导读:本文包含了载体改建论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:植物双元表达载体,CaMV,35S,rd29A,多克隆位点
载体改建论文文献综述
李敬涛,孙新华,余刚,贾承国,杜茜[1]（2014）在《几种基于pCAMBIA系列多用途新型植物表达载体的改建及优化》一文中研究指出以pCHF3,pCAMBIA1301,pCAMBIA3300和pCAMBIA3301载体为骨架,构建CaMV 35S和rd29A启动子驱动多克隆位点(MCS:SacⅠ,KpnⅠ,SmaⅠ,BamHⅠ,XbaⅠ,SalⅠ,PstⅠ)的通用型重组植物双元表达载体,得到两种启动子驱动下MCS与eGFP融合的应用型亚细胞定位双元表达载体,并建立了对大量候选基因进行高通量筛选和功能验证的通用型表达载体系统.(本文来源于《吉林大学学报(理学版)》期刊2014年02期）
綦惠,孙磊,陈磊,江建,杰永生[2]（2014）在《应用小牛皮制备软骨修复载体的脱毛-脱细胞-结构改建工艺探讨》一文中研究指出[目的]软骨修复载体的制备是软骨组织工程的重要课题。本实验以小牛皮为原料,通过脱毛-脱细胞-结构改建的早期工艺探讨,掌握最佳制备流程,为后续工艺做准备。[方法]将小牛皮分别浸入0.5%dispase溶液和0.25%胰蛋白酶溶液,4℃脱毛72 h,比较脱毛效果。乙酸溶胀,刮除/切除表皮和皮下组织,获得真皮组织。真皮组织分别浸入0.5%SDS、1%SDS与0.5%TritonX-100进行脱细胞,充分冲洗之后冻干,HE染色比较脱细胞效果,MTT法进行细胞毒性检测。应用0.25%胰蛋白酶浸泡、0.25%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声振荡、0.5%胰蛋白酶浸泡、0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声振荡四种方法进行结构改建,扫描电镜观察、MASSON染色、孔隙率检测比较结构改建效果。[结果]0.5%dispase溶液和0.25%胰蛋白酶溶液均能够良好的去除小牛皮的毛发。0.5%SDS、1%SDS脱细胞效果基本一致,TritonX-100似有将胶原纤维破坏的征兆,由于低浓度SDS更易于冲洗,后续实验采用0.5%SDS脱细胞。细胞毒性检测为0级。0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声是最佳的结构改建方法,改建后的载体胶原纤维光滑、立体感明显增强,孔隙率显着高于未改建的载体(P<0.05)。[结论]0.25%胰蛋白酶溶液脱毛-0.5%SDS脱细胞-0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声进行结构改建,是应用小牛皮制备软骨修复载体的最佳工艺。(本文来源于《中国矫形外科杂志》期刊2014年02期）
陈俊杰,胡建军,陈成水,张洁,王梦怡[3]（2012）在《改建型STAT1-CC基因慢病毒载体的构建及其在肺癌A549细胞中的表达》一文中研究指出目的 :构建携带STAT1基因和突变型STAT1-CC基因的慢病毒表达载体,转染肺癌A549细胞并检测STAT1和STAT1-CC基因在肺癌A549细胞内的表达。方法:采用PCR技术从质粒模板中扩增得到目的基因STAT1和STAT1-CC,将其接入含有CMV启动子和绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒载体中,构建慢病毒载体表达载体Lenti-STAT1和Lenti-STAT1-CC,双酶切和测序鉴定。分别将重组子Lenti-STAT1、Lenti-STAT1-CC和包装质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,感染非小细胞肺癌细胞株A549。荧光显微镜观察A549细胞EGFP表达,Western Blotting验证STAT1在A549细胞株中的表达。结果:酶切及测序结果显示成功构建重组慢病毒表达载体Lenti-STAT1和Lenti-STAT1-CC,将慢病毒颗粒感染A549细胞48 h后,观察到宿主细胞内EGFP表达,Western Blotting证实STAT1蛋白在A549细胞中过表达。结论:本实验成功构建了携带STAT1基因和STAT1-CC基因的慢病毒表达载体,并在A549细胞中过表达STAT1基因。(本文来源于《温州医学院学报》期刊2012年03期）
