黑龙江中医药大学黑龙江哈尔滨150040
【摘要】目的：探讨痔洗药促进创面愈合的作用机理。方法:通过实验对大鼠创伤性创面模型进行换药,动态对比观察痔洗药在换药过程中对创面愈合时间和愈合率及羟脯氨酸水平的影响。结果:痔洗药相对能加速创面愈合时间及愈合率,并能提高创面羟脯氨酸含量。结论:痔洗药能提高创面羟脯氨酸含量,从而起到促进创面愈合作用。
【关键词】痔洗药；创口愈合时间;愈合率;羟脯氨酸
Abstract:objective:Toexplorethemechanismofthewashhemorrhoidsmedicinetopromotewoundhealing.Methods:Traumaticwoundthroughtheexperimentonratsmodelofdressing,dynamiccontrastobservationwashhemorrhoidsmedicineintheprocessofdressingonwoundhealingtimeandhealingrateandtheinfluenceofhydroxyprolinelevels.Results:Washhemorrhoidsmedicinerelativecanacceleratewoundhealingtimeandhealingrate,andimprovesthehydroxyprolinecontentofthewound.Conclusion:Washhemorrhoidsmedicinehydroxyprolinecontentcanimprovewound,topromotewoundhealing.
Keywords:Washhemorrhoidsmedicine;Woundhealingtime.Thehealingrate;Hydroxyproline
【中图分类号】R269【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）15-227-02
肛门部疾病是一类常见的多发病,术后创面愈合速度是影响手术质量的关键因素之一。因肛门每日排便的生理功能,创口易被污染，故肛门切口一般不予缝合。术后创口愈合时间短则半月,长则数月,术后瘢痕形成易导致肛门渗液、变形、失禁等并发症,给患者造成极大痛苦。因此如何加快肛门病术后切口愈合速度,抑制瘢痕组织过度生长,减轻病人痛苦，提高愈合质量,是目前肛肠科医生研究的重要课题之一。本研究拟通过动态观察痔洗药对大鼠创面愈合过程中创面愈合时间与创面愈合率以及羟脯氨酸水平的影响，初步探讨其促进创面愈合的作用机制，以期为该痔洗药临床促进肛门病术后创口愈合提供理论依据和应用指导。
1材料
1.1药物：
1.1.1受试药物：痔洗药：药材购于黑龙江中医药大学附属第一医院中药房，具体组方：公英15g双花15g黄柏15苦参15g红花10g蛇床子15g丹皮15g五倍子15g明矾10g用纱布袋装好，放入盆中，倒入适量开水，浸泡，制成痔洗药液。
1.1.2阳性对照药物：高锰酸钾1：5000溶液。葵花药业佳木斯鹿灵制药有限公司，批号：110411
1.1.3羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)试剂盒（批号：）与考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（批号：）由南京建成生物工程研究所提供。
1.2.试剂
生理盐水：哈尔滨三联药业有限公司，批号：080228A
1.3主要仪器
anthos2010酶标仪：郑州博塞生物工程有限责任公司
722分光光度计：山东高密分析仪器厂制造
