导读:本文包含了血管化组织工程脂肪构建论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脂肪干细胞,血管内皮细胞,联合培养,组织工程骨
血管化组织工程脂肪构建论文文献综述
王福科,张红,李彦林,刘流,何川[1]（2019）在《联合培养血管内皮细胞与脂肪干细胞构建组织工程骨异位成骨》一文中研究指出目的探讨将联合培养血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)和脂肪干细胞(adiposederived stem cells,ADSCs)的培养体系作为种子细胞的组织工程骨异位成骨能力。方法采用纤维粘连蛋白复合部分脱蛋白骨(partially deproteinised bone,PDPB)制备部分脱蛋白生物骨(partially deproteinised biologic bone,PDPBB);分离培养18周龄SD大鼠ADSCs及足月妊娠SD大鼠脐血VECs。体外构建3种组织工程骨:PDPBB+VECs(A组)、PDPBB+ADSCs(B组)、PDPBB+联合培养细胞(VECs∶ADSCs为1∶1,C组),以单纯PDPBB为对照组(D组)。细胞移植后10 d行扫描电镜观察细胞在各组支架上的黏附情况。取18周龄SD大鼠48只,随机分为A、B、C、D 4组,每组12只。分别将A、B、C、D 4种支架材料植入相应组别的大鼠股部肌袋,术后2、4、8、12周处死动物行大体观察及HE染色和Masson染色组织学观察,并取Masson染色切片行骨胶原量定量检测。结果扫描电镜观察示,PDPB材料孔隙内部相互连通;纤维粘连蛋白修饰的PDPBB表面大量片状蛋白结晶松散附着于支架表面;复合细胞联合培养10 d后,C组大量细胞与PDPBB附着,细胞相互堆积形成细胞团,多角形细胞和梭形细胞混合分布,细胞沿骨小梁生长,形成细胞层。大体观察示术后2周各组肉芽组织开始长入材料孔隙。C组自4周后材料表面逐渐产生大量白色软骨样物质,表面高低不平。至12周时,A组材料表面血管量增多,材料呈实变;B组材料表面出现少许白色软骨样物质,但材料孔隙未见明显减小;D组材料孔隙大小未见明显减小。组织学观察可见术后2周,各组间骨胶原量比较差异无统计学意义(F=2.551,P=0.088);术后4、8、12周,C组骨胶原量显着高于其余3组,B组高于D组,差异均有统计学意义(P<0.05);A组与B、D组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论联合培养VECs与ADSCs作为种子细胞构建组织工程骨的异位成骨能力最强。(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2019年10期）
侯昂扬[2]（2019）在《以脂肪血管基质成分为基础构建组织工程软骨修复山羊膝关节大面积软骨缺损》一文中研究指出目的:探究采用软骨细胞外基质源性微粒(Cartilage ECM derived particles,CEDPs)及PCL支架作为载体,复合自体脂肪组织来源的血管基质成分(Stromal Vascular Fraction,SVF)构建组织工程软骨修复山羊膝关节负重区软骨大面积缺损的可行性。方法:使用3-D打印技术制备多孔的聚己内酯(PCL)支架。无菌环境下刮取山羊膝关节处软骨碎片,通过粉碎、逐步脱细胞等技术,制备山羊软骨来源的细胞外基质源性微粒。在体外对支架和软骨细胞外基质源性微粒进行微观形态学检测,并复合细胞,观察材料对细胞生长及分化的影响。无菌条件下取山羊颈背部皮下脂肪,利用酶消法获得自体脂肪来源SVF。体外验证其具有多项分化能力。手术时,在山羊右膝关节内外侧股骨髁负重区分别建立一个直径8mm的全层软骨缺损。实验分为5组,每组4只山羊(8个缺损区),分别为A组:空白对照组;B组:CEDPs组;C组:CEDPs+SVF组(微组织组);D组:PCL组;E组:PCL+微组织组。A、B、C组在术后3个月和6个月各取2只,D、E两组在术后6个月进行取材。分别使用国际软骨修复协会大体评分标准对缺损修复情况进行评价,组织切片行HE,番红固绿和二型胶原染色分析,影像学检查,生物力学检测以及糖胺聚糖定量检测来评价缺损处修复效果。结果:3个月取材分析时,标本大体观察情况及评分均显示,C组的效果优于AB两组。标本切片染色结果显示,C组的透明软骨的比例高于其余组,A组和B组大部分为纤维软骨修复或者未修复。6个月取材时,E组的修复效果优于其他对照组。MRI结果显示,E组修复区域软骨信号较类似于正常软骨,软骨下骨破坏较其余组轻。纳米压痕结果显示E组修复区域软骨组织力学特性较接近于周围正常软骨。糖胺聚糖定量分析结果显示,C组新生软骨的糖胺聚糖含量多于AB两组。结论:采用自体脂肪组织来源的血管基质成分复合PCL支架可用于修复山羊膝关节负重区软骨缺损。本研究结果说明,SVF是一种具有分化潜力的组织工程种子细胞来源,具有容易获取,不需经过培养,一次手术就可以完成的优点。软骨细胞外基质源性微粒可以为种子细胞提供良好的载体和微环境,有利于细胞扩增和分化。PCL支架可以为缺损区提供良好的支撑,为软骨生成创造有利条件。因此本研究中采用的技术具有良好的应用前景。(本文来源于《山西医科大学》期刊2019-03-01）
