导读:本文包含了表达簇论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:microRNA,cDNA文库,成骨细胞,克隆
表达簇论文文献综述
刘唯[1]（2010）在《miR-X/miR-2861表达簇与转录因子Runx2调控环路在成骨细胞分化中的功能研究》一文中研究指出目的：探寻新的小鼠成骨细胞表达的微小核糖核酸(microRNA, miRNA),并研究其在小鼠不同组织和细胞中的表达模式。方法：提取小鼠成骨细胞小分子RNA,经Poly(A)加尾、连接5’端接头后逆转录为cDNA,进行PCR扩增,回收PCR产物后连接至pcDNA3.1 TOPO载体构建cDNA文库,进行菌落PCR,阳性克隆测序后选取19-26nt大小的RNA进行生物信息学分析确定新的miRNAs。通过Northern blot检测新的miRNA在小鼠成骨细胞、破骨细胞、骨组织、肝脏、心脏、肾脏、肺、脾、大脑、脂肪及骨骼肌的表达,并进一步检测其在BMP-2诱导的小鼠基质细胞ST2成骨分化过程中的表达模式。结果：(1)共克隆得到162个小分子RNA序列,68个为miRNA分子,明确2个为新克隆的miRNA,其中一个命名为miR-X,其在小鼠与人类之间具有保守性,位于小鼠第二染色体。(2) miR-X在小鼠成骨细胞、骨组织及肝脏中均有表达,其中成骨细胞中表达最高,其他组织及破骨细胞不表达。(3)在BMP-2诱导的ST2细胞成骨分化过程中,miR-X随时间延长其表达量不断增加。结论：通过构建小鼠成骨细胞小分子RNA的cDNA文库的方法,新克隆了一个在小鼠与人类存在保守性的新miRNA--miR-X。miR-X在小鼠成骨细胞、骨组织、肝脏中表达,其中成骨细胞中表达最高,并且在小鼠成骨细胞分化过程中的表达呈时间依赖特性。目的：研究miR-X在小鼠基质细胞ST2成骨分化中的作用并预测及实验验证miR-X的靶基因。方法：根据miR-X前体序列设计引物,经退火处理后与线性化的pSilencer 4.1CMV puro载体连接,构建miR-X表达载体pre-miR-X。将pre-miR-X或2'-O-methyl修饰的反义寡核苷酸anti-miR-X分别转染BMP-2诱导分化的ST2细胞(300ng/ml),造成miR-X在成骨分化过程中的过表达或功能抑制。转染48小时后,采用分光光度计检测对硝基苯酚释放来反映碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,放射免疫测定法测定骨钙素(osteocalcin, OC)分泌,采用Western blot和实时定量PCR检测转录因子runt相关转录因子2 (runt related transcription factor 2, Runx2)蛋白和mRNA表达的变化。采用多种靶基因预测软件预测miR-X的靶基因。PCR扩增含靶位点的靶基因编码区(coding sequence, CDS),产物连接pGL3载体,构建野生型Hoxa2CDS荧光素酶报告基因载体,采用定点突变技术构建突变型Hoxa2CDS荧光素酶报告基因载体,分别与miR-X表达载体共转染BMP-2诱导的ST2细胞,通过荧光素酶活性变化证实Hoxa2是否为miR-X靶基因。将miR-X表达载体单独转染ST2细胞,采用Western blot和实时定量PCR检测Hoxa2蛋白和mRNA水平的变化,验证miR-X对Hoxa2的调控作用。结果：(1)miR-X过表达促进BMP-2诱导的ST2细胞成骨分化过程中的ALP活性增高和OC分泌,并增加Runx2 mRNA和蛋白的表达。(2)抑制miR-X的作用降低了ST2成骨分化过程中的ALP活性及OC分泌的上升程度,并部分抑制Runx2 mRNA和蛋白的表达。(3)Rnas22预测Hoxa2为miR-X的靶基因。(4)与对照组相比,共转染野生型Hoxa2 CDS荧光素酶报告基因载体及miR-X表达载体的ST2细胞荧光素酶活性显着下降,而共转染突变型Hoxa2 CDS荧光素酶报告基因载体及miR-X表达载体的ST2细胞荧光素酶活性无明显变化。(5)转染miR-X表达载体的ST2细胞Hoxa2蛋白水平下降,但Hoxa2 mRNA表达无明显变化。结论：miR-X在转录后水平抑制靶基因Hoxa2,增加转录因子Runx2的表达,从而促进BMP-2诱导的ST2细胞的成骨分化。目的：探索两个新克隆的miRNA, miR-X和miR-2861之间的关系及其与转录因子Runx2的相互作用。