导读:本文包含了类杀虫晶体蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:苏云金芽胞杆菌,cry1Dd1基因,小菜蛾,新基因
类杀虫晶体蛋白论文文献综述
余宗兰,贺利业,孙宏伟,李平,郑爱萍[1]（2019）在《苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1D新基因的克隆与特性》一文中研究指出为扩充鳞翅目害虫杀虫基因资源,本研究从苏云金芽胞杆菌BN23-5中克隆得到一个新的cry基因,并对其进行鉴定和分析。该基因为一个完整的cry1D基因,全长3501 bp,编码1166个氨基酸残基。该氨基酸序列是一个新的Cry氨基酸序列,与Cry1Db1的同源性最高,为86%,命名为Cry1Dd1(登录号为KJ728844)。将该基因插入穿梭表达载体pSTK中,转入BT无晶体突变株-HD73中进行表达。结果表明,cry1Dd1基因能在BT无晶体突变株中表达,并形成菱形伴孢晶体。SDS-PAGE验证其分子量为132.2 kD,与预测的大小相符。生物活性测定表明,Cry1Dd1晶体蛋白对小菜蛾的幼虫具有杀虫活性,LC_(50)为13.1μg/mL;能明显抑制甜菜夜蛾幼虫的生长;但对棉铃虫幼虫没有杀虫活性。对cry1Dd1基因序列进行分析,cry1Dd1包含8个block保守区域,这和目前其他的cry基因相似;Cry1Dd1蛋白的活性区域为N端的37～593位氨基酸残基。(本文来源于《中国生物防治学报》期刊2019年02期）
朱勋,李祥瑞,魏长平,阎维巍,李亚萍[2]（2016）在《抗Cry1Ac杀虫晶体蛋白近等基因系小菜蛾中肠多组学研究》一文中研究指出苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是应用最为成功的生物杀虫剂,但对其抗性机制认识的不足,严重制约着Bt杀虫蛋白的进一步开发与应用,并威胁着转Bt基因作物的使用寿命。十字花科重要害虫小菜蛾[Plutella xylostella(L.)]是最早被发现在田间对Bt产生抗性的害虫。前期研究发现,小菜蛾对Bt Cry1Ac的抗性由多受体基因变化所致,由其上游的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径调控。本研究以抗CrylAc近等基因系小菜蛾幼虫中肠为研究材料,开展全基因组甲基化、中肠转录组和蛋白质组联合测序,通过多层组学整合分析,建立小菜蛾中肠DNA甲基化控制基因表达的分子调控网络,研究评价DNA甲基化对小菜蛾抗Cry1Ac的贡献。实验结果表明,小菜蛾全基因组胞嘧啶甲基化率约为0.8%,且以CG形式为主,抗性品系的甲基化率低于Cry1Ac敏感品系的甲基化率。小菜蛾中mCG主要集中在基因区,且以低甲基化的形式为主。在甲基化的基因中,mCG的密度明显向CDS的5'端偏斜。我们在抗感品系间鉴定到了425个差异甲基化的基因,在抗性种群中有65.4%的差异甲基化基因是低甲基化基因,在这些低甲基化基因中我们鉴定到了与杀虫剂抗性相关的候选基因。对抗敏种群小菜蛾幼虫中肠转录组与iTRAQ定量蛋白组联合分析,发现了大量可能的Bt受体和与抗性相关的蛋白质差异表达,其中包括6个ABC转运蛋白、4个氨肽酶N等。其中发现多个与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)代谢途径相关的基因,在两个种群中存在表达差异,这些基因或蛋白的表达差异可能跟与MAPK调控受体引起抗性有关。我们分析了基因的甲基化与表达量之间的关系,发现基因表达量的高低与甲基化状态有关而与甲基化率高低无关,甲基化基因的表达量显着高于非甲基化基因的表达量。暗示小菜蛾基因区域的甲基化对基因的表达具有重要调控作用。研究结果为MAPK途径控制多受体基因变化的遗传调控网络的阐明提供数据支持,对Bt杀虫蛋白的开发与可持续应用具有重要的理论和实践意义。(本文来源于《植保科技创新与农业精准扶贫——中国植物保护学会2016年学术年会论文集》期刊2016-11-10）
