导读:本文包含了血管内皮细胞样细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Emdogain,成骨细胞,内皮细胞,直接共培养
血管内皮细胞样细胞论文文献综述
王珊珊,Xiaohui,Rausch-Fan,Oleh,Andrukov,林毅,林李嵩[1]（2019）在《Emdogain对共培养成骨样细胞及内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响》一文中研究指出目的:评价emdogain对直接与间接共培养条件下成骨样细胞和内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响以及其间的相关性。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和成骨样细胞(MG63)按2∶1比例于12孔板内进行直接及间接共培养,并使用不同浓度(0、0.1、1、10、50μg/mL)的emdogain共培养细胞72 h。采用细胞计数仪结合流式细胞仪评价细胞增殖情况,并通过荧光激活流式细胞分选技术分选共培养细胞。对分选后的成骨样细胞及内皮细胞采用实时荧光定量PCR分别检测成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原蛋白(Col-1)及成血管相关基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)、VEGF酪氨酸激酶受体1(Flt-1)、VEGF酪氨酸激酶受体2(KDR)、von Willebrand因子(vWF)、内皮细胞C蛋白受体(EPCR)、E选择素(E-Selectin)、促血管生成素2(Ang-2)的表达水平。采用SPSS24.0软件包对数据进行统计学处理。结果:在直接与间接共培养条件下,Emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖的作用具有浓度依赖性。随着emdogain浓度增加,细胞增殖率逐渐下降。50μg/mL浓度的emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖抑制作用最为明显。随着emdogain浓度增加,MG63表面ALP和Col-1表达水平逐渐增加;50μg/mL浓度条件下,表达水平最高且与其他组基因表达水平差异显着(P<0.01)。同一emdogain浓度条件下,直接共培养MG63表面ALP及Col-1表达水平均显着高于间接共培养(P<0.01)。除10μg/mL组外,直接共培养条件下,VEGF表达水平均显着高于间接共培养(P<0.01)。50μg/mL组直接共培养的HUVEC表面Flt-1、KDR、vWF、E-selectin基因表达水平显着高于间接共培养及直接共培养的其他各组(P<0.01)。间接共培养条件下,HUVEC表面EPCR及Ang-2基因表达水平显着高于直接共培养(P<0.05)。结论:Emdogain对共培养MG63和HUVEC增殖的作用具有浓度依赖性,50μg/mL可能是emdogain作用的关键浓度。在直接共培养条件下,50μg/mL emdogain抑制MG63及HUVEC细胞增殖,但能同时促进MG63及HUVEC细胞相关基因表达;且该条件下emdogain的作用显着强于其他实验条件,细胞间直接交联可能在其中发挥重要作用。(本文来源于《中国口腔颌面外科杂志》期刊2019年01期）
陈龙[2]（2017）在《大鼠骨髓源神经干细胞向血管内皮细胞样细胞分化的实验研究》一文中研究指出目的:观察SD大鼠骨髓源神经干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells-derived neural stem cells,BMSCs-NSCs)在血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)培养条件下是否分化为内皮样细胞(endothelial-like cells,ELCs)。方法:本实验采用全骨髓培养法分离培养大鼠双侧股骨、胫骨以及肱骨的骨髓,利用骨髓源基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的贴壁生长特性和多次传代培养使其纯化。研究BMSCs的外形改变并绘制P3(Passage 3)代细胞的生长曲线,探讨BMSCs的最适接种密度,利用流式细胞仪检测BMSCs标志物CD34、CD44、CD45、CD90的表达情况。将所得P3代BMSCs消化形成单细胞悬液,调整细胞密度后置于神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱导培养基(20ng/mL bFGF、20ng/mL EGF、B27)中进行悬浮培养,通过免疫细胞化学染色观察神经球表面标志物CD133、Nestin的表达情况。培养所得神经球消化形成单细胞,并进行免疫细胞化学染色检测VEC表面标志物CD31、vWF的表达情况。将所得NSCs悬液置于Matrigel胶质培养基中培养,观察是否形成血管腔样结构。结果:1.BMSCs早期呈簇状生长,细胞呈梭形。