导读:本文包含了噬菌体展示肽论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:噬菌体展示系统,糖尿病,自身抗体,抗原表位
噬菌体展示肽论文文献综述
刘尧,林骏,梁永羿,山云,王洪涛[1]（2019）在《噬菌体展示系统筛选糖尿病相关抗原蛋白及应用效果评价》一文中研究指出目的用噬菌体展示系统筛选与糖尿病相关的自身抗原新表位,表达新抗原肽段并评价其在糖尿病诊断中的应用效果。方法以Ⅰ型糖尿病血清作为靶分子,对Ph.D.-12噬菌体肽库进行淘选,测序淘选的噬菌体并用ELISA检测噬菌体与靶分子的结合效果,BLAST分析特异性最好的表位与糖尿病的相关性,选择合适的目的基因合成重组质粒,用Expi293细胞表达新抗原肽段并检测该抗原与临床血清的特异结合效果。结果共完成2418个噬菌体单克隆的测序,淘选出93种表位序列,11种具有代表性的表位中测序超过200次的有4种,对特异性最强的表位序列"-GTFLFSLCAAVY"进行分析后选择mTOR相关蛋白mEAK-7作为目的基因,抗原肽段与临床血清的特异性结合效果为:Ⅰ型糖尿病阳性率为17%,Ⅱ型糖尿病阳性率为4%。结论 mEAK-7蛋白对糖尿病血清具有一定的抗原特异性,该基因与糖尿病可能有相关性,具有很好的研究价值。(本文来源于《中国医药生物技术》期刊2019年06期）
何海汛,陈威,李丹,孙国鹏,李鹏[2]（2019）在《利用噬菌体展示随机肽库筛选与犬PD-1和PD-L1结合的多肽》一文中研究指出研究目的:癌症是致犬死亡的常见病之一。目前治疗犬肿瘤的方法有手术、化疗和放疗。除此之外现已开发出了一些针对免疫检查点的靶向抗体药物,并在体外和体内进行了测试,如程序性细胞死亡受体1(Programmed cell death protein 1,PD-1),它是一种重要免疫抑制分子。PD-L1(programmed death ligand 1,CD274)是PD-1的天然配体。PD-1/PD-L1结合激活通路后,在癌症、病毒感染、器官移植方面会抑制免疫系统发挥功能。阻断PD-1和PD-L1(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
叶长烂,周霞,谢浩然,马金魁,张宏斌[3]（2019）在《噬菌体展示随机环八肽库的构建》一文中研究指出目的构建表达于噬菌体表面的随机环八肽库。方法通过自行设计,人工合成编码随机环八肽的寡核苷酸片段,通过延伸引物扩增获得编码随机环八肽的基因片段。将编码基因片段和M13KE噬菌体载体经过EagⅠ和KpnⅠ限制性内切酶双酶切后进行连接,重组产物电转入大肠杆菌ER2738感受态细胞获得噬菌体展示随机环八肽库,噬斑及测序检测库容和多样性。结果构建的环八肽库库容超过7.5×109,重组阳性率为92.5%,不同率为97.3%。结论成功构建了库容量与多样性都满足筛选要求的噬菌体展示随机环八肽库。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2019年14期）
田栢会,易乐,王习文,李颂,付世杰[4]（2019）在《噬菌体展示禽流感病毒抗原变异性基因片段文库的构建》一文中研究指出构建T7噬菌体展示禽流感病毒抗原变异性基因片段文库.首先,从Gene Bank中查找筛选禽流感病毒抗原变异性基因,将其截短、修饰、简并后得到禽流感病毒抗原变异性基因微阵列.其次,将合成的禽流感病毒抗原变异性基因片段文库扩增、酶切,链接到双酶切后的T7噬菌体载体基因上,构成重组噬菌体DNA.最后,重组噬菌体DNA经体外包装和扩增,得到T7噬菌体展示文库,并进行T7噬菌体展示文库滴度、重组率和免疫活性测定.实验结果表明,从Gene Bank中查找、筛选、剪切和修饰共获得96 258条序列构建T7噬菌体展示文库,原始文库滴度为3.6×107个菌落/mL,重组率大于90%.用禽流感病毒H5N1抗体进行捕获,经聚合酶链式反应(PCR)鉴定,得到理想目的条带,证明噬菌体表面展示蛋白具有抗原活性,可用于禽流感病毒感染患者的快速检测及抗原表位筛选.(本文来源于《吉林大学学报(理学版)》期刊2019年04期）