龚莉君,柳傲,刘大成,杨中侠[3]（2016）在《Bt杀虫晶体蛋白增效物质的研究进展》一文中研究指出Bt杀虫晶体蛋白对靶标害虫具高度的专一性,是目前世界上产量最大、应用最广泛的微生物杀虫剂。现已广泛应用于微生物制剂和转基因植物,利用其增效物质提高杀虫晶体蛋白的杀虫活性,对高效Bt工程菌的构建及cry基因在转基因植物中的应用具有非常重要的意义,本文对目前已确定的几种增效物质进行综合论述,以供研究者了解相关动态。(本文来源于《华中昆虫研究》期刊2016年00期）
刘肖萍,林毅[4]（2016）在《Cry1A型杀虫晶体蛋白活性区的空间结构比较分析》一文中研究指出对9种代表性Cry1A型杀虫晶体蛋白成员进行活性区空间结构的同源模建与比较分析.分析结果表明:DomainⅠ和DomainⅢ相对保守,其中,DomainⅠ整体走向及结构基本重迭,只有Cry1Aa和Cry1Af多了一个螺旋;DomainⅡ的主要差异体现在loop上;将DomainⅢ结构一致的成员Cry1Ab,Cry1Ad,Cry1Ae和Cry1Af归为一个亚型,其他5种成员归为另一个亚型.研究确定了影响Cry1A型杀虫晶体蛋白结构差异的关键氨基酸及关键结构片段.(本文来源于《华侨大学学报(自然科学版)》期刊2016年04期）
薛欢[5]（2016）在《苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白研究及应用概述》一文中研究指出作为应用最广最有效的细菌杀虫剂,苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在形成芽孢时可产生具有杀虫活性的杀虫晶体蛋白(ICPs)。迄今为止,ICP已有近800种,对鳞翅目、双翅目、同翅目、膜翅目、鞘翅目、蜱螨目等害虫都具有特异性的毒杀作用。该文概述了ICP的结构、功能及基因分类,以及其基因工程研究及应用,为Bt杀虫蛋白的推广应用及其定向改造提供参考。(本文来源于《江苏林业科技》期刊2016年02期）
彭琦,周子珊,张杰[6]（2015）在《苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白研究进展》一文中研究指出苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt),属于蜡样芽胞杆菌族,芽胞杆菌属的革兰氏阳性细菌,与其它芽胞杆菌的区别是在形成芽胞的同时,伴随有杀虫晶体蛋白(Cry蛋白)的产生。Cry蛋白对鳞翅目、鞘翅目、膜翅目和双翅目等多种害虫具有特异的杀虫作用,因此,Cry蛋白以微生物杀虫剂或转Bt基因植物的形式而被广泛应用于害虫生物防治中。本文从Bt菌株的发掘、cry基因的转录调控机制、Cry蛋白的结构功能及作用机制等方面进行综述,为Bt杀虫蛋白的推广应用、Bt蛋白的定向改造和构建高效广谱的工程菌提供参考。(本文来源于《中国生物防治学报》期刊2015年05期）
徐承晨[7]（2015）在《苏云金芽胞杆菌Cry51Aa1杀虫晶体蛋白结构及功能研究》一文中研究指出1991年首例Cry3Aa蛋白结构成功解析以来,苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白结构生物学研究的不断深入,有力地推动了蛋白作用机制等研究领域的快速发展,促进了苏云金芽胞杆菌在农林业中更加广泛的应用。为了进一步揭示新型杀虫晶体蛋白的结构,探索杀虫蛋白的作用机理,扩大苏云金芽胞杆菌的应用范围,缓解与防治田间害虫中出现的抗性,本研究以我室新克隆表达的Cry51Aa1蛋白为对象,利用X射线晶体学衍射技术,较全面而深入地开展了结构及功能的探索。结果如下:1.解析出与经典叁结构域型Cry蛋白不同,且对马铃薯甲虫幼虫有特异性毒性的Cry51Aa1全长蛋白结构。创建了苏云金芽胞杆菌新颖蛋白结构与杀虫活性之间的新型关系,此项研究国内尚未见诸报道。