李志进[3]（2016）在《血管化组织工程脂肪构建中的巨噬细胞表型转换》一文中研究指出【研究背景】在口腔颌面外科和整形外科领域,肿瘤切除、创伤、感染、先天性萎缩均可导致皮下脂肪层丧失及大体积软组织缺损。软组织缺损不仅影响正常组织功能,还严重影响患者美观和心理状态,因此,理想的可移植的具有生理功能的脂肪组织在颌面外科及整形外科领域有非常大的需求。当前,软组织缺损的修复重建包括自体组织移植,人工合成假体植入等方法,但存在易吸收、供区缺损、手术复杂以及假体生物相容性不足的问题。因此,整形重建外科一直在寻求能够克服上述问题的方法。近年来随着再生医学及组织工程技术快速发展,组织工程方法构建大体积脂肪取得了可喜的进展。然而,由于脂肪组织是高度血管化和高代谢活性的组织,而血运重建是组织再生的基础,要构建组织工程化脂肪组织,尤其是大体积的脂肪组织,必须保证移植物内部尽早获得营养和氧气的供给。血管化不足成为制约构建大体积组织工程脂肪的瓶颈问题。然而,我们对血管化机制的认识仍然不足,为解决血管化的难题,需要从明确血管化的机制入手。既往的脂肪组织工程研究大多聚焦于脂肪间充质干细胞/脂肪前体细胞,内皮祖细胞/内皮细胞,以及影响它们增殖、分化的细胞因子筛选或支架设计;而对脂肪和血管生成中的其他类型细胞,如巨噬细胞,关注较少。近年来随着对巨噬细胞在组织修复和再生中的重要性的认识加深,人们认识到巨噬细胞的功能不仅仅是一种参与非特异性免疫和特异性免疫的的吞噬细胞,在固有免疫应答中发挥重要作用,其在组织器官的发育、内稳态的维持、多种组织器官损伤的修复和再生等生理和病理过程中的作用也受到越来越多的关注。近年来,有学者发现巨噬细胞参与了组织工程脂肪构建中的血管生成和脂肪再生。然而,巨噬细胞是一种具有高度异质性和可塑性的细胞,在不同的局部微环境下,巨噬细胞可极化为不同的表型,分泌多种不同的细胞因子。在脂肪再生和脂肪组织工程领域不同的巨噬细胞表型及其在脂肪再生中的作用,尚无文献报告。综上,本课题拟构建血管化组织工程脂肪组织,在此基础上研究血管生成和脂肪生成中巨噬细胞的分布及表型特点,并深入探讨巨噬细胞及其不同表型在血管化组织工程脂肪构建中的作用,为揭示脂肪再生的机制以及为构建符合临床要求的血管化组织工程脂肪提供理论基础和实验依据。【研究目的】建立大鼠脂肪组织工程模型,通过对模型的改良和优化,探索血管化脂肪再生的合适条件。研究组织工程脂肪构建中巨噬细胞分布及表型变化,分析组织工程室内多种抗炎和促炎细胞因子的微环境;明确巨噬细胞对组织工程室内血管生成和脂肪生成及微环境的影响,对巨噬细胞及表型调控在组织工程脂肪构建中的作用进行了初步探索。【研究方法】1组织工程室脂肪再生模型的构建利用中空的硅胶管作为组织工程室模型,植入大鼠腹股沟,硅胶管内注入FGF-2缓释的Matrigel凝胶支架,比较轴型血管蒂+骨蜡封口组、无血管蒂+脂肪瓣封口组、轴型血管蒂+脂肪垫封口组叁种不同的血管化组织工程脂肪构建方法脂肪再生的差异。2组织工程室脂肪再生过程中的巨噬细胞表型转化研究利用实验一构建的大鼠脂肪组织工程室模型,在不同时间点取材,分析组织工程室血管生成和脂肪再生情况,通过免疫组化和免疫荧光技术分析再生过程中巨噬细胞数量及表型的变化,并通过ELISA法对组织工程室内促炎和抗炎细胞因子微环境进行分析。3早期巨噬细胞清除对组织工程室脂肪再生的影响利用大鼠脂肪组织工程室模型,采用脂质体介导的巨噬细胞自杀技术,分析早期巨噬细胞清除对组织工程室内血管生成和脂肪再生的影响,通过免疫组化和免疫荧光技术分析组织工程室内内皮细胞、中性粒细胞、巨噬细胞的分布,以及巨噬细胞的表型情况。并通过ELISA法分析早期巨噬细胞清除对组织工程室内促炎和抗炎细胞因子微环境的影响。【实验结果】叁个组6周取材时血管蒂通畅,轴型血管蒂+脂肪垫封口组组织工程室内容物的平均重量和体积最大,血管蒂周围可见大量的成熟脂肪组织,无轴型血管蒂+脂肪垫封口组脂肪生成相对较少,而轴型血管蒂+骨蜡封口组新生组织量最少,主要为纤维结缔组织,几乎看不见脂肪细胞。组织工程室植入后第3天,大量的炎细胞浸润,内皮细胞进入Matrigel凝胶,呈现出血外观,植入后第7天,Matrigel开始部分降解,并被新生结缔组织和毛细血管替代。植入后第14天,Matrigel大部分降解,Matrigel凝胶被新生结缔组织和新生血管替代,未见明显的脂肪生成。