导读:本文包含了重组活性论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鲤鱼,c型溶菌酶,成熟肽,毕赤酵母
重组活性论文文献综述
颜倩倩,陶妍,李雯,谢晶,钱韵芳[1]（2019）在《鲤鱼c型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性》一文中研究指出c型溶菌酶是鱼类在先天性免疫机制中抵抗细菌感染的关键性免疫蛋白。鲤鱼(Cyprinus carpio)c型溶菌酶具有鱼类c型溶菌酶的基本特征:N端含有信号肽;C端成熟肽中的Glu35和Asp51构成酶的活性位点,并含有8个保守的半胱氨酸残基。本研究通过反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)获得鲤鱼c型溶菌酶成熟肽的c DNA,该序列全长381 bp,编码由127个氨基酸残基组成的成熟肽;通过PCR在其5'端添加限制性内切酶XhoⅠ位点和6×His标签、3'端添加XbaⅠ位点;获得的目的基因,即鲤鱼c型溶菌酶基因(common carp c-type lysozyme, CLYc),与表达载体pPICZαA连接后电转至毕赤酵母(Pichia pastoris) X-33,通过高浓度博来霉素筛选高拷贝酵母转化子;在29℃、250 r/min条件下,使用1.5%甲醇诱导表达120 h,表达上清液经固化金属离子亲和层析(immobilized metal affinity chromatography, IMAC)纯化,获得分子量为15.4 kD的重组蛋白,表达量约为40 mg/L;Western blot分析和MALDI-TOF/TOF质谱鉴定表明该重组蛋白为预期的目的重组蛋白CLYc。抑菌试验证明,含重组CLYc的培养上清液对革兰氏阳性的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以及革兰氏阴性的大肠杆菌(Escherichia coli)和副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)具有明显的抑菌活性;纯化的重组CLYc对单增李斯特菌、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌和副溶血性弧菌显示了相同的最小抑菌浓度。本研究结果为鱼类来源的天然抗菌剂的开发和生产提供了技术途径。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年11期）
吴丽云,朱艳冰,银小倩,李鹤宾,倪辉[2]（2019）在《丁香假单孢菌重组褐藻胶裂解酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性》一文中研究指出目的:将丁香假单孢菌的褐藻胶裂解酶进行克隆表达和纯化,研究重组酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为进一步研究该酶的结构与功能奠定良好的基础。方法:利用PCR扩增褐藻胶裂解酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,研究重组酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除ABTS·+和·OH自由基的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。结果:来自丁香假单孢菌的重组褐藻胶裂解酶的分子质量为40.8 ku。该重组酶专一性降解聚甘露糖醛酸,酶的最适反应温度和pH分别为30℃和7.5,温度低于50℃时稳定。除了SDS和DTT,重组酶对其它抑制剂和去垢剂具有较好的抗性。酶解产物对ABTS·+和·OH自由基的半数抑制剂量IC50分别为1.56 mg/mL和0.56 mg/mL,还原能力较强。结论:该重组褐藻胶裂解酶的酶解产物有一定的抗氧化活性,具有应用潜力。(本文来源于《中国食品学报》期刊2019年11期）
贾洋洋,张蕊,刘阳,刘忠渊[3]（2019）在《重组蛋白ApSerpin-FA72的包涵体复性及活性研究》一文中研究指出[目的]原核表达及制备重组光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂(Ap Serpin-FA72),探索包涵体最优复性条件与最适酶反应条件。[方法]采用超声破碎获得大量包涵体,通过包涵体的洗涤、包涵体的溶解方法对包涵体进行纯化,获得高纯度的包涵体进行复性液成分与复性方法的摸索。测定Trx A-Ap Serpin-FA72对胰蛋白酶的IC50、最适反应p H和最适反应温度。[结果]在32℃、180 r/min、0. 4 mmol/L IPTG浓度下以沉淀形式表达大量蛋白,通过包涵体复性在含有L-精氨酸复性液中获得有生物活性的Trx A-Ap Serpin-FA72,对胰蛋白酶的IC50为0. 48μmol/L,p H在7～9,温度在60℃时有较高的抑制活性。[结论]L-精氨酸是复性液中重要的组成部分,复性的重组蛋白Trx A-Ap SerpinFA72对胰蛋白酶有较强的抑制能力,是一种热稳定较好的弱碱性胰蛋白酶抑制剂。(本文来源于《生物技术》期刊2019年05期）
