导读:本文包含了转录后的基因沉默论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:转录后水平基因沉默,小干扰RNA,ct-siRNA,RNA降解
转录后的基因沉默论文文献综述
张新岩,朱颖,吴辉辉,郭红卫[1]（2016）在《植物转录后水平基因沉默:调控基因表达的一把双刃剑》一文中研究指出植物转录后水平基因沉默保护植物基因组免于外来基因的入侵,同时调控了一组特定的发育相关的内源基因的表达.本文综述了植物如何防控不利的转录后水平基因沉默发生的一些最新进展.作为转录后水平基因沉默决定性的一步,大多数内源基因表达产生的缺陷转录本进入细胞质双向降解过程,而不进入小干扰RNA(siRNA)介导的转录后水平基因沉默,只有少数发育相关的内源siRNA产生基因是例外.本文同时也讨论了植物中谨慎权衡的转录后水平基因沉默阈值模型,即植物能充分利用转录后水平基因沉默,同时又避免伤害自身.(本文来源于《中国科学:生命科学》期刊2016年06期）
赵楠[2]（2016）在《本氏烟钙调素类似蛋白Nbrgs-CaM抑制转录后基因沉默的机理研究》一文中研究指出转录后基因沉默(Post transcriptional gene silencing, PTGS)是植物抵抗病毒侵染的一种机制,病毒为了成功侵染寄主植物会编码RNA沉默抑制子。中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus, TYLCCNV)伴随的卫星分子Beta (Tomato yellow leaf curl China Betasatellite, TYLCCNB)编码的唯一蛋白pCl是一个重要的致病因子和RNA沉默抑制子。βC1可以上调本氏烟中的钙调素类似蛋白基因Nbrgs-CaM来抑制RNA沉默途径中的重要基因NbRDR6的表达,从而抑制RNA沉默。Nbrgs-CaM被证实是一个植物内源的RNA沉默抑制子,并在βCl抑制次级小型干扰RNAs (Small interfering RNAs, siRNAs)的产生及诱导双生病毒的致病性中起了重要作用。植物病毒利用Nbrgs-CaM来反击寄主的防御反应,但是Nbrgs-CaM抑制RNA沉默的具体作用尚不清楚。本文围绕着Nbrgs-CaM与本氏烟沉默抑制子(Suppressor of Gene Silencing 3, NbSGS3)的互作开展深入的研究。NbSGS3在细胞内呈颗粒状分布,这种颗粒状结构被称为SGS3/RDR6小体(SGS3/RDR6 bodies)。对NbSGS3序列进行分析,发现它具有叁个典型的结构域。为了明确它的哪一个结构域对于这种颗粒状的定位是必需的,我们分别构建了NbSGS3的各个结构域缺失突变体的亚细胞定位表达载体(pCHF3-NbSGS3-dZF-GFP, pCHF3-NbSGS3-dXS-GFP, pCHF3-NbSGS3-d2CC-GFP)。通过浸润H2B-RFP本氏烟,观察它们的亚细胞定位模式,我们发现NbSGS3的ZF和2CC结构域对于它的亚细胞定位很重要。为了探究NbSGS3的关键定位结构域是否也是它与Nbrgs-CaM的互作结构域,我们构建了NbSGS3的各个结构域缺失突变体的BiFC表达载体(2YN/2YC-NbSGS3-dZF, 2YN/2YC-NbSGS3-dXS,2YN/2YC-NbSGS3-d2CC)。通过在H2B-RFP本氏烟上共表达这些突变体蛋白,分析它们与Nbrgs-CaM蛋白在细胞内的互作情况,结果显示NbSGS3的ZF和2CC结构域对于它与Nbrgs-CaM的互作也是必需的。对Nbrgs-CaM的序列进行分析,发现它具有四个功能结构域。为了探究Nbrgs-CaM的哪个结构域决定了它与NbSGS3的互作,我们构建了Nbrgs-CaM的各个结构域缺失突变体的BiFC表达载体(2YN/2YC-NbCaM-dX,2YN/2YC-NbCaM-dEFI,2YN/2YC-NbCaM-dEFII,2YN/2YC-NbCaM-dEFIV)。在H2B-RFP本氏烟上研究Nbrgs-CaM不同结构域的缺失突变体与NbSGS3蛋白的互作情况,结果显示Nbrgs-CaM的EFI和EFII两个结构域对于它与NbSGS3的互作是必需的。