扩增；超过2.2或者是红色信号成簇表现，代表阳性，表示HER2基因扩增；结果处于1.8～2.2之间的情况下，应对20个细胞核中的信号再进行计数[2]。
1.2.2IHC法
严格按照即用型非生物素免疫组化试剂盒的说明书进行检测操作，切片脱蜡至水，高温下进行修复，一抗室温孵育1个小时，试剂A（聚合物）室温下孵育20分钟，试剂B（酶标抗鼠、免聚合物）室温下孵育半小时，DAB显色，采用苏木素再做复染，封片。PBS取代一抗做阴性对照。
所得结果判断：完全没着色或者是在10%以内的肿瘤细胞细胞膜着色（-），超过10%的肿瘤细胞有微弱、不完全的细胞膜着色（+），超过10%的肿瘤细胞有弱到中度完整的细胞膜着色（++），超过10%的肿瘤细胞为强切完整的细胞膜着色（+++）。其中-/+表示阴性，++和+++皆代表阳性[3]。
1.4统计学应用
本次研究数据借助于SPSS19.0进行总汇处理，计数资料比较用X2检验，FISH、IHC检测结果一致性用kappa检验，P＜0.05认定为有讨论价值。
2结果
2.1HER2基因扩增和病理特征的联系
在58例乳腺癌标本当中，HER2基因扩增阳性数是26例，占44.8%。由下表1可见，HER2基因扩增和年龄、肿瘤大小并无关联（P＞0.05），和组织学分级有密切联系，基于组织学分级的增高，阳性率也愈见提高（P＜0.05）。
3讨论
想要提高乳腺癌治疗的成功率，必须要依赖于早期的诊断和尽早的手术、术后干预治疗。因此，对乳腺癌激素受体与HER2基因状态等特异性的生物学信息加以明确，对于提高乳腺癌患者治疗效果及预后有重要意义。
本次研究结果表明，HER2的扩增和发病年龄与肿瘤大小并无关联，但和肿瘤的组织学分级关系密切，在病理学分级增高的情况下HER2基因扩增阳性率也呈明显的上升趋势，这与房爱菊,张晓莹,程凤凤等研究结果相符，提示HER2蛋白的过表达能够预测浸润性导管癌的发展方向[4]。
另外，IHC法检测HER2蛋白和FISH法检测HER2基因扩增有较好的一致性，但需注意的是，17号染色体多倍体会使HER2拷贝数增多，导致蛋白的过表达但是却并无HER2基因扩增，所以对于这些患者在使用IHC法检测时可能会出现假阳性。所以，IHC筛查HER2得到++/+++的结果时还需再借助FISH法来提高诊断的精准性。
参考文献
[1]巩雷,陈萍,程薇等.荧光原位杂交（FISH）检测乳腺癌中HER－2基因状态与p53、Ki－67、TOPOⅡ表达的相关性[J].现代肿瘤医学,2016,24(21):3382-3385,3386.
[2]武莎斐,刘媛媛,姜英等.HER2免疫组织化学结果不确定的乳腺癌原位mRNA表达特征[J].中华病理学杂志,2015,33(10):725-728.
[3]何小艳,李慧,刘倩等.乳腺癌HER-2检测方法比价及其与ER、PR、淋巴结转移的相关性分析[J].医学临床研究,2016,33(9):1740-1743.
[4]房爱菊,张晓莹,程凤凤等.乳腺癌中不同克隆号HER-2抗体IHC与FISH检测结果比较[J].国际检验医学杂志,2017,38(17):2357-2359.