导读:本文包含了稳定细胞系论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:DAB2IP,HT29细胞,侵袭及迁移,上皮间质转化
稳定细胞系论文文献综述
来森艳,胡发涌,吴维,李国东,李小兰[1]（2019）在《DAB2IP稳定细胞系的构建及其对结直肠癌HT29细胞侵袭迁移能力的影响》一文中研究指出目的构建DAB2IP高表达的结直肠癌HT29稳定细胞系,检测其对HT29细胞侵袭及迁移能力的影响。方法将携带DAB2IP基因序列的pcDNA3.1质粒转染HT29细胞,24 h后加入适量浓度的G418筛选(10μg/mL),两周后,通过实时定量PCR(qPCR)和Western blot方法检测DAB2IP mRNA水平和蛋白水平,验证DAB2IP的高表达;进一步,通过Transwell及划痕实验检测DAB2IP对HT29细胞侵袭及迁移能力的影响;最后,通过Western blot方法检测其对E-cadherin和vimentin蛋白的表达,初步探讨DAB2IP影响HT29细胞侵袭迁移能力的机制。结果经G418筛选后,DAB2IP的mRNA和蛋白水平均较对照组明显升高;高表达DAB2IP能够明显抑制HT29细胞的侵袭及迁移能力,差异具有统计学意义(P<0.001);高表达DAB2IP能够促进HT29细胞E-cadherin蛋白的表达,抑制vimentin蛋白的表达。结论成功筛选出DAB2IP高表达的HT29稳定细胞系,高表达DAB2IP能够通过抑制细胞上皮间质转化过程从而抑制HT29细胞侵袭及迁移能力。(本文来源于《实用肿瘤学杂志》期刊2019年05期）
罗陈烁,赵嫚,雷婷,张曼[2]（2019）在《核磷蛋白1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系的建立与纯化》一文中研究指出目的旨在建立核磷蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。方法采用慢病毒感染的方式,对耐顺铂膀胱癌细胞系T24/DDP的NPM1基因进行敲除,并采用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)和Western blotting法在基因水平和蛋白水平对NPM1的敲除效果进行验证,并通过荧光显微镜验证荧光效率。采用有限稀释法对感染后的细胞进行筛选纯化,通过单克隆增殖的方法对纯化后的细胞增殖培养,建立具有NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。结果通过基因和蛋白水平比较筛选出能够有效敲除NPM1的基因片段,并通过单克隆筛选获得了NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。筛选后细胞系荧光效率近100%,且对NPM1有明显敲除效率。结论NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系T24/DDP具有稳定的NPM1基因敲除效果,可以作为研究膀胱癌细胞耐药的良好实验模型。(本文来源于《标记免疫分析与临床》期刊2019年09期）
骆茹梦,刘媛,朱记平,李毅[3]（2019）在《应用CRISPR/Cas9构建稳定表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞系》一文中研究指出为了构建犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)结构蛋白VP2稳定表达的HEK293T细胞系,以2017年新分离的CPV-WH株为材料,扩增其VP2基因,并进行进化树分析。根据安全插入位点AAVS1位点序列设计sgRNA,并构建Cas9及sgRNA的表达载体PX335-U6-sgRNA-Cas9,同时构建含有VP2的特异性同源序列的片段HM-puro-eGFP-VP2-HA,将两者共转染HEK293T细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定表达VP2的HEK293T细胞株,并通过测序确定VP2正确插入。进化树分析显示CPV-WH的VP2存在S557N、T570K 2个氨基酸突变,该氨基酸位点可能与病毒免疫逃逸有关。通过荧光观察和免疫印迹确定了稳定表达细胞系中VP2的表达。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞,为后期制备CPV样颗粒提供细胞模型。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年08期）
