马玲叶扬李俊洁
新疆维吾尔自治区昌吉回族自治州人民医院检验科，新疆昌吉831100
[摘要]目的探讨乙型肝炎(乙肝）患者血清标志物模式和HBV-DNA检测在乙肝诊治中的意义以及二者之间的相关性。方法对2014年1月-2014年12月在我院住院的350例乙肝患者，运用放射免疫法（SPRIA）检测患者的乙肝血清标志物和荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测HBV-DNA。并对其检测结果应用统计学方法进行对比分析。结果350例乙肝患者血清经SPRIA法检测乙肝血清标志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb），得到六种阳性模式。不同的HBV阳性血清学模式的患者，其HBV-DNA的阳性率和含量均不同，差异有统计学意义（P<0.05）。Ⅰ组模式(即“大三阳”组)的患者HBV-DNA的阳性率和含量最高，分别为95%和（6.63±1.67），其阳性率和含量均明显高于其它组；HBeAg(+)模式的患者HBV-DNA的阳性率和含量均高于HBeAg（—）模式的患者，差异均有统计学意义（P<0.05)。结论乙肝血清标志物与HBV-DNA的检测结果具有相关性。SPRIA法只能反映乙肝患者感染的不同时期的情况，而FQ-PCR法检测HBV-DNA可以更直接、更准确地反映乙肝病毒感染复制的程度，对乙肝诊治具有互补作用。故临床上应该联合应用放射免疫法和荧光定量PCR法检测乙肝血清标志物和HBV-DNA。这样对乙肝的诊断及药效观察都具有十分重要的临床意义。
[关键词]乙型肝炎；血清标志物；HBV-DNA；荧光定量PCR；放射免疫
ApplicationofHBVserummarkersandHBV-DNAdetectionindiagnosisofhepatitisB
MaLingYeYangLiJunJie
(DepartmentofClinicalLabaratory,ChangjiPrefecturePeople’sHospitalinXinjiangUygurAutonomousRegion，Changji，Xinjiang831100，China).
[Abstract]ObjectiveToinvestigatethesignificanceofserummarkersandHBV-DNAdetectioninthediagnosisandtreatmentofhepatitisBpatientsandthecorrelationbetweenthetwo.MethodsJanuary2014toDecember2014inourhospitalof350casesofhepatitisBpatientsbyradioimmunoassay(spria)detectioninpatientswithhepatitisBserummarkersandfluorescencequantitativePCR(FQ-PCR)methodtodetectHBV-DNA.Anditsdetectionresultswerecomparedwiththestatisticalmethods.ResultsSerummarkersofhepatitisBvirus(HBsAb,HBeAg,HBsAg,HBcAb,HBeAb)weredetectedbySPRIAin350patientswithhepatitisB,andsixpositivepatternswereobtained.ThepositiverateandcontentofHBV-DNAindifferentHBVpositivepatientswerestatisticallysignificant(P<0.05)..Group1mode(i.e.,"big3thisworld")groupofpatientswithHBV-DNApositiverateandcontentwerethehighest,Thepositiverateandthecontentofthe95%and(6.63±1.67)weresignificantlyhigherthanthoseoftheothergroups;ThepositiverateandcontentofHBeAg(+)inpatientswithHBV-DNA(+)modeweresignificantlyhigherthanthoseinpatientswithHBeAg(-)mode,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).ConclusionHepatitisBserummarkerswereassociatedwiththedetectionofHBV-DNA.FQ-PCRcanonlyreflectthedifferentstagesofhepatitisBvirusinfection,andHBV-DNAmethodcanmoredirectlyandmoreaccuratelyreflectthedegreeofreplicationofhepatitisBvirusinfection.itshouldbecombinedwiththeapplicationofthePCRmethodforthedetectionofhepatitisBserummarkersandHBV-DNA.SoithasveryimportantclinicalsignificanceforthediagnosisandefficacyobservationofhepatitisBvirus。
[Keywords]HepatitisB；Serummarkers;HBV-DNA；FluorescencequantitativePCR;Radioimmunoassay