为了明确Nbrgs-CaM与NbSGS3的互作结构域EFI和EFII对于Nbrgs-CaM的PTGS抑制子活性是否同样重要,我们将Nbrgs-CaM及其各个结构域缺失突变体构建到pCambia2300-Flag的重组表达载体上(pCambia2300-NbCaM-dX-Flag, pCambia2300-NbCaM-dEFI-Flag, pCambia2300-NbCaM-dEFII-Flag,pCambia2300-NbCaM-dEFIV-Flag)。分别在野生型本氏烟和16c本氏烟上进行RNA沉默抑制子鉴定实验,结果均显示Nbrgs-CaM与NbSGS3互作所必需的EFI和EFII两个结构域对于Nbrgs-CaM的沉默抑制子功能也是必需的。我们还发现Nbrgs-CaM的过量表达能够降低NbSGS3蛋白的积累量。这些结果说明Nbrgs-CaM可以与NbSGS3互作并降解NbSGS3蛋白的表达从而抑制RNA沉默。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-03-01）
李方方[3]（2014）在《中国番茄黄化曲叶病毒卫星DNA抑制转录后基因沉默的机理研究》一文中研究指出中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)伴随的卫星DNAβ(Tomato yellow leaf curl China betasatellite,TYLCCNB)对于诱导症状、增强病毒的致病性及抑制RNA沉默是必需的,而TYLCCNB编码唯一的βCl蛋白不仅是致病因子,也是RNA沉默抑制子。但到目前为止,βC1抑制RNA沉默的机理尚不清楚。为了解析βCl蛋白抑制RNA沉默的机制、明确RNA沉默途径中抵抗双生病毒侵染的关键基因的作用,本文开展了以下研究：1βC1蛋白抑制RNA沉默的机制：我们利用芯片技术比较了TYLCCNV/TYLCCNB和TYLCCNV侵染本氏烟后差异性表达的基因,以及βC1转基因本氏烟植株相对于野生型植株的差异性表达的基因。我们发现TYLCCNB或βC1显着上调本氏烟一个钙调素类似蛋白基因Nbrgs-CaM的表达,而且TYLCCNB的侵染还能够上调普通烟和番茄中Nbrgs-CaM同源物的表达。我们利用经典的农杆菌浸润RNA沉默抑制试验,发现本氏烟、普通烟和番茄rgs-CaMs都能够抑制转录后基因沉默(Post-transcriptional Gene Silencing,PTGS),而且Nbrgs-CaM还能抑制TYLCCNV诱导的基因沉默,因此证明了这些rgs-CaMs是植物内源的RNA沉默抑制子。我们利用35S启动子转基因过量表达Nbrgs-CaM,发现转基因植株表现出与βC1转基因植株类似的发育缺陷表型。通过构建Nbrgs-CaM双链发夹RNA沉默载体获得了Nbrgs-CaM基因表达下调的转基因植株,我们发现在该转基因植株上βC1失去了诱导典型症状及抑制PTGS的能力,表明Nbrgs-CaM介导了βCl诱导症状及抑制PTGS的功能。此外,我们还发现Nbrgs-CaM及其在普通烟与番茄中的同源物对TYLCCNV在茄科寄主中的致病力起了重要作用。2RDR6介导的RNA沉默在抵御双生病毒侵染中的作用：通过分析pC1与Nbrgs-CaM对正链RNA及双链RNA介导RNA沉默的抑制,我们发现两者只能抑制正链RNA诱导的PTGS,而不能抑制双链RNA诱导的PTGS,同时发现它们也只能抑制次级小干扰RNA(small interfering RNAs,siRNAs)的产生而不能抑制初级siRNAs的产生。进一步分析发现βC1通过上调Nbrgs-CaM的表达抑制NbRDR6介导的RNA沉默,而NbRDR6沉默的转基因植株不仅阻断了TYLCCNV诱导的基因沉默,还表现出对双生病毒侵染的超敏感性。另外,我们发现RDR6在决定双生病毒的寄主范围中起重要的作用,TYLCCNV能够突破寄主限制侵染拟南芥rdr6突变体。3SGS3介导的RNA沉默在抵御双生病毒侵染中的作用：在拟南芥中,RDR6可与双链RNA结合蛋白SGS3互作并形成复合体,在次级siRNAs合成中起重要作用。为了研究Nbrgs-CaM是否会影响NbSGS3的功能,我们克隆了NbSGS3基因并对其功能进行分析。我们发现NbSGS3在正链RNA诱导的基因沉默、GFP系统沉默的建立及维持、双生病毒诱导的基因沉默及双生病毒的抗性方面起了重要作用,而且NbSGS3能够协同NbRDR6参与对双生病毒的抗性。