代娟娟,杨丽娟,杜静,苗双,席思川[4]（2019）在《人LncRNA MIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响》一文中研究指出目的:检测过表达人MIR31HG基因对PC9细胞增殖和迁移的影响,阐明促癌基因MIR31HG的作用机制。方法:通过RT-PCR法扩增长链非编码RNA (LncRNA) MIR31HG全长序列,分子克隆至pcDNA3.1(―)真核表达载体,将pcDNA3.1-MIR31HG过表达质粒和对照质粒pcDNA3.1分别转染人肺癌PC9细胞。采用酶切鉴定法检测MIR31HG过表达载体的构建情况。通过G418药物筛选建立稳定过表达MIR31HG的PC9细胞系(PC9-pcDNA3.1-MIR31HG,稳定转染组)和对照细胞系(PC9-pcDNA3.1,空载体组)。采用RT-PCR法检测稳定转染细胞系中MIR31HG基因表达水平,采用CCK-8法和划痕愈合实验检测PC9细胞增殖活性和迁移能力。结果:琼脂糖凝胶电泳,成功扩增得到了MIR31HG的特异基因片段;MIR31HG真核表达载体经双酶切后分别产生目的基因和载体2个片段。RT-PCR法检测,稳定转染组细胞中MIR31HG mRNA表达水平明显高于空载体组(P<0.05)。CCK-8检测,在培养24、36和48h时,稳定转染组细胞增殖活性明显高于空载体组(P<0.01)。划痕愈合实验,在培养48h时,稳定转染组细胞划痕愈合率明显高于空载体组(P<0.05)。结论:成功构建了人LncRNA MIR31HG基因的真核过表达载体和过表达MIR31HG的稳定转染PC9细胞系,且MIR31HG过表达能够促进肺癌PC9细胞增殖和迁移。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
穆继宏,张浩,杨玲,余雷,吴宣树[5]（2019）在《GDF5基因真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立》一文中研究指出目的构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,建立稳定转染的HEK293细胞系并检测其表达情况。方法以Genbank中人GDF5序列为模板,通过PCR扩增GDF5序列,插入pEGFP-N1空载体,构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,进行双酶切图谱分析和DNA测序鉴定。将pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞,然后通过荧光显微镜、Real-time PCR和Western blot技术检测GDF5的表达情况。结果双酶切鉴定结果显示,重组质粒pEGFP-N1-GDF5经NHEL和HindⅢ双酶切后得到同样的2个条带,目的条带的长度与GDF5cDNA长度相符。重组质粒pEGFPN1-GDF5插入片段的DNA序列与GDF5基因序列一致。pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞后48 h荧光显微镜下可见多数细胞发出绿色荧光。Real-time PCR检测与Western blot检测GDF5基因在HEK293细胞中的mRNA与蛋白水平存在较高表达。结论 pEGFP-N1-GDF5真核表达载体构建成功,为进一步研究GDF5基因功能奠定了基础。(本文来源于《中国骨与关节损伤杂志》期刊2019年07期）
朱记平,刘媛,骆茹梦,冯小婷,李毅[6]（2019）在《可调控表达人博卡病毒1型非结构蛋白NS1稳定细胞系的建立及其反式转录激活作用初探》一文中研究指出人博卡病毒1型(Human bocavirus 1,HBoV1)非结构蛋白NS1是多功能蛋白,对病毒复制有重要作用,同时可诱导宿主细胞凋亡。在研究NS1蛋白功能时,降低NS1蛋白对宿主细胞的毒性作用是急需解决的问题。基于此,文中建立了可调控表达HBoV1非结构蛋白NS1的稳定细胞系。构建NS1重组慢病毒质粒(含可调控启动子),应用转染试剂将NS1重组慢病毒质粒转染至HEK293T细胞。通过嘌呤霉素筛选抗性细胞、多西环素诱导NS1表达,建立可稳定表达NS1-100、NS1-70蛋白的HEK 293T细胞系,利用荧光标记蛋白和Western blotting检测,确定NS1蛋白的表达。并在稳定表达NS1细胞系中转染HBoV1启动子-荧光素酶基因的质粒,分析NS1的反式转录激活活性。结果表明NS1蛋白可在建立的细胞系中稳定表达,且稳定表达NS1蛋白对HBoV1启动子有较强的激活活性,为进一步研究非结构蛋白NS1的功能及人博卡病毒致病机理奠定了良好的基础。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年06期）
朱先玉,王历,杨茂,吴婷,何涛[7]（2019）在《可诱导表达hFGFR1α稳定细胞系的建立与表达优化》一文中研究指出目的:构建hFGFR1α(human fibroblast growth factor receptor 1 alpha, hFGFRα)稳定细胞系,优化获得最适诱导表达条件,实现可诱导的、高效的稳定表达。方法:将hFGFR1α基因编码区全长克隆入pcDNA5/FRT/TO/2×Flag表达载体,连同pOG44重组酶质粒共转染人宿主细胞Flp-InTM-T-RexTM-293细胞系(HEK293H),潮霉素B筛选获得阳性克隆细胞系HEK293H/hFGFR1ɑ。用不同浓度强力霉素(doxycline, Dox)或者不同作用时间对HEK293H/hFGFR1ɑ细胞系进行诱导表达,Western Blot鉴定hFGFR1ɑ蛋白的表达情况。结果:构建了pcDNA5-FRT/TO/2×Flag/hFGFR1ɑ重组表达载体,获得了可被Dox诱导表达的HEK293H/hFGFR1ɑ稳定细胞系;0.001μg/mL Dox即可诱导hFGFR1ɑ蛋白表达,0.01μg/mL Dox即可诱导表达量达峰值;Dox对该细胞系作用2 h即诱导hFGFR1ɑ蛋白表达,对其作用24 h后该细胞系的表达明显增强。结论:成功构建了可诱导的、高效的稳定表达细胞系HEK293H/hFGFR1ɑ;Dox诱导该细胞系表达具有剂量差异性和时间依赖性。(本文来源于《西南医科大学学报》期刊2019年03期）