P3 BMSCs流式细胞仪检测显示CD44阳性细胞比率为91.4%,CD90阳性细胞比率为93.7%;CD34、CD45的表达均呈阴性反应。2.P3代细胞生长曲线呈“S”型,其接种最佳密度区间在5×104~1×105/mL。3.BMSCs培养1-2天时细胞聚集呈团块状,随后呈“桑葚状”球形结构,免疫细胞化学染色显示CD133、Nestin的表达均呈阳性反应。4.骨髓源神经球在VEC培养基中培养7天时,细胞呈扁平状,叁角形或多角形,外观似“铺路石”状。在Matrigel胶质培养基中可形成管腔样结构。结论:1.体外利用无血清悬浮培养法,可将大鼠BMSCs诱导分化为NSCs。2.BMSCs-NSCs体外诱导可定向分化为ELCs,并且在Matrigel胶中可形成管腔样结构。(本文来源于《青海大学》期刊2017-03-01）
汤树[3]（2016）在《卵巢癌干细胞样细胞通过自分泌CCL5促进内皮细胞分化和肿瘤血管形成》一文中研究指出一、研究背景肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)以其自我更新和高度致瘤能力而着称。另外,近年来CSCs所具备的多向分化潜能也成为一个研究热点,得到了学界的热切关注。近期有研究表明,在恶性胶质瘤和乳腺癌中,CSCs能够分化为有功能的血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)并参与肿瘤的血管形成。已经有大量科学文献证实丰富的血管形成是癌症的一大特征,其能够为肿瘤的进展提供能量来源,为肿瘤细胞的侵袭和转移提供有利的渠道,也是肿瘤组织不可或缺的生存支柱。因此,探讨以往未曾研究透彻的、潜在的干细胞源性的血管生成机制有利于完善肿瘤的发生、发展理论。我们的前期研究成果已经证明了卵巢癌干细胞样细胞(cancer stem-like cells,CSLCs)能够合成和分泌大量的趋化因子CCL5,并在细胞表面高表达CCL5的特异性活化受体。已有文献报道,CCL5作为一个重要的促恶性因素,其与肿瘤的生长、转移和进展都密切相关,尤其,CCL5对肿瘤的血管生成具有重要的意义。二、研究目的血管生成对卵巢癌进展、侵袭、转移过程有非常重要的作用。然而,传统的抗血管生成治疗对肿瘤的控制却作用有限,且伴随着一系列毒副作用。在本研究中,我们发现了卵巢癌CSLCs能够分化成为具备内皮细胞形态和功能的内皮细胞,并探讨了趋化因子CCL5在这个内皮分化过程中的作用及机制。我们期望这些结果能够帮助完善肿瘤的血管生成理论,并为临床卵巢癌治疗提供一个新的抗血管生成策略。叁、研究方法1.在前期对卵巢癌CSLCs研究的基础上,通过体外基质胶血管形成实验和免疫标记技术明确卵巢癌CSLCs是否具有内皮分化和血管形成能力。根据对裸鼠体内移植瘤组织进行血管内皮细胞标志物的免疫荧光检测,明确移植瘤组织的内皮细胞来源,从而再次求证卵巢癌CSLCs是否具有内皮分化和血管形成能力。2.通过单克隆抗体阻断CCL5功能、病毒转染下调CCL5表达、加入重组人CCL5因子、阻断CCL5特异性受体等体外实验证明CCL5有调节卵巢癌CSLCs分化为ECs的能力。再利用裸鼠移植瘤模型体内实验,证明CCL5对于促进干细胞来源的血管生成有重要作用。3.利用Western blot、免疫荧光检测卵巢癌CSLCs中CCL5可能激活的通路。再通过化合物阻断等方式明确CCL5是通过活化何种信号通路调节来卵巢癌CSLCs向ECs分化的过程,最后提出CCL5调节CSLCs向ECs分化过程中的可能存在的机制。四、研究结果1.体外基质胶血管形成模型证实了卵巢癌CSLCs能够形成微管网络,其形态与人脐静脉内皮细胞所形成的微血管网类似,但卵巢癌非干细胞在同样条件下却没有形成类似的微管网络。免疫荧光标记技术显示CSLCs分化所形成的微管网络细胞表达血管ECs特异性标记物CD31、VE-cadherin和vWF。在裸鼠移植瘤实验中,CSLCs移植瘤内可见较丰富的血管,而非干细胞移植瘤血管较少。免疫荧光检测发现CSLCs移植瘤内既有人源性的CD31表达也有鼠源性的CD31表达,而非干细胞移植瘤内只有鼠源性的CD31表达,无人源性CD31表达。2.首先,单克隆抗体阻断CCL5功能实验显示阻断CSLCs内的CCL5功能后其形成微管网络的能力下降,且这种下降具有浓度依耐性。第二,病毒转染CSLCs下调CCL5表达,CSLCs所形成的微管网,其管腔数和分支长度都明显少于对照组。第叁,CSLCs与重组人CCL5因子共培养,所形成小管网络的管腔数和分支长度比对照组增加。第四,分别阻断CCL5的特异性活化受体CCR1、CCR3、CCR5之后,CSLCs所形成的的微管网内的微管管腔数和分支长度均较对照组减少。裸鼠移植瘤实验和免疫组织化学检测显示下调CSLCs的CCL5表达后,CCL5下调组与对照组的肿瘤大小无明显差异,且两组移植瘤组织内鼠源性CD31阳性细胞的数量无明显差异。但就人源性CD31阳性细胞数而言,CCL5表达下调组移植瘤内的人源性CD31阳性细胞数明显少于对照组。3.Western blot和免疫荧光检测结果显示病毒转染沉默CSLCs的CCL5基因,导致胞核内的p65和STAT3表达减少,而胞浆内的p65和STAT3表达较对照组增加,且整个细胞内的磷酸化p65和磷酸化STAT3水平明显低于对照组。化学阻断NF-κB或STAT3信号通路导致CSLCs的血管形成和维持能力受抑制。五、结论1.卵巢癌CSLCs能够分化成为血管内皮细胞。2.卵巢癌CSLCs通过自分泌趋化因子CCL5促进自身分化成为血管内皮细胞并参与肿瘤组织内的血管形成。3.CCL5通过活化NF-κB和/或STAT3信号通路调控卵巢癌CSLCs向血管内皮细胞分化。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2016-05-01）