李浩杰,杨雪珍,蓝文康,张伟崇,王晔[4]（2019）在《重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究》一文中研究指出为了构建一种胞内表达人溶菌酶(hLZ)的毕赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通过酶切位点插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得pPICZαA-hLZ。线性化该表达载体,电转化并筛选阳性克隆,甲醇诱导重组蛋白表达后,进行纯化和活性分析。结果表明,通过亲和层析树脂(Ni-IDA)从培养液上清纯化目标蛋白,SDS-PAGE表明目标蛋白为14.7 kDa左右,Western-blot结果表明目标蛋白即为带有6个His标签的重组人溶菌酶,BCA法测定表明纯化后的蛋白浓度为0.121 mg/mL;溶壁微球菌抑菌试验表明该重组人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地获得了胞内表达且具有部分生物活性的人溶菌酶毕赤酵母工程菌,为重组人溶菌酶作为饲料添加剂开发应用奠定了一定的基础。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年10期）
李妮,王海杰,吕诗韵,杜沧浩,孙鸽[5]（2019）在《EV713D聚合酶基因体外重组质粒的构建、表达及活性检测》一文中研究指出目的构建编码肠道病毒71型(EV71)3D聚合酶基因的重组质粒,表达和纯化3D聚合酶并检测其活性。方法将编码3D聚合酶的基因片段克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析、TEV酶酶切、Ni-NTA柱亲和纯化后获得高纯度3D聚合酶蛋白,放射测量法是体外酶活力测定方法中较常见的一种方法,本研究通过测定插入poly(U) RNA放射性标志UMP的量确定3D聚合酶的活性。结果经酶切、PCR、测序鉴定pGEX-4T-3D重组质粒构建成功,3D聚合酶基因片段大小为1 386 bp。与未诱导相比,经IPTG诱导后带有GST标签的3D聚合酶成功表达,表达产物的相对分子质量约为79×10~3,TEV酶酶切掉GST标签后的相对分子质量约为55×10~3。纯化的3D聚合酶经体外延伸反应后跑变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳得知,3D聚合酶溶解液DMSO组相比于3D聚合酶强抑制剂EDTA组,在DMSO组中,可以观察到强电泳条带,表明放射性同位素标志程度强,表明反应速率快,即3D聚合酶酶活较好。结论构建了EV71 3D聚合酶基因重组质粒,其表达产物3D聚合酶为以EV71 3D聚合酶为靶点的抗EV71药物筛选奠定基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年09期）
卢悟广,曹萌,桑明,蔡花漫,曹鹏[6]（2019）在《一种靶向钙结合蛋白S100A9重组疫苗的构建及其抗肿瘤活性研究》一文中研究指出钙结合蛋白S100A9与炎症发生与肿瘤侵袭密切相关,是髓系来源的抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell, MDSC)的特异性标志物之一。本研究以霍乱毒素B亚基(CTB)五聚体为载体构建了一种靶向小鼠钙结合蛋白S100A9的重组多肽疫苗CTB-S100A9,并在大肠杆菌分泌表达系统中获得表达。经纯化后的重组CTBS100A9五聚体蛋白辅以氢氧化铝佐剂免疫小鼠后能打破自身免疫耐受产生高滴度的S100A9抗体。在4T1小鼠乳腺癌的预防及治疗模型中, CTB-S100A9疫苗均能够有效抑制肿瘤生长。进一步发现CTB-S100A9疫苗能够有效减少荷瘤小鼠外周血中Treg细胞的含量及粒细胞来源的MDSC,逆转抑制性肿瘤免疫环境,增强抗肿瘤免疫应答。本研究的动物实验都是在南京中医药大学附属中西医结合医院动物伦理委员会批准的动物护理和方案下进行。该研究表明, CTB-S100A9是一种良好的靶向肿瘤免疫环境的重组疫苗,具有较大临床应用的潜力。(本文来源于《药学学报》期刊2019年10期）
