导读:本文包含了二温式论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:二重二温式PCR,牛支原体,牛病毒性腹泻病毒,检测
二温式论文文献综述
谢志勤,范晴,谢芝勋,张民秀,谢丽基[1]（2019）在《牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立》一文中研究指出为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvr C基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将叁温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法。该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170 bp。特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响。综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2019年01期）
熊文婕,谢芝勋,范晴,谢志勤,谢丽基[2]（2018）在《IBRV与MB二温式多重PCR检测方法的建立》一文中研究指出本研究根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)的保守基因设计了两对特异引物,建立了可同时检测IBRV和MB的二温式多重PCR检测方法。结果表明,IBRV和MB的扩增长度分别为727bp和412bp,而其他对照病毒的检测结果均为阴性;该方法的IBRV和MB标准品最低检测限均为104拷贝。(本文来源于《中国奶牛》期刊2018年12期）
范晴,谢芝勋,谢志勤,谢丽基,黄莉[3]（2018）在《牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒叁重二温式PCR检测方法的建立及应用》一文中研究指出为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的叁重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5′端非编码区(5′-UTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将叁温式PCR扩增程序简化为两个温度梯度,优化反应条件建立了用于同时检测MB、BVDV以及IBRV 3种常见牛呼吸道传染病病原的叁重二温式PCR。结果显示,该方法特异性好,只对MB、BVDV和IBRV模板进行扩增,扩增的目的片段长度分别为412、170、727bp,对其他牛病原体无特异性扩增;灵敏度高,最低能同时检测到10 000拷贝的目的核酸;干扰性小,能同时检测3个不同浓度的模板。研究所建立的MB、BVDV和IBRV叁重二温式PCR检测方法,具有特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有很高的临床应用价值。(本文来源于《动物医学进展》期刊2018年02期）
陈千林,付利芝,王振宝,王凤莲,曹雪峰[4]（2017）在《弓形虫GRA7基因二温式PCR检测方法的建立》一文中研究指出根据弓形虫GRA7基因保守序列设计特异性引物,均匀设计法优化反应中引物浓度和退火温度等,建立弓形虫病二温式PCR检测方法。结果表明,扩增条带与预期目的片段(255 bp)相符;未扩增出新孢子虫等虫种的阳性DNA片段;扩增产物经克隆、测序发现与RH株基因序列(Sequence ID:JX045573.1)的相似性为99%;最低检测量为52.6 fg/μL,灵敏性是常规PCR的10~(-1)倍,但反应时间缩短了34 min;重复3次对阳性质粒模板的10~(-4)、10~(-5)、10~(-6)(本文来源于《第五届全国人畜共患病学术研讨会论文摘要集》期刊2017-04-21）
陈千林,王振宝,宋迎春,刘梦丽,许正茂[5]（2016）在《新孢子虫二温式PCR检测方法的建立及应用》一文中研究指出根据新孢子虫Nc2基因保守区设计特异性引物,应用均匀设计法优化反应中Taq DNA聚合酶、引物浓度和退火温度等,建立新孢子虫二温式PCR检测方法。结果显示,扩增条带与预期目的片段大小(266bp)相符,未扩增出弓形虫等虫种的阳性DNA片段;扩增片段经克隆、测序发现与引物基因序列的同源性为100%;最低检出量为32.5fg/μL,是叁步法PCR的10-1倍,但循环时间缩短了38min;重复3次对10-4、10-5、10-6和10-7稀释的阳性质粒进行二温扩增,10-7稀释均未出现扩增条带。同时对156份牛全血DNA进行检测,检出率为10.90%(17/156),与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)的检出符合率为83.33%(30/36),二者检测结果差异性不显着(P>0.05)。由此可见,建立的二温式PCR检测方法可用于临床诊断和日常监测新孢子虫,为监控"带虫宿主"提供技术支撑。(本文来源于《动物医学进展》期刊2016年04期）