蒋立艳,楼湘莹,王自能,路妍妍,高瑞萍[4]（2015）在《CD133~+卵巢癌干细胞样细胞在血管内皮细胞中的分化》一文中研究指出背景:大量研究证实,新生血管形成在肿瘤的生长、浸润以及转移过程中发挥重要作用。目的:探讨CD133+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的特点。方法:通过无血清培养方法从卵巢癌A2780细胞株中成功诱导出CD133+卵巢癌干细胞样细胞,在体外接种于铺或不铺Matrigel基质胶的96孔板内,观察不同时间点CD133+卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞形成管腔样结构能力。通过裸鼠皮下移植实验,免疫荧光法观察CD133+卵巢癌干细胞样细胞在卵巢癌血管新生中的作用。结果与结论:CD133+卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞(阳性对照)在未铺Matrigel基质胶上并不能形成相应的管腔结构,且不表达内皮细胞标志物CD31,在Matrigel基质胶上能够形成相对稳定的管腔结构,CD31表达明显。CD133+卵巢癌干细胞样细胞接种裸鼠皮下成瘤后,可观察到肿瘤组织中有人源性CD31的表达。结果表明CD133+卵巢癌干细胞样细胞能够分化为血管内皮细胞,参与肿瘤血管重建。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年41期）
贺路航[5]（2014）在《CD133~+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化和成管的实验研究》一文中研究指出目的：卵巢癌是妇女生殖系统中常见的一种恶性肿瘤，其发病率仅次于宫颈癌与子宫内膜癌。由于早期症状不典型，患者就诊时癌症常已至晚期，且容易复发和转移。临床上患者总的5年生存期仅为25%。深入研究卵巢癌的发生、发展、复发和转移等作用机制将有助于卵巢癌早期诊断和提高疗效。大量的研究证实，新生血管形成在肿瘤生长、浸润和转移过程中发挥重要作用。因此，深入研究卵巢癌中血管形成机制将为其诊断和治疗提供新思路。VEGF等促血管生长因子和趋化因子诱导肿瘤周围血管向着肿瘤出芽生长，或者招募内皮细胞分化生长，这是传统的肿瘤血管生成机制。近年来的研究也发现：在肿瘤组织中存在一群数量不多的，具有与普通干细胞类似的功能诸如自我更新和多向分化潜能的细胞，这类细胞通常使用CD133+标记，被命名为肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)。CSCs可以分化为血管内皮细胞，参与肿瘤血管的构建。这一发现丰富了肿瘤血管理论。然而，在卵巢癌中是否也存在CSCs分化成血管内皮细胞，参与血管构建的过程还鲜有报道。本实验旨在探究卵巢癌肿瘤组织中，CSCs通过自身分化形成肿瘤血管内皮细胞的过程及特点，并尝试探讨其具体机制，进而为临床卵巢癌的抗血管治疗提供新的思路和靶点。方法：利用前期实验中卵巢癌细胞系A2780通过体外无血清培养基成功诱导并鉴定的CD133+阳性的卵巢癌干细胞样细胞(ovarian cancer stem-like cells，OCSLCs)和购买得到的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，通过分别在体外接种于铺或不铺Matrigel基质胶的96孔板内，观察不同时相点肿瘤干细胞和人脐静脉内皮细胞形成管腔样结构的能力；通过免疫荧光，real-timePCR和western bloting检测形成管腔样结构的细胞CD31的表达；通过使用CD133+OCSLCs裸鼠移植瘤模型，在肿瘤>1cm后处死裸鼠，冰冻恒温机8μm切片，观察肿瘤组织中人源性微血管结构的表达；为探讨CD133+OCSLCs成管机制，通过前期结果推测出趋化因子CCL5在这一过程中的潜在作用，通过体外使用rhCCL5刺激CD133+OCSLCs，观察其在Matrigel基质胶的成管效果；通过构建CCL5-knockdown CD133+OCSLCs细胞，观察其在裸鼠体内的成管效果；所有计量资料以平均值±标准差表示，用SPSS11.5统计分析软件进行统计，各组之间比较用Student’s t检验。P<0.05为有统计学意义。结果：1.体外CD133+OCSLSs在基质胶培养条件下，可以形成管腔样结构。2.体外CD133+OCSLSs在基质胶培养条件下表达内皮细胞标志物CD31。3.体内CD133+OCSLSs会分化成为血管内皮细胞。4.体外CCL5通过CCR1/3/5促进CD133+OCSLCs在基质胶培养条件下形成管腔样结构，但不影响其向血管内皮分化。5.体内CCL5促进CD133+OCSLCs成管。结论：1. CD133+OCSLCs在体内和体外可以分化形成肿瘤血管内皮细胞。2. CD133+OCSLCs通过自分泌CCL5促进肿瘤血管形成。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2014-05-01）