恒温水浴锅：美国贝克曼库尔特有限公司
1.4实验动物
健康SD大鼠，体重180～220g之间，由黑龙江中医药大学实验动物中心繁殖提供。合格证为SCXK（黑）2008004；发证单位为黑龙江省科技厅。
2实验方法
2.1创伤模型制备大鼠经腹腔注射1﹪戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，剔去背中部毛，面积约4cm×5cm，距脊柱两侧各旁开1.5cm在对称部位用特制打孔器切割2个圆形创面直径约1.8cm面积约2.54cm2深至皮下，形成机械性损伤，动物模型。造模后大鼠伤口暴露，单笼饲养。
2.2给药方法大鼠造模后随机分为3组：痔洗药组，高锰酸钾组，生理盐水组，每组25只，痔洗药组用生理盐水冲洗创面消毒后，其中一个伤口滴入0.2ml的痔洗药液，间隔5分钟每次，同时用面积为2.52㎝2的无菌纱布若干放在痔洗药液中浸泡，平均每隔五分钟给大鼠创口更换外敷一次浸有药液的纱布，使创口始终保持在痔洗药作用的环境中约20分钟，每天两次，间隔10个小时；另一个伤口等体积滴入生理盐水。高锰酸钾组，用生理盐水冲洗创面消毒后，其中一个伤口滴入0.2ml的1：5000高锰酸钾，间隔5分钟，同时用浸有高锰酸钾面积为2.54㎝2的纱布外敷在创口上，每隔五分钟给予更换药液纱布一次，使创口始终保持在高锰酸钾药液作用的环境中约20分钟，每天两次，间隔10小时；另一个伤口等体积滴入生理盐水。生理盐水组，用生理盐水冲洗创面消毒后，两个伤口均滴入0.2ml的生理盐水，以上述同样的方式每隔五分钟给予创面更换相应的药物纱布，保持20分钟的药液环境，每天两次，间隔10小时。主要观察痔洗药液对创面愈合的影响。
2.3检测指标与分析方法
2.3.1创面愈合时间观察大鼠在创伤和给药后，创面红肿、感染、结痴情况，并记录创面愈合时间。
2.3.2创面愈合率手术后3，5，7，10，14，16d用透明的塑料板沿创面边缘描述测量创面的面积，愈合率=(原创面面积-现创面面积)/原创面面积×100%，评价创面的愈合速度。
2.3.3组织学检验于创伤后第3、7、14天，各组处死大鼠5只，第21天处死各组剩余10只大鼠。取创面皮肤约一半置于10%中性福尔马林溶液中固定。将剩余组织置于冰生理盐水中漂洗，用滤纸吸干，-20℃保存，测定羟脯氨酸的含量，严格按试剂盒说明书操作。取创伤后第7天各组动物的创面组织，戊二醛固定，电镜下观察肉芽组织的超微结构。
2.3.4统计学方法采用SPSS10.0统计软件分析，各组间比较用方差分析，所得数据以表示。
3实验结果
3.1形态学改变愈合过程中痔洗药、高锰酸钾两组创面相对较为清洁，肉芽组织红嫩，表面平整，呈现均匀微细的颗粒状；肉芽组织分别在后10-9d充填创面，而生理盐水组创面可见有少量的粘性分泌物，创面边缘上皮及肉芽组织生长较快，表面凸凹不平，个别部位肉芽水肿明显；伤后7d已基本被肉芽组织所充填。
3.2创面平均愈合时间和愈合面积各组对比，结果见表1
据表1所示：痔洗药组与高锰酸钾组创面愈合时间均快于生理盐水组，而痔洗药组与生理盐水组比较，愈合时间显著缩短，经统计学分析p﹤0.01，差异显著，有统计学意义，而高锰酸钾组则无统计学意义。
据表1所示：在手术后的第5、7、10、14、16天，在创口愈合率方面，痔洗药组＞高锰酸钾组＞生理盐水组，而痔洗药组愈合率在第5、7、10、14、16天均显著增多，经统计学分析＊p﹤0.05,＊＊p﹤0.01，差异显著，有统计学意义。而高锰酸钾组愈合率只有在第7、10、14天，经统计学分析＊p﹤0.05，差异显著，有统计学意义。
经以上分析，从而证明在创口愈合时间和创口愈合率方面，痔洗药组明显优于高锰酸钾组和生理盐水组。
3.3大鼠创面组织羟脯氨酸含量
