北华大学附属医院吉林吉林市132011
【摘要】目的建立ASAL的测定方法，进一步研究探讨其在肝炎诊断中的价值。方法建立了精氨酰琥珀酸裂解酶（ASAL）的检测方法“速率法”，制备成了试剂盒，并对120例健康体检者和120例肝炎病人、65例肝癌病人、65例肝硬化病人同时进行了检测分析。结果肝炎病人血清中ASAL明显升高，是对照组的5.1倍，经统计学处理P<0.01。15例HBSAg阳性，谷丙转氨酶正常或轻度升高的患者ASAL显著升高，是对照组的5.4倍，经统计学处理P<0.01。65例肝癌病人和65例肝硬化病人血清中ASAL轻度升高。经统计学处理与对照组无显著性差异P<0.05。15例肝坏死病人血清中ASAL显著升高。是对照组的11.4倍。结论，用速率法测定ASAL方法简便、快速准确，试剂、样品用量小，可用于各型自动生化分析仪。ASAL是诊断肝炎、进行预后判断、估计病情、观察疗效的重要指标，特别是表面抗原阳性，谷丙转氨酶不高的病人，可提高早期诊断率。
【关键词】精氨酰琥珀酸裂解酶；肝炎；肝硬化；速率法
病毒性肝炎特别是2型肝炎发病率很高，如不早期发现延误治疗易转为慢性，导致肝硬化。肝功能检查目前常规检测ALT（谷丙转氨酶）等，能够及时发现肝细胞损害，但经治疗后几周多半正常，对治疗尚未痊愈或晚期病人会延误病情。因此提出一种新的酶，作为检测指标，可弥补肝功能常规组项的缺陷。我们于2004年起对ASAL的检测方法速率法进行了初步的研究并制备成试剂盒。并对120例肝炎病人、65例肝硬化病人、65例肝癌病人和120例健康人同时进行了ASAL检测分析。并对其临床价值进行了研究。旨在于提高肝炎的早期诊断率。
1、对象与方法
1.1试剂盒的测定原理
在340nm波长下测定ASAL吸光度的变化值（△A/分钟），计算其活性。
1.2测定试剂盒的主要参数及测定方法
1.2.1测定方法：速率法
1.2.2主要技术参数：反应温度：37℃，测定时间：90s，延时时间：60s，样品用量12.5/μL，试剂用量125/μL，反应方向正反应。
1.3研究对象
1.3.1正常对照组：从体检中抽取健康体检者120例，其中男58例，女62例，年龄28~74岁，平均年龄46.85岁。
1.3.2试验组：120例根据肝炎分型九项、肝功能检测、超声检查临床症状、体症等诊断为肝炎的病人，不伴有其它疾病，男59人，女61人，年龄30~75岁，平均年龄47.78岁。其中肝坏死15例，表面抗原阳性ALT不高者15例。
1.3.3试验对照组：130例，其中肝癌65例，男35例，女30例，年龄25~76岁，平均年龄47岁。肝硬化65例，男34例女31例，年龄29~64岁，平均年龄44.38岁。
1.4实验方法和步骤
1.4.1血液标本的采集
血液标本每天早6：00~9：00时，取静脉血2.5ml，置真空采血管内，待测。
1.4.2仪器、试剂
试剂：已制备成的试剂盒。仪器：全自动生化分析仪美国雅培公司生产的Aeroset2000。
1.4.3标本检测
按仪器操作规程进行标本的检测。
1.4.4统计学处理方法
实验结果以¯X+SD表示，试验组和对照组比较采用t检验。
2、结果
见表1-4
上述结果表明：肝炎病人血清中ASAL明显升高，是对照组的5.1倍，经65例统计学处理P<0.01。65例肝硬化、65例肝癌患者血清中ASAL轻度升高，经统计学处理P<0.05。
3、讨论
3.1肝炎病人ASAL检测的临床意义。ASAL主要分布于肝脏，70年代Gampanin等进行了研究，认为ASAL测定优于GPT，比GPT对肝脏疾病的诊断有较高的特异性和灵敏度。我们的研究表明，肝炎病人ASAL明显升高，是对照组的5.1倍。经统计学处理P<0.01，其中15例HBSAg阳性的病人血清中GPT轻度升高或正常，但ASAL明显升高。当肝脏发生病变时，由于肝细胞破坏，ASAL随之进入血液[1、2]。可见ASAL测定优于GPT，特别是HBSAg阳性而ALT不升高或升高不显著的病人作出早期诊断具有很大的价值，Gampamin等的报道是一致的[3]。肝硬化、肝癌病人血清中ASAL轻度升高[3]15例肝坏死病人血清中ASAL显著升高是对照组的11倍。可血ASAL对判断病情、估计预后具有十分重要的意义。
3.2ASAL速率法检测的应用前景
ASAL检测过去我们用手工法，荧光分量光度法[4]，操作繁琐，反应时间长，试剂用量大，准确性差，受影响因素多，不能用自动生化分析仪，尚验证推广和普及。我们研制的试剂盒，采用动力学法，测定简便、快速、准确、可用于各型自动生化分析仪，易于推广和普及有广阔的应用前景。ASAL检测对肝脏疾病的诊断具有得要的价值。可弥补肝功能常规组项的缺陷，为肝炎患者提供疗效和痊愈的指标。
参考文献：
[1]唐晓若，陈江肝病患者精氨酸代琥珀酸裂解酶分泌及与肝病相关血清学指标的关系中外医学研究，2011，9（24）：32-33。
[2]王坤等，实用诊断酶学，重庆：重庆科学技术出版社，第一版，1988，219-220.
[3]RicciardBRetal：PharmacdbiochemBeHal18（SUPPL）1：16，1984。
[4]朱汉明等，荧光分光度法测定血清精氨酸代琥珀酸合成酶湖北医科大学学报，1997，18（3），204-208。