彭永海[6]（2014）在《pim-1在结肠癌干样细胞向血管内皮细胞分化中的作用研究》一文中研究指出背景及目的：结直肠癌在发达国家发病率居恶性肿瘤第叁位,死亡率更居第二位。在我国结直肠癌发病率居第叁位且呈上升趋势,死亡率则居第五位,复发、转移或死亡率近50%。实体瘤的生长和转移依赖于肿瘤内新生血管的形成,为其提供氧及营养物质。抗肿瘤血管生成治疗是结肠癌研究领域关注的焦点。化疗在提高临床疗效方面已近瓶颈,而联合抗肿瘤血管生成治疗大大提高了疗效。目前抗肿瘤血管生成治疗局限于干扰内皮细胞的功能和干扰肿瘤血管发育的微环境两方面,肿瘤干细胞能够向血管内皮细胞分化是目前抗肿瘤血管生成治疗失败的主要原因之一。肿瘤干细胞能不能向血管内皮细胞分化一直是干细胞研究领域讨论的热点。长期以来的研究发现肿瘤组织中的内皮细胞和正常组织中的内皮细胞的基因表达具有明显差别,进而产生了血管生成模拟即肿瘤细胞充当血管内皮细胞的角色排列成肿瘤的脉管的观点,但这些肿瘤细胞在来源上不能确定,一般认为肿瘤细胞在接近新生脉管的微环境下会获得内皮细胞的特性,而有一研究提出肿瘤干细胞可能完成血管模拟功能。最近研究发现在胶质瘤中,肿瘤干样细胞能向内皮细胞分化同宿主内皮细胞一起参与了肿瘤血管的形成。肿瘤干细胞首先在血液系统肿瘤中被报道,往往它们含量非常稀少,但在肿瘤组织内它们具有无限增殖能力和强成瘤能力。《Nature》在2007年一月份连续发表了两项研究,报道CD133+细胞是结肠癌的来源,这些细胞是一小群未分化的、占全部肿瘤组织细胞的2.5%左右,但在无血清条件培养基中能以未分化的克隆细胞球(简称克隆球)形态呈对数增长超过1年的时间并保持成瘤性。Matilde Todaro等进一步证明了结肠癌CD133+亚群富含干细胞。Pim-1基因是一种原癌基因,被发现于1980s。Pim-1在胚胎期高表达,成人后关闭。它位于6p21.1-p21.31,编码丝／苏氨酸激酶(pim-1激酶)。Pim-1的生理功能主要体现在他是B淋巴细胞生成、增殖活化的重要调控蛋白；病理功能方面Pim-1激酶具有潜在的成瘤性而高表达于血液病及实体瘤中。目前对它的成瘤性研究主要围绕着和MYC相关的抗凋亡研究,它调节前列腺癌等细胞的增殖、分化、抗凋亡等生物学活性,在缺氧条件下,Pim-1能促进胰腺癌细胞成瘤并介导缺氧相关的耐药,逐渐成为肿瘤学研究的热点之一。关于结肠癌干细胞向血管内皮细胞分化的机制,通过进一步文献检索,发现Pim-1是胚胎干细胞向血管内皮细胞和周细胞分化并形成血管过程中必需的激酶,pim-1能不能介导肿瘤干细胞向血管内皮细胞分化,这个问题引起了我们的注意。我们前期研究发现,pim-1高表达于CD133+亚群,CD133-亚群基本不表达。我们推测结肠癌的预后是由肿瘤组织的不同部位(癌、癌间质、癌旁粘膜)pim-1的表达共同决定的；pim-1可能是晚期肿瘤化疗疗效的预测因子；pim-1可能是介导结肠癌干细胞向血管内皮细胞分化的关键蛋白之一。本课题拟回顾性分析pim-1对结肠癌的预后影响,并进一步分析晚期结肠癌患者的pim-1的表达水平和肿瘤血管密度及患者一线含奥沙利铂和5-FU方案化疗的疗效之间的关系；并在体内、外观察pim-1对结肠癌CD133+亚群向血管内皮细胞分化的影响,验证干预肿瘤干细胞向内皮细胞分化将是未来抗肿瘤血管生成治疗的一个新方向,进一步丰富抗肿瘤血管生成治疗的基础理论。方法：1.回顾性分析pim-1在结肠癌不同部位(癌组织、癌旁粘膜、癌间质)的表达与患者DFS和OS之间的关系,探讨结肠癌的预后指标；观察记录复发／转移的结肠癌患者一线含奥沙利铂和5-FU方案化疗的疗效,将其肿瘤标本建立组织芯片,利用连续切片免疫组化观察pim-1的表达和肿瘤血管密度之间的关系,进一步统计pim-1的表达情况与患者化疗疗效之间的关系；2.通过流式分选出CD133+、CD133-亚群,在含VEGFA的EBM-2培养基中进行血管内皮分化诱导,从细胞表型、细胞功能、特异性的组织形态学结构、血管网格形成实验,对CD133+亚群能够向血管内皮细胞分化进行鉴定；3.构建携RFP的pim-1过表达和干扰慢病毒载体及相应的对照载体,感染结肠癌细胞HT29、LOVO、HCT116后,在体外通过含VEGFA的EBM-2培养基中进行血管内皮分化诱导,通过RT-PCR、Western blot观察不同组别之间血管内皮细胞表型标志蛋白之间的差别；血管网格形成能力的差别；4.将上述转染的结肠癌细胞进行流式分选,分别分选出CD133+RFP+的细胞亚群,构建裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后在处死前5分钟尾静脉注射FITC-UEA,切片后标记CD31,激光共聚焦显微镜下比较RFP对照组、pim-1过表达组、pim-1干扰组在体内形成血管的能力及灌注功能。结果：1.