1.资料与方法
1.1一般资料收集2014年1月-2014年12月在我院住院的乙肝患者标本350例，年龄在18-45岁。空腹采集静脉血，离心，提取血清进行检测。
1.2试剂与仪器乙肝血清标志物检测试剂由北京北方生物技术研究所提供，仪器DFM-96型放射免疫γ计数器由西安利亚电子公司提供。HBV-DNA检测试剂盒由广州达安股份有限公司提供，荧光定量PCR扩增仪Prism7300型由美国ABI公司生产。
1.3方法乙肝血清标志物与HBV-DNA的测定乙肝血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)五项指标（即“两对半”）采用SPRIA法测定。HBV-DNA检测采用FQ-PCR法测定。所有操作均严格按照试剂盒操作说明进行。
1.4乙肝血清标志物类型人为分组HBsAg(+)、HBeAg（+）、HBcAb（+）即“大三阳”分为Ⅰ组；HBsAg（+）、HBeAb（+）、HBcAb（+）即“小三阳”分为Ⅱ组；HBsAg（+）、HBeAg（+）、HBeAb（+）、HBcAb（+）分为Ⅲ组；HBsAg（+）、HBcAb（+）为Ⅳ组；HBsAb（+）、HBeAb（+）、HBcAb（+）分为Ⅴ组；HBsAb（+）、HBcAb（+）分为Ⅵ组。
1.5统计学分析处理采用SPSS15.0统计软件对数据进行分析，计量资料以X±S表示，计数资料以率表示，P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1SPRIA法检测乙肝血清标志物350例乙肝患者血清经SPRIA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五项指标，得到六种阳性模式。见表1。
2.2FQ-PCR法检测HBV-DNA不同的HBV阳性血清学模式的患者，其HBV-DNA的阳性率和含量均不同，差异有统计学意义（P<0.05）。Ⅰ组模式（即“大三阳”组）的患者HBV-DNA的阳性率和含量最高，分别为95%和6.63±1.67.且均高于其他组模式的患者；HBeAg（+）模式的患者HBV-DNA阳性率和含量均高于HBeAg(-)模式的患者，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。
3讨论
乙肝是一种因乙肝病毒引起的传染性疾病，是我国最常见的一种传染病。在我国大约有1.2亿人携带乙肝病毒，它严重影响了人们的身心健康，因此开展乙肝血清标志物与HBV-DNA的检测对于乙肝的防控及临床诊治有着十分重要的意义。
目前判断乙肝感染情况最常用的检测指标为乙肝血清标志物，其组合模式多种多样，它检测的是机体感染HBV后的免疫反应状态，本文主要采用SPRIA法进行检测。但由于各种因素存在一定的假阳性，还有可能出现漏诊，它不能及时动态地反映体内病毒复制情况及传染危险程度，而FQ-PCR法特异性强、灵敏度高[2]。进行HBV-DNA定量检测是HBV感染最直接的指标，且能直接反映乙肝病毒的复制水平和传染性。HBV-DNA阳性提示HBV复制和有传染性[3]。HBV-DNA含量越高，表示乙肝病毒复制和感染性越强，它是对乙肝五项检测指标的有效补充。因此单纯进行血清标志物检测是不能反映乙肝患者体内血清病毒含量的，对于病毒复制状况监测、疗效观察等帮助不大[4]。但是HBV-DNA检测不能完全表达非复制状态的感染情况，故临床上常常将二者进行联合检测。从表1中显示，不同的HBV阳性血清学模式，其HBV-DNA的阳性率和含量均不同，差异均有统计学意义（P<0.05)。Ⅰ组模式（即“大三阳”组）的患者HBV-DNA阳性率和含量最高，分别为95%和6.63±1.67，且明显高于其它几种模式，差异有统计学意义（P<0.05)。说明该模式患者的HBV-DNA具有较高的复制水平，且具有很强的传染性。其次为Ⅲ组模式，其HBV-DNA阳性率含量分别为72.0%和4.85±1.22.HBeAg（+）模式的患者HBV-DNA阳性率和含量均高于HBeAg（-）模式的患者，差异均有统计学意义（P<0.05），可见HBeAg与HBV-DNA含量呈正相关，HBeAg阳性表明HBV在肝细胞内复制活跃，传染性强。而HBeAg转阴表明患者体内的HBV-DNA的复制水平正在减少，但HBeAg阴性的血清仍能检测出HBV-DNA，可见病毒还在复制，仍具有一定的传染性。这可能与HBV基因的变异、HBV病毒仍在体内复制有关[5]。
FQ-PCR法检测HBV-DNA可直接监测血清中乙肝病毒核酸的载量，是判断病毒复制活跃程度及是否具有传染性的可靠依据，其敏感性高、准确度高，对乙肝病毒感染者的诊断、治疗及判断预后均具有指导意义[7]。同时应用FQ-PCR法检测技术发现了Ⅴ组、Ⅵ组模式的乙肝恢复期患者HBV-DNA检测阳性率分别为3.1%和2.2%，HBV-DNA含量分别为1.93±1.36和1.78±0.91，其HBV-DNA病毒定量值开始下降，传染性降低，从而提高了乙肝患者战胜疾病的信心和坚持治疗的决心。但这并不表示患者体内已没有病毒复制[6]，说明仍有少数存在低水平的病毒复制，从而可以帮助诊断隐匿性乙肝感染和非典型的慢性乙肝感染。同时提醒了乙肝患者和医务工作者密切关注乙肝恢复期病毒的传染性，切断其传播途径，达到预防和控制感染的目的。
综上所述，应该在检测乙肝血清标志物的同时进行HBV-DNA的检测。二者联合检测，可提高准确度、降低漏诊率起到互补作用，这样对乙肝病毒感染的诊断、药效观察及预后判断都具有十分重要的临床意义。
参考文献
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[6]黄静.荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA法乙肝免疫学检测的探讨[J].中国医药科学，2013,3（6）：110-111，123.