同时,将已解析的苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白结构的分辨率刷新至1.65?。2.Cry51Aa1蛋白结构主要由β折叠股组成,按结构特性可分为叁个结构域:结构域I位于整个结构的氨基端,由α螺旋、310螺旋和β折叠股组成;结构域II位于整个结构的中段,由β发卡和β片层构成;结构域III位于整个结构的羧基端,含有两个β片层。结构域II和结构域III均呈‘β三明治’构象。3.Cry51Aa1蛋白叁个结构域具有其自身的特点:结构域I富含芳香族氨基酸,可能与受体结合以及结构稳定性相关;结构域II富含色氨酸与苏氨酸,并含有一个两亲性β发卡结构和一段甘氨酸loop,这些模块可能参与蛋白的多聚和跨膜穿孔过程;结构域III含有完整的羧基尾端,与蛋白酶酶解活化过程紧密联系。4.Cry51Aa1在非对称单元内以单体形式存在,但在晶体与溶液中呈晶体学二聚体状态。对结构进一步分析表明,Cry51Aa1蛋白经胰蛋白酶酶解活化后,二聚体内分子间氢键被破坏,二聚体裂解形成单体,单体聚集产生六聚体,六聚体可能是蛋白与细胞膜相互作用时的多聚形态。酶解亦会破坏蛋白单体内各结构域之间的氢键,从而影响两亲性β发卡结构的稳定性。5.本研究根据螺旋和β折叠组成及分布特点的相似性,叁维结构空间分布相似性、以及典型的两亲性β发卡结构特征,将Cry51Aa1蛋白归类于Aerolysin型β穿孔蛋白家族中。同时,比较了Cry51Aa1蛋白单体叁结构域与Aerolysin型β穿孔蛋白家族成员结构的异同。6.功能性实验初步表明,Cry51Aa1蛋白对马铃薯甲虫幼虫有较高的杀虫活性。对鞘翅目昆虫的活性实验验证了Cry51A类蛋白的杀虫谱,使之成为结构新颖、且对鞘翅目有特异性杀虫活性的一类苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白;对冈比亚按蚊幼虫细胞系的毒性测定发现,经酶解Cry51Aa1蛋白处理的细胞出现气球样变的现象,说明蛋白能影响细胞膜的完整性,即活化后的Cry51Aa1蛋白具有溶细胞活性。本研究利用结构生物学研究手段,摸索并提炼出了一套适用于苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白表达体系的蛋白纯化、结晶、X射线衍射、结构解析的完整技术路线。结构新颖的Cry51Aa1杀虫晶体蛋白为苏云金芽胞杆菌结构生物学的研究增添了新的成员,也提供了新的研究思路;功能性结果验证并拓宽了Cry51Aa类蛋白的功能范围,不仅证实了Cry51A类蛋白与鞘翅目和半翅目昆虫细胞膜之间存在特异的相互作用,也暗示了该类蛋白在昆虫细胞膜上的作用方式可能与Aerolsyin型β穿孔蛋白家族类似。对Cry51Aa1杀虫晶体蛋白结构的深入研究和分析,为今后进一步阐明Cry51A类蛋白结构与功能的关系、作用机理的研究,以及害虫生物防治奠定了一定的基础。本文在阐述Cry51Aa1杀虫晶体蛋白结构及功能研究之前,对目前苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白结构与功能的研究进展情况作了一个较为详尽的综述。综述着力分析、归纳和总结了苏云金芽胞杆菌叁类不同结构特征晶体蛋白的特点;比较分析了相似蛋白结构与相应功能的异同;探索了杀虫晶体蛋白的作用机制,为Cry51Aa1蛋白结构与功能的研究提供了思路和经验。同时,为凸显现代结构生物学的特点,本论文对蛋白质的X射线晶体学基本概念与研究方法也进行了简要概述。(本文来源于《华中农业大学》期刊2015-06-01）