为探讨pim-1对结肠癌的预后,我们对接受根治性切除的343例结肠癌患者术后肿瘤标本通过免疫组化的方法检测pim-1的表达,回顾性分析它与DFS和OS之间的关系：利用多变量Cox比例风险模型确定结肠癌的独立预后因子,采用层次分析法计算癌组织、癌间质、癌旁粘膜的pim-1对预后的权重0.1132686,0.5076026,0.3791288,建立pim-1总评分(PTS)公式：PTS=0.1132686p1+0.5076026p2+(-)0.3791288p3(pl、p2、p3分别代表癌、癌旁粘膜、癌间质的pim-1表达的病理评分),利用Delphi Method进行分为3级：低PTS≤0,中0<PTS≤0.5,高PTS>0.5；然后进行log-rank生存分析,发现结肠癌患者的预后(DFS/OS)是由癌组织、癌间质、癌旁粘膜的pim-1共同决定的,提示癌旁粘膜的癌变程度、癌间质免疫细胞的活化程度、癌本身的恶性程度(即它们pim-1表达的高低)共同决定了肿瘤患者的预后；肿瘤组织的pim-1表达水平和肿瘤血管密度成正相关；是晚期结肠患者一线含奥沙利铂和5-FU方案化疗疗效差重要的预测指标。2.我们通过流式分选的方法获取了CD133+结肠癌,通过成球、克隆形成、成瘤实验对其干性进行鉴定,证明CD133+结肠癌细胞亚群富含结肠癌干样细胞；将CD133+亚群细胞在EBM-2(内皮细胞基础培养基)中进诱导,通过内皮细胞表型鉴定、功能鉴定(Dii-AcLDL内吞和FITC-UEA结合实验)、组织形态学鉴定、成管实验鉴定,发现：CD133+亚群能够分化成具有内皮细胞表型(CD144、VEGFR2、CD31、CD105)的细胞；能够分化成内吞Dii-AcLDL和FITC-UEA结合具有内皮细胞独特功能的细胞；能够分化成空泡状具有内皮细胞独特组织形态学的细胞；分化的的细胞能够向血管内皮细胞一样具有成管功能。上述鉴定证明：富含结肠癌干样细胞的CD133+亚群能够分化成血管内皮细胞,参与肿瘤血管的生成。3.为了进一步验证pim-1在CD133+亚群向血管内皮细胞分化中的作用,我们首先对CD133+亚群和CD133-亚群中的pim-1进行检测,发现pim-1高表达于CD133+亚群。我们进一步对五株结肠癌细胞系进行了pim-1表达情况筛查,发现LOVO表达最低、HCT116表达最高。通过构建pim-1过表达慢病毒载体转染LOVO细胞,建立pim-1过表达的稳定株；构建pim-1干扰慢病毒载体转染HCT116细胞,建立pim-1干扰的稳定株；进一步通过流式分选CD133+亚群在EBM-2中进诱导,分别从血管内皮细胞表型的标记物、成管能力、裸鼠体内接种后的血管密度及灌注功能进行检测,发现LOVO细胞过表达pim-1能显着增加CD144、VEGFR2、CD31、CD105具有内皮细胞表型标记物的表达,能够增强其成管能力,接种后的移植瘤血管密度显着增加,灌注功能显着下降；HCT116细胞阻断pim-1表达能显着降低CD144、VEGFR2、 CD31、CD105具有内皮细胞表型标记物的表达,能够阻断其成管能力,接种后的移植瘤血管密度显着降低,灌注功能明显改善；上述实验证明了过表达pim-1能够增强结肠癌干样细胞向血管内皮细胞分化的能力；干扰pim-1的表达能够抑制结肠癌干样细胞向血管内皮细胞分化的能力。结论：1. pim-1既是结肠癌患者独立的预后因子,也是晚期结肠癌患者化疗疗效的预测因子。2. CD133+结肠癌干样细胞有向肿瘤血管内皮细胞分化的潜能。3. pim-1是结肠癌干样细胞向血管内皮细胞分化过程中的重要调控蛋白。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2014-04-01）
姚巍,张秀兰,姚英,王卫淑[7]（2014）在《骨髓动员单个核细胞向血管内皮细胞和心肌样细胞的转化》一文中研究指出背景:目前骨髓动员能否归巢到心肌病心衰受损部位,分化成心肌样细胞和血管内皮细胞尚无定论。目的:观察骨髓动员剂粒细胞集落刺激因子对心肌病心衰大鼠心肌和血管的影响。方法:选取阿霉素心肌病心衰模型大鼠50只,分成2组,骨髓动员组30只皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子,心衰组20只给予相同体积的生理盐水。骨髓动员组其中10只在动员第6天处死,留取心肌标本,行CD34免疫荧光检测。各组在治疗前及治疗后第5天剪尾取血,测量白细胞总数及单个核细胞百分比,同时提取外周血中单个核细胞行流式细胞仪检测。治疗第5天,腹腔注射Brdu 50 mg/kg,连续4周直至动物处死。留取心肌组织,通过心肌BrdU单染、BrdU与肌球蛋白重链双染及BrdU与肌动蛋白双染确定单个核细胞的归巢,评价移植的单个核细胞向心肌和血管内皮细胞的生成、分化。采用苏木精-伊红染色评价血管密度。结果与结论:骨髓动员组白细胞数及单个核细胞数较治疗前明显增高(P<0.05)。流式细胞仪证实骨髓动员组外周血单个核细胞CD34阳性率显着高于心衰组(P<0.05)。心肌CD34免疫荧光检测,心衰组阴性,骨髓动员组阳性。骨髓动员组心肌BrdU单染和肌球蛋白重链、肌动蛋白双染均呈阳性,心肌损伤处血管内皮细胞核呈BrdU阳性;心衰组均为阴性。骨髓动员组血管密度显着高于心衰组(P<0.001)。提示骨髓动员出单个核细胞,归巢到心肌受损处,对心肌病心衰大鼠模型心肌和血管有明显修复作用。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2014年06期）