植入后第42天,Matrigel完全降解,可见大量的成熟脂肪组织,周围可见结缔组织包膜。Lectin血管内皮染色显示,血管密度明显增加,在2周时达到峰值,随后相对稳定。CD68染色显示,第3天即可见明显巨噬细胞浸润,巨噬细胞密度在第7天到达峰值,随后显着降低。在不同时间点,巨噬细胞均有M1和M2两种表型。M1巨噬细胞比例第3天最后,随后逐渐下降,M2巨噬细胞比例有持续增高的趋势,而M2/M1比值从7-42天整个血管生成脂肪再生阶段持续增加。ELISA检测组织工程室内不同时间点促炎和抗炎细胞因子的分泌水平,促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6整体呈下降趋势,抗炎细胞因子IL-4、IL-10和TGF-β整体呈上升趋势。巨噬细胞清除组4天后组织工程室内巨噬细胞密度较对照组显着降低,14天后巨噬细胞密度恢复正常。进一步分析巨噬细胞表型,发现第14天巨噬细胞清除组M1巨噬细胞所占比例显着高于对照组,M2巨噬细胞比例以及M2/M1比值显着低于对照组。在第4、14和42天,巨噬细胞清除组中性粒细胞密度显着高于对照组。ELISA结果显示,第14天时,促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的分泌水平氯膦酸二钠组显着高于脂质体组。而抗炎细胞因子IL-4、IL-10和TGF-β的分泌水平氯膦酸二钠组显著低于脂质体对照组。【结论】利用组织工程室模型和血管化体内预构技术,可实现血管化脂肪组织再生。组织工程室为组织再生提供了空间,血管蒂的引入,生物支架材料的植入以及与自体脂肪组织接触,构建了成血管和成脂的微环境,有利于血管生成和脂肪再生。巨噬细胞参与了组织工程室中血管生成和脂肪再生的全过程;在血管生成和脂肪再生的过程中,巨噬细胞经历了从炎症期的促炎M1表型向增殖期的抗炎M2表型的转换,小室微环境也从炎症期的促炎状态向增殖期的抗炎状态转换。通过脂质体介导的巨噬细胞清除技术,证实巨噬细胞在组织工程室的早期血管化和脂肪再生中发挥关键作用。脂质体包裹的氯膦酸二钠能高效清除组织工程室内的巨噬细胞,但这种清除作用在两周后消失;早期巨噬细胞清除会导致组织工程室内的血管化显着延迟,中性粒细胞持续浸润,小室微环境处于持续的炎症状态;早期巨噬细胞清除导致巨噬细胞增殖期从M1向M2表型转换障碍。提示巨噬细胞表型调控,而不是巨噬细胞数量,是决定组织工程室内脂肪再生的关键因素。本研究为大体积组织工程脂肪构建提供了新的思路。在组织工程支架的设计理念上,使设计的生物支架植入体内后有利于巨噬细胞向M2表型转换,或通过导入外源性的细胞因子或细胞的方法,诱导巨噬细胞向M2表型转换,使局部微环境从促炎状态向抗炎状态转变,这可能是未来血管化组织工程脂肪构建的重要策略之一。(本文来源于《第四军医大学》期刊2016-05-01）
黄皎,于湄,田卫东[4]（2016）在《脂肪组织血管基质成分在组织工程化脂肪构建中的应用》一文中研究指出脂肪组织血管基质成分(SVF)中含有脂肪干细胞并可提供一定的生长因子,在脂肪组织工程化构建领域相对于单独应用脂肪干细胞更具明显优势,近年来得到了广泛的应用。本文就SVF的组成和优势,SVF的具体提取方法和影响因素,SVF用于构建组织工程化脂肪中支架材料的选择,SVF包含的构建组织工程化脂肪的生长因子和将SVF用于构建组织工程化脂肪时应考虑到局部微环境的作用,SVF复合脂肪组织构建组织工程化脂肪,SVF复合富血小板血浆或富血小板血纤蛋白构建组织工程化脂肪的方法,以SVF构建组织工程化脂肪存在的问题等作一综述,旨在帮助临床构建出可用于治疗的存活率高并发症少的组织工程化脂肪,以推动整形外科的发展。(本文来源于《国际口腔医学杂志》期刊2016年01期）
亢婷,王刚,刘毅,刘刚强[5]（2015）在《血管内皮生长因子165基因修饰的人脂肪间充质干细胞与改性丝素蛋白体内构建血管化组织工程脂肪的研究》一文中研究指出目的探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)基因修饰的人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)与壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料体内构建血管化组织工程脂肪的可行性。方法分离提取h ADSCs,选取生长状态良好的第3代h ADSCs,用携带重组人VEGF165基因的慢病毒进行感染(感染复数=50)。选用慢病毒感染和未感染的第3代h ADSCs分别接种于支架材料上,记为实验组与对照组,同时成脂诱导5 d后,使用氯甲基苯甲酰胺标记细胞。取24只雌性Wistar大鼠,将上述实验组与对照组细胞—支架复合物移植于背部皮下,每组12只。