据表2所示：在手术后的第3、7、14、21天，在大鼠创面组织羟脯氨酸含量方面，痔洗药组优于高锰酸钾组和生理盐水组，而痔洗药组羟脯氨酸含量在第7天明显多于另外两组，并且经统计学分析p﹤0.05，差异显著，有统计学意义。而高锰酸钾组则无统计学意义。经以上分析，从而证明在促进大鼠创面组织羟脯氨酸含量生成方面，痔洗药组明显优于高锰酸钾组和生理盐水组。
4讨论
中药熏洗疗法是用熏洗坐浴的方法借药力和热力直接作用于患处而发挥药效，使局部气血经络得到温通，从而加快局部血液循环，达到促进创面修复愈合的目的。陈炽祥[1]采用凉血止痛方剂熏洗创面，验证了肛周疾病术后该洗药可以明显改善痔瘘患者术后肛缘水肿疼痛的情况，并促进创面愈合，进而缩短病程，且无明显副作用，值得在临床推广应用。在术后切口的修复过程中，新生的肉芽有效的对创口进行了修复，预防创面感染并减少出血，是创面愈合的重要基础[2]。痔洗药坐浴在促进肛门病术后创面愈合过程中有着明显的作用，加速创面肉芽生长，缓解肛门病术后创面的疼痛。痔洗药中蒲公英[3]清热解毒，消肿散结,用于痈肿疮疡、丹毒等,对抑杀金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、乙型溶血型链球菌、福氏志贺氏菌等均有很强的作用；金银花性味甘、寒,归肺、心、胃经,有清热解毒、凉散风热之功；红花活血祛瘀止痛；丹皮清热凉血，活血祛瘀；蛇床子杀虫止痒，燥湿祛风；五倍子收湿敛疮；明矾解毒燥湿止痒。诸药合用具有清热解毒、活血止痛的功效，对于肛门病术后创口愈合有很好的疗效。创面蛋白质含量及羟辅氨酸含量的测定具有两方面意义。首先,其含量的高低能够直接的反映出创面修复的活跃性。其次,其含量多少可以反映创面肉芽组织的质量,即创面完全修复的程度，因此创面蛋白质及羟辅氨酸的含量越高说明创面成纤维细胞及胶原纤维越致密丰富,创面修复程度越成熟[4]。李斌[5]报道:祛癖生肌中药复黄膏组动物新生肉芽组织中羟辅氨酸及DNA含量明显高于空白对照组(P<0.01)。肖燕等[6]观察中药珠黄霜对肛门病术后创面愈合的影响发现：外用中药珠黄霜对术后第7、14天创面肉芽组织中羟辅氨酸（HYP)含量治疗组显著高于对照组,而第3天二者差异无显著性，提示中药能够通过提高羟辅氨酸(HYP)含量促进创口愈合。本实验结果表明痔洗药能有效促进大鼠创面愈合，缩短创面愈合时间，其机制可能与其增加创面羟脯氨酸水平，即促进胶原合成有关，但对于其如何具体调节胶原合成及比例尚需进一步研究探讨。
参考文献
[1]陈炽祥，许文顺，曾力群，等.凉血止痛方配合超声雾化熏洗治疗肛周病术后的临床研究［J］.中医外治杂志,2012,21(6):10-11
[2]BuchananGN,HalliganS,BartramCI.ClinicalExamination,Endosonography,andMRImaginginPreoperativeAssessmentofFistulainAno:ComparisonwithOutcome-basedReferenceStandard[J].Radiology,2014,10(3):674.
[3]张布波,陈伟民.中药皮肤康洗液迮皮肤细菌性感染治疗中的应用[J].上海医药,2000，21(8):26-27.
[4]袁亮.中医祛腐生肌法促进创面愈合作用机理及用药规律的临床和实验研究[D].中国中医研究院,2005.116
[5]李斌,唐汉钧,金若敏.复黄生肌愈创油膏对大鼠新生肉芽组织中羟辅氨酸、DNA含量的影响.上海中医药杂志,1996,(12):40.
[6]肖燕,潘仁智,郑雪平.珠黄霜对肛门术后创面愈合的临床实验观察.时珍国医国药,2003,14(8):449-450.