方法：通过BLAST等生物信息学方法寻找miR-X与miR-2861在基因组上的定位,分析两者之间的位置关系,采用Mfold软件预测初级转录本(primary microRNA, pri-miRNA)的二级结构。通过国外公布的人类及小鼠转录起始位点(TSS)预测文库,根据第四位赖氨酸叁甲基化的H3组蛋白(H3K4me3)在TSS位点周围的富集与启动子CpG岛为主要标识,预测miR-X/miR-2861表达簇的TSS。运用TF-seach转录因子结合位点预测软件分析miR-X/miR-2861表达簇的TSS上游2kb内的DNA序列,预测可能的Runx2结合位点。通过染色体免疫沉淀法(ChIP),采用Runx2抗体(anti-Runx2)验证Runx2与所预测结合位点的相互关系。通过PCR扩增Ⅱ型Runx2 cDNA并亚克隆至pSG5载体,构建Runx2表达载体pSG5-Runx2,转染ST2细胞,并将体外合成的特异性阻断Runx2蛋白表达的小干扰RNAsiRNA-Runx2,转染BMP-2诱导的ST2细胞,分别采用Northern blot检测miR-X和miR-2861的表达,研究Runx2对miR-X与miR-2861表达的调控作用。结果：(1) miR-X与miR-2861在小鼠第2染色体上的基因定位仅相差69bp,两者以miR-X/miR-2861表达簇的形式存在。(2)确定miR-X/miR-2861表达簇的转录起始位点位于小鼠第2染色体10,104,622。(3)预测Runx2在]miR-X/miR-2861表达簇启动子的转录结合位点在其TSS上游2kb。(4) ChIP证实Runx2结合于所预测的转录因子结合位点。(5)与对照组细胞相比,转染Runx2表达载体的ST2细胞中,miR-X与miR-2861的表达增强。而转染siRNA-Runx2的BMP-2诱导ST2细胞miR-X与miR-2861的表达降低。结论：miR-X与miR-2861在基因组中成簇存在,共同转录。转录因子Runx2通过与miR-X/miR-2861表达簇的启动子结合,促进表达簇的转录,并与miR-X和miR-2861形成正反馈调控环路,协同调控成骨分化。(本文来源于《中南大学》期刊2010-05-01）
李疆,张清炯,肖学珊,李家璋,张丰生[2]（2003）在《排除视网膜特异性表达簇样蛋白1基因变异与中国高度近视人群的相关性》一文中研究指出目的 筛查视网膜特异性表达簇样蛋白 1( clusterin- like protein 1,CL UL 1)基因编码区域变异与中国高度近视人群的相关性。方法 采用 PCR- SSCP检测 2 0 4例中国人高度近视先证者 CL U L1基因所有编码外显子及两侧序列有无突变 ;对有突变的外显子区域进行克隆测序。结果 仅发现 1例患者在 CL U L1基因外显子 2的密码子 10第 3个核苷酸 GT G→ GT T杂合同义突变 ,没有氨基酸的改变 ( Val10 Val)。CL UL1基因其余外显子无突变和多态现象。结论 初步排除位于 18p11.3D18S6 3～ D18S5 2 0 .8c M范围内视网膜特异表达的 CL U L 1基因与中国高度近视人群的相关性 ;CL UL 1基因在中国人群中突变罕见(本文来源于《眼科新进展》期刊2003年03期）
表达簇论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的 筛查视网膜特异性表达簇样蛋白 1( clusterin- like protein 1,CL UL 1)基因编码区域变异与中国高度近视人群的相关性。方法 采用 PCR- SSCP检测 2 0 4例中国人高度近视先证者 CL U L1基因所有编码外显子及两侧序列有无突变 ;对有突变的外显子区域进行克隆测序。结果 仅发现 1例患者在 CL U L1基因外显子 2的密码子 10第 3个核苷酸 GT G→ GT T杂合同义突变 ,没有氨基酸的改变 ( Val10 Val)。CL UL1基因其余外显子无突变和多态现象。结论 初步排除位于 18p11.3D18S6 3～ D18S5 2 0 .8c M范围内视网膜特异表达的 CL U L 1基因与中国高度近视人群的相关性 ;CL UL 1基因在中国人群中突变罕见
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达簇论文参考文献
[1].刘唯.miR-X/miR-2861表达簇与转录因子Runx2调控环路在成骨细胞分化中的功能研究[D].中南大学.2010
[2].李疆,张清炯,肖学珊,李家璋,张丰生.排除视网膜特异性表达簇样蛋白1基因变异与中国高度近视人群的相关性[J].眼科新进展.2003