朱勋[8]（2014）在《抗Cry1Ac杀虫晶体蛋白近等基因系小菜蛾中肠蛋白质基因组学研究》一文中研究指出苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)是目前世界上用途最广、产量最大的微生物杀虫剂,其编码Bt杀虫毒蛋白基因作为主要的杀虫基因转入到多种作物中,在害虫防治中成效显着。但与此同时,Bt制剂的大量使用和转Bt作物的广泛种植,使得Bt的抗性问题越来越严重。十字花科重要害虫小菜蛾Plutella xylostella (L.)是最早被发现且目前仅有的6种在田间对Bt产生抗性的害虫之一。但到目前为止,Bt对小菜蛾的杀虫作用过程和小菜蛾对Bt的抗性机理,研究的仍不是完全清楚。在本研究中,我们建立了对Cry1Ac有高于5000倍抗性的近等基因系小菜蛾种群,同时研究了其相关生物学特性。同时,我们首次利用shotgun HPLC-ESI-MS/MS技术对小菜蛾幼虫中肠蛋白质进行了蛋白质基因组分析。同时为了更好的揭示小菜蛾抗Cry1Ac的分子机理,我们利用iTRAQ和MRM两种蛋白质组分析技术,对两个种群的中肠蛋白质组进行了定量分析,发现了大量差异表达蛋白质和可能的Bt受体。结果如下：1.小菜蛾抗CrylAc近等基因系种群的构建我们利用弗罗里达Florida抗Cry1Ac小菜蛾DBMlAc-R与纽约日内瓦Geneva敏感种群DBM1Ac-S,建立了两套近等基因系种群。经ISSR分子标记技术对其近等性进行评估发现,利用高世代回交法构建的近等基因系抗性种群BC7F3(更名为NIL-R),与轮回亲本敏感种群DBM1Ac-S之间的遗传相似度达到98.24%,具有较高的相似度,且其对Cry1Ac毒蛋白的抗性倍数保持在5000倍以上,是理想的实验材料。2.抗CrylAc近等基因系小菜蛾的抗性相关生物学研究我们利用以上建立的抗CrylAc小菜蛾近等基因系种群NIL-R开展相关生物学研究。我们通过3次生命表对NIL-R种群的抗性适合度研究发现：在卵的大小、寿命、幼虫发育、成虫寿命和产卵量上,抗性种群NIL-R与敏感种群DBM1Ac-S相比没有显着差别,说明NIL-R没有出现发育的延迟；利用两种群的内禀增长率(Ro)计算相对适合度,叁次生命表结果分别为1.016、0.940和0.932,说明抗Cry1Ac小菜蛾近等基因系种群NIL-R没有抗性适合度代价。根据交互抗性谱分析发现：NIL-R对CrylAb毒蛋白和Cry1Ah蛋白具有一定的交互抗性,对Cry1Ca毒蛋白和Cry1Ie毒蛋白没有交互抗性,由此我们可以推断小菜蛾对CrylA类毒蛋白可能具有共同的受体位点,而与Cry1Ca毒蛋白和Cry1Ie毒蛋白的受体位点不同。利用单对杂交实验和剂量对数-期望死亡机率曲线两种方法研究其遗传方式发现：抗性近等基因系种群NIL-R对Cry1Ac的抗性由一个常染色体、不完全隐形的基因位点决定。3.利用shotgun ESI-MS对小菜蛾幼虫中肠进行蛋白质基因组研究我们利用shotgun HPLC-ESI-MS/MS对小菜蛾幼虫中肠蛋白质进行测定,结合其基因组数据,完成了首个小菜蛾中肠蛋白质基因组分析。通过研究,一共得到了876,341张质谱图,将这些质谱图与小菜蛾基因组的蛋白质数据库及全基因组6框翻译的蛋白数据相比对,共鉴定出15,887条肽段。其中,12,004条肽段与已经发表的小菜蛾基因组中的预测蛋白质信息相匹配,同时发现了2113新肽段。利用这些发现的新肽段鉴定得到491个新基因,修正了202个小菜蛾基因组注释基因。通过对小菜蛾中肠蛋白质组的功能注释分析我们发现脂质消化作用相关酶和基因在小菜蛾中肠蛋白质中占据了重要地位,这可能是小菜蛾与其主要寄主十字花科作物的共进化的又一证据。同时我们从这些蛋白质数据鉴定到了大量与小菜蛾杀虫剂抗性相关的蛋白质,为小菜蛾适应性及广泛抗药性等的分子机理、功能基因组研究供了必要的数据支持。4.抗CrylAc近等基因系小菜蛾的比较蛋白质组研究我们利用iTRAQ技术,对NIL-R和DBM1Ac-S两个种群的中肠BBMV进行蛋白质定量比较研究,共筛选出了128个差异表达蛋白质。其中发现了氨肽酶和ABC转运蛋白质两个已报道的Bt受体蛋白质,在抗性种群中的表达量显着低于敏感种群。这可能说明这两个蛋白质也是Cry1Ac在小菜蛾中的受体。我们还发现了一个葡糖基转移酶的显着升高。另外,我们还发现了细胞色素P450解毒酶和谷胱甘肽转移酶两个解毒酶在抗性种群中显着升高的现象。随后,我们利用MRM技术对找出的差异蛋白质及已报道的Bt受体进行质谱定量检测,比较以上蛋白质在两个种群的中肠样品的表达量差异情况。MRM技术检测的结果与iTRAQ结果基本一致。另外,我们还发现氨肽酶、ABC转运蛋白质、碱性磷酸酶、钙黏蛋白以及鞘糖脂等潜在受体蛋白质在抗性小菜蛾中都有显着的降低。这个结果说明在本研究的小菜蛾种群抗Cry1Ac过程中,这些潜在受体蛋白质可能都不同程度的发挥着作用。(本文来源于《华中农业大学》期刊2014-06-01）