翟志慧,梅彩英,王晓闻[7]（2019）在《重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性测定法的建立及方法验证》一文中研究指出目的 :建立重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性测定法并对其进行方法验证。方法 :采用间接ELISA法建立抗原-抗体-二抗结合反应体系,用四参数计算法拟合其结合曲线,计算供试品的结合活性。结果 :方法具有良好的专属性、精密度、相对准确度、线性和耐用性。在64%～156%水平范围内,精密度验证各水平的GCV值均在15%以内;相对准确度验证各水平的相对偏倚置信区间均在±12%范围内,平均回收率均在80%～120%范围内;以五个水平实测值对数值对每个理论值对数值进行线性回归,线性关系良好。结论 :该方法专属性好,精密度好,准确度高,可用于重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性的测定。(本文来源于《上海医药》期刊2019年15期）
施晋升,李峰,吴思慧,俞力超,刘黎琼[8]（2019）在《携带抗FAP×抗CD3双特异性抗体重组溶瘤痘病毒的构建及其抗癌活性观察》一文中研究指出目的:构建携带抗成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)和抗小鼠CD3分子的双特异性抗体溶瘤痘病毒(r VVDD-BiTE. FAP),并体外检测该病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株抑制作用。方法:利用同源重组技术将PF17R启动子调控的Bi TE-FAP基因和PSEL启动子调控的DsRed基因克隆入缺失痘苗生长因子(vaccinia growth factor,VGF)基因的v SC20亲本病毒TK基因处,经软琼脂空斑筛选获得VGF和TK双基因缺失的重组溶瘤痘病毒r VVDD-BiTE. FAP。采用空斑计数法比较重组溶瘤病毒和亲本病毒v SC20在小鼠肺癌细胞株中的复制能力;采用MTS法检测重组溶瘤病毒r VVDD-BiTE. FAP和r VVDD-GFP对小鼠肺癌LLC细胞株的抑制效果,并用MTS、LDH实验进一步检测溶瘤病毒和小鼠脾脏T细胞对靶细胞的协同杀伤效果,采用ELISA法检测细胞因子IL-2和IFN-γ的表达。结果:通过同源重组技术和软琼脂空斑法筛选获得r VVDD-BiTE. FAP重组溶瘤痘病毒。r VVDD-BiTE. FAP与亲本病毒具有同等复制能力;小鼠T细胞能够增强r VVDD-BiTE. FAP抗肿瘤效果。结论:r VVDD-BiTE. FAP具有高效抗肿瘤活性。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
毛福超,张梦珂,廖成水,贾艳艳,王晓利[9]（2019）在《重组单增李斯特菌TatD-like DNase蛋白的核酸酶活性分析》一文中研究指出为研究单增李斯特菌TatD-like DNase蛋白的序列结构与表达纯化后蛋白的酶学特性。本研究应用PCR扩增得到单增李斯特菌10403s株的Tat D-like DNase基因,利用生物信息学系统性预测分析其序列结构特征。然后将目的基因亚克隆至原核表达载体p ET32a构建重组表达质粒(p ET32a-Tat D-like DNase),转入大肠杆菌Rosetta中经IPTG诱导表达、亲和层析法纯化后采用SDS-PAGE和Western blot进行分析,将纯化的蛋白透析后进行酶学特性分析。单增李斯特菌10403s株Tat D-like DNase蛋白由265个氨基酸组成,理论蛋白分子量为30.16 k D,其氨基酸序列与其它34种微生物的Tat D-like DNase及其类似物的同源性较低。Tat D-like DNase为亲水性蛋白,含有5个优势B细胞抗抗原表位。二级结构分析,Tat D-like DNase蛋白主要由29.81%的无规则卷曲、49.43%的α-螺旋、16.6%的β-折迭和4.15%的β-转角构成。SDS-PAGE和Western blot结果显示Tat D-like DNase重组蛋白约55 k D,主要以包涵体形式表达。Tat D-like DNase蛋白具有核酸酶活性,并且酶学活性的发挥具有一定的蛋白浓度依赖性,受到温度和PH的影响。本实验对单增李斯特菌Tat D-like DNase蛋白进行了序列分析,同时得到了纯化后的重组原核表达蛋白,并检测了该蛋白的功能特性。为进一步研究Tat D-like DNase在单增李斯特菌感染中的作用奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
