导读:本文包含了高分子量重组蛛丝蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:高分子量重组蛛丝蛋白,大肠杆菌,乳糖诱导,高密度发酵
高分子量重组蛛丝蛋白论文文献综述
郑剑[1]（2009）在《乳糖诱导大肠杆菌表达重组高分子量蛛丝蛋白高密度发酵》一文中研究指出天然蜘蛛丝由于良好力学性能和生物相容性,在生物医学领域有着广泛的应用前景。本实验室已经构建了高分子量重组蛛丝蛋白工程菌BL21(DE3)pLysS/pNSR32,表达重组蛛丝蛋白32聚体,分子量为102KD。但由于蜘蛛丝独特的编码序列,含有大量的丙氨酸和甘氨酸密码子,以及重组蛛丝蛋白32聚体分子量较高,其表达量比较低。IPTG不仅价格昂贵,而且还会给人体带来潜在危害,本文从大规模发酵培养成本和产品安全角度考虑,改用乳糖为诱导剂,在了解摇瓶培养生长特性和表达条件后,于10L发酵罐中优化了高密度培养和高表达的发酵控制工艺,提高了重组蛛丝蛋白的发酵产量,并且初步摸索了重组蛛丝蛋白的纯化条件,为本室下游组织工程应用研究提供了重组蛛丝蛋白原材料。本文首先研究了重组质粒pNSR32在宿主菌BL21(DE3)pLysS和BL21(DE3)中的表达情况,确定了合适的宿主菌BL21(DE3)。用乳糖替代IPTG作为诱导剂,发现乳糖对促进BL21(DE3)/pNSR32生长和提高重组蛛丝蛋白表达表达量的效果均优于IPTG。通过摇瓶实验还考察了BL21(DE3)/pNSR32发酵培养基,诱导强度,诱导时机,诱导时间,装液量,诱导后培养温度,诱导后培养pH值,乙酸钠对工程菌生长和重组蛛丝蛋白表达的影响,诱导对宿主蛋白表达的影响,重组质粒稳定性等条件。在10L发酵罐分批发酵中初步验证了摇瓶培养条件,并且在不同的溶氧水平下培养观察到大于30%的溶氧就能较好的促进菌体生长。高密度发酵采用pH-stat结合溶氧反馈及梯度增加的补料方法,优化了高密度发酵诱导时机,诱导前后的碳源及乳糖诱导方式,发酵最高密度OD_(600) nm最高达到130,干重达到55.83g/L(DCM),重组蛛丝蛋白表达量达到26%。在重组蛛丝蛋白初步纯化实验中,通过加热出去大部分杂蛋白后,用硫酸铵沉淀,能够得到电泳纯的重组蛛丝蛋白。此方法工艺简单,适合大规模纯化,但得率有待进一步提高。(本文来源于《福建师范大学》期刊2009-06-01）
郑剑,吴琳琳,李敏[2]（2008）在《乳糖诱导高分子量重组蛛丝蛋白发酵培养基优化》一文中研究指出在M9基础培养基的基础上,以乳糖为诱导剂,对基因重组蛛丝蛋白工程菌pNSR32/BL21(DE3)的发酵培养基进行了优化。利用单因子实验和正交试验优化出表达高分子量重组蛛丝蛋白的最优培养基配方,结果表明:优化的碳源为0.3%的甘油,氮源为3%的酵母膏、0.75%的蛋白胨和0.05%(NH4)2SO4及少量的无机盐。优化培养基有利于菌体的生长和目的蛋白的表达,表达重组蛛丝蛋白达总蛋白量的20%。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2008年12期）
阮超然,黄晶星,魏梅红,李敏[3]（2007）在《高分子量RGD-蛛丝蛋白重组体的构建、高密度发酵及纯化》一文中研究指出蜘蛛丝是自然界综合性能优良的天然蛋白质纤维之一,因其具有良好的生物相容性和可降解性在生物医学领域具有潜在的应用前景。在本室已经构建的RGD-蜘蛛拖丝蛋白基因16多聚体基础上,通过首尾相连、倍加等方法进一步多聚化,得到RGD-蜘蛛拖丝蛋白基因32和64多聚体,分别将这两种多聚体与原核高效表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,得到的32多聚体表达重组子命名为pNSR32,64多聚体表达重组子命名为pNSR64。通过酶切、琼脂糖电泳鉴定及对目的片段的测序均与理论值相符。将32和64多聚体基因序列注册GenBank,序列号分别为DQ469929和DQ837297。重组体pNSR32和pNSR64经IPTG诱导表达,SDS-PAGE图谱显示表达产物分子量分别为102kD和196.6kD,与天然蛛丝蛋白分子量接近并与理论值相吻合。高分子量的蛛丝蛋白在原核生物成功实现高效表达,在国内外尚未见报道。在此基础上对pNSR32工程菌进行高密度发酵,建立了简单高效的目的蛋白纯化工艺。(本文来源于《生物工程学报》期刊2007年05期）