田栢会[5]（2019）在《基于噬菌体展示技术禽流感病毒抗体谱的研究》一文中研究指出禽流感作为一种重要的人畜共患病受到人们广泛关注。其病原禽流感病毒可以伴随候鸟的迁徙,在沿途进行的广泛传播,致使病情肆虐全球,造成巨大损失。H7N9、H5N1等高致病性禽流感病毒还能够感染人类,对人类生命安全造成威胁。禽流感病毒亚型较多,变异性较高,使因此针对其开展监控、检测、疫苗研发和疾病防治变得十分困难。目前常规的禽流感检测方法可能存在局限性,基于PCR方法的核酸检测依赖于取样部位,常规ELISA检测一个反应一次只能针对一种已知病毒进行检测,很难实现多种类,大范围检测,因此亟需建立一种取样简单、高通量、高特异性的禽流感病毒检测方法。本文建立了一种基于噬菌体展示的抗体谱扫描禽流感病毒检测技术。该方法首次综合运用噬菌体展示技术、免疫沉淀和高通量测序分析等先进技术手段来分析检测禽流感病毒。我们利用T7噬菌体的特性构建T7噬菌体展示禽流感病毒抗原基因片段文库,通过免疫沉淀分离与样品中的抗体结合的噬菌体,捕获下来的噬菌体经DNA提取后,高通量测序T7噬菌体内含的序列,进而分析T7噬菌体内含的禽流感病毒片段对应亚型,实现检测禽流感病毒的目的。基于噬菌体展示的抗体谱扫描禽流感病毒检测技术具有灵敏度高、特异性强、覆盖范围广等特点,在病毒含量很低或已清除的情况下进行检测,不受感染时间和抗病毒治疗干扰,一次可以检测所有亚型的禽流感病毒。应用该方法可以实现对家禽、野鸟的大批量检测,根据他们的感染情况,进行早期预警,并及时采取预防控制措施,从而从传播途径上阻断禽流感病毒的传播,进而降低禽畜患病风险,减少经济损失。通过Gene Bank查找禽流感病毒抗原片段,通过截短、简并、修饰后进行合成,经PCR扩增,将插入DNA片段与载体DNA同时进行EcoR I、Xho I双酶切、T4连接酶连接后经体外包装,构建T7噬菌体展示禽流感病毒抗原基因片段文库。经鉴定,构建的T7噬菌体展示文库库容为8×10~9pfu,文库滴度为4×10~8pfu mL~(-1),随机挑取的100个噬菌斑均为有效重组,所展示多肽也具有与相应抗体结合的能力。通过实际检测哨兵动物血清样品,来自湖北网湖的哨兵动物绿头鸭血清中含有H5N6亚型禽流感病毒抗体,证明该地区的绿头鸭曾感染过禽流感病毒H5N6亚型。(本文来源于《长春理工大学》期刊2019-06-01）
何泊宁[6]（2019）在《牛多杀性巴氏杆菌分离鉴定及应用噬菌体展示技术筛选TbpA蛋白抗原表位》一文中研究指出多杀性巴氏杆菌是动物机体上呼吸道和眼部黏膜的常在菌群,当机体受到应激或其他呼吸性病原体感染时,常发生内源性感染。牛巴氏杆菌病多发于运输应激的牛群或者犊牛群中。现有的牛出败灭活疫苗免疫原是荚膜血清型B型的多杀性巴氏杆菌,然而大量的研究表明A型多杀性巴氏杆菌引起的牛呼吸道感染较为普遍,不同荚膜血清型间的交叉保护效果并不理想。本研究从黑龙江省两个规模化奶牛场发生严重呼吸道感染的病死牛肺脏和患病牛鼻拭子中分离鉴定致病菌,筛选多杀性巴氏杆菌转铁蛋白结合蛋白TbpA的抗原表位,对于研制高效疫苗防治该病具有重要的现实意义。首先,无菌采集病死牛的肺脏和患病牛鼻拭子,进行病原分离培养、染色镜检及生化试验、细菌16S rDNA及OmpH基因PCR鉴定,应用PCR方法确定分离株的荚膜血清型和毒力因子。结果表明,两个分离株WC16551、LY01均为荚膜血清型A型多杀性巴氏杆菌,药敏试验显示对恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。检测22种毒力因子,两株菌均携带19种毒力因子(oma87、fimA、ompA、tonB、exbD、Fur、hgbA、sodC、PmHAS、TbpA、hsf-2、hsf-1、PfhA、ptfA、sodA、nanH、plpB、exbB和tadD),有叁种未被检出(toxA、hgbB和nanB)。LD_(50)分别为:2.3×10~8 CFU/mL和2.08×10~5 CFU/mL。其次,构建pET-32a-TbpA蛋白原核表达质粒,蛋白诱导表达,Western Blot检测;用Ni-NTA对蛋白进行纯化,蛋白复性及浓缩,选用ISA206佐剂制备免疫原,免疫小鼠,制备高免血清,随后进行抗体纯化。