移植后8,12周分别取材并行冰冻切片、HE染色、油红O染色及扫描电镜,同时观察支架材料的降解情况,观察移植物。免疫印迹法检测VEGF165及过氧化物酶体增殖体激活受体-γ2(PPARγ-2)蛋白的表达。结果移植后8,12周,免疫印迹法结果显示实验组移植物均表达VEGF165,对照组未见表达;实验组与对照组均表达PPARγ-2,实验组中的表达量明显多于对照组(P<0.05)。扫描电镜、油红O染色及HE染色均表明实验组与对照组生成大量脂肪样细胞,且实验组明显多于对照组(P<0.05)。结论携带重组人VEGF165基因的慢病毒感染的h ADSCs与壳聚糖/丝素蛋白支架材料复合物在大鼠体内可持续表达VEGF165及PPARγ-2蛋白,能显着促进工程化脂肪组织的构建,为血管化组织工程脂肪的构建奠定了基础。(本文来源于《兰州大学学报(医学版)》期刊2015年03期）
卢子敬[6]（2015）在《脂肪组织提取物对组织工程室内构建物早期血管形成及成脂化影响的研究》一文中研究指出研究背景和目的临床上因为肿瘤切除术后、先天性畸形及外伤等各种原因引起的软组织缺损及因美容需求的软组织填充是整形修复美容外科面临的重大挑战之一。2011年美国有近5百万例的修复重建手术,78%为修复重建肿瘤切除术后的软组织缺损。全球范围内每年大约有130万的乳腺癌新发病例,乳癌切除后必将造成大范围软组织缺损。为解决以上难题,真皮移植、人工合成材料、胶原注射剂及自体脂肪移植等被越来越多的的应用于临床工作中。而这些方法都有各自的缺点和不足,比如合成材料容易引起机体的异物反应和感染；脂肪组织因能够提供容量和轮廓支持而受到临床医生的青睐,但其吸收率高达30～50%,限制了其在临床上的应用；带蒂脂肪瓣移植由于其移植后,应用显微外科技术即刻重建脂肪内部的血液循环,移植后体积缩小少,能取得移植的最佳效果,但带蒂脂肪供区有限,切取大量脂肪后易导致供区继发畸形,这限制了带蒂脂肪瓣移植在临床的应用。近年来脂肪组织工程技术为解决软组织缺损的修复提出了全新的思路。在脂肪组织工程中细胞、支架和微环境是叁个主要因素,但不管是通过优化种子细胞或者改性生物活性材料支架或者改善局部微环境,最终构建的工程化脂肪组织,其体积都无法超过1ml,并且在组织构成和组织稳定上都难以达到满意的结果。2003年Hofer SO等人移植轴型血管蒂到一个充满胶原基质的生物惰性材料制作有一定硬度的保护性容器内,为拟构建的组织提供血运基础、营养物质和生长所需空间,生成了非特异性的肉芽组织,首先提出“血管化组织工程室”的概念。这种创新型的构建模式为我们的组织工程研究大大拓宽了思路。随着研究的深入,2007年Dolderer等人把带血管蒂的腹壁脂肪瓣放入中空的小室内植入老鼠的腹股沟皮下,发现脂肪组织显着增长,组织形态学分析显示增加的组织是正常的血管化成熟脂肪组织,形成了“脂肪组织工程室”。2011年将这种方法应用到大动物,体积最大达56.5ml,然而所产生的脂肪组织的体积未达到置入工程室的容积,生长受到限制,并且组织形态学研究发现其组织成分为；纤维结缔组织、脂肪组织、血管、PLGA,并且纤维结缔组织的量和脂肪组织的量是相同的。我们手术治疗软组织缺损的目的不仅仅是为了填充凹陷,更重要的是要形成具有自然外观和美学功能,并且与身体周围组织结合并长期维持稳定的自然组织。显而易见,脂肪组织工程内所构建的脂肪组织并不完全适合应用于临床实践中。随着深入的研究,目前认为工程化脂肪组织的体积主要取决于：一、早期的快速血管化,这是限制组织工程技术最终构建物体积以及组织结构成熟的关键因素；二、可控降解、组织相容性良好的生物材料；叁、利于符合构建物发构建物发展的微环境；四、稳定的物理屏障以保障构建物体积和组织形态的长期稳定。脂肪组织本身具有很独特的生理结构,脂肪组织中除了丰富的血管网络之外,90%的空间由高耗氧、高耗能的脂肪细胞构成,同时作为机体重要的内分泌器官,脂肪组织能分泌多种脂肪因子,并且拥有丰富的生长因子和细胞因子,同时参与了血管化和脂肪化的过程。Jertta-RiinaSarkanen等从成熟的脂肪组织中提取的脂肪组织提取物(ATE)包含各种成熟脂肪组织的生长因子和细胞因子,在体外能够诱导血管生成和脂肪生成。那么能否在工程室内局部增加一些促进血管化或成脂化的因子促进早期构建组织的血管化这个关键问题,来改善组织工程室构建物生长受限的情况?是否能影响最终新生构建物的组织形态和成熟程度呢?归根结底来说,就是如何利用组织工程室模型,最终诱导较纯化的工程化脂肪组织。围绕这几个科学问题,本实验拟将脂肪组织提取物注入到兔组织工程室内,通过对组织工程室内渗出液进行生化检测分析,揭示工程室内环境的变化,而后观察工程室内构建组织的组织学形态变化及血管化情况,探讨通过加强早期的血管化,能否构建较纯化的工程化脂肪组织。