贺路航,向橦,张艳玲,谢荣凯,朱波[8]（2014）在《CD133~+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的实验研究》一文中研究指出目的研究CD133+卵巢癌干细胞样细胞(ovarian cancer stem-like cells,OCSLCs)向血管内皮细胞的分化。方法通过无血清培养方法诱导卵巢癌A2780细胞株来源的CD133+OCSLCs;体外观察其在Matrigel基质胶上向血管内皮细胞分化的生物学行为,RT-PCR和Western blot检测其成管后CD31的表达;通过裸鼠皮下移植瘤实验,免疫荧光法观察CD133+OCSLCs在卵巢癌血管新生中的作用。结果成功诱导出CD133+OCSLCs;体外成管实验结果显示CD133+OCSLCs在Matrigel基质胶上具有成管能力,6 h管腔样结构形成最为明显;免疫荧光、RT-PCR和Western blot证实,OCSLCs成管后表达CD31内皮细胞标记物(P<0.01);CD133+OCSLCs接种裸鼠皮下成瘤后,通过免疫荧光可观察到人源性肿瘤微血管的形成。结论 CD133+OCSLCs具有向血管内皮细胞分化的潜能。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2014年05期）
易善永,南克俊,阮静,张丽娟,柯洋[9]（2013）在《血管内皮细胞对肝癌干细胞样细胞增殖及成瘤的影响》一文中研究指出目的探讨血管内皮细胞对肝癌干细胞样细胞增殖及成瘤的影响,并初步了解血管微环境对肝癌干细胞样细胞作用。方法用磁珠分选技术分选MHCC97H细胞株中的肝癌干细胞样细胞,将其分别接种到普通软琼脂和内皮细胞条件软琼脂中,观察集落形成情况;将其与血管内皮细胞混合细胞接种到裸鼠皮下,观察移植瘤形成情况。结果肝癌干细胞样细胞在普通培养基和内皮细胞条件培养基中集落形成率分别为:(14.25±2.94)%vs.(33.49±5.46)%,差异具有统计学意义(P=0.036)。两组移植瘤的体积和重量分别为(1442.73±67.51)mm3vs.(862.93±135.12)mm3;(1.45±0.15)g vs.(0.91±0.19)g,差异具有统计学意义(P=0.008;P=0.043)。结论血管内皮细胞是肿瘤干细胞血管微环境的重要组成部分,血管内皮细胞不仅在体外培养时能够促进肝癌干细胞样细胞的生长与增殖,而且在体内也能促进其移植瘤的生长。(本文来源于《中华临床医师杂志(电子版)》期刊2013年15期）
杨波[10]（2012）在《降钙素基因相关肽对成骨样细胞与血管内皮细胞交互作用的调控机制研究》一文中研究指出骨折修复重建过程中，再生神经和血管系统对骨痂发挥了严密的、实时的调控作用，相互协调，最终完成骨痂的结构和功能重建。周围神经所分泌的神经肽类物质，降钙素基因相关肽(calcitonin gene related protein，CGRP)，在骨折修复过程中发挥了促进骨痂生成的生物学作用。体外环境下CGRP能够促进成骨细胞增殖，并证明成骨细胞表面有CGRP受体的存在，大量下游细胞信号通路得到证实。但细胞实验研究中，多数实验仅围绕CGRP对成骨细胞(Osteoblasts, OB)或破骨细胞(Osteoclasts, OC)等单一成骨相关细胞展开，而对多细胞间的交互调控作用(Cross-talk)研究较少，因此未能全面完整地说明CGRP在体内多细胞环境下的促成骨机制。成骨细胞和血管内皮细胞(Vascular endothelial cells, VECs)之间存在一种相互影响、相互调控的OB-VECs间cross-talk机制。在骨痂中VECs不仅仅构建了微血管簇为骨痂提供了营养支持，还作为一种具有成骨诱导功能细胞，参与了MSCs的募集和诱导分化。研究发现细胞间cross-talk主要发生在两个层面，一是经由细胞膜之间的蛋白完成细胞与细胞间的直接作用，二是通过自分泌和旁分泌的方式完成细胞间的间接作用。而在骨折愈合过程中，骨痂中的CGRP阳性纤维沿着血管生长，并且有大量的体外实验证实，CGRP在血管再生和形成中也发挥着重要的生物学作用，说明CGRP参与了对OB-VECs之间Cross-talk的调控。基于骨痂中的CGRP对成骨的调控机制可能与VECs细胞相关这一推测，本实验依据课题组的前期预实验结果，建立CGRP干预的OB-VECs共培养体系体，通过对VECs细胞旁分泌成骨因子的检测，和OB细胞对应因子受体表达及细胞分化指标的检测，探讨CGRP对OB-VECs间cross-talk的调控机制。从而在体内及体外多细胞环境下，发现并证实神经通过对VECs旁分泌的调控作用发挥了促成骨效应，进一步阐述骨痂中神经对血管和成骨交互调控的作用机制。方法：1.细胞培养：美国ATCC公司人脐静脉血管内皮细胞HUVECs和人骨肉瘤细胞MG-63细胞株，加入含10%FCS的高糖DMEM培养基，以5×106/瓶密度接种于100ml培养瓶中，置于5%CO2孵箱中37°C孵育72或96h传代，培养传代，6-8代细胞用于共培养实验。2、共培养体系建立：2.1直接共培养：MG-63和HUVECs细胞经0.25％胰蛋白酶消化后，用含10％FCS的DMEM培养液配制成单个细胞悬液，按照不同混合比例的细胞悬液以1×105个/孔密度接种到12孔板，培养后24h后将细胞至于倒置显微镜下进行观察。