陈娴,谢渊,赵艳,周建奖[4]（2011）在《shRNA表达载体的改建及鉴定》一文中研究指出目的通过改建pSilencer3.1-H1载体快速有效筛选重组shRNA表达载体,并可使线性化载体环化,长期保存。方法制备含有单一限制性内切酶NotⅠ识别序列的双链DNA插入片段,与BamHⅠ和HindⅢ酶切线性化的shRNA表达载体pSilencer3.1-H1连接,构建载体pSilencer3.1-H1/NotⅠ,再用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pSilenc-er3.1-H1/NotⅠ,将含靶向目的基因JAK2siRNA表达框的DNA模板与其连接,构建pSilencer3.1-H1/JAK2的shRNA表达载体,提取质粒DNA,用NotⅠ进行单酶切,快速选择阳性克隆,选取不能被NotⅠ切开的质粒进行测序鉴定。随后将pSilencer3.1-H1/JAK2转染胃癌细胞系,用Western blot检测JAK2蛋白的表达。结果通过测序证实pSilencer3.1-H1/NotⅠ和含JAK2siRNA表达框的表达载体成功构建,将其转染胃癌细胞系AGS后,抑制了JAK2蛋白的表达。结论通过对pSilencer3.1-H1表达载体的改建可以快速有效地筛选shRNA表达载体。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2011年01期）
江健,孙磊,冯华,陈磊,孟淑琴[5]（2009）在《改建脱细胞真皮基质作为软骨细胞移植载体修复兔软骨缺损(英文)》一文中研究指出背景:脱细胞真皮(Acellular Dermal Matrix,ADM)具有良好的柔韧性、易于修剪,制成微粉状皮内或皮下注射后,可见到成纤维细胞的移入及胶原的沉积,目前己被广泛应用于整形修复临床实践。目的:验证脱细胞真皮经改建后作为软骨细胞移植载体的可行性。设计、时间及地点:对比观察,于2003-08/2007-02在北京大学医学部和北京积水潭医院完成。材料:新生小牛的真皮层由北京元亨圣马生物研究所提供;体质量250g的SD健康成年大白鼠24只,雌雄不限。3月龄的新西兰大白兔36只。方法:①取新生小牛背部真皮组织,进行脱细胞处理,分别用戊二醛和水溶性交联剂进行交联;再用生长因子对其进行纤维表面修饰。②取SD大白鼠,于大鼠脊柱两侧各设计3个长方形皮瓣,分别植入两组交联后的脱细胞真皮基质。术后2,6,12周取出植入物。③取新西兰大白兔,分为实验组和对照组,从其左侧关节面取原代软骨,分离软骨细胞并接种于复合后的ADM上进行培养。将实验组兔右侧后肢造成软骨缺损,植入含有自体软骨细胞的ADM,再将生物胶滴加于载体表面;对照组兔右侧后肢造成软骨缺损后分层缝合伤口。分别于第4,12,24周取材,对照组每次取2只,实验组每次取5只。主要观察指标:①交联效果的比较。②兔软骨缺损修复结果。结果:①经戊二醛交联后的ADM植入大鼠皮下后有强烈的炎症反应,并有组织出血坏死;而经水溶性交联剂交联的ADM的组织相容性较好。②在植入接种有自体软骨细胞的ADM24周后大白兔股关节的软骨缺损修复完好,附和的细胞能够存活且有增殖,ADM本身基本降解。结论:经脱细胞及纤维改建和交联及生长因子修饰的ADM孔隙均匀,组织相容性好,适于细胞黏附及长期生长。ADM胶原支架在兔体内可基本降解,未见排异反应,移植24周后见骨缺损修复。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2009年29期）