此外通过酵母双杂交与双分子荧光互补实验,我们还发现Nbrgs-CaM与NbSGS3能够互作,并且Nbrgs-CaM的过表达不仅能够影响NbSGS3的亚细胞定位,使其不能定位于'siRNA-bodies'上,也会降低NbSGS3蛋白在植物中的表达水平。4DNAβ上调Nbrgs-CaM表达的机理分析：利用甲基化抑制剂和Chop-PCR方法对Nbrgs-CaM启动子进行甲基化分析,我们发现其启动子处于甲基化状态,而且表达βC1能够降低Nbrgs-CaM启动子的甲基化水平；对pC1的核定位突变体进行分析,我们发现该突变体不仅不能抑制Nbrgs-CaM启动子的甲基化,也不能上调Nbrgs-CaM的表达及抑制PTGS.对Nbrgs-CaM启动子的序列进行克隆,我们获得了该启动子驱动报告基因GUS和GFP表达的转基因本氏烟植株,并且发现TYLCCNV伴随的TYLCCNB的侵染能够特异地上调Nbrgs-CaM启动子驱动的报告基因的表达。我们的这些发现阐述了一个全新的机制：病毒编码的RNA沉默抑制子能够利用植物内源RNA沉默抑制子Nbrgs-CaM抑制RNA沉默及诱导症状,并强调了RDR6与SGS3在抵抗双生病毒侵染的RNA防卫反应中的重要地位；同时我们也发现了βC1抑制TGS产生的效应能够作用于PTGS,从而明确了βC1在抑制TGS与PTGS这两个途径之间的关系。(本文来源于《浙江大学》期刊2014-06-01）
朱春晖,张德咏,刘勇[4]（2010）在《转录后基因沉默与植物抗病毒研究进展》一文中研究指出主要综述了转录后基因沉默(PTGS)的发现、定义、机制、与植物抗病毒的关系及利用转录后基因沉默防治植物病毒病研究进展。(本文来源于《长江蔬菜》期刊2010年08期）
董延龙[5]（2009）在《转基因植物转录后的基因沉默》一文中研究指出针对转基因沉默的分子机理、特征进行了阐述,并探讨了机理沉默与生物进化的关系。(本文来源于《中国林副特产》期刊2009年04期）
吕典秋,吕文河,李辉[6]（2007）在《转录后基因沉默与植物对外界病毒的抵御》一文中研究指出转录后基因沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)是生物界普遍存在的现象。近年来,PTGS在植物中特别是在转基因植物中得到了广泛的研究。PTGS是植物的一种自然防御机制,通过对PTGS的研究,对病毒和植物之间的相互关系有了新的认识,它是病毒和植物共进化的结果。对基因沉默的机理和方式的深入研究对于植物基因工程在基础理论和应用方面均有重要作用。文章对转录后基因沉默的机理、病毒和植物的互作关系以及PTGS在植物功能基因研究和病毒抗性方面的应用进行了综述。(本文来源于《东北农业大学学报》期刊2007年05期）
李路明[7]（2007）在《转录后基因沉默在烟草对PVY和CMV双价抗性中的应用研究》一文中研究指出烟草病毒病害是烟草上的主要病害，PVY和CMV均在我国烟草上广泛分布，且多复合发生。对于病毒病的防治，抗病毒育种成为最经济有效的防治手段。但是在传统育种中存在抗病性与不良农艺性状连锁等问题，转基因生物技术为解决这一问题提供了一条可行性的路线。基因沉默现象是上世纪末被发现的，目前对其作用机制已有了比较详细的认识，在植物抗痫毒中的应用研究也已开展很多，已有的实验数据表明，利用基因沉默技术可以获得高抗乃至免疫水平的抗性，其在抗病育种中具有非常广阔的应用前景。本论文是利用转录后基因沉默技术进行的双价病毒抗性转基因烟草研究。在国内首次利用病毒抑制子PVY HP-Pro和CMV 2b的保守区段为靶标进行双价病毒抗性的研究。根据GenBank中的数据确定靶标序列后，利用RT-PCR技术克隆了国内流行株系的PVY HC-Pro片段和CMV 2b片段。将两靶标序列串联后以此为基础进行载体构建，通过反向中间载体和正反向中间载体得到靶标串联片段的反向重复序列结构，用其替换掉双元表达载体pCAMBIA1300-221中的GUS基因，完成基因沉默植物表达载体pCAMHb的构建。将pCAMHb表达载体导入到农杆菌EHA105菌株中。利用农杆菌介导的叶盘法转化栽培烟草NC89，得到27棵再生苗，用PCR初步检测得到11棵阳性苗。抗病性检测得到3棵抗性苗。本实验的技术路线与实验方法为转录后基因沉默技术在双价抗病毒中的应用提供了理论依据，为烟草病毒病的防治开拓了新的思路。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2007-06-01）