姚青青[9]（2013）在《苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry51Aal和Cry6Aa2的晶体学研究》一文中研究指出苏云金芽胞杆菌(Bacillus thurigiensis,Bt)是环境中常见的革兰氏阳性菌,在生长过程中能够产生多种杀虫晶体蛋白。一些杀虫晶体蛋白基因已成功用于转基因作物,并在农业生产中发挥着显着的作用。其杀虫晶体蛋白分为Cry.Cyt和P arasporin叁类。Cry和Cyt具有杀昆虫活性,Parasporin对癌细胞有选择性毒性。Cry51Aa1和Cry6A a2分别具有杀半翅目昆虫和杀植物寄生线虫活性,为了更好的了解这两个蛋白的活性机理,我们研究了Cry51Aa1 和 Cry6Aa2蛋白质的叁级结构。通过生物信息学分析,Cry51Aa1是Cry家族的Mtx类。其二级结构中以β片层为主,通过叁级结构建模,我们得到了以2D42和2ZTB为模型的蛋白质结构。而Cry6Aa2与其他Cry家族的蛋白氨基酸序列没有相似性。Cry51Aa1在MB171无晶体突变株中表达。通过阴离子交换柱和分子筛色谱柱两步法纯化得到大量的Cry51Aa1。分子筛和超速离心实验表明Cry51Aa1在溶液中以二聚体形式存在。晶体生长是采用气相扩散悬滴法,晶体的筛选是利用各类晶体生长试剂盒。经过优化,我们得到了Cry51Aa1的菱形晶体,其最佳结晶条件为16%PEG2000,100 mmo 1/L柠檬酸pH 3.0,140 mmol/L硫酸铵和3mmol/L glycyl-glycyl-glycyl,蛋白质浓度为1-2 mg/mL,最适生长温度为16℃。在上述的条件中培养获得了高质量的金原子衍生物晶体。在上海光源BL17U光束线站收集Cry51Aa1晶体衍射的数据。仪器的参数：温度-730C,光源能量为12.6 keV,波长0.9792 A,CCD为MX225,然后利用mosflm软件包对所得的晶体数据进行数据处理,结果显示CryS1Aa1属于P412112空间群,晶胞参数为a=b=54.5,c=212.2,α=β=β=90°。Cry6Aa2在BMB171无晶体突变株中表达。但是其全长蛋白在溶液中不稳定,在经过胰蛋白酶处理之后,我们可以得到一个43 kDa的稳定的蛋白片段。所以在离子交换色谱柱之后用胰蛋白酶处理全长Cry6Aa2,然后再用分子筛色谱进行分离纯化。分子筛显示酶解的Cry6Aa2为单体。Cry6Aa2的酶解片段在晶体筛选过程中出现了四种晶形,针状、片状、梯形以及雪花状。在后期优化过程中,针形晶体只是变长,片状晶体不能重复生长,梯形晶体被验证为是盐晶,只有雪花状晶体在优化后形状有较大程度的变化形成棒状晶体,这种棒状晶体很有希望可以继续优化提高晶体的质量。(本文来源于《华中农业大学》期刊2013-06-01）
滕晓露[10]（2012）在《二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因克隆、表达分析及RNA干扰》一文中研究指出苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)是可产生Bt杀虫晶体蛋白的一种革兰氏阳性菌,具有毒力高、对人畜与天敌安全、不污染环境的优点,已经广泛地应用于害虫防治中。随着Bt杀虫晶体蛋白对农业害虫的选择压力增强,其抗性问题逐渐引起了人们的高度重视。Bt杀虫晶体蛋白的杀虫机制一般认为有两种可能的机制：是中肠穿孔,二是信号传导导致细胞凋亡。