结果表明,目的蛋白大小为104 KDa,当IPTG浓度为0.1 mM时37℃诱导5 h表达量较多,以包涵体形式存在,目的蛋白具有较好的抗原性。第叁,构建十五肽库质粒,电转入TG1感受态中,制备噬菌体随机十五肽库,检测肽库多样性及库容量,计算噬菌体滴度,进行叁次淘洗,将筛选出噬菌体进行测序,与TbpA蛋白进行同源性分析,最终获得TbpA蛋白抗原表位。结果表明,成功构建了十五肽库质粒和随机肽库,库容量为1.32×10~9 CFU/mL,经多抗淘洗筛选,确定G_(103)和W_(232)两个模拟结合位点,抗原表位主要分布于95-265、573-765蛋白序列中。综上所述,本研究确定了发病牛的病原为荚膜血清型A型多杀性巴氏杆菌,成功筛选出TbpA蛋白抗原表位,为研制牛多杀性巴氏杆菌病基因工程亚单位疫苗奠定了基础。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2019-06-01）
王艳梅[7]（2019）在《猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性抗原表位的噬菌体展示及其抗原性研究》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome PRRS)是由猪繁殖与呼吸病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus PRRSV)引起的一种高度传染性疾病。该病主要是以预防为主,疫苗接种是预防该病的首要措施。GP5蛋白是PRRSV重要的结构蛋白,存在六个重要的抗原决定簇,可以诱导中和抗体的产生,一直是疫苗研发的重要靶蛋白。中和性B细胞表位已经被确认为该病毒的中和性抗原区域。本研究旨在探究中和性B细胞表位诱导机体产生中和抗体及其作用。首先以合成中和性B细胞表位对7个猪场经不同商品化疫苗免疫的430份猪免疫临床血清进行检测,检测表明不同猪场的血清抗体水平阳性百分比在86.11%~98.15%之间。以中和性B细胞表位为目的展示序列,分别与靶向肽DC3pep、非靶向肽SCRMpep进行融合,通过噬菌体展示技术构建重组噬菌体M13-DC3pep-GP5-B和M13-SCRMpep-GP5-B,以临床PRRSV阳性血清进行western blot分析二者的免疫反应原性。以1.0×10~(13)pfu/mL的重组噬菌体M13-DC3pep-GP5-B、M13-DC3pep-GP5-B混合弗氏佐剂和M13-SCRMpep-GP5-B免疫小鼠,对小鼠血清进行特异性抗体检测,表明重组噬菌体M13-DC3pep-GP5-B和M13-SCRMpep-GP5-B均具有良好的反应原性;M13-DC3pep-GP5-B混合弗氏佐剂免疫组的小鼠血清有特异性抗体产生,抗体水平在第四周达到最高为0.94;免疫组M13-DC3pep-GP5-B小鼠抗体水平在第六周达到最高为0.93,免疫组M13-SCRMpep-GP5-B的抗体水平在第六周达到最高为0.634,免疫组M13-DC3pep-GP5-B的特异性抗体水平均高于免疫组M13-SCRMpep-GP5-B,二者差异显着(p<0.05)。将重组噬菌体M13-DC3pep-GP5-B、M13-DC3pep-GP5-B混合氢氧化铝佐剂和M13-SCRMpep-GP5-B以1.0×10~(13)pfu/mL的剂量免疫断奶仔猪,对仔猪血清进行特异性抗体检测,以临床分离PRRSV毒株对仔猪血清进行中和试验,表明M13-DC3pep-GP5-B混合氢氧化铝佐剂免疫组的抗体水平在末次免疫后第四周达到最高为0.687,且其抗体水平显着高于免疫M13-DC3pep-GP5-B组和M13-SCRMpep-GP5-B组(p<0.05);免疫组M13-DC3pep-GP5-B的特异性抗体水平高于免疫组M13-SCRMpep-GP5-B,无显着差异(P>0.05);但是诱导机体产生的中和抗体水平较低,免疫血清只在低稀释度时对PRRSV呈现中和活性。