方法1、脂肪组织提取物对血管和脂肪生成的诱导利用兔腹股沟的脂肪组织,将其分离培养24小时,过滤,离心后提取上清液,ELISA检测相关因子,并将脂肪来源干细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞加入到中提取的脂肪组织提取物(ATE)中,观察其对成脂化和成血管的作用2、脂肪组织提取物注入工程室内观察组织工程室内构建组织的变化构建兔脂肪组织工程室模型,实验组：在模型构建后将脂肪组织提取物1周后注入一侧工程室内,对照组：另一侧注入等量的生理盐水。分别于不同时间点观察脂肪组织工程室构建物的大体及组织学变化过程,并检测脂肪组织工程室渗出液中细胞因子及生长因子的变化。3、统计学处理数据以均数±标准差(x±s)表示,使用统计软件SPSS 13.0进行数据处理。两组之间比较采用配对t检验；不同时间点的差异采用协方差分析。P值小于0.05说明具有统计学意义。结果1、脂肪组织提取物(ATE)加入到到联合培养的血管内皮细胞和成纤维细胞的培养基中,血管形成实验显示ATE组血管内皮细胞形成连续的网状结构。ATE加入脂肪来源干细胞中(ASCs)的培养基中,油红O染色显示,ATE组ASCs在无成脂诱导的情况下,细胞内出现明显的脂滴聚集。2、脂肪瓣的体积在注入ATE后3天、1周、2周、3周、4周、7周时,早期构建组织成胶冻状,后期软组织表面可见明显包膜形成,触之较韧。注入ATE后,实验组新生组织体积较对照组明显增大3、在脂肪组织发展过程中开始阶段,对照组组和实验组均有大量新生小血管出现在间质区域,实验组组比对照组新产生的小血管密度大。随着时间推移,对照组和实验组注入组新生组织边缘纤维沉积中有大量新生血管岛状样脂肪细胞新生,实验组中边缘纤维沉积中有大量的新生的幼稚脂肪细胞,而对照组中只有零散的分布,脂肪新生提前,并且血管化逐渐成熟。后期两组新生组织已形成正常的脂肪组织小叶样结构。观察构建物的外层形成的薄膜发现,实验组新生脂肪组织边缘包膜较对照组更薄,结构排列更为规则4、CD31免疫组化发现,早期血管新生和数量明显增多,注入ATE后1周总的毛细血管的数量是最高的,并且实验组较对照组多。讨论组织工程室模型诱导脂肪新生的模式可看作为独特的脂肪组织创伤修复的过程。脂肪瓣从原位分离出带蒂岛状脂肪瓣后,脂肪组织连续性被打破,从而导致正常血管功能受损。机体启动非特异性的创伤修复,主要表现为叁个相互独立又相互重迭的时期：炎症期,增殖期和组织重塑期。在小室内的早期炎症反应,大量组织液渗出,局限在小室内部,形成暂时性的结构性支撑。同时,高密度的中性粒细胞、巨噬细胞从血管中游离至填满小室的组织间液中,并分泌大量促血管生成和趋化因子。这对血管生成和早期骨髓间充质干细胞迁移和增殖起到起始趋化的作用。血管内皮生长因子(VEGF)最初被称为血管通透性因子,它被认为是内皮细胞增殖和迁移的强力刺激因子。成纤维细胞生长因子2(FGF-2)对于伤口愈合和血管生成很重要。作为血管生成的细胞因子,成纤维细胞生长因子2(FGF-2)能够促进内皮细胞增殖和毛细血管的形成,与此同时,也刺激间充质细胞的增殖和迁移。John A.Rophael等将VEGF、血小板来源生长因子(PDGF-BB)、FGF-2混合后加入到含有单纯血管蒂和Matrigel的小室中后发现加入的生长因子作用于早期。纤维组织中细胞浸润的数量增加,这些细胞主要包括巨噬细胞、周细胞、各种前脂肪细胞族群。而其中巨噬细胞和周细胞与血管和脂肪的生成均有关。同时研究发现加入促血管生成因子能促进创伤修复。主要原因是早期的新生血管不仅为局部组织提供氧气和营养,还作为干细胞趋化迁移的主要途径。因此早期更好地建立完善的血供能够更好的促进组织再生。ATE中包含成熟脂肪组织的生长因子和细胞因子,如VEGF、bFGF,白细胞介素-6(IL-6),胰岛素样生长因子-1(IGF-1),瘦素,脂联素等,而一些脂肪组织来源的生长因子和细胞因子也能刺激血管生成和脂肪组织扩张所需的毛细血管网形成。我们将ATE注入小室内,发现早期小室内新生组织间质化明显,渗出的组织液形成凝胶样纤维蛋白原基质,出现明显的血管新生。与此同时,血管周围出现许多幼稚脂肪细胞,提示机体间充质干细胞募集迁移至小室组织并在局部微环境诱导下启动分化。随着新生血管的逐渐成熟,并与机体固有血管形成完善的血管网络后,炎症反应逐渐减轻,组织修复进入增殖期。在实验组的这个阶段中,我们观察到大量新生血管网络形成。在早期形成的纤维蛋白原基质中出现大量孤岛样脂肪细胞分化增殖,并逐渐融形成新的脂肪小叶。不同分化阶段的脂肪前体细胞和脂肪细胞依附于血管周形成脂肪新生的基础。这个阶段实验组更早的形成更多地岛状脂肪细胞新生,一方面可能因为炎症期时在ATE的促血管生成因子的作用下,更多更快的血管网络在组织间液形成的纤维蛋白原基质中形成,致使更多的间充质干细胞通过循环进入小室内参与脂肪组织诱导新生；另一方面可能因为在增殖期ATE中含有的促脂肪生成因子,如瘦素,胰岛素样生长因子等,能更好的促进趋化迁移来的间充质干细胞增殖并诱导向成脂系细胞方向的分化。