刘婷婷,谢芝勋,宋德贵,罗思思,谢丽基[6]（2015）在《H3亚型禽流感病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用》一文中研究指出为建立快速、准确检测H3亚型禽流感病毒(AIV)的方法,根据GenBank中H3亚型AIV HA基因序列,设计出1对特异性引物,通过优化反应条件建立了H3亚型AIV二温式RT-PCR检测方法。对该法进行特异性、敏感性检测,并对256份临床样品进行检测。结果表明,该法只能扩增H3亚型AIV,对其他亚型AIV及常见禽病病原体不扩增;对H3亚型AIV检测下限为1×10~4拷贝/μL;256份临床样品检测结果与病毒分离鉴定结果一致。与普通RT-PCR相比该法节省了30min,表明所建立的H3亚型AIV二温式RT-PCR方法是一种快速、简便和特异的检测方法。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2015年10期）
覃玥,陈保善[7]（2015）在《应用二温式PCR检测家蚕核型多角体病毒的方法》一文中研究指出为了简便、快速、准确地检测家蚕核型多角体病毒(Bm NPV),以Bm NPV广西分离株的多角体蛋白基因(polh)序列(Gen Bank登录号:JQ991011.1)设计引物,以感染Bm NPV(广西宜州分离株)2 h的5龄家蚕幼虫中肠组织提取的DNA为模板,建立二温式PCR检测Bm NPV的方法,最终确定的最佳反应体系为:10×PCR buffer 1.5μL,5 mmol/L Mg Cl22μL,2.5mmol/L d NTP 0.5μL,10μmol/L上、下游引物各1μL,5 U/μL Taq DNA聚合酶0.1μL,18 ng/μL模板DNA 1μL,加水至总体积15μL。确定的最佳反应条件为:94℃预变性3 min;95℃15 s,延伸和退火温度合并为62℃30 s,共25个循环。按上述条件PCR扩增得到大小约309 bp的特异性片段,测序结果与已知polh基因序列的相似度为100%。与普通PCR检测方法比较,采用二温式PCR方法对样本的检测时间节省1.5 h,反应特异性强,灵敏度高(能被检测的最小感病组织基因组DNA的质量浓度为1.8 pg/μL),并且选择最初2 h感病的幼虫中肠组织为检测材料,因而可用于家蚕血液型脓病的早期诊断。(本文来源于《蚕业科学》期刊2015年03期）
张杨[8]（2015）在《马驽巴贝斯虫二温式、荧光PCR检测方法的建立及其初步应用》一文中研究指出马驽巴贝斯虫病病原为驽巴贝斯虫,该病是一种经由媒介蜱虫传播的严重影响马属动物健康的血液原虫病,被世界卫生组织(OIE)列为法定报告检疫疫病,在我国该病被列为二类动物疫病。该病呈全球性发生,患马呈现发热、贫血、黄疸、血红蛋白尿,急性病例死亡,亚急性、慢性病例终身成为带虫宿主,造成本土马与引进马互相感染、反复发病,给马养殖业造成重大损失。目前尚无该病的有效治疗药物及疫苗,故研发新型检测技术是有效的防控途径,可及时检测、监控和综合防治,有利于马产业的健康发展。(Ⅰ)根据GenBank中的驽巴贝斯虫(Babesia caballi)Bc48基因序列设计了一对特异性引物,建立检测驽巴贝斯虫的二温式PCR方法。该方法能够特异地扩增155 bp的片段,与双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、马泰勒虫、瑟氏泰勒虫均无交叉反应,能检测到的最低DNA拷贝数为5.17×102 copies/μL。应用所建立的方法检测了采集于和静县焉耆马匹样品(N=82),结果显示,马驽巴贝斯虫感染率69.51%(57/82),与血液涂片检查结果37.8%(31/82)相比,其检出率更高。该二温式PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于马驽巴贝斯虫的早期诊断。(Ⅱ)根据Bc48保守部分基因序列设计合成特异性引物和MGB荧光探针,建立了驽巴贝斯虫病的MGB FQ-PCR检测方法。对所建立的FQ-PCR检测方法进行特异性、灵敏性和重复性试验,并分别用FQ-PCR检测方法和普通PCR方法对临床样品进行检测对比。结果显示,该方法灵敏度高,最小检出量为5.17×101copies/μL的标准质粒,比常规PCR灵敏100倍;建立的FQ-PCR检测方法标准曲线的循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.9996,重复性好,组内与组间重复性试验的变异系数分别为0.7%和0.42%,均小于1%;该方法能特异性检测驽巴贝斯虫,而对马泰勒虫、双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫等病原检测结果均为阴性。