杨军,周汉平,宋纪真,尹启生[8]（2006）在《转录后基因沉默(PTGS)与烟草抗病毒育种》一文中研究指出对转录后基因沉默的特点和发生机制、PTGS与植物病毒抗性等方面进行综述,并在此基础上,就该技术策略应用于烟草抗病毒育种上的可行性进行探讨,并提出相关建议。(本文来源于《中国烟草学报》期刊2006年06期）
李琳,王佐林[9]（2006）在《转录后水平的基因沉默技术在HSP47中的应用》一文中研究指出热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)是位于内质网内一种应激蛋白,它能与胶原特异性结合,在哺乳动物细胞内参与原胶原的折迭、装配、修饰、转运等过程。除了应激诱导之外,在正常情况下HSP47的表达通常与各种细胞组织中(本文来源于《口腔颌面外科杂志》期刊2006年04期）
朱春晖[10]（2006）在《利用转录后基因沉默（PTGS）防治作物黄瓜花叶病毒病》一文中研究指出根据已报道的CMV基因序列，设计通用引物，通过RT-PCR扩增了CMV P3613株系的RNA2片段和MP基因片段及AN株系的CP基因片段，并分别克隆到pBluescript SK(-)载体上。根据克隆得到的序列，设计新的引物，在CP基因5′端用引物引入限制性内切酶位点Bsp120Ⅰ：在RNA2片段的5′端引入限制性内切酶位点Bsp120Ⅰ，3′端引入限制性内切酶位点KpnⅠ；在MP基因的5′端引入限制性内切酶位点Bsp120Ⅰ，3′端引入限制性内切酶位点PsyⅠ。利用分子克隆的常规方法，以CP基因作为中间序列，以PGEM为中间载体，构建了两个分别具有RNA2片段和MP基因反向重复片段的原核表达载体。通过PCR、酶切、测序等方法验证，均表明构建的重组载体与预期相同。 具有反向重复片段的原核表达载体通过离体转录验证，能够转录出与预期构建大小相同的片段。将具有反向重复片段的原核表达载体转化大肠杆菌菌株HT115(DE3)，经过IPTG诱导表达，破碎细胞提取到了与预期构建大小相同的片段，经过DNase和RNaseA的酶切鉴定，证实为表达的dsRNA。用能够表达dsRNA的细菌破碎后处理烟草进行攻毒的实验分为2组，每组分为相同的10个处理。接种病毒7天后采用RT-PCR方法检测。第一组先接种细菌7d后接种CMV，结果除了接种表达dsRNA的细菌的烟草抗CMV，还有另外两个处理可能因为接种方法的问题而表现无病毒。第二组先接种CMV 1h后再接种细菌的结果也是接种表达dsRNA的细菌的烟草抗CMV。两组结果证明：细菌表达的dsRNA能够诱导烟草对CMV产生抗性。 本论文的研究结果证实：利用转录后基因沉默(PTGS)的原理，构建具有反向重复序列的原核表达载体，将此载体在特定的细菌菌株中诱导表达的dsRNA粗提取物处理烟草，可诱导植物对病毒的抗性。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2006-06-01）
转录后的基因沉默论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
转录后基因沉默(Post transcriptional gene silencing, PTGS)是植物抵抗病毒侵染的一种机制,病毒为了成功侵染寄主植物会编码RNA沉默抑制子。中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus, TYLCCNV)伴随的卫星分子Beta (Tomato yellow leaf curl China Betasatellite, TYLCCNB)编码的唯一蛋白pCl是一个重要的致病因子和RNA沉默抑制子。βC1可以上调本氏烟中的钙调素类似蛋白基因Nbrgs-CaM来抑制RNA沉默途径中的重要基因NbRDR6的表达,从而抑制RNA沉默。Nbrgs-CaM被证实是一个植物内源的RNA沉默抑制子,并在βCl抑制次级小型干扰RNAs (Small interfering RNAs, siRNAs)的产生及诱导双生病毒的致病性中起了重要作用。