随着构建组织的成熟进入了重塑期,在血管生成的过程中伴随着血管的重塑,这个过程中血流不通,这就解释了为什么在注入ATE后2周对照组和实验组血管的密度下降。新生脂肪组织的结构逐渐形成正常脂肪组织的小叶状结构工程室内新生脂肪组织体积都小于工程室的实际体积,并且构建组织的最外层包绕着一层致密的纤维包膜,目前工程室模型多采用硅胶材料小室,这层纤维包膜可能和隆胸时假体表面形成的包膜相似。对于包膜形成的原因尚不明确,可能是由填充材料的性质、假体置入技术、假体表面的纹理、异物的存在(如手套上的滑石粉)、细菌感染等引起的,而对包膜挛缩的治疗也是没有固定的治疗方案。包膜分3个细胞层,每层都有自己的血供。有文献指出通过改善局部血管化能够重塑邻位组织,改善包膜质地。有实验研究利用干细胞疗法重建缺血组织血运以减轻包膜挛缩。也有学者利用脂肪移植来减轻包膜挛缩的程度,可能是因为脂肪组织中的间充质干细胞能分泌血管生成因子而促进内皮前体细胞进入新形成的血管中,改善包膜局部的血供,从而减轻包膜挛缩的程度。通过组织学染色,我们发现实验组工程室内新生组织最外层包膜比对照组薄,可能是因为早期更好的血管化导致后期包膜变薄。而包膜反应的减轻能够减少对新生组织体积增大的束缚,致使后期新生组织进一步增大。通过我们的实验对工程室内渗出液的连续观察,我们发现脂肪工程室内组织渗出液中含有大量的生长因子,注入ATE后渗出液中的生长因子的浓度增大,这些组织液能提供能更好的促进构建物的血管化和成脂化,提供更好的环境来支持脂肪组织的生长。脂肪组织工程室具有重要的的应用前景,脂肪组织来源丰富,供区损伤小,工程室不仅为室内组织提供了生长所需的空间,而且构建出的相对独立的空间便于实验的干预,局部应用脂肪组织提取物,加速室内组织的生长,又不影响全身的组织,这可能是未来利用组织工程室进行体内组织工程研究的重点。结论1、利用兔腹股沟脂肪垫提取的ATE能够改善工程室内的血管微环境,早期诱导大量血管网络新生、成熟,更快建立完善血供,促进脂肪组织新生。2、同时通过改善局部血管化减轻包膜反应,去除阻止新生组织体积进一步增大的障碍,为构建有利于临床应用的工程化的脂肪组织提供新的思路。(本文来源于《南方医科大学》期刊2015-03-20）
亢婷[7]（2015）在《VEGF165基因修饰的hADSCs与改性丝素蛋白支架材料构建血管化组织工程脂肪的实验研究》一文中研究指出目的：探讨VEGF165基因修饰的人脂肪间充质干细胞(hADSCs)与改性丝素蛋白支架材料构建血管化组织工程脂肪的可行性。方法：1.分离、培养及鉴定人脂肪间充质干细胞(hADSCs),选择生长良好的P3 hADSCs,接种于壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料(CS/SF),MTT法检测细胞在CS/SF上的粘附和增殖能力。成脂诱导14天后电镜及光镜分别观察细胞在支架材料上的粘附和生长,以评估支架材料与hADSCs的生物相容性。2.携带重组人VEGF165基因的慢病毒感染P3 hADSCs,将细胞与支架材料体外培养。实验分叁步,第一步：将P3 hADSCs(对照组C1)及慢病毒感染(MOI=50)的P3 hADSCs(实验组E1)分别行成脂诱导,14天后行油红0染色,检测慢病毒感染对hADSCs成脂能力的影响。第二步：将P3 hADSCs(对照组C2)与慢病毒感染的P3 hADSCs(实验组E2)分别接种于支架材料上,MTT法评估慢病毒感染后,对hADSCs在支架材料上增殖能力的影响；第叁步：C2组及E2组细胞-支架复合物体外成脂诱导,分别作为对照组C3及实验组E3,14天后,采用RT-PCR检测成脂特异性基因PPARγ-2并行油红0染色,评估慢病毒感染对hADSCs在支架材料上成脂能力的影响。3.体内实验。取24只雌性Wistar大鼠,每组12只。将上述C3、E3两组细胞—支架复合物体外成脂诱导5天后分别移植入大鼠背部皮下,移植后8周、12周分别取材并观察移植物,同时观察支架材料的降解情况,移植物行冰冻切片、HE染色、油红0染色及扫描电镜观察。Western Blot检测VEGF165及PPARγ-2蛋白的表达。结果1.hADSCs接种于支架材料后,在支架材料上粘附、增殖良好。成脂诱导14天后,油红0染色表明壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料上有大量脂肪细胞生成,扫描电镜下亦可见成熟脂肪细胞生成。2.感染72h后,荧光显微镜下即可见El组hADSCs呈现微弱的绿色荧光,96h后荧光明显增强。成脂诱导14天后,E1组和C1组均可见大量成熟脂肪细胞,两组无统计学差异(P>0.05),慢病毒感染对hADSCs成脂能力无影响；MTT试验表明,慢病毒感染后,实验组E2和对照组C2细胞支架材料上增殖无统计学差异(P>0.05)；油红0染色及RT-PCR均表明：实验组和对照组细胞—支架复合物体外成脂诱导后,均可见大量成熟脂肪细胞生成,两组无统计学差异(P>0.05)。