陈醒[8]（2019）在《慢病毒介导的人p53基因过表达及稳定感染细胞系的建立》一文中研究指出p53基因作为肿瘤抑制的关键基因,主要功能是修复与细胞周期G、S期有关的DNA损伤,并且在DNA损伤严重时诱导受损细胞的凋亡。因此,p53基因在维持基因组的稳定与预防癌症发生方面具有重要的作用。在等摩尔比例下,具有正确DNA结合结构域的野生型p53蛋白比突变型p53蛋白活性更强,野生型p53蛋白不仅可以抑制突变型p53蛋白的获得性功能,而且可以诱导由突变型p53蛋白引起的肿瘤细胞的凋亡。由于在所有恶性肿瘤中,该基因的突变率在50%以上。因此,p53基因及其表达产物可以起到预防肿瘤细胞发生和发展的重要作用。本研究设计并构建了两种慢病毒表达载体pWPI-p53WT-Neo和pWPI-PTEN-Neo,并将上述两种慢病毒载体和包装质粒(packaging plasmids)组成的包装系统共转染293T细胞,收集慢病毒颗粒并测定pWPI-p53慢病毒和pWPI-PTEN慢病毒的滴度。按实验设计流程将两种病毒感染靶细胞CF-1,利用G418筛选出稳定细胞系后收集细胞内蛋白质样品。然后,通过Western Blot实验对收集到的CF-1-p53细胞和CF-1-p53-PTEN细胞内的蛋白质样品进行检测。实验结果表明慢病毒介导的人p53基因在CF-1细胞系中能够过表达p53蛋白,并且慢病毒介导的人p53基因和PTEN基因共同导入CF-1细胞系中也能过量表达p53蛋白,但是与慢病毒介导人p53基因的单独导入CF-1细胞相比产生的p53蛋白较少。上述实验结果证明本研究成功建立了人p53基因稳定表达细胞系。本研究还通过细胞计数法检测p53基因和PTEN基因表达后对细胞生长的影响。实验结果发现慢病毒介导的人p53基因的导入会对CF-1细胞的生长产生抑制作用,而慢病毒介导的人p53基因和慢病毒介导的PTEN基因的同时导入同样会对CF-1细胞的生长产生抑制作用,并且抑制细胞生长的程度比慢病毒介导的人p53基因单独导入的细胞更加强烈。上述实验结果表明,CF-1-p53-PTEN细胞系较CF-1-p53细胞系中p53蛋白的过表达量少,可能是因为PTEN基因与p53基因的同时过表达对细胞生长的抑制作用引起的。综上所述,本论文成功构建了慢病毒表达载体pWPI-p53WT-Neo和pWPI-PTEN-Neo,并利用G418筛选出pWPI-p53慢病毒和pWPI-PTEN慢病毒感染的稳定细胞系CF-1-p53和CF-1-p53-PTEN。通过Western Blot实验成功检测到两种细胞内p53蛋白的过量表达,并且利用细胞生长曲线的测定证明p53和PTEN基因的过量表达对CF-1细胞生长的影响。本论文为利用p53基因治疗癌症提供了重要的实验基础。(本文来源于《山东师范大学》期刊2019-06-04）
夏国建[9]（2019）在《构建BVDV-NS5B稳定表达的细胞系》一文中研究指出牛病毒性腹泻(亦称粘膜病)是世界动物卫生组织(Office International desépizooties,OIE)必须上报的传染病之一。其病原是牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)。BVDV为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的代表成员。BVDV能感染的动物主要包括牛、羊和猪等,最近发现BVDV也能感染小鼠。但是其天然宿主为牛,尤其是幼龄牛的易感性最高。感染BVDV之后引起牛发病,产生的症状不一,有的急性感染,损伤牛的健康,重症者死亡;有的持续感染,无明显症状,却成为主要的传染源,并且由于免疫抑制作用,导致继发其他疾病而放大其危害。目前在防控BVDV方面,欧美国家已经积累了较丰富的经验,主要采用“筛查+淘汰”和“免疫+淘汰”两种净化策略。前者建立在有效的诊断基础之上,且淘汰成本高;后者依赖高效的疫苗免疫,适用于养牛密度高,且BVDV流行率高的地区。因此,第二种策略较适应我国当前情况。要很好地控制在我国BVDV的流行,研究和生产高效疫苗成为当务之急。BVDV的基因组约为12500核苷酸的正链RNA,一个开放阅读框编码一个大的蛋白,然后被剪切为12个蛋白。最后一个蛋白为其RNA聚合酶NS5B,缺乏此蛋白病毒基因组将不能复制,病毒在宿主细胞中将不能增殖,而失去连续感染能力。本实验室已经成功构建出NS5B缺失的BVDV疫苗病毒,所以要构建NS5B基因稳定表达的生产细胞系,以遗传互补的方式使NS5B缺失的BVDV疫苗病毒在配套细胞系中增殖。项目的完成,将有望弥补我国BVDV疫苗生产中的不足,对控制我国BVDV具有非常重要的意义。根据NS5B核酸序列设计并合成上下游引物,以实验室保存的从BVDV病毒液中提取的RNA反转录成的cDNA为模板,通过PCR扩增出NS5B核酸序列,然后与pLVX-IRES-Puro载体连接,构建pLVX-IRES-Puro-HA-NS5B重组质粒。重组质粒经过鉴定之后,与包装载体(PLP1、PLP2、pLP/VSVG)共转染293T细胞,48h和72h分别收集病毒液感染MDBK细胞,感染48h之后用含有嘌呤霉素的培养基筛选阳性细胞,直至单克隆出现并逐级扩大培养。