为了进一步发现并验证猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)保护性抗原GP5蛋白羧基端新的中和性表位,本研究运用生物信息学软件预测PRRSV GP5蛋白羧基端的抗原性,全基因合成GP5蛋白羧基端168-198位氨基酸的编码序列,构建了重组噬菌体M13-GP5168-198aa,以临床PRRSV阳性血清进行western blot分析重组噬菌体表面展示的GP5 168-198aa多肽的免疫反应原性。以1.0×10~(13)pfu/mL重组噬菌体混合氢氧化铝佐剂制备的免疫抗原,按照灭活疫苗免疫程序肌肉注射免疫PRRSV抗体阴性断乳仔猪,以临床分离PRRSV毒株进行中和试验。结果显示:以临床阳性血清进行Western blot分析表明重组噬菌体表面展示的GP5168-198aa多肽具有免疫反应原性;免疫仔猪诱导仔猪产生的中和性抗体在第六周达到最高,中和滴度为1:10.08。综上,人工合成PRRSV GP5蛋白的中和性B细胞表位可用于临床猪血清PRRSV抗体的检测;运用噬菌体展示技术展示了中和性B细胞表位,免疫断奶仔猪,诱导机体产生的中和抗体水平较低,免疫血清只在低稀释度时对PRRSV呈现中和活性;生物学软件预测GP5蛋白羧基端的抗原表位进行展示,免疫断奶仔猪,可以诱导仔猪产生中和性抗体,仔猪免疫血清在细胞水平上对PRRSV呈现良好的中和作用。为PRRSV GP5新型多表位疫苗的开发奠定了基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
王艳梅,顾敬敏,雷连成,冯新,孙长江[8]（2019）在《猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒GP5蛋白羧基端的噬菌体展示及其诱导仔猪产生中和抗体水平》一文中研究指出为了发现并验证猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)保护性抗原GP5蛋白羧基端新的中和性表位,本研究运用生物信息学软件预测PRRSV GP5蛋白羧基端的抗原性,全基因合成GP5蛋白羧基端168～198位氨基酸的编码序列,构建了重组噬菌体M13-GP5aa168～198,以临床阳性血清进行Western blot分析重组噬菌体表面展示的GP5aa168～198多肽的免疫反应原性。以1.0×10~(13) PFU/mL重组噬菌体混合氢氧化铝佐剂制备免疫抗原,按照灭活疫苗免疫程序肌肉注射免疫PRRSV抗体阴性断乳仔猪2次,间隔2周,分别于末次免疫后的第2,4和6周采血,分离血清,以临床分离PRRSV强毒株进行中和试验。结果显示:重组噬菌体表面展示的GP5aa168～198多肽具有免疫反应原性,免疫仔猪后,能够诱导仔猪产生较高水平的中和性抗体,为构建PRRSV GP5新型多表位疫苗的开发奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年05期）
王阔鹏,于凌娇,刘倩宏,刘麒,张履冰[9]（2019）在《噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库构建及差减筛选融合蛋白》一文中研究指出目的建立噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库,差减筛选具有良好特异性、亲和力及反应原性的蛋白,为确定新型诊断用抗原奠定基础。方法利用噬菌粒载体pYW01构建重组羊型布鲁氏菌16M株基因文库,辅助噬菌体VCSM13感染基因文库进而构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M蛋白文库。利用PEG纯化后,扩增蛋白文库。随机挑取单克隆,提取质粒,测序鉴定蛋白文库。通过差减筛选,选择具有良好特异性、亲和力及反应原性的表面蛋白,为确定诊断用抗原奠定基础。结果通过DNA重组技术,构建羊型布鲁氏菌16M基因文库,库容量达到10~8pfu/mL,并且随机性良好。