3.体内实验：植入体内8周及12周后,Western Blot结果显示实验组移植物均表达VEGF165,对照组未见表达；实验组及对照组均表达PPARγ-2,实验组中的表达量明显多于对照组(P<0.05)。扫描电镜、油红0染色及HE染色均表明实验组及对照组均生成大量脂肪样细胞,且实验组明显多于对照组(P<0.05)。结论1.CS/SF支架材料具有良好的生物相容性,hADSCs在CS/SF支架材料上粘附、增殖良好。2.携带重组人VEGF165基因的慢病毒感染hADSCs后,接种于支架材料,在体外能成功构建组织化工程脂肪。3.携带重组人VEGF165基因的慢病毒感染的hADSCs与CS/SF支架材料复合物在大鼠体内可持续表达VEGF165及PPARγ-2蛋白,能显着促进工程化脂肪组织的构建,为构建血管化组织工程脂肪奠定了基础。(本文来源于《兰州大学》期刊2015-03-01）
焦帅[8]（2013）在《脂肪干细胞用于组织工程血管构建的细胞分化研究》一文中研究指出血管移植是目前临床上治疗动脉粥样硬化等血管类疾病的主要手段,一般选用内乳动脉或自体大隐静脉作为材料,但可以移植的自体血管数目有限,并且很大一部分患者不适合进行自体血管移植。人工合成血管如涤纶和聚四氟乙烯在大中直径血管(内径>5mmm)移植中已获得成功,但在小直径血管(内径<5mm)移植中因其高剪切力和低血流量,容易形成血栓和内膜增生,远期通畅率低,且无降解性和促进组织再生的能力,长期移植生物相容性很差等问题。近年来,组织工程学的发展为研究可降解、生物相容性良好的小直径血管支架提供了新途径。脂肪干细胞(ADSC)的分化潜能和骨髓间充质干细胞(MSC)类似,能在体外培养中分化为多种中胚层来源的细胞,如成骨细胞、软骨细胞、肌细胞等。脂肪干细胞具有取材容易,可以通过抽脂法获得,创伤小而且供应充足,能反复取材,也不会引起道德争论。并且,脂肪干细胞具有增殖快速的优点,因此作为组织工程种子细胞具有非常大的优势,应用前景广阔。本研究利用脂肪干细胞的多向分化性能,原位转染诱导其在不同基因诱导条件下分别向血管内皮细胞和血管平滑肌细胞分化。我们选用了明胶制作二维膜,利用PEI作为转染载体,制成了具有高转染效率的组织工程支架。VEGF质粒活化后诱导ADSC向血管内皮细胞分化；PDGF质粒活化后的支架可诱导ADSC向血管平滑肌细胞分化。通过观察细胞在支架上的生长状态,ELISA检测因子表达,Q-PCR检测血管细胞标志性物的表达,来判断ADSC在支架上生长和分化。细胞计数结果显示基因活化材料能够很好支持ADSC的贴附和增殖；VEGF-165因子的ELISA测定结果显示该系统是一个理想的的原位转染系统,为诱导ADSC向血管细胞分化提供了细胞因子的保障。相比未基因活化的支架,Q-PCR结果显示在向血管内皮分化体系中,诱导后的ADSC血管内皮细胞标志分子CD31和Vwf的mRNA表达量明显上调。在向血管平滑肌分化体系中,血管平滑肌细胞标志分子cnnl和α-SMA的mRNA表达量也显着上调。本研究初步确定了在合适的诱导条件下,ADSC可分别向血管内皮细胞和血管平滑肌细胞分化；为取材方便且应用前景广阔ADSC应用于血管组织工程提供了充分的实验证据。(本文来源于《南京大学》期刊2013-05-01）
王和庚,黎洪棉,崔世恩,徐昆明[9]（2013）在《带血管肌筋膜包埋脂肪干细胞载体复合物构建血管化组织工程脂肪(英文)》一文中研究指出背景:再血管化是构建组织工程化脂肪的关键因素。目的:观察3种不同筋膜瓣包裹的脂肪来源干细胞与胶原蛋白支架复合物在体内成脂效率的差异。方法:分离兔右侧带血管蒂的背阔肌筋膜瓣,包裹成脂诱导后的脂肪来源干细胞与Ⅰ型胶原蛋白复合物,设为带有轴型血管蒂的诱导分化组。分离兔左侧带血管蒂的背阔肌筋膜瓣,包裹未经诱导的脂肪来源干细胞与Ⅰ型胶原蛋白复合物,设为带有轴型血管蒂的未诱导分化组。分离兔右侧无特定血管蒂的臀大肌筋膜瓣,包裹未经诱导的脂肪来源干细胞与Ⅰ型胶原蛋白复合物,作为对照组。结果与结论:移植后8周,苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色检测结果显示,各组均可见新生脂肪组织形成,带有轴型血管蒂的诱导分化组新生肪组织平均湿质量和新生微血管密度均高于其他2组(P<0.01,P<0.05)。结果说明实验成功构建了带血管肌筋膜包埋成脂诱导后的脂肪干细胞载体复合物构建血管化组织工程脂肪,此复合物在体内的成脂效率和促进血管再生的能力最好。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2013年18期）