江健,孙磊,冯华,陈磊,陶剑锋[6]（2008）在《脱细胞真皮基质的改建及其作为软骨细胞移植载体在兔软骨缺损修复中的应用》一文中研究指出目的:探讨脱细胞真皮(acellular dermal matrix,ADM)经改建后作为软骨细胞移植载体的可行性。方法:取新生小牛背部真皮组织,分别用自制脱细胞剂和表面活性剂对其进行脱细胞处理后,观察得出自制脱细胞剂脱细胞的效果良好,但脱细胞后的胶原纤维结构需要改建;将自制脱细胞剂脱细胞后的真皮组织分别用按一定浓度配比的消化液和胃蛋白酶消化,发现经配比消化液改建后的胶原纤维表面光滑、孔隙均匀,符合软骨细胞移植载体的要求;比较戊二醛和水溶性交联剂对改建后脱细胞真皮基质的交联效果,可见水溶性交联剂交联后的ADM载体植入大鼠皮下后,其生物相容性良好;用生长因子对改建和交联后的ADM进行纤维表面修饰,然后接种乳兔软骨细胞,观察细胞粘附及生长情况;最后将接种有兔自体软骨细胞的ADM植入兔胫骨软骨缺损部位,术后定期取材观察修复效果。结果:(1)经戊二醛交联后的ADM植入大鼠皮下后有强烈的炎症反应,并有组织出血坏死;而经水溶性交联剂交联的ADM的组织相容性较好。(2)在植入接种有自体软骨细胞的ADM24周后,大白兔胫骨的软骨缺损修复完好,附和的细胞能够存活且增殖,ADM本身基本降解。结论:经脱细胞、纤维改建、交联及生长因子修饰的ADM孔隙均匀,组织相容性好,适于细胞粘附及长期生长。ADM胶原支架在兔体内可基本降解,未见排异反应,移植24周后骨缺损修复。(本文来源于《中国运动医学杂志》期刊2008年04期）
王玉飞,陈泽良,乔凤,汪舟佳,杜昕颖[7]（2007）在《布鲁氏菌自杀载体的改建及其在突变株构建中的应用》一文中研究指出目的:改建布鲁氏菌自杀载体.方法:用NdeⅠ将pKOBEG-SacB质粒中的反向筛选基因SacB切下来,与同样酶切处理的pUC19质粒连接,得到pUC19-SacB,经测序和蔗糖筛选实验证实.结果:成功将SacB从pKOBEG-SacB中切下来并插入到pUC19质粒中,构建得到了pUC19- SacB.测序和蔗糖筛选实验证实.插入的sacB基因具有较好的反筛功能.我们利用该质粒,成功的构建了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统的突变株,改建的载体能高效的应用于布鲁氏菌染色体的精确修饰.结论:构建了一个新的自杀质粒pUC19-SacB,该质粒能用于布鲁氏菌无痕缺失突变株的构建.(本文来源于《世界华人消化杂志》期刊2007年27期）
单志新,林秋雄,符永恒,邓春玉,余细勇[8]（2007）在《一种方便酶切鉴定的shRNA表达载体改建方法》一文中研究指出目的建立一种用单限制性内切酶酶切来快速筛选重组小发夹RNA(shRNA)表达载体的方法。方法制备包含单一限制性内切酶ClaⅠ识别序列的双链DNA插入片段(ClaⅠ位点两侧碱基序列不互补),与BamHⅠ和HindⅢ线性化的shRNA表达载体pSilencer-4.1(不含ClaⅠ识别序列)构建载体pSilencer-4.1-ClaⅠ。用BamHⅠ和HindⅢ酶切pSilencer-4.1-ClaⅠ,将酶切产物与表达绿色荧光蛋白(GFP)shRNA的DNA模板(不含ClaⅠ识别序列)做连接反应,构建GFPshRNA表达质粒。提取阳性克隆质粒DNA,行ClaⅠ单酶切鉴定,对未被ClaⅠ线性化的质粒行DNA测序鉴定。结果DNA测序表明正确构建了shRNA表达载体pSilencer-4.1-ClaⅠ,以pSilencer-4.1-ClaⅠ为载体构建的GFPshRNA候选重组子中,不能被ClaⅠ线性化的均为GFPshRNA表达质粒。结论构建了可用于制备shRNA表达质粒的通用载体pSilencer-4.1-ClaⅠ,所引入的单一的ClaⅠ识别位点可以用来快速地筛选重组shRNA表达质粒。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2007年09期）
高荣凯,张兆山,李淑琴[9]（1999）在《大肠杆菌CS3菌毛作为表面表达载体的改建》一文中研究指出细菌表面表达技术是微生物表面表达技术的一个重要分支，其策略是将外源蛋白或多肽与细菌表面蛋白融合或嵌合并活性表达于细菌表面，开发此项技术的初衷是构建基因工程疫苗，此外该技术在抗体库和肽库的表面呈现、开发新型微生物催化剂以及生物吸附剂等方面都显示出广泛的应用(本文来源于《云南大学学报(自然科学版)》期刊1999年S3期）