另外将pLVX-IRES-Puro-HA-NS5B直接转染BHK细胞,并通过嘌呤霉素筛选获得表达NS5B蛋白的BHK细胞系。本研究利用原核表达系统成功表达了NS5B抗原表位,并对其进行纯化,经过测定最高浓度可达430μg/mL,然后经过弗氏佐剂乳化免疫小鼠,免疫叁次之后摘除眼球致死获得抗NS5B的血清,经过ELISA效价测定,最高效价可达1:64000,因此获得有效的血清用于后期Western Blot检测表达NS5B蛋白的细胞系,也可以检测BVDV。总之,本实验成功获得抗NS5B的血清,成功构建NS5B稳定表达的BHK细胞系,为NS5B缺失的BVDV疫苗病毒提供了配套生产细胞系,以反向遗传互补方式获得BVDV基因缺失病毒奠定基础。(本文来源于《山东师范大学》期刊2019-05-28）
武乐祎,吴素芳,车影,张强,李鹏[10]（2019）在《稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析》一文中研究指出建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株,并对该细胞株进行发酵,纯化得到的目的蛋白,通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达;发酵过程中活细胞密度高达6×10~6个·mL~(-1),细胞活力在80%以上,PCV2-Cap蛋白表达量约为370 mg·L~(-1);利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平,证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析,为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年05期）
稳定细胞系论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的旨在建立核磷蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。方法采用慢病毒感染的方式,对耐顺铂膀胱癌细胞系T24/DDP的NPM1基因进行敲除,并采用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)和Western blotting法在基因水平和蛋白水平对NPM1的敲除效果进行验证,并通过荧光显微镜验证荧光效率。采用有限稀释法对感染后的细胞进行筛选纯化,通过单克隆增殖的方法对纯化后的细胞增殖培养,建立具有NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。结果通过基因和蛋白水平比较筛选出能够有效敲除NPM1的基因片段,并通过单克隆筛选获得了NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。筛选后细胞系荧光效率近100%,且对NPM1有明显敲除效率。结论NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系T24/DDP具有稳定的NPM1基因敲除效果,可以作为研究膀胱癌细胞耐药的良好实验模型。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
稳定细胞系论文参考文献
[1].来森艳,胡发涌,吴维,李国东,李小兰.DAB2IP稳定细胞系的构建及其对结直肠癌HT29细胞侵袭迁移能力的影响[J].实用肿瘤学杂志.2019
[2].罗陈烁,赵嫚,雷婷,张曼.核磷蛋白1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系的建立与纯化[J].标记免疫分析与临床.2019
[3].骆茹梦,刘媛,朱记平,李毅.应用CRISPR/Cas9构建稳定表达CPV结构蛋白VP2的HEK293T细胞系[J].中国兽医学报.2019
[4].代娟娟,杨丽娟,杜静,苗双,席思川.人LncRNAMIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响[J].吉林大学学报(医学版).2019
[5].穆继宏,张浩,杨玲,余雷,吴宣树.GDF5基因真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立[J].中国骨与关节损伤杂志.2019
[6].朱记平,刘媛,骆茹梦,冯小婷,李毅.可调控表达人博卡病毒1型非结构蛋白NS1稳定细胞系的建立及其反式转录激活作用初探[J].生物工程学报.2019
[7].朱先玉,王历,杨茂,吴婷,何涛.可诱导表达hFGFR1α稳定细胞系的建立与表达优化[J].西南医科大学学报.2019
[8].陈醒.慢病毒介导的人p53基因过表达及稳定感染细胞系的建立[D].山东师范大学.2019
[9].夏国建.构建BVDV-NS5B稳定表达的细胞系[D].山东师范大学.2019
[10].武乐祎,吴素芳,车影,张强,李鹏.稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析[J].畜牧兽医学报.2019