阮超然[4]（2007）在《高分子量RGD-蛛丝蛋白重组体构建、高密度发酵及纯化》一文中研究指出蜘蛛丝既轻又坚韧，是自然界综合性能优良的天然蛋白质纤维之一，因其具有良好的生物相容性和可降解性在生物医学领域具有潜在的应用前景。精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(RGD)是许多粘附蛋白的高度保守氨基酸序列，生物材料表面结合RGD肽有助于细胞在材料上的粘附、迁移和增殖。本室先前运用基因工程的方法，将具有特定信号识别功能的RGD叁肽模体与蛛丝蛋白基因重组，构建了具有RGD叁肽编码子和蛛丝蛋白基因16多聚体的克隆重组子pDSR16，首次生物合成RGD叁肽和蛛丝蛋白16多聚体(pNSR16)。但在利用16多聚体重组蛛丝蛋白作原料制备生物材料的研究中，观察到因其与天然蛛丝蛋白在分子量上的差距较大，影响了材料性能的表征。因此，在本室已经构建的RGD-蜘蛛拖丝蛋白基因16多聚体基础上，通过首尾相连、倍加等方法进一步多聚化，得到RGD-蜘蛛拖丝蛋白基因32和164多聚体，分别将这两种多聚体与原核高效表达载体pET-30a(+)连接，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，得到的32多聚体表达重组子命名为pNSR32，64多聚体表达重组子命名为pNSR64。通过酶切、琼脂糖电泳鉴定及对目的片断的测序均与理论值相符。将32和64多聚体基因序列登陆GenBank，序列号分别为DQ469929和DQ837297。重组体pNSR32和pNSR64经IPTG诱导表达，SDS-PAGE图谱显示表达产物分子量分别为102KD和196.6KD，与天然蛛丝蛋白分子量接近并与理论值相吻合。高分子量的蛛丝蛋白在原核生物成功实现高效表达，在国内外尚未见报道。在此基础上，对pNSR32工程菌进行高密度发酵条件摸索并建立了简单高效的目的蛋白纯化工艺。(本文来源于《福建师范大学》期刊2007-04-01）
高分子量重组蛛丝蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
在M9基础培养基的基础上,以乳糖为诱导剂,对基因重组蛛丝蛋白工程菌pNSR32/BL21(DE3)的发酵培养基进行了优化。利用单因子实验和正交试验优化出表达高分子量重组蛛丝蛋白的最优培养基配方,结果表明:优化的碳源为0.3%的甘油,氮源为3%的酵母膏、0.75%的蛋白胨和0.05%(NH4)2SO4及少量的无机盐。优化培养基有利于菌体的生长和目的蛋白的表达,表达重组蛛丝蛋白达总蛋白量的20%。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
高分子量重组蛛丝蛋白论文参考文献
[1].郑剑.乳糖诱导大肠杆菌表达重组高分子量蛛丝蛋白高密度发酵[D].福建师范大学.2009
[2].郑剑,吴琳琳,李敏.乳糖诱导高分子量重组蛛丝蛋白发酵培养基优化[J].中国生物工程杂志.2008
[3].阮超然,黄晶星,魏梅红,李敏.高分子量RGD-蛛丝蛋白重组体的构建、高密度发酵及纯化[J].生物工程学报.2007
[4].阮超然.高分子量RGD-蛛丝蛋白重组体构建、高密度发酵及纯化[D].福建师范大学.2007
标签：高分子量重组蛛丝蛋白; 大肠杆菌; 乳糖诱导; 高密度发酵;