两种机制都与Bt毒素受体蛋白密切相关。害虫中肠组织中与Bt杀虫晶体蛋白有互作的基因包括钙粘蛋白(Cadherin, CAD)、氨肽酶(Aminoopeptidase N, APN)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)、糖脂转移酶(Glycosyltransferase, GT)等。其中,对碱性磷酸酶和糖脂转移酶的研究较少。本文以水稻重要害虫二化螟(Chilo suppressalis)为研究对象,克隆了二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因,扩增了部分基因的全长,并进行了RNA干扰分析。1、二化螟中定量PCR内参基因的筛选实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)能够快速地对多个样品进行基因表达分析,成为芯片和微点阵数据验证的常用手段。为了得到更精确的数据,通常需要一个和多个内参基因来对qRT-PCR数据进行归一化分析。本文检测了actinA1、GAPDH、 G3PDH、E2F、rp49等5个持家基因在二化螟不同龄期和不同组织中的稳定性,利用geNorm、NormFinder、stability index'assay和△Ct analysis选择其最佳内参。结果表明：在二化螟中最稳定的基因是actinA1;不同组织中,rp49和actinA1最适合同时作为内参；不同龄期发育中,G3PDH和E2F最适合同时作为内参。该结果为二化螟基因表达分析时内参基因的选择提供了参考。2、二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体相关基因全长克隆克隆得到二化螟中Bt杀虫晶体蛋白4类受体基因的全长序列,包括1个钙粘蛋白、3个氨肽酶、3个碱性磷酸酯酶和4个糖脂转移酶基因。此外,还获得了14个5’UTR序列和16个3’UTR序列。对已获得全长序列的基因做了进化关系分析。结果表明,CAD1与鳞翅目的家蚕、小菜蛾的钙粘蛋白在进化距离上相近,CAD2与双翅目的果蝇钙粘蛋白相近；其他一些基因均与鳞翅目部分昆虫的类似基因进化距离较近。3、二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因在不同龄期中肠组织中表达分析分析二化螟中4类Bt杀虫晶体蛋白受体基因的表达量变化,对于基因的功能研究具有重要意义。研究了Bt杀虫晶体蛋白的受体基因在二龄、叁龄、四龄、五龄、六龄幼虫,成虫等不同发育阶段中肠组织中的表达量变化。结果表明,成虫中肠中所有4类受体基因均低表达。两个钙粘蛋白和两个碱性磷酸酶在不同发育阶段的表达量变化趋势一致,由二龄幼虫到老熟幼虫期间的表达量持续升高,成虫期降至与二龄幼虫相似的表达量。叁个氨肽酶基因在幼虫期的表达量变化不大,到成虫期急剧下降至幼虫期的百分之一以下。叁个糖脂转移酶之间有一定差异,其中GT3在中肠组织中表达量基本一致,但是GT1和GT2成虫中表达量均低于其他龄期。4、钙粘蛋白在二化螟不同组织中的表达分析及其RNA干扰利用定量PCR技术分析了两个钙粘蛋白在中肠、头、脂肪体、表皮等组织中的表达量差异。CAD1在中肠中的表达量显着高于其他组织,是头部的2000倍；CAD2在不同组织中的表达量差异不显着。合成了两个钙粘蛋白的siRNA,通过喂食法进行RNA干扰。利用定量PCR技术检测了干扰不同时间后靶标基因mRNA的丰度变化。结果表明,5天后两个基因表达量降低40%左右,7天后基因表达水平回升。CAD1和CAD2基因被干扰后,二化螟在转Bt基因水稻上的存活率明显上升,表明CAD基因的表达水平降低可能导致Bt抗性的形成。实验成功地实现了二化螟钙粘蛋白基因的沉默,为利用RNAi技术分析二化螟基因功能以及Bt抗性研究提供了参考。(本文来源于《南京农业大学》期刊2012-06-01）