2.2间接共培养：将MG-63细胞以5×105浓度接种于12孔板，安装0.4μm孔径的12孔板Transtwell小室，将HUVECs细胞以5×105浓度接种于Transtwell小室内。3.间接共培养环境下MG-63细胞的分化：3.1MG-63细胞CollagenⅠ mRNA检测：间接培养24h，48h，72h和96h后，提取MG-63细胞mRNA用于实验检测。Real time PCR检测共培养环境对MG-63细胞CollagenⅠmRNA表达改变影响；3.2培养液中OC检测：间接培养24h，48h，72h和96h后，提取培养液于实验检测，ELISA检测共培养环境对MG-63细胞OC表达改变影响。4. CGRP对间接共培养环境下MG-63细胞分化的生物学作用：4.1CGRP对间接共培养环境下MG-63细胞CollagenⅠ mRNA表达的作用：以量效组100nM，10nM，1nM和0.1nM，和时效组0h，24h，48h，72h和96h分组，CGRP干预MG-63-HUVECs共培养体系，获取MG-63细胞mRNA，Real timePCR检测各组细胞CollagenⅠmRNA表达差异。4.2CGRP对间接共培养环境下MG-63细胞OC表达的作用：以量效组100nM，10nM，1nM和0.1nM，和时效组0h，24h，48h，72h和96h分组，CGRP干预MG-63-HUVECs共培养体系，获取MG-63细胞培养液，ELISA检测各组细胞OC表达差异。5.共培养体系中CGRP所诱导的VEGF调控机制：5.1共培养体系中CGRP所诱导的VEGF-A分泌变化：10nM的CGRP作用于MG-63、HUVECs和MG-63-HUVECs间接共培养体系，作用0h，12h，24h，36h，和48h后收集细胞培养液或细胞，进行ELISA和Real Time-PCR测定。5.2共培养体系中CGRP所诱导的MG-63细胞VEGF受体的表达变化：将MG-63与HUVECs细胞Transtwell小室内间接共培养，未加Transtwell小室的MG-63培养为空白对照组(CON)，单独培养加入10nM CGRP的为CGRP作用组(CGRP)；加入Transwell及HUVECs的为共培养组(CO)，同时加入CGRP干预的为实验组(EXP)。培养48h后对MG-63细胞的VEGFR1/2进行免疫荧光检测。结果：1. MG-63-HUVECs细胞共培养：1.1直接共培养： MG-63和HUVECs细胞按照1:4，1:2，1:1，2:1和4:1比例进行共培养，24h发现MG-63：HUVECs按照比例为1:1的直接共培养体系中两种细胞生长最为良好，细胞间杂生长，其中HUVECs细胞呈结节样生长，MG-63细胞生长于内皮细胞结节周围。DiI荧光标记后，MG-63-HUVECs共培养体系24h，HUVECs细胞呈结节样生长，MG-63细胞生长于内皮细胞结节周围，48h，HUVECs细胞结节中央形成细胞坏死，72h，HUVECs细胞与MG-63细胞分层，MG-63细胞向内皮细胞结节内浸润生长，96h，HUVECs细胞出现类管型样结构，MG-63细胞完全布满培养瓶底。1.2间接共培养对MG-63细胞分化的作用：MG-63细胞在与HUVECs细胞间接共培养环境下，其CollagenⅠ mRNA表达明显增加，24h共培养组MG-63细胞所表达的CollagenⅠ mRNA为对照组的1.32，(P<0.05)；48h达到最大值，为对照组的1.57，(P<0.01)。培养液中OC表达随时间增加，且共培养组明显高于对照组，24h，共培养组培养清液中OC含量为对照组的1.54，(P<0.01)；48h为对照组的1.48，(P<0.01)；72h为对照组1.35，(P<0.05)。2. CGRP对间接共培养体系中MG-63细胞的生物学作用：不同浓度的CGRP作用MG-63-HUVECs细胞共培养体系48h后，MG-63细胞的CollagenⅠ mRNA和OC表达均有所增加，以10nM浓度组的MG-63细胞CollagenⅠmRNA和OC表达增高最为明显，分别为对照组1.94(P<0.01)和2.02(P<0.01)。10nM浓度CGRP作用MG-63-HUVECs细胞共培养体系，MG-63细胞CollagenⅠmRNA表达呈现增加趋势，CollagenⅠ mRNA表达于48h达到峰值，为对照组的1.98，(P<0.01)；培养液中的OC含量自24h后呈现增加趋势(P<0.01)，培养液中的OC含量于96h达到峰值，为对照组的2.91。3.共培养体系中CGRP所诱导的VEGF-A调控机制：3.1共培养体系中CGRP所诱导的VEGF-A分泌变化：在10nM CGRP的作用下，HUVECs单独作用组中培养液中VEGF-A含量相对对照组显着上升，在48h达到峰值，为对照组的2.31，VEGF-AmRNA相对对照组显着上升，在24h达到峰值，为对照组的2.71； MG-63单独作用组中培养液中的VEGF-A的含量在36h后随着时间延长出现下降，在48h达到最低值，为对照组的0.66；CGRP干预共培养组中，HUVECs细胞VEGF-A mRNA表达在24h后出现显着增高，24h达到峰值，为对照组的2.42。