用建立的MGB-FQ PCR和常规PCR分别对90份临床样品进行检测,MGB-FQ PCR和常规PCR检出率分别为53%和30%。本次建立的驽巴贝斯虫病MGB-FQ PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于马驽巴贝斯虫病临床样品诊断、流行病学调查,将为蜱传马梨形虫病的检测提供新的方法。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2015-05-01）
何晓杰,阿曼吐尔·阿黑哈提,叶尔保勒,史秀丽,齐鑫[9]（2015）在《美洲幼虫腐臭病二温式PCR诊断方法的建立及应用》一文中研究指出【目的】为建立蜂及蜂产品中美洲幼虫腐臭病(AFB)二温式PCR诊断方法。【方法】选取幼虫芽孢杆菌基因保守序列设计一对特异性引物,优化反应参数,进行特异性、敏感性和重复性试验验证,建立了诊断AFB的二温式PCR方法。【结果】扩增出130 bp的特异性片段,与参考株序列相似性为100%,DNA灵敏度检测幼虫芽孢杆菌达到33 fg/PCR体系,重复性良好。应用该方法对40份实验室模拟样本和50份临床样本进行了检测,与预期结果一致。【结论】该方法具有特异、灵敏、准确等优点,可用于蜂及蜂产品中AFB的快速诊断。(本文来源于《新疆农业科学》期刊2015年02期）
张杨,王振宝,恩克博力德,苏娃,巴音查汗[10]（2014）在《应用二温式PCR和荧光PCR检测法对伊犁马梨形虫病感染状况的调查研究》一文中研究指出引言为了早期诊断、发现带虫马和综合防治当地马匹感染血液原虫,分别采用二温式PCR和实时荧光PCR方法对采自伊犁河谷924份马全血,进行了马梨形虫病的分子流行病学调查。材料与方法真空无菌采集伊犁河谷新源县(213份)、昭苏县(538份)、特克斯县(141份)、尼勒克县(32份)共计924份抗凝血,利用DNA提取试剂盒提取全血DNA,并利用自己所建立的马梨形虫二温式PCR检测方法和荧光PCR检测方法,对采集的样品(包括不同马场、不同年龄马的样品)进行了检测和分析。结果与讨论表1所示,新源、昭苏、特克斯、尼勒克四个县马匹均感染、携带马梨形虫病,其中尼勒克县感染率最高,(本文来源于《中国畜牧兽医学会马学分会成立大会学术论文集》期刊2014-08-27）
二温式论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)的保守基因设计了两对特异引物,建立了可同时检测IBRV和MB的二温式多重PCR检测方法。结果表明,IBRV和MB的扩增长度分别为727bp和412bp,而其他对照病毒的检测结果均为阴性;该方法的IBRV和MB标准品最低检测限均为104拷贝。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
二温式论文参考文献
[1].谢志勤,范晴,谢芝勋,张民秀,谢丽基.牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立[J].中国动物检疫.2019
[2].熊文婕,谢芝勋,范晴,谢志勤,谢丽基.IBRV与MB二温式多重PCR检测方法的建立[J].中国奶牛.2018
[3].范晴,谢芝勋,谢志勤,谢丽基,黄莉.牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒叁重二温式PCR检测方法的建立及应用[J].动物医学进展.2018
[4].陈千林,付利芝,王振宝,王凤莲,曹雪峰.弓形虫GRA7基因二温式PCR检测方法的建立[C].第五届全国人畜共患病学术研讨会论文摘要集.2017
[5].陈千林,王振宝,宋迎春,刘梦丽,许正茂.新孢子虫二温式PCR检测方法的建立及应用[J].动物医学进展.2016
[6].刘婷婷,谢芝勋,宋德贵,罗思思,谢丽基.H3亚型禽流感病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J].中国兽医杂志.2015
[7].覃玥,陈保善.应用二温式PCR检测家蚕核型多角体病毒的方法[J].蚕业科学.2015
[8].张杨.马驽巴贝斯虫二温式、荧光PCR检测方法的建立及其初步应用[D].新疆农业大学.2015
[9].何晓杰,阿曼吐尔·阿黑哈提,叶尔保勒,史秀丽,齐鑫.美洲幼虫腐臭病二温式PCR诊断方法的建立及应用[J].新疆农业科学.2015
[10].张杨,王振宝,恩克博力德,苏娃,巴音查汗.应用二温式PCR和荧光PCR检测法对伊犁马梨形虫病感染状况的调查研究[C].中国畜牧兽医学会马学分会成立大会学术论文集.2014