类杀虫晶体蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是应用最为成功的生物杀虫剂,但对其抗性机制认识的不足,严重制约着Bt杀虫蛋白的进一步开发与应用,并威胁着转Bt基因作物的使用寿命。十字花科重要害虫小菜蛾[Plutella xylostella(L.)]是最早被发现在田间对Bt产生抗性的害虫。前期研究发现,小菜蛾对Bt Cry1Ac的抗性由多受体基因变化所致,由其上游的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径调控。本研究以抗CrylAc近等基因系小菜蛾幼虫中肠为研究材料,开展全基因组甲基化、中肠转录组和蛋白质组联合测序,通过多层组学整合分析,建立小菜蛾中肠DNA甲基化控制基因表达的分子调控网络,研究评价DNA甲基化对小菜蛾抗Cry1Ac的贡献。实验结果表明,小菜蛾全基因组胞嘧啶甲基化率约为0.8%,且以CG形式为主,抗性品系的甲基化率低于Cry1Ac敏感品系的甲基化率。小菜蛾中mCG主要集中在基因区,且以低甲基化的形式为主。在甲基化的基因中,mCG的密度明显向CDS的5'端偏斜。我们在抗感品系间鉴定到了425个差异甲基化的基因,在抗性种群中有65.4%的差异甲基化基因是低甲基化基因,在这些低甲基化基因中我们鉴定到了与杀虫剂抗性相关的候选基因。对抗敏种群小菜蛾幼虫中肠转录组与iTRAQ定量蛋白组联合分析,发现了大量可能的Bt受体和与抗性相关的蛋白质差异表达,其中包括6个ABC转运蛋白、4个氨肽酶N等。其中发现多个与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)代谢途径相关的基因,在两个种群中存在表达差异,这些基因或蛋白的表达差异可能跟与MAPK调控受体引起抗性有关。我们分析了基因的甲基化与表达量之间的关系,发现基因表达量的高低与甲基化状态有关而与甲基化率高低无关,甲基化基因的表达量显着高于非甲基化基因的表达量。暗示小菜蛾基因区域的甲基化对基因的表达具有重要调控作用。研究结果为MAPK途径控制多受体基因变化的遗传调控网络的阐明提供数据支持,对Bt杀虫蛋白的开发与可持续应用具有重要的理论和实践意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
类杀虫晶体蛋白论文参考文献
[1].余宗兰,贺利业,孙宏伟,李平,郑爱萍.苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1D新基因的克隆与特性[J].中国生物防治学报.2019
[2].朱勋,李祥瑞,魏长平,阎维巍,李亚萍.抗Cry1Ac杀虫晶体蛋白近等基因系小菜蛾中肠多组学研究[C].植保科技创新与农业精准扶贫——中国植物保护学会2016年学术年会论文集.2016
[3].龚莉君,柳傲,刘大成,杨中侠.Bt杀虫晶体蛋白增效物质的研究进展[J].华中昆虫研究.2016
[4].刘肖萍,林毅.Cry1A型杀虫晶体蛋白活性区的空间结构比较分析[J].华侨大学学报(自然科学版).2016
[5].薛欢.苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白研究及应用概述[J].江苏林业科技.2016
[6].彭琦,周子珊,张杰.苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白研究进展[J].中国生物防治学报.2015
[7].徐承晨.苏云金芽胞杆菌Cry51Aa1杀虫晶体蛋白结构及功能研究[D].华中农业大学.2015
[8].朱勋.抗Cry1Ac杀虫晶体蛋白近等基因系小菜蛾中肠蛋白质基因组学研究[D].华中农业大学.2014
[9].姚青青.苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry51Aal和Cry6Aa2的晶体学研究[D].华中农业大学.2013
[10].滕晓露.二化螟Bt杀虫晶体蛋白的受体基因克隆、表达分析及RNA干扰[D].南京农业大学.2012