利用辅助噬菌体VCSM13包装基因文库,随机挑取蛋白文库中单克隆,提取质粒,经测序鉴定,成功构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库。利用免疫血清及感染血清对噬菌体展示蛋白文库进行差减淘选,筛选出6个噬菌体融合蛋白。经Western-blot分析6个噬菌体融合蛋白均具有较好的反应原性及特异性。结论成功构建噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库,差减筛选出6个具有较好反应原性及特异性的融合蛋白,为后续新型血清学诊断制剂筛选奠定基础。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2019年05期）
李宁[10]（2019）在《基于噬菌体展示的多肽预处理以及表位预测研究》一文中研究指出B细胞表位识别在疫苗制备和疾病诊断方面有着举足轻重的地位,但是传统的实验手段来定位表位既耗时又费力并且价格昂贵,因此科研人员通过计算的方法来预测表位逐渐成为一个辅助方案,而其中基于噬菌体展示的模拟肽数据的表位预测是重要的分支。本文以基于模拟肽的表位预测为主要研究内容,对模拟肽的噪声筛查、表位预测算法及工具以及测试数据这叁部分进行了主要研究。通过研究传统噬菌体展示的实验过程和方法,并参考比对分析现有噪声筛查工具的实现方法,开发了一款识别塑料结合肽在线服务叫做PSBinder。该服务采用支持向量机算法,选取优化过后的氨基酸组份信息为特征进行构建,具备良好的性能。其在线链接为http://i.uestc.edu.cn/sarotup/cgi-bin/PSBinder.pl。通过对基于模拟肽的B细胞表位预测评估数据的研究,在本课题组原有基础上进行进一步挖掘处理,整理出了一套包含模板复合物、标准表位以及具体模拟肽数据的测试数据集。通过研究已有B细胞表位预测工具的实现方法和核心算法,针对现有工具的不足,采用全新的思路和算法开发了一款新的B细胞表位预测工具,并将其实现为PyMOL软件的插件。该工具借助PyMOL强大的分子叁维结构展示能力和灵活的操作能力,成为了一款具备跨平台、运行速度快、数据有保障、预测准确率高、展示和操作灵活等特点的工具。综上所述,本课题通过对B细胞表位预测的数据、实现算法和评估数据的整个流程的研究,开发了全新的噪声识别工具和表位预测工具,并更新了基于模拟肽的B细胞表位预测的标准测试集。本研究对噬菌体展示数据假阳性识别,疫苗制备以及疾病诊断等方面具有推动作用,在科学研究与实际应用中具有一定的意义。(本文来源于《电子科技大学》期刊2019-03-30）
噬菌体展示肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究目的:癌症是致犬死亡的常见病之一。目前治疗犬肿瘤的方法有手术、化疗和放疗。除此之外现已开发出了一些针对免疫检查点的靶向抗体药物,并在体外和体内进行了测试,如程序性细胞死亡受体1(Programmed cell death protein 1,PD-1),它是一种重要免疫抑制分子。PD-L1(programmed death ligand 1,CD274)是PD-1的天然配体。PD-1/PD-L1结合激活通路后,在癌症、病毒感染、器官移植方面会抑制免疫系统发挥功能。阻断PD-1和PD-L1
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
噬菌体展示肽论文参考文献
[1].刘尧,林骏,梁永羿,山云,王洪涛.噬菌体展示系统筛选糖尿病相关抗原蛋白及应用效果评价[J].中国医药生物技术.2019
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[9].王阔鹏,于凌娇,刘倩宏,刘麒,张履冰.噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库构建及差减筛选融合蛋白[J].中国人兽共患病学报.2019
[10].李宁.基于噬菌体展示的多肽预处理以及表位预测研究[D].电子科技大学.2019