宋天琪,侯绍华,郭晓宇,鑫婷,姜一曈[10]（2019）在《重组犬α6干扰素的酵母表达及其抗病毒活性评价》一文中研究指出试验旨在构建犬α6干扰素毕赤酵母表达系统,并对其进行优化和筛选,以期获得高活性的重组犬α6干扰素(CaIFN-α6)。根据CaIFN-α6基因序列,按毕赤酵母菌密码子偏好性对CaIFN-α6全基因序列进行优化与合成,用XhoⅠ和NotⅠ双酶切将其连接至载体pPICZαA中,构建pPICZαA-CaIFN-α6重组表达质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。提取质粒pPICZαA-CaIFN-α6并线性化,电转入酵母感受态细胞X33中制备重组菌。采用甲醇进行诱导表达,收集上清,超滤浓缩,最终获得纯化的重组CaIFN-α6。利用BCA法测得纯化后的CaIFN-α6蛋白浓度为1.5 mg/mL,Western blotting分析表明CaIFN-α6蛋白具有良好的反应原性,SDS-PAGE显示其纯度约在95%以上,MDCK/VSV法检测其效价为2.37×10~7 IU/mL,比活性为1.58×10~7 IU/mg。结果表明犬α6干扰素在毕赤酵母pPICZαA表达载体系统中成功表达,且具有较高的生物活性,为后期的犬病毒病的临床预防与治疗提供了良好的支撑。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年07期）
重组活性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:将丁香假单孢菌的褐藻胶裂解酶进行克隆表达和纯化,研究重组酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为进一步研究该酶的结构与功能奠定良好的基础。方法:利用PCR扩增褐藻胶裂解酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a;表达产物用亲和层析纯化,研究重组酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除ABTS·+和·OH自由基的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。结果:来自丁香假单孢菌的重组褐藻胶裂解酶的分子质量为40.8 ku。该重组酶专一性降解聚甘露糖醛酸,酶的最适反应温度和pH分别为30℃和7.5,温度低于50℃时稳定。除了SDS和DTT,重组酶对其它抑制剂和去垢剂具有较好的抗性。酶解产物对ABTS·+和·OH自由基的半数抑制剂量IC50分别为1.56 mg/mL和0.56 mg/mL,还原能力较强。结论:该重组褐藻胶裂解酶的酶解产物有一定的抗氧化活性,具有应用潜力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组活性论文参考文献
[1].颜倩倩,陶妍,李雯,谢晶,钱韵芳.鲤鱼c型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性[J].农业生物技术学报.2019
[2].吴丽云,朱艳冰,银小倩,李鹤宾,倪辉.丁香假单孢菌重组褐藻胶裂解酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性[J].中国食品学报.2019
[3].贾洋洋,张蕊,刘阳,刘忠渊.重组蛋白ApSerpin-FA72的包涵体复性及活性研究[J].生物技术.2019
[4].李浩杰,杨雪珍,蓝文康,张伟崇,王晔.重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究[J].家畜生态学报.2019
[5].李妮,王海杰,吕诗韵,杜沧浩,孙鸽.EV713D聚合酶基因体外重组质粒的构建、表达及活性检测[J].中国病原生物学杂志.2019
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[7].翟志慧,梅彩英,王晓闻.重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性测定法的建立及方法验证[J].上海医药.2019
[8].施晋升,李峰,吴思慧,俞力超,刘黎琼.携带抗FAP×抗CD3双特异性抗体重组溶瘤痘病毒的构建及其抗癌活性观察[J].江苏大学学报(医学版).2019
[9].毛福超,张梦珂,廖成水,贾艳艳,王晓利.重组单增李斯特菌TatD-likeDNase蛋白的核酸酶活性分析[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[10].宋天琪,侯绍华,郭晓宇,鑫婷,姜一曈.重组犬α6干扰素的酵母表达及其抗病毒活性评价[J].中国畜牧兽医.2019