3.2共培养体系中CGRP所诱导的MG-63细胞VEGF受体表达变化：CGRP升高了共培养体系中MG-63细胞中VEGFR1的表达，10nM CGRP作用48h后，通过交叉对比，CO组VEGFR1表达显着高于CON组，0.186:0.124(p<0.01)；EXP组VEGFR1表达显着高于CON组，0.201:0.124(p<0.01)，并显着高于CGRP组，0.201:0.118(p<0.01)。CGRP和共培养环境分别升高了MG-63细胞中VEGFR2的表达，10nM CPGR作用48h后，通过交叉对比，CGRP组和CO组均显VEGFR2表达着高于CON组，分别为0.177:0.081(p<0.01)和0.154:0.081(p<0.01)；EXP组VEGFR2表达显着高于CON组，0.194:0.081(p<0.01)，并显着高于CO组，0.194:0.154(p<0.05)。结论1. MG-63细胞与HUVECs细胞能够在高糖DMEM培养基中直接共培养，其中以1:1比例为优势比例；血管内皮细胞呈结节样生长，随时间延长有出现管型样结构的趋势，MG-63细胞在其周围生长。2. MG-63-HUVECs间接共培养环境下，Collegen I mRNA表达和分泌型OC增加，促进MG-63细胞的分化成熟。3. CGRP对共培养体系中MG-63细胞CollagenⅠ mRNA和OC表达具有显着地促进作用，以10nM为最佳浓度，CGRP和共培养两种方式均能促进MG-63细胞CollagenⅠ mRNA和OC表达，促进MG-63细胞分化成熟。4. CGRP能够促进MG-63-HUVECs共培养体系中HUVECs细胞表达VEGF-AmRNA，上调MG-63-HUVECs共培养体系中MG-63细胞VEGFR1/2受体表达，以VEGFR2更为显着。但CGRP对MG-63-HUVECs共培养体系培养液中VEGF-A含量无显着影响。(本文来源于《第叁军医大学》期刊2012-10-01）
血管内皮细胞样细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:观察SD大鼠骨髓源神经干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells-derived neural stem cells,BMSCs-NSCs)在血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)培养条件下是否分化为内皮样细胞(endothelial-like cells,ELCs)。方法:本实验采用全骨髓培养法分离培养大鼠双侧股骨、胫骨以及肱骨的骨髓,利用骨髓源基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的贴壁生长特性和多次传代培养使其纯化。研究BMSCs的外形改变并绘制P3(Passage 3)代细胞的生长曲线,探讨BMSCs的最适接种密度,利用流式细胞仪检测BMSCs标志物CD34、CD44、CD45、CD90的表达情况。将所得P3代BMSCs消化形成单细胞悬液,调整细胞密度后置于神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱导培养基(20ng/mL bFGF、20ng/mL EGF、B27)中进行悬浮培养,通过免疫细胞化学染色观察神经球表面标志物CD133、Nestin的表达情况。培养所得神经球消化形成单细胞,并进行免疫细胞化学染色检测VEC表面标志物CD31、vWF的表达情况。将所得NSCs悬液置于Matrigel胶质培养基中培养,观察是否形成血管腔样结构。结果:1.BMSCs早期呈簇状生长,细胞呈梭形。P3 BMSCs流式细胞仪检测显示CD44阳性细胞比率为91.4%,CD90阳性细胞比率为93.7%;CD34、CD45的表达均呈阴性反应。2.P3代细胞生长曲线呈“S”型,其接种最佳密度区间在5×104~1×105/mL。3.BMSCs培养1-2天时细胞聚集呈团块状,随后呈“桑葚状”球形结构,免疫细胞化学染色显示CD133、Nestin的表达均呈阳性反应。4.骨髓源神经球在VEC培养基中培养7天时,细胞呈扁平状,叁角形或多角形,外观似“铺路石”状。在Matrigel胶质培养基中可形成管腔样结构。结论:1.体外利用无血清悬浮培养法,可将大鼠BMSCs诱导分化为NSCs。2.BMSCs-NSCs体外诱导可定向分化为ELCs,并且在Matrigel胶中可形成管腔样结构。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
血管内皮细胞样细胞论文参考文献
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[3].汤树.卵巢癌干细胞样细胞通过自分泌CCL5促进内皮细胞分化和肿瘤血管形成[D].第叁军医大学.2016
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[7].姚巍,张秀兰,姚英,王卫淑.骨髓动员单个核细胞向血管内皮细胞和心肌样细胞的转化[J].中国组织工程研究.2014
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[10].杨波.降钙素基因相关肽对成骨样细胞与血管内皮细胞交互作用的调控机制研究[D].第叁军医大学.2012