黎洪棉,柳大烈,赵培冉,梁双武[10]（2012）在《脂肪干细胞与自体富血小板血浆载体复合物体内构建血管化组织工程脂肪》一文中研究指出背景:血运重建机制是组织工程化脂肪组织成功构建的决定性因素。目的:观察脂肪干细胞与自体富血小板血浆和纤维蛋白胶载体复合物在体内构建血管化组织工程脂肪的可行性。方法:从健康成年人吸脂术后的脂肪组织中分离脂肪干细胞并行原代及传代培养,将第3代经BrdU标记的脂肪干细胞向脂肪细胞定向诱导2周后,制成浓度为5×1010L-1细胞悬液。由0.5mL细胞悬液、100μL富血小板血浆工作液或DMEM培养基与0.5mL纤维蛋白胶组成实验组和对照组移植物,分别植入裸鼠背部皮下。结果与结论:植入后8周取材:①实验组可见血管明显增生并长入材料,呈轻度纤维包裹;对照组有少量血管长入材料中,也有轻度纤维包裹现象。实验组新生组织湿质量大于对照组(P<0.01)。②苏木精-伊红染色均可见移植物中有新生脂肪组织形成和不同程度的微血管长入;实验组微血管数多于对照组(P<0.01)。③新生组织免疫荧光染色示,两组新生脂肪细胞的胞核及部分微血管内皮细胞的胞核呈现绿色荧光。说明脂肪干细胞与自体富血小板血浆和纤维蛋白胶载体复合物在体内可构建血管化组织工程脂肪,脂肪干细胞与自体富血小板血浆共同参与新生脂肪组织的血管化过程,自体富血小板血浆能促进组织工程构建物的血运重建,保证更多种子细胞的成活。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年45期）
血管化组织工程脂肪构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探究采用软骨细胞外基质源性微粒(Cartilage ECM derived particles,CEDPs)及PCL支架作为载体,复合自体脂肪组织来源的血管基质成分(Stromal Vascular Fraction,SVF)构建组织工程软骨修复山羊膝关节负重区软骨大面积缺损的可行性。方法:使用3-D打印技术制备多孔的聚己内酯(PCL)支架。无菌环境下刮取山羊膝关节处软骨碎片,通过粉碎、逐步脱细胞等技术,制备山羊软骨来源的细胞外基质源性微粒。在体外对支架和软骨细胞外基质源性微粒进行微观形态学检测,并复合细胞,观察材料对细胞生长及分化的影响。无菌条件下取山羊颈背部皮下脂肪,利用酶消法获得自体脂肪来源SVF。体外验证其具有多项分化能力。手术时,在山羊右膝关节内外侧股骨髁负重区分别建立一个直径8mm的全层软骨缺损。实验分为5组,每组4只山羊(8个缺损区),分别为A组:空白对照组;B组:CEDPs组;C组:CEDPs+SVF组(微组织组);D组:PCL组;E组:PCL+微组织组。A、B、C组在术后3个月和6个月各取2只,D、E两组在术后6个月进行取材。分别使用国际软骨修复协会大体评分标准对缺损修复情况进行评价,组织切片行HE,番红固绿和二型胶原染色分析,影像学检查,生物力学检测以及糖胺聚糖定量检测来评价缺损处修复效果。结果:3个月取材分析时,标本大体观察情况及评分均显示,C组的效果优于AB两组。标本切片染色结果显示,C组的透明软骨的比例高于其余组,A组和B组大部分为纤维软骨修复或者未修复。6个月取材时,E组的修复效果优于其他对照组。MRI结果显示,E组修复区域软骨信号较类似于正常软骨,软骨下骨破坏较其余组轻。纳米压痕结果显示E组修复区域软骨组织力学特性较接近于周围正常软骨。糖胺聚糖定量分析结果显示,C组新生软骨的糖胺聚糖含量多于AB两组。结论:采用自体脂肪组织来源的血管基质成分复合PCL支架可用于修复山羊膝关节负重区软骨缺损。本研究结果说明,SVF是一种具有分化潜力的组织工程种子细胞来源,具有容易获取,不需经过培养,一次手术就可以完成的优点。软骨细胞外基质源性微粒可以为种子细胞提供良好的载体和微环境,有利于细胞扩增和分化。PCL支架可以为缺损区提供良好的支撑,为软骨生成创造有利条件。因此本研究中采用的技术具有良好的应用前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
血管化组织工程脂肪构建论文参考文献
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[6].卢子敬.脂肪组织提取物对组织工程室内构建物早期血管形成及成脂化影响的研究[D].南方医科大学.2015
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[9].王和庚,黎洪棉,崔世恩,徐昆明.带血管肌筋膜包埋脂肪干细胞载体复合物构建血管化组织工程脂肪(英文)[J].中国组织工程研究.2013
[10].黎洪棉,柳大烈,赵培冉,梁双武.脂肪干细胞与自体富血小板血浆载体复合物体内构建血管化组织工程脂肪[J].中国组织工程研究.2012