植物病毒利用Nbrgs-CaM来反击寄主的防御反应,但是Nbrgs-CaM抑制RNA沉默的具体作用尚不清楚。本文围绕着Nbrgs-CaM与本氏烟沉默抑制子(Suppressor of Gene Silencing 3, NbSGS3)的互作开展深入的研究。NbSGS3在细胞内呈颗粒状分布,这种颗粒状结构被称为SGS3/RDR6小体(SGS3/RDR6 bodies)。对NbSGS3序列进行分析,发现它具有叁个典型的结构域。为了明确它的哪一个结构域对于这种颗粒状的定位是必需的,我们分别构建了NbSGS3的各个结构域缺失突变体的亚细胞定位表达载体(pCHF3-NbSGS3-dZF-GFP, pCHF3-NbSGS3-dXS-GFP, pCHF3-NbSGS3-d2CC-GFP)。通过浸润H2B-RFP本氏烟,观察它们的亚细胞定位模式,我们发现NbSGS3的ZF和2CC结构域对于它的亚细胞定位很重要。为了探究NbSGS3的关键定位结构域是否也是它与Nbrgs-CaM的互作结构域,我们构建了NbSGS3的各个结构域缺失突变体的BiFC表达载体(2YN/2YC-NbSGS3-dZF, 2YN/2YC-NbSGS3-dXS,2YN/2YC-NbSGS3-d2CC)。通过在H2B-RFP本氏烟上共表达这些突变体蛋白,分析它们与Nbrgs-CaM蛋白在细胞内的互作情况,结果显示NbSGS3的ZF和2CC结构域对于它与Nbrgs-CaM的互作也是必需的。对Nbrgs-CaM的序列进行分析,发现它具有四个功能结构域。为了探究Nbrgs-CaM的哪个结构域决定了它与NbSGS3的互作,我们构建了Nbrgs-CaM的各个结构域缺失突变体的BiFC表达载体(2YN/2YC-NbCaM-dX,2YN/2YC-NbCaM-dEFI,2YN/2YC-NbCaM-dEFII,2YN/2YC-NbCaM-dEFIV)。在H2B-RFP本氏烟上研究Nbrgs-CaM不同结构域的缺失突变体与NbSGS3蛋白的互作情况,结果显示Nbrgs-CaM的EFI和EFII两个结构域对于它与NbSGS3的互作是必需的。为了明确Nbrgs-CaM与NbSGS3的互作结构域EFI和EFII对于Nbrgs-CaM的PTGS抑制子活性是否同样重要,我们将Nbrgs-CaM及其各个结构域缺失突变体构建到pCambia2300-Flag的重组表达载体上(pCambia2300-NbCaM-dX-Flag, pCambia2300-NbCaM-dEFI-Flag, pCambia2300-NbCaM-dEFII-Flag,pCambia2300-NbCaM-dEFIV-Flag)。分别在野生型本氏烟和16c本氏烟上进行RNA沉默抑制子鉴定实验,结果均显示Nbrgs-CaM与NbSGS3互作所必需的EFI和EFII两个结构域对于Nbrgs-CaM的沉默抑制子功能也是必需的。我们还发现Nbrgs-CaM的过量表达能够降低NbSGS3蛋白的积累量。这些结果说明Nbrgs-CaM可以与NbSGS3互作并降解NbSGS3蛋白的表达从而抑制RNA沉默。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转录后的基因沉默论文参考文献
[1].张新岩,朱颖,吴辉辉,郭红卫.植物转录后水平基因沉默:调控基因表达的一把双刃剑[J].中国科学:生命科学.2016
[2].赵楠.本氏烟钙调素类似蛋白Nbrgs-CaM抑制转录后基因沉默的机理研究[D].浙江大学.2016
[3].李方方.中国番茄黄化曲叶病毒卫星DNA抑制转录后基因沉默的机理研究[D].浙江大学.2014
[4].朱春晖,张德咏,刘勇.转录后基因沉默与植物抗病毒研究进展[J].长江蔬菜.2010
[5].董延龙.转基因植物转录后的基因沉默[J].中国林副特产.2009
[6].吕典秋,吕文河,李辉.转录后基因沉默与植物对外界病毒的抵御[J].东北农业大学学报.2007
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[8].杨军,周汉平,宋纪真,尹启生.转录后基因沉默(PTGS)与烟草抗病毒育种[J].中国烟草学报.2006
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