石长信,周伟,温乐英,洪涛[10]（1999）在《5型腺病毒载体的改建》一文中研究指出腺病毒载体是一个良好的真核表达载体，已有多种外源基因在５型腺病毒载体得到表达。病毒学研究所形态室八十年代中期从国外引进了Ｅ３区缺失的５型腺病毒载体，并应用该载体表达了Ｂ组轮状病毒第５基因和乙型肝炎表面抗原基因，在使用过程中发现该载体有以下缺点，１．载...(本文来源于《中华实验和临床病毒学杂志》期刊1999年01期）
载体改建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
[目的]软骨修复载体的制备是软骨组织工程的重要课题。本实验以小牛皮为原料,通过脱毛-脱细胞-结构改建的早期工艺探讨,掌握最佳制备流程,为后续工艺做准备。[方法]将小牛皮分别浸入0.5%dispase溶液和0.25%胰蛋白酶溶液,4℃脱毛72 h,比较脱毛效果。乙酸溶胀,刮除/切除表皮和皮下组织,获得真皮组织。真皮组织分别浸入0.5%SDS、1%SDS与0.5%TritonX-100进行脱细胞,充分冲洗之后冻干,HE染色比较脱细胞效果,MTT法进行细胞毒性检测。应用0.25%胰蛋白酶浸泡、0.25%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声振荡、0.5%胰蛋白酶浸泡、0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声振荡四种方法进行结构改建,扫描电镜观察、MASSON染色、孔隙率检测比较结构改建效果。[结果]0.5%dispase溶液和0.25%胰蛋白酶溶液均能够良好的去除小牛皮的毛发。0.5%SDS、1%SDS脱细胞效果基本一致,TritonX-100似有将胶原纤维破坏的征兆,由于低浓度SDS更易于冲洗,后续实验采用0.5%SDS脱细胞。细胞毒性检测为0级。0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声是最佳的结构改建方法,改建后的载体胶原纤维光滑、立体感明显增强,孔隙率显着高于未改建的载体(P<0.05)。[结论]0.25%胰蛋白酶溶液脱毛-0.5%SDS脱细胞-0.5%胰蛋白酶浸泡联合220 V-250 W-40%功率超声进行结构改建,是应用小牛皮制备软骨修复载体的最佳工艺。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
载体改建论文参考文献
[1].李敬涛,孙新华,余刚,贾承国,杜茜.几种基于pCAMBIA系列多用途新型植物表达载体的改建及优化[J].吉林大学学报(理学版).2014
[2].綦惠,孙磊,陈磊,江建,杰永生.应用小牛皮制备软骨修复载体的脱毛-脱细胞-结构改建工艺探讨[J].中国矫形外科杂志.2014
[3].陈俊杰,胡建军,陈成水,张洁,王梦怡.改建型STAT1-CC基因慢病毒载体的构建及其在肺癌A549细胞中的表达[J].温州医学院学报.2012
[4].陈娴,谢渊,赵艳,周建奖.shRNA表达载体的改建及鉴定[J].基础医学与临床.2011
[5].江健,孙磊,冯华,陈磊,孟淑琴.改建脱细胞真皮基质作为软骨细胞移植载体修复兔软骨缺损(英文)[J].中国组织工程研究与临床康复.2009
[6].江健,孙磊,冯华,陈磊,陶剑锋.脱细胞真皮基质的改建及其作为软骨细胞移植载体在兔软骨缺损修复中的应用[J].中国运动医学杂志.2008
[7].王玉飞,陈泽良,乔凤,汪舟佳,杜昕颖.布鲁氏菌自杀载体的改建及其在突变株构建中的应用[J].世界华人消化杂志.2007
[8].单志新,林秋雄,符永恒,邓春玉,余细勇.一种方便酶切鉴定的shRNA表达载体改建方法[J].南方医科大学学报.2007
[9].高荣凯,张兆山,李淑琴.大肠杆菌CS3菌毛作为表面表达载体的改建[J].云南大学学报(自然科学版).1999
[10].石长信,周伟,温乐英,洪涛.5型腺病毒载体的改建[J].中华实验和临床病毒学杂志.1999